Sau DNA聚合酶(Sau DNA Polymerase)是具有链置换活性的DNA恒温扩增聚合酶,主要应用于RPA重组酶扩增。重组酶UvsX与引物结合形成的蛋白-DNA复合物,能在双链DNA中寻找同源序列;一旦引物定位了同源序列,就会发生链交换反应,Sau DNA聚合酶启动DNA合成,对模板上的目标区域进行指数式扩增, 被替换的DNA链与SSB结合,防止进一步替换。
本Sau DNA 聚合酶来源于金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) DNA 聚合酶(Sau) I 基因, 是将其N端的1-293个AA截去而得。该酶保留了DNA聚合酶 的 5´-3´ 聚合酶活性,但是缺失了 5´-3´ 和3‘-5’核酸外切酶活性,可用于重组酶扩增。
应用
随机引物法标记
cDNA 第二条链的合成
单个 dA 的加尾
链置换的 DNA 合成
活性定义
在37℃条件下,30min内参入10nmol酸性不容物定义为1个活性单位。
1X Sau Reaction Buffer
50 mM NaCl ,10 mM Tris-HCl (Ph7.5) , 10 mM MgCl2 , 1 mM DTT。
储存
-20℃可保存2年,避免反复冻融。
热失活
75°C,20min。
应用实例1:在以A3824-03或 A3828-03,用 LP1002引物组进行的LAMP测试。Bst4.0 SYBR Green试剂可在标准定量PCR仪或恒温荧光仪上进行反应。以体外转录RNA为模板,1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应25min的检测结果,可以看到检测反应<20min(达平台期)。
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应用实例2: 用 LP1002引物组进行的LAMP测试。OG变色法为终点变色策略,在反应结束后,倒置反应管,溶解管盖上染料后,阳性样本呈现出醒目的绿色,阴性表现出橙色,区分明显。且该方法不受样本类型限制,杂质耐受性很好。以体外转录RNA为模板,1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应20min后检测结果。
![](https://img1.17img.cn/17img/images/202408/uepic/1ab7e4d0-ee4e-4ac0-a331-5e5047ebd645.jpg)
应用实例3:采用荧光酶活测定法在30℃和60℃条件下测定HotStart Bst 4.2,结果显示与未加入Aptamer的对照比较来看。HotStart Bst 4.2在30℃条件下酶活几乎无活性,而60℃条件下1min内酶活完全释放,恢复100%活性
![](https://img1.17img.cn/17img/images/202408/uepic/8dc01f70-54d3-4033-9cef-16f757dacbab.jpg)
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