PolyA 聚合酶为高效加A聚合酶,该酶以RNA为模板在RNA的3′末端加入20~200个A碱基。可应用于增强mRNA的稳定性,及microRNA加A尾,为cDNA合成提供oligo-dT引物结合位点等。HaiGene生产的PolyA聚合酶是E.coli来源的,该酶是以单链RNA 作为模板,ATP作为底物进行聚合反应的。
来源
重组表达的E.coli来源的Poly(A)聚合酶。
单位定义
在37℃、pH7.9 的条件下,以ATP 为底物,10 分钟内把1 nmol的AMP 聚合到RNA上所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。
应用
RNA 3' 标记增强RNA稳定性microRNA加A尾,为cDNA合成提供oligo-dT引物结合位点
储存
-20°C可保存2年。
应用实例1:在以A3824-03或 A3828-03,用 LP1002引物组进行的LAMP测试。Bst4.0 SYBR Green试剂可在标准定量PCR仪或恒温荧光仪上进行反应。以体外转录RNA为模板,1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应25min的检测结果,可以看到检测反应<20min(达平台期)。
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应用实例2: 用 LP1002引物组进行的LAMP测试。OG变色法为终点变色策略,在反应结束后,倒置反应管,溶解管盖上染料后,阳性样本呈现出醒目的绿色,阴性表现出橙色,区分明显。且该方法不受样本类型限制,杂质耐受性很好。以体外转录RNA为模板,1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应20min后检测结果。
![](https://img1.17img.cn/17img/images/202408/uepic/1ab7e4d0-ee4e-4ac0-a331-5e5047ebd645.jpg)
应用实例3:采用荧光酶活测定法在30℃和60℃条件下测定HotStart Bst 4.2,结果显示与未加入Aptamer的对照比较来看。HotStart Bst 4.2在30℃条件下酶活几乎无活性,而60℃条件下1min内酶活完全释放,恢复100%活性
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