人T淋巴细胞白血病细胞A3培养说明书http://www.yajimall.com/article/aboutus.html一、细胞培养条件细胞名称人T淋巴细胞白血病细胞A3生长特性悬浮冻存条件无血清冻存液培养体系DMEM+10%FBS+1%双抗传代方法第一次建议1:2传代传代情况2天换液备注用无菌离心管收集瓶子培养基，留作过渡对比培养如果对比培养效果不好，建议直接购买我们的完全培养基二、细胞收到后处理培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是运输细胞的最好办法。收到细胞用75%酒精喷洒整个细胞瓶，消毒后放到超净台内严格无菌操作，将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后再做处理。显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（最好40x,100x,200x各一张），前三天照片是重要售后依据，不提供照片默认收到状态良好。（注意密封培养瓶放入培养箱时要将盖子拧松，传代后建议一瓶用原瓶的完全培养基，另外一瓶用自己配的完全培养基，以便进行对比培养）三、细胞培养步骤a、细胞传代：如果未超过80%汇合度时，将瓶装的完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；如果细胞密度超80%，即可进行传代培养，传代具体步骤如下：1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上完全培养基终止消化。3.轻轻吹打细胞，使之完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL完全培养基重悬。4. 将细胞悬液按1：2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入到37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。b、细胞冻存：1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心 5min；3、 弃上清，沉淀细胞加入1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中。4、 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱即可，如后期要将细胞转入液氮罐中，则需在-80℃冰箱 中存放24小时以上再转入液氮罐中。C、细胞复苏：1、从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速将其置入 37℃水浴中解冻， 直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；2、将冻存管中的细胞移至含 5ml 完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min；3、弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养；4、第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。四、注意事项：有些细胞贴壁不牢，在运输过程中发生容易细胞脱落，这是正常现象。如脱落很多可按此方法：将培养瓶所有培养液收集至离心管，1000rpm离心5min，收集上清作过渡培养（后期对比培养），沉淀加入胰酶1-2ml，轻轻吹打，重悬，消化1-2分钟后，加5ml完全培养基终止反应。再离心，弃上清，加1-2ml完全培养基重悬。然后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养。五、售后条款：1）细胞出现问题，可重发的情况有哪些？判定标准是什么？1. 细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，重发；2. 细胞污染问题，请在收到产品48小时内，给我们提出真实的实验结果，核实后重发；3. 常温发货的细胞静置24小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后，绝大多数细胞未存活，（需提供真实清晰的细胞状态照片），重发；4. 干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后或常温发货的细胞静置4小时候并且未开封，出现污染，重发；5. 细胞活性问题，请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后予重发；6. 细胞收到当天以及第2,3天请拍照，3天未告知的，视为产品合格。4-7天内出现问题有提供收到细胞前3天照片和细胞出现问题时照片以及细胞相关操作的详细步骤的，并跟技术人员沟通的，由技术人员判定为我方责任的，重发。技术人员判定为双方承担责任的由双方进行协商处理或者按合同价的50%收费重发。2）细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？1. 客户造成细胞污染，不重发；2. 客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；3. 非本库推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；4. 细胞状态不好，未提供细胞培养前3天照片的，不重发；5. 细胞培养时经其它处理的，不重发；6. 细胞收到2天内，未告知，不重发；7. 视具体情况而定

人卵巢癌细胞A2780/GFP培养说明书http://www.yajimall.com/article/aboutus.html一、细胞培养条件细胞名称人卵巢癌细胞A2780/GFP生长特性贴壁少量漂浮冻存条件无血清冻存液培养体系DMEM+10%FBS+1%双抗传代方法第一次建议1:2传代传代情况2天换液备注用无菌离心管收集瓶子培养基，留作过渡对比培养如果对比培养效果不好，建议直接购买我们的完全培养基二、细胞收到后处理培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是运输细胞的最好办法。收到细胞用75%酒精喷洒整个细胞瓶，消毒后放到超净台内严格无菌操作，将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后再做处理。显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（最好40x,100x,200x各一张），前三天照片是重要售后依据，不提供照片默认收到状态良好。（注意密封培养瓶放入培养箱时要将盖子拧松，传代后建议一瓶用原瓶的完全培养基，另外一瓶用自己配的完全培养基，以便进行对比培养）三、细胞培养步骤a、细胞传代：如果未超过80%汇合度时，将瓶装的完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；如果细胞密度超80%，即可进行传代培养，传代具体步骤如下：1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上完全培养基终止消化。3.轻轻吹打细胞，使之完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL完全培养基重悬。4. 将细胞悬液按1：2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入到37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。b、细胞冻存：1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心 5min；3、 弃上清，沉淀细胞加入1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中。4、 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱即可，如后期要将细胞转入液氮罐中，则需在-80℃冰箱 中存放24小时以上再转入液氮罐中。C、细胞复苏：1、从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速将其置入 37℃水浴中解冻， 直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；2、将冻存管中的细胞移至含 5ml 完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min；3、弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养；4、第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。四、注意事项：有些细胞贴壁不牢，在运输过程中发生容易细胞脱落，这是正常现象。如脱落很多可按此方法：将培养瓶所有培养液收集至离心管，1000rpm离心5min，收集上清作过渡培养（后期对比培养），沉淀加入胰酶1-2ml，轻轻吹打，重悬，消化1-2分钟后，加5ml完全培养基终止反应。再离心，弃上清，加1-2ml完全培养基重悬。然后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养。五、售后条款：1）细胞出现问题，可重发的情况有哪些？判定标准是什么？1. 细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，重发；2. 细胞污染问题，请在收到产品48小时内，给我们提出真实的实验结果，核实后重发；3. 常温发货的细胞静置24小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后，绝大多数细胞未存活，（需提供真实清晰的细胞状态照片），重发；4. 干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后或常温发货的细胞静置4小时候并且未开封，出现污染，重发；5. 细胞活性问题，请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后予重发；6. 细胞收到当天以及第2,3天请拍照，3天未告知的，视为产品合格。4-7天内出现问题有提供收到细胞前3天照片和细胞出现问题时照片以及细胞相关操作的详细步骤的，并跟技术人员沟通的，由技术人员判定为我方责任的，重发。技术人员判定为双方承担责任的由双方进行协商处理或者按合同价的50%收费重发。2）细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？1. 客户造成细胞污染，不重发；2. 客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；3. 非本库推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；4. 细胞状态不好，未提供细胞培养前3天照片的，不重发；5. 细胞培养时经其它处理的，不重发；6. 细胞收到2天内，未告知，不重发；7. 视具体情况而定。

6T-CEM人T细胞白血病细胞培养说明书http://www.yajimall.com/一、细胞培养条件细胞名称6T-CEM人T细胞白血病细胞生长特性贴壁生长冻存条件无血清冻存液培养体系1640+10%FBS+1%双抗传代方法第一次建议1:2传代 传代情况2天换液备注用无菌离心管收集瓶子培养基，留作过渡对比培养如对比培养效果不好，建议直接购买我们的完全培养基二、细胞收到后处理培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是运输细胞的最好办法。收到细胞用75%酒精喷洒整个细胞瓶，消毒后放到超净台内严格无菌操作，将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后再做处理。显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（最好40x,100x,200x各一张），前三天照片是重要售后依据，不提供照片默认收到状态良好。（传代后建议一瓶用原瓶的完全培养基，另外一瓶用自己配的完全培养基，以便进行对比培养，换液后将瓶盖拧松）三、细胞培养步骤a、细胞传代：如果未超过80%汇合度时，将瓶装的完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；如果细胞密度超80%，即可进行传代培养，传代具体步骤如下：1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上完全培养基终止消化。3.轻轻吹打细胞，使之完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL完全培养基重悬。4. 将细胞悬液按1：2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入到37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。b、细胞冻存：1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次； 2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心 5min； 3、 弃上清，沉淀细胞加入1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中。 4、 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱即可，如后期要将细胞转入液氮罐中，则需在-80℃冰箱 中存放24小时以上再转入液氮罐中。C、细胞复苏：1、从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速将其置入 37℃水浴中解冻， 直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁； 2、将冻存管中的细胞移至含 5ml 完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min； 3、弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养；4、第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。四、注意事项：有些细胞贴壁不牢，在运输过程中容易发生细胞脱落，这是正常现象。如脱离较多可将培养瓶所有培养液收集至离心管，1000rpm离心5min，收集上清作过渡培养（后期对比培养），沉淀加入胰酶1-2ml，轻轻吹打，重悬，消化1-2分钟后，加5ml完全培养基终止反应。再离心，弃上清，加1-2ml完全培养基重悬。然后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养。五、售后条款：1）细胞出现问题，可重发的情况有哪些？判定标准是什么？1. 细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，重发；2. 细胞污染问题，请在收到产品48小时内，给我们提出真实的实验结果，核实后重发；3. 常温发货的细胞静置24小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后，绝大多数细胞未存活，（需提供真实清晰的细胞状态照片），重发；4. 干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后或常温发货的细胞静置4小时候并且未开封，出现污染，重发；5. 细胞活性问题，请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后予重发；6. 细胞收到当天以及第2,3天请拍照，3天未告知的，视为产品合格。4-7天内出现问题有提供收到细胞前3天照片和细胞出现问题时照片以及细胞相关操作的详细步骤的，并跟技术人员沟通的，由技术人员判定为我方责任的，重发。技术人员判定为双方承担责任的由双方进行协商处理或者按合同价的50%收费重发。2）细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？1. 客户造成细胞污染，不重发；2. 客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；3. 非本库推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；4. 细胞状态不好，未提供细胞培养前3天照片的，不重发；5. 细胞培养时经其它处理的，不重发；6. 细胞收到2天内，未告知，不重发；7. 视具体情况而定。 

 THP-1的培养方法http://www.yajimall.com/培养条件：RPMI-1640＋10% FBS＋0.05mM β-巯基乙醇＋1% 双抗到货处理用75%酒精棉球擦拭 T25 细胞培养瓶外部，观察细胞生长情况。1.不要打开培养瓶盖，将细胞放入 37℃培养箱中静置 3-4 小时后再做处理，以稳定细胞状态。2.通过离心的方式收集细胞，然后将细胞沉淀加入5-8ml的完全培养基轻轻吹打均匀后移入新的T25培养瓶中培养。培养时的注意技巧换液前将培养瓶竖在培养箱静置1小时左右，轻轻吸掉3ml左右培养基，然后加入3ml的新鲜完全培养基，混匀后放入培养箱中培养。2.如果细胞密度比较稀，培养基没有明显变化，可以加入500ul的FBS混匀后，竖着培养。3.传代时，先按照换液步骤处理，吸掉3ml左右培养基后，加入10ml的新鲜完全培养基，混匀后分2个T25培养瓶培养。4.培养一周左右可以离心一次，以去除一些死细胞。5.该细胞比较脆弱，培养过程中不要频繁拿出来观察，以免影响细胞的生长。6.该细胞的生长环境比较敏感，需使用较好的血清培养。7.建议使用未TC处理的瓶或者皿培养。订购建议：为避免收到细胞后离心处理，推荐使用15ml离心管发货，到货后直接分装到2个T25培养瓶即可。

293A人胚肾细胞説明书培养说明书http://www.yajimall.com/一、细胞培养条件细胞名称293A人胚肾细胞生长特性贴壁生长冻存条件无血清冻存液培养体系1640+10%FBS+1%双抗传代方法第一次建议1:2传代 传代情况2天换液备注用无菌离心管收集瓶子培养基，留作过渡对比培养如对比培养效果不好，建议直接购买我们的完全培养基二、细胞收到后处理培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是运输细胞的最好办法。收到细胞用75%酒精喷洒整个细胞瓶，消毒后放到超净台内严格无菌操作，将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后再做处理。显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（最好40x,100x,200x各一张），前三天照片是重要售后依据，不提供照片默认收到状态良好。（传代后建议一瓶用原瓶的完全培养基，另外一瓶用自己配的完全培养基，以便进行对比培养，换液后将瓶盖拧松）三、细胞培养步骤a、细胞传代：如果未超过80%汇合度时，将瓶装的完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；如果细胞密度超80%，即可进行传代培养，传代具体步骤如下：1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上完全培养基终止消化。3.轻轻吹打细胞，使之完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL完全培养基重悬。4. 将细胞悬液按1：2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入到37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。b、细胞冻存：1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次； 2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心 5min； 3、 弃上清，沉淀细胞加入1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中。 4、 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱即可，如后期要将细胞转入液氮罐中，则需在-80℃冰箱 中存放24小时以上再转入液氮罐中。C、细胞复苏：1、从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速将其置入 37℃水浴中解冻， 直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁； 2、将冻存管中的细胞移至含 5ml 完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min； 3、弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养；4、第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。四、注意事项：有些细胞贴壁不牢，在运输过程中容易发生细胞脱落，这是正常现象。如脱离较多可将培养瓶所有培养液收集至离心管，1000rpm离心5min，收集上清作过渡培养（后期对比培养），沉淀加入胰酶1-2ml，轻轻吹打，重悬，消化1-2分钟后，加5ml完全培养基终止反应。再离心，弃上清，加1-2ml完全培养基重悬。然后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养。五、售后条款：1）细胞出现问题，可重发的情况有哪些？判定标准是什么？1. 细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，重发；2. 细胞污染问题，请在收到产品48小时内，给我们提出真实的实验结果，核实后重发；3. 常温发货的细胞静置24小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后，绝大多数细胞未存活，（需提供真实清晰的细胞状态照片），重发；4. 干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后或常温发货的细胞静置4小时候并且未开封，出现污染，重发；5. 细胞活性问题，请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后予重发；6. 细胞收到当天以及第2,3天请拍照，3天未告知的，视为产品合格。4-7天内出现问题有提供收到细胞前3天照片和细胞出现问题时照片以及细胞相关操作的详细步骤的，并跟技术人员沟通的，由技术人员判定为我方责任的，重发。技术人员判定为双方承担责任的由双方进行协商处理或者按合同价的50%收费重发。2）细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？1. 客户造成细胞污染，不重发；2. 客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；3. 非本库推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；4. 细胞状态不好，未提供细胞培养前3天照片的，不重发；5. 细胞培养时经其它处理的，不重发；6. 细胞收到2天内，未告知，不重发；7. 视具体情况而定。 

人膀胱癌细胞5637培养说明书http://www.yajimall.com/一、细胞培养条件细胞名称人膀胱癌细胞5637生长特性贴壁生长冻存条件无血清冻存液培养体系1640+10%FBS+1%双抗传代方法第一次建议1:2传代 传代情况2天换液备注用无菌离心管收集瓶子培养基，留作过渡对比培养如对比培养效果不好，建议直接购买我们的完全培养基二、细胞收到后处理培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是运输细胞的最好办法。收到细胞用75%酒精喷洒整个细胞瓶，消毒后放到超净台内严格无菌操作，将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后再做处理。显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（最好40x,100x,200x各一张），前三天照片是重要售后依据，不提供照片默认收到状态良好。（传代后建议一瓶用原瓶的完全培养基，另外一瓶用自己配的完全培养基，以便进行对比培养，换液后将瓶盖拧松）三、细胞培养步骤a、细胞传代：如果未超过80%汇合度时，将瓶装的完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；如果细胞密度超80%，即可进行传代培养，传代具体步骤如下：1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上完全培养基终止消化。3.轻轻吹打细胞，使之完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL完全培养基重悬。4. 将细胞悬液按1：2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入到37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。b、细胞冻存：1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次； 2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心 5min； 3、 弃上清，沉淀细胞加入1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中。 4、 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱即可，如后期要将细胞转入液氮罐中，则需在-80℃冰箱 中存放24小时以上再转入液氮罐中。C、细胞复苏：1、从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速将其置入 37℃水浴中解冻， 直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁； 2、将冻存管中的细胞移至含 5ml 完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min； 3、弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养；4、第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。四、注意事项：有些细胞贴壁不牢，在运输过程中容易发生细胞脱落，这是正常现象。如脱离较多可将培养瓶所有培养液收集至离心管，1000rpm离心5min，收集上清作过渡培养（后期对比培养），沉淀加入胰酶1-2ml，轻轻吹打，重悬，消化1-2分钟后，加5ml完全培养基终止反应。再离心，弃上清，加1-2ml完全培养基重悬。然后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养。五、售后条款：1）细胞出现问题，可重发的情况有哪些？判定标准是什么？1. 细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，重发；2. 细胞污染问题，请在收到产品48小时内，给我们提出真实的实验结果，核实后重发；3. 常温发货的细胞静置24小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后，绝大多数细胞未存活，（需提供真实清晰的细胞状态照片），重发；4. 干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后或常温发货的细胞静置4小时候并且未开封，出现污染，重发；5. 细胞活性问题，请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后予重发；6. 细胞收到当天以及第2,3天请拍照，3天未告知的，视为产品合格。4-7天内出现问题有提供收到细胞前3天照片和细胞出现问题时照片以及细胞相关操作的详细步骤的，并跟技术人员沟通的，由技术人员判定为我方责任的，重发。技术人员判定为双方承担责任的由双方进行协商处理或者按合同价的50%收费重发。2）细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？1. 客户造成细胞污染，不重发；2. 客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；3. 非本库推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；4. 细胞状态不好，未提供细胞培养前3天照片的，不重发；5. 细胞培养时经其它处理的，不重发；6. 细胞收到2天内，未告知，不重发；7. 视具体情况而定。 

A-72犬癌细胞培养说明书http://www.yajimall.com/article/aboutus.html一、细胞培养条件细胞名称A-72犬癌细胞生长特性贴壁生长冻存条件无血清冻存液培养体系DMEM+10%FBS+1%双抗传代方法第一次建议1:2传代 传代情况2天换液备注用无菌离心管收集瓶子培养基，留作过渡对比培养如果对比培养效果不好，建议直接购买我们的完全培养基二、细胞收到后处理培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是运输细胞的最好办法。收到细胞用75%酒精喷洒整个细胞瓶，消毒后放到超净台内严格无菌操作，将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后再做处理。显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（最好40x,100x,200x各一张），前三天照片是重要售后依据，不提供照片默认收到状态良好。（注意密封培养瓶放入培养箱时要将盖子拧松，传代后建议一瓶用原瓶的完全培养基，另外一瓶用自己配的完全培养基，以便进行对比培养）三、细胞培养步骤a、细胞传代：如果未超过80%汇合度时，将瓶装的完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；如果细胞密度超80%，即可进行传代培养，传代具体步骤如下：1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上完全培养基终止消化。3.轻轻吹打细胞，使之完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL完全培养基重悬。4. 将细胞悬液按1：2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入到37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。b、细胞冻存：1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次； 2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心 5min； 3、 弃上清，沉淀细胞加入1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中。 4、 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱即可，如后期要将细胞转入液氮罐中，则需在-80℃冰箱 中存放24小时以上再转入液氮罐中。C、细胞复苏：1、从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速将其置入 37℃水浴中解冻， 直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁； 2、将冻存管中的细胞移至含 5ml 完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min； 3、弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养；4、第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。四、注意事项：有些细胞贴壁不牢，在运输过程中发生容易细胞脱落，这是正常现象。如脱落很多可按此方法：将培养瓶所有培养液收集至离心管，1000rpm离心5min，收集上清作过渡培养（后期对比培养），沉淀加入胰酶1-2ml，轻轻吹打，重悬，消化1-2分钟后，加5ml完全培养基终止反应。再离心，弃上清，加1-2ml完全培养基重悬。然后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养。五、售后条款：1）细胞出现问题，可重发的情况有哪些？判定标准是什么？1. 细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，重发；2. 细胞污染问题，请在收到产品48小时内，给我们提出真实的实验结果，核实后重发；3. 常温发货的细胞静置24小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后，绝大多数细胞未存活，（需提供真实清晰的细胞状态照片），重发；4. 干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后或常温发货的细胞静置4小时候并且未开封，出现污染，重发；5. 细胞活性问题，请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后予重发；6. 细胞收到当天以及第2,3天请拍照，3天未告知的，视为产品合格。4-7天内出现问题有提供收到细胞前3天照片和细胞出现问题时照片以及细胞相关操作的详细步骤的，并跟技术人员沟通的，由技术人员判定为我方责任的，重发。技术人员判定为双方承担责任的由双方进行协商处理或者按合同价的50%收费重发。2）细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？1. 客户造成细胞污染，不重发；2. 客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；3. 非本库推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；4. 细胞状态不好，未提供细胞培养前3天照片的，不重发；5. 细胞培养时经其它处理的，不重发；6. 细胞收到2天内，未告知，不重发；7. 视具体情况而定。 

细胞培养板的选购技巧http://www.yajimall.com/article/aboutus.html细胞培养板是进行细胞培养的重要工具，选择适合的细胞培养板对于细胞的生长和实验结果具有重要影响。本文将介绍一些选择细胞培养板的关键因素，并提供一些应用案例进行说明。 1. 培养板材质：细胞培养板的材质是一个重要的考虑因素。目前市场上主要有塑料和玻璃两种材质的培养板。塑料培养板价格较低且易于使用，而玻璃培养板具有更好的透明度和耐高温的特性。根据实验需要，可以选择适合的材质。 2. 表面涂层：细胞培养板的表面涂层可以影响细胞黏附和增殖。常用的涂层包括凝胶体、胶原蛋白、明胶等。例如，凝胶体涂层可以增加细胞对基质的黏附，有助于细胞的生长和扩增。选择合适的涂层可以提高细胞的生存率和实验结果的准确性。3. 通气性：细胞培养过程中，细胞需要氧气和二氧化碳的交换。因此，细胞培养板的通气性是一个重要考虑因素。一般来说，培养板的材料应该具有良好的通气性，以保证细胞的正常生长和代谢。4. 尺寸和孔径：细胞培养板的尺寸和孔径可以根据实验的需要进行选择。常见的尺寸有6孔、12孔、24孔等。对于需要大批量培养的实验，可以选择大孔径的培养板。而对于需要单独培养和处理的细胞，可以选择小孔径的培养板。 5. 特殊应用：一些特殊实验需要特殊设计的细胞培养板。例如，用于细胞迁移或测量细胞侵袭能力的Transwell培养板；用于细胞色素检测的96孔或384孔微孔板等。在选择细胞培养板时，需要考虑实验的具体需求，并选择适合的特殊应用型培养板。

1、用OVA（卵清蛋白）做一些哮喘，过敏性肠炎的模型，后来会检测粘膜特异性的sIgA以及血清里面IgG，IgE等指标。2、对于一些小分子的检测，比如前列腺素、糖皮质激素的检测，我的理解是要用竞争法ELISA去检测，也要采用这个方法的盒子。一般细胞因子的检测，都是采用常规的夹心法ELISA检测，因为因子分子量比较大，一般10几个KD左右，很容易找到两个或者多个抗原表位。而小分子很难找到两个不同的表位，也就决定了包被抗体和检测抗体无法同时结合小分子并固相化。解决方案就是酶标板上包被二抗，每个孔加入一定量的酶标的小分子，然后加样品，再加不带标记的检测抗体，显色底物。样品的目的小分子的含量越高，吸光度越低。3、对于胰岛素的检测。4、做实验面向的ELISA试剂盒种属主要是人，大鼠和小鼠，现在市面上鸡、牛、马、羊、兔各种指标的盒子都有售，真不知道这些抗体是怎么来的。这些炎症指标还是有很大种属特异性的。5、好多人有个误区，拿来一个指标就想当然地尝试用ELISA去检测，其实应该多动脑，该检测活性的检测活性，该做western的做western。ELISA试剂盒检测方法简单，灵敏度高。

人子宫内膜癌细胞KLE培养说明书http://www.yajimall.com/article/aboutus.html一、细胞培养条件细胞名称人子宫内膜癌细胞KLE生长特性贴壁生长冻存条件无血清冻存液培养体系DMEM/F12+10%FBS传代方法次建议1:2传代 传代情况2天换液备注用无菌离心管收集瓶子培养基，留作过渡培养二、细胞收到后处理培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是运输细胞的办法。收到细胞用75%酒精喷洒整个细胞瓶，消毒后放到超净台内严格无菌操作，将细胞放入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后再做处理。显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（40x,100x,200x各一张），前三天照片是重要售后依据，不提供照片默认收到状态良好。（注意密封培养瓶放入培养箱时要将盖子拧松，传代后建议一瓶用原瓶的完全培养基，另外一瓶用自己配的完全培养基，以便进行对比培养） 三、细胞培养步骤a、细胞传代：如果未超过80%汇合度时，将瓶装的完全培养液收集至离心管中，留6ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；如果细胞密度超80%，即可进行传代培养，传代具体步骤如下：1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上完全培养基终止消化。3.轻轻吹打细胞，使之完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL完全培养基重悬。4. 将细胞悬液按1：2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入到37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。b、细胞冻存：1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心 5min；3、 弃上清，沉淀细胞加入1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中。4、 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱即可，如后期要将细胞转入液氮罐中，则需在-80℃冰箱 中存放24小时以上再转入液氮罐中。细胞复苏：从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速将其置入 37℃水浴中解冻， 直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；将冻存管中的细胞移至含 5ml 完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min；弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养；第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。 注意事项：个别贴壁细胞贴壁不牢，在运输过程中发生细胞脱落，这是正常现象。请将培养瓶所有培养液收集至离心管，1000rpm离心5min，收集上清作过渡培养（后期对比培养），沉淀加入胰酶1-2ml，轻轻吹打，重悬，消化1-2分钟后，加5ml完全培养基终止反应。再离心，弃上清，加1-2ml完全培养基重悬。然后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养。人子宫内膜癌细胞KLE培养说明书五、售后条款：1）细胞出现问题，可重发的情况有哪些？判定标准是什么？1. 细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，重发；2. 细胞污染问题，请在收到产品48小时内，给我们提出真实的实验结果，核实后重发；3. 常温发货的细胞静置24小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后，绝大多数细胞未存活，（需提供真实清晰的细胞状态照片），重发；4. 干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后或常温发货的细胞静置4小时候并且未开封，出现污染，重发；5. 细胞活性问题，请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后予重发；6. 细胞收到当天以及第2,3天请拍照，3天未告知的，视为产品合格。4-7天内出现问题有提供收到细胞前3天照片和细胞出现问题时照片以及细胞相关操作的详细步骤的，并跟技术人员沟通的，由技术人员判定为我方责任的，重发。技术人员判定为双方承担责任的由双方进行协商处理或者按合同价的50%收费重发。2）细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？1. 客户造成细胞污染，不重发；2. 客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；3. 非本库推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；4. 细胞状态不好，未提供细胞培养前3天照片的，不重发；5. 细胞培养时经其它处理的，不重发；6. 细胞收到2天内，未告知，不重发；7. 视具体情况而定。 人子宫内膜癌细胞KLE培养说明书

淋巴细胞和NK细胞的生成http://www.yajimall.com/article/aboutus.htmlCLP被认为能产生B淋巴细胞、T淋巴细胞和NK细胞。骨髓中B淋巴细胞和T淋巴细胞祖细胞的发育与抗原无关。SCF和Flt3L似乎都参与了小鼠早期淋巴系祖细胞的生成。B淋巴细胞祖细胞在大多数哺乳动物的骨髓中，在犬、猪和反刍动物的佩耶氏结中，以及在鸟类的法氏囊中生成成熟的、未成熟的B淋巴细胞。大约2到3天，前B淋巴细胞在骨髓中发育为成熟的幼稚B淋巴细胞并进入循环。在骨髓中生成的B淋巴细胞中，只有不到20%成为外周成熟B淋巴细胞池的一部分，大多数细胞在骨髓或进入血液后被淘汰，B淋巴细胞也可以在成年动物外周血的淋巴组织中增殖。与其他血细胞一样，骨髓和淋巴器官的微环境对淋巴细胞的生成很重要。抗原敏感的表面免疫球蛋白阳性B淋巴细胞的生成以免疫球蛋白基因位点的连续重排和表面蛋白的选择性表达为标志。尽管许多细胞因子（包括SCF、Flt3L、SDF-1和IGF）参与骨髓中B淋巴细胞的生成，但IL-7似乎是一个特别重要的正生长因子。B淋巴细胞的生成受到多种因素的抑制，包括TGF-β、IFN-α、IFN-β和IFN-γ。哺乳动物次级淋巴器官T淋巴细胞区的抗原刺激可以激活循环B淋巴细胞，然后迁移到淋巴结、佩耶氏结和脾脏的滤泡。B淋巴细胞的活化和分化为浆母细胞，是由微生物产物、细胞因子和结合在T淋巴细胞和树突状细胞表面分子组合诱导的。浆母细胞可以在生成它们的淋巴器官中发育为浆细胞，也可以通过血液迁移并在周围组织或骨髓中发育为浆细胞。SDF-1将循环浆母细胞吸引到骨髓，包括SDF-1和IL-6在内的因子通过阻止细胞凋亡来促进浆细胞的发育。T淋巴细胞祖细胞离开骨髓，迁移到胸腺。这些细胞的归处取决于它们与胸腺内皮细胞上各种粘附分子的相互作用以及胸腺基质细胞生成的特异性趋化因子。T淋巴细胞祖细胞在胸腺微环境和胸腺产生的生长因子(包括Flt3L和IL-7)的影响下发育成T淋巴细胞。哺乳动物胸腺成熟后，T淋巴细胞会聚集在淋巴结皮质旁区、脾脏小动脉周围淋巴结和佩耶氏结滤泡间区。大多数NK细胞是由骨髓中的祖细胞生成的，它们在骨髓中经过一周或更久时间的扩增和成熟，然后释放到血液中。控制其产生的生长因子需要进一步的表征，但SCF、IL-2、IL-7和IL-15可以在体外刺激NK细胞从祖细胞发育而来。NK细胞亚群也在胸腺和其他可能的器官，如淋巴结、肝脏和脾脏中发育。这些部位可能依赖于骨髓来源的祖细胞和/或未成熟的NK细胞从血液中进入这些器官，它们在微环境的影响下成熟。

植物根系活力检测试剂盒(TTC 比色法)http://www.yajimall.com/article/aboutus.html植物根系是活跃的吸收器官和合成器官，根的生长情况和代谢水平即根系活力将直接影响植物地上部分的生长和营养状况以及最终产量，是植物生长的重要生理指标之一。TTC(2，3，5-氯化三苯基四氮唑)是一种氧化还原物质，是标准氧化电位为 80mV 的氧化还原色素，溶解于水为无色，但还原后即生成红色而不溶于水的三苯基甲腙(TTF)，TTF 比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化，所以 TTC 常被用作酶试验的氢受体。 植物根系活力检测试剂盒(TTC 比色法)，又称作植物根系脱氢酶活性检测试剂盒，其检测原理是当测定植物根系活力时，以 TTC 为底物，保温 1~4 小时，根系中脱氢酶能够还原 TTC 并生成不溶于水的红色 TTF，再用有机溶剂(乙酸乙酯或丙酮等)将其从根中提取出来，用分光光度计或酶标仪检测 485nm 处吸光度，进而计算出 TTC 的还原量，以该还原量表示脱氢酶活性，并作为植物根系活力的指标。该试剂盒主要用于定量测定植物的根系活力或脱氢酶活性。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。产品组成：编号名称YS102350TStorage试剂(A): TTC1gRT 避 光试剂(B): TTC Assay buffer250mlRT试剂(C): TTC 终止液100mlRT试剂(D): Na2S2O4 粉末0.1gRT使用说明书1 份自备材料：1、蒸馏水、乙酸乙酯2、离心管或容量瓶、滤纸3、恒温箱或水浴锅、研钵或匀浆器4、分光光度计或酶标仪、比色杯或 96 孔板操作步骤(仅供参考)：1、配制 TTC 溶液(0.4%)：称取 0.4g TTC 完全溶解于 100ml 蒸馏水即成，配制成溶液后应 4℃避光保存，若变红应弃用。2、配制 TTC Assay buffer 工作液：将 TTC 溶液(0.4%)与 TTC Assay buffer 等比例混合即成，建议现用现配， 4℃避光保存，若变红应弃用。3、配制 TTF 标准工作液： 取 0.25ml TTC 溶液(0.4%)置于 10ml 离心管或容量瓶，加入少许 Na2S2O4 粉末(一般 2mg 左右)，混匀，产生红色的不溶于水的红色颗粒物 TTF，加10ml 乙酸乙酯，充分混合溶解颗粒，静置分层（下层 0.25ml 为无色水层，不可用）， 上层红色溶液中 TTF 浓度为 100μg/ml。按下表分别移取上层红色溶液 0.25、0.5、1、1.5、2ml 置于离心管或容量瓶中， 用乙酸乙酯补加至 10ml，即获得 TTF 系列标准管。4、准备样品：取 0.2~0.5g 植物须根系，洗净，用滤纸吸干，完全浸没于 TTC Assay buffer 工作液中，37℃避光孵育 1~3h，加入 2ml TTC 终止液终止反应。同时做一空白对照实验，即根系先完全浸没于 2ml TTC 终止液以杀死根样，再加入 10ml TTC Assay buffer 工作液，37℃避光孵育 1~3h。5、提取：分别将上述实验组和空白对照组的根系取出，滤纸吸干水分，放入研钵或匀浆器中，加入 3~4ml 乙酸乙酯，充分研磨或匀浆，以提取出 TTF。把红色提取液(TTF)转移至离心管，并用少量乙酸乙酯把残渣洗涤 2~3 次，再将洗涤液一并转移至离心管，最后补加乙酸乙酯至 10ml，摇匀。6、测定：比色杯光径 1.0cm，系列标准管以“0”号管调零，测定 1~5 号管 485nm 的吸光度值；样品管以空白对照组样品提取液做参比，调零，以分光光度计或酶标仪测定实验组样品提取液在 485nm 的吸光度值。计算：以系列标准溶液 TTF 含量(25、50、100、150、200μg)为横坐标，以对应吸光度为纵坐标，绘制 TTF 标准曲线，根据回归方程计算待测样品的 TTF 含量或 TTC 还原量(μg)，即为根系活力或脱氢酶活性。根系(脱氢酶)活力[mg/(g·h)]=m/(1000×W×t)式中：m=根据标准曲线查得的样品提取液TTF 含量(μg)= TTC 还原量(μg) W=植物须根系的重量(g)t=孵育时间(h)注意事项：1、 配制好的 TTC 溶液(0.4%)和 TTC Assay buffer 工作液应避光保存，若变红应弃用。2、 根系种类不同，取样量可有不同。3、 根系应吸干水分但不能挤压伤及细胞，才能测定准确。4、 提取用的研钵或匀浆器、试管、比色皿均应保持干燥，没有水分。5、 由于本实验采用有机溶剂（乙酸乙酯或丙酮）提取 TTF，因此不能用一次性塑料比色皿或者酶标条进行检测。建议用石英比色皿或玻璃比色皿检测，检测完成后用乙醇清洗并用水冲洗干燥即可。6、 如果没有分光光度计，也可以使用酶标仪测定，但应注意酶标板每孔检测体积。7、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。附录：参考标准曲线范围： 测定空白对照，通过分光光度计测定其吸光度多在0.03-0.07 之间。 测定 TTF 标准在 25、50、100、150、200、400μg 时吸光度， 据此 作出其标准曲线如下：注意：由于检测仪器和操作手法等条件的不同，参考值范围会有波动，该值仅供参考， 对于要求精确计算植物根系含量的，可以采用标准曲线多点重复测定；根据 测定经验显示，TTF 含量在 5μg 以下， 400μg 以上，标准曲线会有偏差。有效期：12 个月有效。

TMB底物显色试剂盒(ELISA，HRP显色)説明书http://www.yajimall.com/细胞转染是指将外源分子（如DNA、RNA等）导入真核细胞的技术。目前，其已成为实验室工作中最常涉及的基本方法，是研究基因表达调控、突变分析等的常规工具。转染方法大致可分为物理介导（如电穿孔法、显微注射和基因枪等）、化学介导（脂质体及其代替物、磷酸钙等）和生物介导（各类病毒，包括腺病毒、慢病毒、逆转录病毒、腺相关病毒等）三类途径。细胞转染又分为瞬时转染和稳定转染，瞬时转染是指外源基因进入受体细胞后，存在于游离的载体上，不整合到细胞的染色体上，基因表达维持时间较短，通常在96h以内；稳定转染是指DNA整合到宿主细胞的染色体中，使宿主细胞可长期表达目的基因。目前，大多采用依据不同质粒载体含有的抗性标志选用相应的抗生素对靶细胞进行筛选，常用的抗生素有嘌呤霉素（Puromycin）、G418（Geneticin）等。1、主要有下面几种化学法：磷酸钙法、DEAE-右旋糖苷法、阳离子脂质体法；物理法：电穿孔法、显微注射法、biolistic颗粒传递法；病毒介导法：逆转录病毒、腺病毒A. 阳离子脂质体法：带正电的脂质体与核酸带负电的磷酸基团形成复合物被细胞内吞。特点：简单通用，适用性广，转染效率高，重复性好，但转染时需除血清，转染效率随细胞类型变化大。由于脂质体复合物与贴壁细胞的接触机会远大于悬浮细胞，所以贴壁比悬浮转染效率要高。悬浮细胞建议使用电穿孔法。B. 电穿孔法：利用高压电脉冲对细胞膜的干扰，使其形成利于核酸进入的微孔。C. 逆转录病毒（RNA）：通过病毒中膜糖蛋白和宿主细胞表面的受体相互作用进入宿主细胞，之后反转录酶启动合成DNA并随机整合到宿主基因组中。特点：稳定转染，可用于难转染的细胞、原代细胞，体内细胞等，但携带基因不能太大。D. 腺病毒（双链DNA）：先和细胞表面的受体结合，继而在αV整合素介导下被细胞内吞。特点：可用于难转染的细胞。2、影响转染的因素血清：血清影响复合物的形成，降低转染效率。阳离子脂质体和DNA的最佳量在使用血清时会有所不同，因此想在转染培养基中加入血清时要进行条件优化。大部分细胞可以在无血清培养基中几个小时内保持健康。抗生素：比如青霉素和链霉素，是影响转染的培养基添加物。这些抗生素一般对于真核细胞无毒，但阳离子脂质体试剂增加了细胞的通透性，使抗生素可以进入细胞。这降低了细胞的活性，导致转染效率低。细胞代数：转染前细胞最好经过1-2次传代保证细胞生长旺盛容易转染，注意贴壁细胞一旦长满就不好转染。细胞铺板密度：一般转染时，贴壁细胞密度为70%-90%，悬浮细胞密度为2*10^6--4*10^6 细胞/ml 时效果较好。确保转染时细胞没有长满或处于静止期。铺板细胞数目的增加可以增加转染活性和细胞产量。DNA质量：DNA质量对转染效率影响非常大。一般的转染技术基于电荷吸引原理，如果DNA不纯，如带少量的盐离子，蛋白，代谢物污染都会显著影响转染复合物的有效形成和转染的进行。

一文了解细胞转染http://www.yajimall.com/细胞转染是指将外源分子（如DNA、RNA等）导入真核细胞的技术。目前，其已成为实验室工作中最常涉及的基本方法，是研究基因表达调控、突变分析等的常规工具。转染方法大致可分为物理介导（如电穿孔法、显微注射和基因枪等）、化学介导（脂质体及其代替物、磷酸钙等）和生物介导（各类病毒，包括腺病毒、慢病毒、逆转录病毒、腺相关病毒等）三类途径。细胞转染又分为瞬时转染和稳定转染，瞬时转染是指外源基因进入受体细胞后，存在于游离的载体上，不整合到细胞的染色体上，基因表达维持时间较短，通常在96h以内；稳定转染是指DNA整合到宿主细胞的染色体中，使宿主细胞可长期表达目的基因。目前，大多采用依据不同质粒载体含有的抗性标志选用相应的抗生素对靶细胞进行筛选，常用的抗生素有嘌呤霉素（Puromycin）、G418（Geneticin）等。1、主要有下面几种化学法：磷酸钙法、DEAE-右旋糖苷法、阳离子脂质体法；物理法：电穿孔法、显微注射法、biolistic颗粒传递法；病毒介导法：逆转录病毒、腺病毒A. 阳离子脂质体法：带正电的脂质体与核酸带负电的磷酸基团形成复合物被细胞内吞。特点：简单通用，适用性广，转染效率高，重复性好，但转染时需除血清，转染效率随细胞类型变化大。由于脂质体复合物与贴壁细胞的接触机会远大于悬浮细胞，所以贴壁比悬浮转染效率要高。悬浮细胞建议使用电穿孔法。B. 电穿孔法：利用高压电脉冲对细胞膜的干扰，使其形成利于核酸进入的微孔。C. 逆转录病毒（RNA）：通过病毒中膜糖蛋白和宿主细胞表面的受体相互作用进入宿主细胞，之后反转录酶启动合成DNA并随机整合到宿主基因组中。特点：稳定转染，可用于难转染的细胞、原代细胞，体内细胞等，但携带基因不能太大。D. 腺病毒（双链DNA）：先和细胞表面的受体结合，继而在αV整合素介导下被细胞内吞。特点：可用于难转染的细胞。2、影响转染的因素血清：血清影响复合物的形成，降低转染效率。阳离子脂质体和DNA的最佳量在使用血清时会有所不同，因此想在转染培养基中加入血清时要进行条件优化。大部分细胞可以在无血清培养基中几个小时内保持健康。抗生素：比如青霉素和链霉素，是影响转染的培养基添加物。这些抗生素一般对于真核细胞无毒，但阳离子脂质体试剂增加了细胞的通透性，使抗生素可以进入细胞。这降低了细胞的活性，导致转染效率低。细胞代数：转染前细胞最好经过1-2次传代保证细胞生长旺盛容易转染，注意贴壁细胞一旦长满就不好转染。细胞铺板密度：一般转染时，贴壁细胞密度为70%-90%，悬浮细胞密度为2*10^6--4*10^6 细胞/ml 时效果较好。确保转染时细胞没有长满或处于静止期。铺板细胞数目的增加可以增加转染活性和细胞产量。DNA质量：DNA质量对转染效率影响非常大。一般的转染技术基于电荷吸引原理，如果DNA不纯，如带少量的盐离子，蛋白，代谢物污染都会显著影响转染复合物的有效形成和转染的进行。

DPPH自由基清除率检测试剂盒(比色法)http://www.yajimall.com/article/aboutus.html一、产品简介：在生命活动的代谢过程中不断产生各种自由基而自由基的积累会使机体产生氧化损伤而引起衰老、肿瘤、中风、心肌炎和糖尿病等慢性疾病，在众多自由基中2，2-二苯基-1-苦基苯肼( DPPH)是一种较稳定的自由基，当有自由基清除剂存在时颜色由紫色向黄色转变，吸光度随之变小。雅吉生物 DPPH自由基清除率检测试剂盒(比色法)又称氮自由基清除能力检测试剂盒或氮自由基清除率检测试剂盒，其检测原理是DPPH自由基是一种较稳定的含氮自由基，含一个单电子，溶于乙醇后溶液呈紫色，在517nm下有强吸收，如果有其他物质提供一个电子与此单电子配对，溶液会褪色，褪色程度与接受电子的量呈正比，通过吸光度下降的程度来反应样品的氮自由基清除能力，主要用于检测血清、植物组织、抗氧化类食品、保健品及药品等样本。该试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。二、产品组成：名称规格100T存储试剂(A): 氮自由基提取液100mlRT试剂(B): DPPH溶液100ml4℃避光试剂(C): 维生素C10mg4℃使用说明书一份三、自备材料：1、蒸馏水、无水乙醇2、实验材料∶植物组织(芹菜、绿豆、玉米等叶片)、血液、组织样本等3、研钵或匀浆器或粉碎机或超声破碎机4、离心机、离心管5、恒温水浴锅、恒温干燥箱6、电子天平、30~50目筛7、分光光度计、比色皿四、操作步骤(仅供参考)：1、准备样品∶①植物样品∶取新鲜植物样本，清洗干净，研钵研碎(粉碎)，干燥箱烘干后过筛，称取0.05g 样品，加入0.8ml氮自由基提取液，40℃水浴浸提30~60min，10000rpm离心10min，上清液待用，4℃保存备用(亦可参考相关资料提取方法提取)。②血浆、血清和尿液样品︰血浆(用肝素或枸橼酸钠抗凝，不宜使用EDTA 抗凝)4°℃5000rpm离心10min，取上清液待用;血清或尿液样品可直接测定。③细胞样品︰按每5×10°个细胞加入0.8ml氮自由基提取液，超声破碎(功率200W,超声3s，间隔10s，重复30次)，10000rpm 离心10min，取上清液待用。④果汁、葡萄酒等样品︰按样品∶氮自由基提取液=1∶9的比例震荡混匀，10000rpm离心10min，上清液待用，4℃保存备用。⑤高活性样品︰如果样品中有效浓度较高，可用提取液进行恰当的稀释。2、配制维生素C溶液︰将一支10mg维生素C充分溶解于1ml氮自由基提取液中，即成10mg/ml维生素C溶液;可分成0.1ml的小份，-20℃保存。3、配制Vc标准工作液︰如需测线性关系，建议用氮自由基提取液将10mg/ml维生素C溶液稀释至20、15、10、8、6、4、2μg/ml的Vc标准工作液;如需清除率约为100%的阳性对照，建议选用大于 30μg/ml 的Vc标准工作液。4、分光光度计开机预热 30min，调节波长517nm(500~530nm亦可)，无水乙醇调零。5、DPPH加样∶按照下表设置空白管、样本测定管、样本对照管、阳性对照管，溶液应按照顺序依次加入，混匀，室温避光静置30min。加入物(ml) 空白管 样本测定管样本对照管阳性对照管（标准管）氮自由基提取液0.2———上清液—0.20.2—VC标准工作液———0.2无水乙醇0.90.91.8 0.9DPPH溶液0.90.9— 0.96、OD值测定∶将各管溶液依次加入到比色皿中，用分光光度计检测各管吸光度值，依次记为A0、A1、A2、A3。五、计算：阳性对照·DPPH清除率(%)= (A0- A3)/A0×100%待测样本·DPPH清除率(%)=[A0-( A1- A2)]/A0×100%备注:A0=空白管的吸光度值A1=样本测定管的吸光度值A2=样本对照管的吸光度值A3=阳性对照管的吸光度值六、注意事项：1、正式测定之前建议选择2~3个预期差异较大的样本做预实验。2、实验材料应尽量新鲜，当天提取当天测定。3、不同样本清除DPPH自由基的能力差异很大。4、如样本DPPH清除率大于90%，应用提取液稀释；如样本 DPPH清除率小于5%，应提高样本用量以提高有效成分浓度。5、样品中不宜添加Triton、DTT等可能影响氧化还原反应的成分。6、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。七、有效期：6 个月有效。4℃运输，4℃保存。附录∶标准曲线制作∶在室温条件下按说明书操作，对系列VC标准工作液(20、15、10、8、6、4、2、1μg/ml ）进行吸光度的测定，其数值及标准曲线如下(仅供参考)︰初始吸光度值调零吸光度值.DPPH清除率无水乙醇0.032空白管0.710.678VC标准20μg/ml 0.0750.04393.65782VC标准15μg/ml 0.0770.04593.36283VC标准10μg/ml 0.1080.07688.79056VC标准8μg/ml 0.1840.15277.58112VC标准6μg/ml 0.350.31853.09735VC标准4μg/ml 0.5120.4829.20354VC标准2μg/ml 0.6690.6376.047198VC标准1μg/ml 0.7620.73-7.66962由上图可知：VC标准工作液在2~8ug/ml时线性关系良好， ·DPPH清除率与Vc浓度呈正相关，当Vc浓度大于10即开始有偏差，Vc浓度大于12时， ·DPPH清除率大于90%。

 THP-1的培养方法http://www.yajimall.com/article/aboutus.html培养条件：RPMI-1640＋10% FBS＋0.05mM β-巯基乙醇＋1% 双抗到货处理用75%酒精棉球擦拭 T25 细胞培养瓶外部，观察细胞生长情况。1.不要打开培养瓶盖，将细胞放入 37℃培养箱中静置 3-4 小时后再做处理，以稳定细胞状态。2.通过离心的方式收集细胞，然后将细胞沉淀加入5-8ml的完全培养基轻轻吹打均匀后移入新的T25培养瓶中培养。培养时的注意技巧换液前将培养瓶竖在培养箱静置1小时左右，轻轻吸掉3ml左右培养基，然后加入3ml的新鲜完全培养基，混匀后放入培养箱中培养。2.如果细胞密度比较稀，培养基没有明显变化，可以加入500ul的FBS混匀后，竖着培养。3.传代时，先按照换液步骤处理，吸掉3ml左右培养基后，加入10ml的新鲜完全培养基，混匀后分2个T25培养瓶培养。4.培养一周左右可以离心一次，以去除一些死细胞。5.该细胞比较脆弱，培养过程中不要频繁拿出来观察，以免影响细胞的生长。6.该细胞的生长环境比较敏感，需使用较好的血清培养。7.建议使用未TC处理的瓶或者皿培养。订购建议：为避免收到细胞后离心处理，推荐使用15ml离心管发货，到货后直接分装到2个T25培养瓶即可。

凝血酶时间(TT)检测试剂盒説明书http://www.yajimall.com/article/aboutus.html 一、产品简介：静脉血离体后至完全凝固所需的时间即为凝血时间,它是反映内源性凝血系统各凝血因子活性的筛选实验。在凝血酶作用下，待测血浆中的纤维蛋白原转变为纤维蛋白，当待测血浆中抗凝物质增多时，凝血酶时间会相应延长。雅吉生物凝血酶时间(TT)检测试剂盒用于检测人、动物血浆凝血酶时间，凝血酶时间延长见于肝素增多或类肝素抗凝物质存在,纤维蛋白(原)降解产物(FDP)增多以及低(无)纤维蛋白原血症;凝血酶时间缩短见于血样本有微小凝血块或存在钙离子。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。 二、产品组成：名称规格50T100T存储试剂(A): 柠檬酸钠抗凝剂(109mM)10ml20ml4℃试剂(B): 凝血酶溶液10ml20ml4℃使用说明书一份 三、自备材料：1、枸橼酸钠抗凝剂采血管、采血针、止血带2、离心机、计时器或秒表、水浴锅 四、操作步骤(仅供参考)：1、制备待测血浆∶取新鲜待测静脉血1.8ml，与0.2ml柠檬酸钠抗凝剂(109mM)按9:1混合，轻轻颠倒混匀。(或用含有1/10体积的柠檬酸钠抗凝剂的塑料管或硅化玻璃管采血)2、3000rpm(或2500g）离心10~15min，收集上层液(缺乏血小板的血浆)，转移至塑料试管或离心管，以防止血小板被激活；同时应设正常对照血浆。3、取待测抗凝血浆0.1ml，置于37℃水浴中，温育5min。4、加入凝血酶溶液0.1ml，记录凝固时间。重复2~3次取平均值。  参考区间：10~16s，若超过正常对照3s以上者为异常。 五、注意事项：1、以上操作，应同时测定正常对照。2、样本应避免溶血或组织液污染。3、获得样本后，应及时检测，一般不应超过1h，置于冰箱中也不应超过4h。4、采血必须使用一次性塑料注射器或硅化玻璃注射器，贮血必须使用塑料试或硅化玻璃管，不宜使用普通玻璃容器，避免凝血因子活化。5、采血时止血带不可束缚过紧，而且不应超过5分钟，否则导致凝血及纤溶因子活化。6、分离血浆应在3000rpm离心10~15min，务必去除血小板。7、本实验不宜用肝素、EDTA或草酸盐作为抗凝剂。8、测定温度在36.5~38.5℃，过低或过高均可使TT延长。9、本产品仅用于科研领域，不得用于临床诊断或其他用途。10、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 六、有效期：6个月有效。4℃运输，4℃保存。 

ATCC细胞操作指南http://www.yajimall.com/article/aboutus.html收到细胞的注意事项　　冻存的ATCC细胞株和杂交瘤细胞株在运送过程中使用干冰保持低温。收到冻存细胞后，可以立即解冻复苏，去除二甲基亚砜（DMSO）后进行细胞培养。如果不立即复苏培养细胞，必须将细胞冻存管放置于液氮罐存储。请不要将细胞存储在-130℃以上的温度。如果温度不够低，达不到-130℃，细胞活力会迅速下降。　　产品说明书和质检报告（COA）　　ATCC每个细胞株都有一份产品说明书（product sheet），其中包含细胞株的信息和详细的操作指南。细胞株的所有详细介绍可以在ATCC网站找到，产品说明书和COA也可以从ATCC网站下载。　　冻存细胞的复苏和培养　　1.先准备好细胞培养皿或细胞培养瓶，及产品说明推荐的相应细胞培养基。并在37℃水浴中预先温热细胞培养基。　　2.小心取出装有细胞的冻存管，保持管盖拧紧，将冻存管盖以下的部分置于37℃水浴中并轻微的搅拌以帮助解冻。解冻过程应该尽快，大约短于2分钟或待最后一块小冰晶体刚融化，就应将细胞冻存管取出水浴。　　3.在从水浴中取出的细胞冻存管表面喷洒70%乙醇配制的消毒剂，用无菌纸巾或纱布试干。之后的操作步骤都应该遵循在无菌条件下生物安全柜中严格操作。　　4.小心拧开冻存管的顶部，将管内容物用1ml移液枪转移到含9毫升培养基的无菌离心管中。离心5到7分钟(125×g),小心吸去上清液以去除抗冻剂(二甲基亚砜)，避免丢失细胞沉淀。将细胞沉淀重悬于配好的完全培养基中。将细胞悬液转移到培养容器，轻轻摇晃使细胞均匀的分布。生长较慢的细胞株可重悬于5-8ml培养基并转移到T25培养瓶。生长较快的细胞株可重悬于12-20ml培养基并转移到T75培养瓶。ATCC网站有各个细胞株的具体生长状况及培养方法记载。　　5.将细胞培养容器置于细胞培养箱，在温度37℃,二氧化碳浓度5%的培养条件下进行孵育。细胞培养24小时后应在显微镜下观察细胞形态和生长状况。　　为了确保细胞活力、遗传基因型稳定和表型的稳定，细胞株的培养需要保持在对数期。这意味着需要定期对细胞进行传代。并且注意在细胞进入生长平台期之前，即单层细胞100%汇合长满前或悬浮细胞达到其推荐的最大细胞密度之前，要进行细胞传代。监测细胞生长和绘制每个细胞株的生长曲线都有助于确定细胞株的生长特性。