Hi T7 RNA聚合酶

Hi T7 RNA 聚合酶对T7噬菌体启动子具有高度的特异性，并可以其作为启动子，DNA作为模板体外合成正义链RNA。线性质粒、PCR产物双链DNA均可作为T7 RNA 聚合酶的底物模板。Hi T7 RNA聚合酶经电子重构架及库筛选，与Wild型相比，该酶的DNA模板结合区域亲和力更高，使其具有持续合成能力，从而获得更高的产量，并易于长片段RNA的合成。

Hi T7高产RNA合成试剂盒是基于Hi T7 RNA聚合酶而组建的试剂盒，20 μl反应即可获得150-200 μg的总产量（产量超过 MegaScript T7 Transcription kit）。利用该高产RNA试剂盒可在体外高效合成多种类型的 RNA，如mRNA、lncRNA、shRNA等。Hi T7 RNA聚合酶识别T7 promoter（TAATACGACTCA CTATA G G）以倒数第二个G碱基为起点开始转录，转录长度可达5000nt以上。利用该试剂盒得到的RNA适用于多种下游应用，如RNA结构和功能研究、核酸酶生物化学研究、RNase保护分析探针、印迹杂交、反义 RNA 及 RNAi 实验、微阵列分析、显微注射、体外翻译和 RNA 疫苗等。

应用

制备放射标记的 RNA 探针

合成用于体外翻译的 RNA

合成用于结构、加工和催化性能研究的 RNA

合成 RNA 反义链，调控基因表达

1X T7 Transcription Buffer

40 mM Tris (pH 7.8), 10 mM NaCl, 6mM MgCl2,2 mM Spermidine HCl, 10 mM DTT 。

酶储存液

10 mM Tris-HCl, 0.1 M NaCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 50% Glycerol, 0.01% (w/v) Triton X-100 , pH 7.5。

储存

-20°C可保存2年，避免反复冻融。

热失活

75°C，10min。

应用实例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物组进行的LAMP测试。Bst4.0 SYBR Green试剂可在标准定量PCR仪或恒温荧光仪上进行反应。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应25min的检测结果，可以看到检测反应<20min(达平台期)。

应用实例2： 用 LP1002引物组进行的LAMP测试。OG变色法为终点变色策略，在反应结束后，倒置反应管，溶解管盖上染料后，阳性样本呈现出醒目的绿色，阴性表现出橙色，区分明显。且该方法不受样本类型限制，杂质耐受性很好。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应20min后检测结果。

‍

应用实例3：采用荧光酶活测定法在30℃和60℃条件下测定HotStart Bst 4.2，结果显示与未加入Aptamer的对照比较来看。HotStart Bst 4.2在30℃条件下酶活几乎无活性，而60℃条件下1min内酶活完全释放，恢复100%活性