TdT末端转移酶

末端转移酶（TdT）是一种不依赖于模板的DNA聚合酶，催化脱氧核苷酸结合到DNA分子的3’羟基端。带有突出、凹陷或平滑末端的单双链DNA分子 均可作为TdT的底物，加尾长度可达5~300nt。本酶经电子重构架技术筛选，使其可以在45°C高温下反应，从而避免因DNA二级结构造成的加尾效 率下降。优化的活性中心结构，使其对模板底物结合能力更强，底物加尾比例更高。该末端转移酶（TdT）广泛用于DNA的3’末端添加同聚物、利用修饰碱基（如 ddNTP，DIGdUTP）标记DNA 3’末端、TdT介导的dUTP 缺口末端标记技术（细胞凋亡的原位检测）等试验。

应用

寡核苷酸或DNA 3’羟基末端标记

DNA末端加尾(DNA tailing)

5’-RACE

合成同一种脱氧核苷酸的寡聚链

活性定义

37℃  60分钟内，催化1nmol dNTP加入到多聚核苷酸3’羟基末端中所需的酶量定义为1个活性单位

储存

-20℃可保存3年。

热失活

75°C 20min。

注意事项

1、适量EDTA可使Terminal Transferase的活性丧失。

2、金属离子螯合剂，较高浓度的铵根离子、氯离子、碘例子和磷酸根离子均对Terminal Transferase活性具有抑制作用。

热失活

75°C，20min。

应用实例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物组进行的LAMP测试。Bst4.0 SYBR Green试剂可在标准定量PCR仪或恒温荧光仪上进行反应。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应25min的检测结果，可以看到检测反应<20min(达平台期)。

应用实例2： 用 LP1002引物组进行的LAMP测试。OG变色法为终点变色策略，在反应结束后，倒置反应管，溶解管盖上染料后，阳性样本呈现出醒目的绿色，阴性表现出橙色，区分明显。且该方法不受样本类型限制，杂质耐受性很好。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应20min后检测结果。

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应用实例3：采用荧光酶活测定法在30℃和60℃条件下测定HotStart Bst 4.2，结果显示与未加入Aptamer的对照比较来看。HotStart Bst 4.2在30℃条件下酶活几乎无活性，而60℃条件下1min内酶活完全释放，恢复100%活性