Tli (exo-) DNA聚合酶【又名Vent (exo-) DNA 聚合酶】其来源于Thermococcus litoralis,经基因工程改造而得,去除了3´-5´核酸外切酶校读活性,其保真度有所降低,大约比Taq DNA聚合酶高2倍。该酶在95℃温育1小时后,仍具有90%以上的聚合酶活性。Tli (exo-) DNA Polymerase 与Vent (exo-) DNA Polymerase性质和使用方法完全相同,纯化自重组E. coli菌株,其携带D141A/E143A突变。该产品是高温双脱氧终止法测序反应和高产量引物延伸反应的首选。
主要特征和应用
引物延伸
高温环状测序
高温双脱氧测序
单位定义
一个活力单位即在在72°C条件下,30分钟内催化10 nmol dNTP的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量。
储存
-20℃可保存2年。
应用实例1:在以A3824-03或 A3828-03,用 LP1002引物组进行的LAMP测试。Bst4.0 SYBR Green试剂可在标准定量PCR仪或恒温荧光仪上进行反应。以体外转录RNA为模板,1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应25min的检测结果,可以看到检测反应<20min(达平台期)。
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应用实例2: 用 LP1002引物组进行的LAMP测试。OG变色法为终点变色策略,在反应结束后,倒置反应管,溶解管盖上染料后,阳性样本呈现出醒目的绿色,阴性表现出橙色,区分明显。且该方法不受样本类型限制,杂质耐受性很好。以体外转录RNA为模板,1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应20min后检测结果。
![](https://img1.17img.cn/17img/images/202408/uepic/1ab7e4d0-ee4e-4ac0-a331-5e5047ebd645.jpg)
应用实例3:采用荧光酶活测定法在30℃和60℃条件下测定HotStart Bst 4.2,结果显示与未加入Aptamer的对照比较来看。HotStart Bst 4.2在30℃条件下酶活几乎无活性,而60℃条件下1min内酶活完全释放,恢复100%活性
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