在评估药物治疗中的细胞应答过程时，细胞增殖动力学分析经常用于对细胞种类及生长速度进行观察。传统的细胞计数常使用生化试剂检测（如MTT、CCK-8）或对细胞进行荧光标记。然而，多数荧光染料对活细胞具有毒性，明显影响细胞的长期培养，如使用DAPI/Hoechst标记细胞核。此外，也可构建表达荧光标记的稳定细胞系，但是这需要投入很大的精力和财力。       相对地，无标记细胞计数具有明显的优势，无需进行耗时耗力的细胞染色，更不用担心荧光染料对细胞活力的影响。        使用Cytation5的高对比度明场成像模块，基于聚焦、离焦图像和Gen5 分析软件，即可快速完成对每个细胞的识别并进行密度计算（图1、图2）。 图1. 高对比度明场细胞直接计数（a）Nih3t3细胞的聚焦图像（b）离焦图像可根据每个细胞产生独立的亮点（c）Gen5软件Masking工具可根据每个亮点进行细胞计数 图2. 多个时间点的细胞密度计算结果       将Cytation5基于高对比度的明场无标记细胞计数结果和使用Hoechst标记获得的结果进行对比，来自两种技术的NIH3T3细胞计数结果在不同的细胞密度下高度可比，将点拟合到非线性回归方程中，R2值为0.99，斜率为0.97，两者几乎没有差异（图3）。 图3. cytation5明场成像和hoechst荧光成像的结果对比       如图4所示，两种方法表现出了两种不同的细胞生长特征。与细胞汇合度数据相比，基于无标记细胞计数的数据更准确，测得的生长曲线对数期更宽（至100%汇合）。 图4. 不同时间点高对比明场细胞计数相对于细胞汇合数据的比较        在高通量药物筛选领域，Cytation 5可以轻易地监测不同药物作用下的细胞生长曲线（图5），以及计算药物的半抑制浓度IC50（图6）。 图5. 在两种药物8种不同浓度的作用下，Hela细胞在96孔微孔板基质上5天时间内的细胞生长曲线图 图6. 计算药物对不同细胞的半抑制浓度ic50       Biotek智能成像设备Cytation 5非常适合于高通量检测和显微成像，在无标记细胞计数实验中的表现非凡。配合Biospa8自动化孵育器，可进行细胞动力学增殖监测。         美国伯腾仪器有限公司（Biotek Instruments, Inc.,）是全球领先的设计、制造和生产商，其产品一直保持美国原产地设计和制造。自从1981年推出第一款酶标仪，Biotek 逐渐发展成为以微孔板为基础、旨在提高医疗、制药、农业和研究等领域客户生产效率的全球领先者之一。biotek产品线覆盖酶标仪、液体处理系统、成像系统、自动化系统，为客户提供全方位的技术服务。

今天小编为大家带来梅特勒-托利多电位滴定仪精编简介，简单粗暴有内容，打动客户从这里开始！  one click® 一键滴定 ，高效 ，安全 ，模块化梅特勒-托利多模块化解决方案1. 为您的需求量身定制：专注于行业应用、拥有多种附件2. 在一个包装中，获得您所需要的一切、在一台设备上提高效率3. be future ready / 为将来做准备、简单的附件添加   新超越系列滴定仪主要特点1. 多次标准加入法，实现安全自动化的钠含量测定2. 控制终端：新的一键用户界面，提高效率3. smartsample™阅读器，用于高效安全的数据传输4. pdf报告以及其他更灵活的数据输出方式5. statuslight™：提高效率

精彩内容RST触屏流变仪—流变仪届的iphone x，今天小编就带大家探索一下它的奥秘，十分钟玩转RST触屏流变仪！ 1.什么是RST流变仪RST触屏流变仪是当今世界上首屈一指的仪器专业制造商--美国Brookfield公司自主研发的新一代的流变仪，代表着Brookfield推荐给客户的最好选择--同时具有控制剪切率（Sec-1或RPM）和剪切应力（Pa或Torque）两种模式，特别适用于复杂的流变学分析。 2.RST触屏流变仪特点控制应力/速率操作分析综合流变行为；多步骤测试程序功能；自动转子识别功能，界面友好液晶屏显示，用户自定义数据安全管理功能，转子快速连接功能，间隙自动调节功能，仪器表面易于清洁，设计持久耐用，可长期无故障运行。Tst-cps锥板型触屏流变仪样品量少、剪切率范围宽、控温方式多样多种转子选择温度控制范围：-20-250℃。 Rst-cc:圆柱型触屏流变仪精确剪切率控制、绝对粘度测量、样品量少、多种测试配件、易于控温温度控制范围：-20-180℃。 Rst-sst:软固体触屏流变仪适用于膏状物，浆体，和含颗粒物质的流变测量、提供物料的粘弹性数据、多种测试配件、易于控温。便携式Rs流变仪双电源特性--便携式应用的充电电池和标准电源供电，可在在实验室、生产现场或者野外场合使用。     3.Rst触屏流变仪的应用领域1、石化产品和高分子材料:油、润滑剂、油脂、熔融物、树脂2、食品：奶制品、调味品、巧克力、凝胶体3、药物：乳剂、混悬液、药膏、分散体4、化妆品和清洁剂：护肤油、香波、面霜、洗涤剂、乳胶5、涂料:颜料、油墨、油漆分散体6、化学品:胶黏剂、混合物、密封剂、浆料 2017年9月份，Mariana Perez Herrera在《 Food Chemistry 》发表了一篇名为“Rheological characterization of gum and starch nanoparticle blends”的学术文章，作者通过流变仪对凝胶与淀粉纳米粒子的共混物的流变学性质进行研究。结果表明，淀粉纳米粒子的来源、浓度、热稳定性都会对共混物的粘度和粘弹性能产生影响。流变仪发展至今，自身在不断改进，应用领域也在不断扩展，而Rst触屏流变仪的多功能，多样性，也是小编推荐给大家的最佳选择。 

研究者们设计CAR并将其表达于T细胞表面，通过CAR特异的识别肿瘤抗原激活T细胞！然而T细胞表面本来是存在TCR用于识别MHC分子提呈的抗原肽的，TCR的激活对于T细胞有着重要意义，那么CAR-T细胞上的TCR激活对于CAR-T细胞起着怎样的作用呢？此次整理分享的就是TCR信号对于CAR-T功能的影响 - 研究者以CAR4（CD4+ CAR-T）和CAR8（CD8+ CAR-T）为研究对象，分析TCR信号对于这两种亚型CAR-T功能的影响。In vitro和in vivo来看CAR4和CAR8对于肿瘤细胞的杀伤、延长小鼠存活时间没差异肿瘤细胞刺激后CAR4产生的细胞因子更多（IL-10除外） CAR4及CAR8单独灌注时扩增能力无差异，但1:1混合后灌注后CAR8扩增更快为研究TCR的作用，做了表达HY抗原特异性TCR的CAR4和CAR8 In vitro：TCR激活及CAR激活均能引起CAR-T分泌细胞因子脱粒TCR激活引起CAR表达下调In vivo：HY抗原特异性TCR的CAR4和CAR8分别灌注表达TCR抗原HY阳性、阴性的荷瘤小鼠对于TCR抗原HY阳性荷瘤小鼠CAR8“失效”，CAR4依然有效找CAR8“失效”原因：TCR抗原HY刺激后引起CAR8细胞凋亡marker caspase3/7表达增多，CAR8扩增受到抑制，却不影响CAR4找CAR8“失效”原因：TCR抗原HY刺激后引起CAR8细胞“疲劳”marker表达上调，CAR4不受影响TCR的激活受MHC限制，CD4细胞接受的是MHC-II分子提呈的抗原肽，而MHC-II不像MHC-I那么普遍的表达，它大多表达于造血细胞，是否是因为这种限制对CAR存在保护作用呢？因此构建了骨髓移植模型除female移植female组外CAR8细胞不能像CAR4细胞一样杀死肿瘤细胞，延长荷瘤小鼠存活时间和前面模型一致，在移植模型上CAR8在TCR激活的情况下“疲劳”marker表达显著升高，CAR4不会换一种TCR抗原（OVA）验证：CAR8在TCR激活的条件下依然“失效”，表达“疲劳”markerCAR4长时间暴露于TCR特异抗原（80天，前面的模型时间较短-7天）也出现了表达凋亡marker、扩增受限、“疲劳”marker表达上调的现象从基因表达的水平看：CAR8 TCR单独激活与CAR、TCR双重激活基因表达模式相似，说明在双信号刺激下CAR8是TCR信号占主导（而CAR4是TCR信号占主导）；无论TCR、CAR如何激活CAR8凋亡、抑制受体相关基因表达均较CAR4高（与前面蛋白水平的结果一致） 这篇文章着眼于一个在明显不过的点-TCR信号对于CAR-T功能的影响，发现了TCR信号对于CAR8细胞发挥功能显著的抑制作用（促进凋亡、疲劳），这些抑制作用在蛋白及核酸水平都做了验证！除了这篇文章近期还有其他CNS级的文章讲了CD4 CAR-T的“好”，后面会进行分享！- 已经获批上市的CAR-T产品均是“混合物”，这些研究成果的发表对于相关产品的升级意义重大！另外有个小细节：这篇文章发现TCR激活引起CAR表达下调，上一次分享的文章发现CD22 CAR在灌注一段时间之后表达下调（基因拷贝数没变化、mRNA上调，CAR下调是在转录之后发生的）- 这两篇文章这个小点凑到一起是有“故事”可讲的:-P Y Yang, ME Kohler, CD Chien, et al. TCR engagement negatively affectsCD8 but not CD4 CAR T cell expansion and leukemic clearance.[J]. Science Translational Medicine, 2017, 9(417):eaag1209. 想了解更多CNS级期刊最新内容，请关注我们的公众号，常有更新哦，也可加笔者微信交流：qianle522568！

梅特勒-托利多超微量紫外分光光度计UV5Nano ，最小的样品量、最大的性能检测。实验检测，只需一滴！卓越的性能，精准的检测                                 四大优势助您实验无忧！一：LockPathTM 技术快速, 节约样品，可靠的UV/VIS测量 ；准确的光程调节 – 重复性好，精度高；无光程漂移 – 低维护费用。二：双操作模式、结构小巧超微量台和标准比色皿测量；台面不会超过一张A4纸大小；操作无需电脑。三：FastTrackTM 技术亮丽的触摸屏终端；人体工程学设计；快速操作，戴上手套也能按屏结果可以保存在U盘；状态指标灯。四：OneClickTM 紫外可见分光光度计快捷键操作超级简单好用；直接测量应用或梅特勒-托利多方法；具有满足美国药典要求的法规软件。

精彩内容工匠精神，专注于实验室高压灭菌器！追求的目标：使得实验室灭菌器更安全、更简单、更精确、更经济。我们拥有超过 20 年的经验，通过与众多专业科学家持续不断的实际合作，我们知道如何配置您的灭菌器功能，帮助您解决最复杂的灭菌工作。1.紧凑的结构通过创新的设计采用更加合理的尺寸：一如既往，外形秉承节约空间的紧凑型理念，同时新设计增加了内部的高度，使整机尺寸更加合理。这样的优势：满足多数标准培养基瓶和锥形瓶的最大容量要求，使装载容量增加了 50 % 之多。2.最先进的工程技术所有型号的灭菌器都经过重新设计，代表了我们最先进的工程技术，所有机械及电子部件都用于达到完善的灭菌程序，确保实验室可以完全满足当前及以后的各种需要，满足全部相关国家规范和法规。3.安全设施新型自动门锁系统：关门是如此的简单，同时又如此的安全，门锁在关上盖子以后自动被圈锁锁定。自动开门系统：门锁可以根据需求自动开启-即可以使用按键触发，也可以设定灭菌结束自动打开。4.智能操作 一键搞定在所有 Systec V 和 D 系列灭菌器上，都使用触摸按键，大屏幕液晶显示屏清晰易读。所需的任何信息都非常容易在屏幕上读取，可以选用多种操作语言，控制菜单。PS：触摸按键均可升级~Systec 灭菌器目前在全球都有非常高的市场占有率，随时为您服务，满足您的咨询、购买及服务要求！

 本周我司会同HEKA亚太区张经理，德国总部工程师Frank进行了中国科学技术大学合肥微尺度物质国家实验室扫描光电化学显微镜项目的安装培训验收工作。1.0 产品培训       从北京到合肥、从美国到合肥，不同的起点同样的终点—中国科学技术大学，HEKA扫描光电化学显微镜安装培训验收项目开始。    2.0 产品安装       48个小时，吃住在实验室，只为能让安装顺利进行。由于国内计算机的系统问题，驱动一直不能成功导入，安装过程一度停止。鉴于Frank后续行程紧凑，为了确保培训的完整性，Frank连续三天每天工作至深夜两点，确保安装培训效果，为厂家的敬业态度疯狂打Call ！！！3.0 产品验收      经过 3天的不懈努力，整个项目的培训安装验收顺利完成，感谢客户的密切配合，感谢厂家的不懈努力，为德泉点赞！          HEKA SPECM是一套集材料形貌、电学性质、光学性质研究于一体的强大系统，形貌分辨率达到1.5nm，电流分辨率达到pA级别，在空气及溶液中均可测试，并且可与多种仪器进行连接，如拉曼、红外等。基于强大的研发团队支持，可根据客户实验设计需求进行模块化定制。       北京德泉兴业商贸有限公司，拥有一支朝气蓬勃、团结协助的专业技术队伍，本着“诚实、守信”的经营作风、锐意进取的创新精神、客户至上的服务意识，赢得了广大用户的信赖和支持。我们以科技力量为依托，以市场为导向，不断引进新产品，更好的为广大客户提供满意的服务。    

针对CD19的CAR-T已经在FDA获批上市，CAR-T市场前景喜人，但CD19 CAR-T并不能“包治百病”，有研究者发现随着治疗，CD19的表达会下降甚至消失，进而使疗效降低引起复发！本次整理分享的是关于B-ALL靶点CD22的内容。研究者首先设计了针对CD22的CAR，进行了I期临床试验：CD22 CAR的设计及CAR-T灌注之后的长时间监测21例病人“量效”及副作用CRS的概况：CR率达73% 15#病人CD79A（a pan-B cell marker, in red）的IHC片子及13#病人的PET片子 对于CD19 CAR-T疗效不好的病人（CD19dim、CD19-），CD22 CAR-T均能有效杀死肿瘤细胞上面的数据报的是“喜”，这次试验也有“忧”-部分病人CD22 CAR-T治疗后出现了复发，研究者对于这部分病人进行了数据“深挖”：对所有病例肿瘤表面CD22的表达情况进行检测发现：所有病例CD22表达均有不同程度的下降，复发病人CD22表达下降明显 研究者猜测复发和CD22表达下调存在关联，因此设计了四种CD22表达程度不同的细胞系，体外用这些细胞刺激CD22 CAR-T发现CD22的表达量和T细胞产生效应分子IFNγ、IL2的量正相关 小鼠体内实验也证明了CD22 CAR-T的疗效和CD22的表达量正相关 所设计的验证实验初步证实了CD22表达下调和复发的关联，研究者开始分析CD22下调的机制：基因拷贝数未发生变化，治疗后CD22表达下调但mRNA却出现上调，暗示CD22的下调是转录之后的调节引起的 将病人肿瘤细胞移植到小鼠上之后灌注CD22 CAR-T引起了CD22表达的下调 小鼠模型上CD22基因拷贝数、mRNA的变化趋势与病人身上一致，综合起来说明复发是由于CD22转录之后的下调引起的从上面的数据可以看出CD22 CAR-T并未表现出相较CD19 CAR-T的优越性，市场价值并不大，文章作者再次“爆发”-设计CD19/CD22双CAR！CD19/CD22双CAR的设计及体外实验结果 CD19/CD22双CAR小鼠体内实验结果整篇文章从CD22到CD19/CD22双CAR，笔者从旁观者的角度，窃以为这篇文章的亮点就在于临床试验不那么成功的情况下（有病例出现复发）：分析数据-挖掘信息-提出猜想-设计实验进行验证-得到结论-基于结论进一步设计出双CAR，目前这个双CAR正在进行新一轮的临床试验！- 科学研究的魅力就在于基于数据，理性的“讲故事”，将事情不断“推进”吧！另外文章作者在讨论里提到肿瘤是高度异质性的细胞群体，群体内部可能本来就存在CD22表达水平较低的细胞，CAR-T治疗后它们存活下来占了“主导”。笔者之前读过类似文章（乳腺癌HER2表达不同细胞相互转化），有兴趣的可以留言索取！ Terry J Fry, Nirali N Shah, Rimas J Orentas, et al. CD22-targeted CAR T cells induce remission in B-ALL that is naive or resistant to CD19-targeted CAR immunotherapy[J]. Nature medicine, 2017:nm.4441. 想了解更多CNS级期刊最新内容，请关注我们的公众号，常有更新哦，也可加笔者微信交流：qianle522568！ 

作为适用于核酸、引物和蛋白等分析测定的最常规仪器，紫外可见分光光度计已成为生命科学研究和开发中最常用的仪器之一。但您认真考虑过怎样选择一款合适的分光光度计嘛？        您在日常实验过程中最常用的应用？今后是否有新的应用？        您需要检测的样品体积？如果是多体积样品，您所需要的比色皿容积和支架的种类？        您是否需要同时检测多个样品？如果需要，选择哪种多样品支架？        您需要的检测灵敏度？对于低浓度样品，是否需要仪器具备多带宽选择？        是否支持多用户登录？预设程序及安全用户登录功能？        数据如何保存、提取? 这份产品指南会告诉您如何从 Biochrom选择分光光度计，包括新的超微量分光光度计以及 SD卡等新的附件。 无论您从事的最基本的浓度测定，还是要求最精确的质量分析，我们都能提供合适的仪器满足您的要求。便捷式超微量分光光度计NanoVueTM Plus 超微量分光光度计能够以移液器点样的方式快速完成核酸、蛋白的定量，样品体积仅0.5至5ul，而且无需比色皿和毛细管等附件，整个测量在数秒内完成。特别适合希望快速完成样品测定的实验室，以及待测样品体积较小或较为珍贵的用户。 常规应用分光光度计Biochrom提供多种应用分光光度计，例如DNA和RNA的定量分析、蛋白浓度测定和细胞浓度测定。 这些仪器包括UltrospecTM 10, 一款可配电池和打印机的细胞密度计； Novaspec III 和 Navaspec Plus可进行蛋白定量分析及酶动力学研究。GeneQuant TM 100 and 1300可广泛应用于分子生物学实验。额外特性对于更复杂的应用，Ultrospec 2100提供了温控单元和比色皿架选项，Ultrospec 8000 and 9000 是高性能、双光束设备，完全符合药典指南要求，适用于制药企业质量控制和研发实验室的精确要求。       不知道这份简单的分析，能否帮您选到一款合适的分光光度计，欲了解更多关于分光光度计的内容，欢迎来电咨询！

免疫检查点是机体为防止免疫系统过度激活，杀伤自身而存在的！肿瘤微环境处在过度的免疫抑制状态，因此通过使用免疫检查点抑制剂（anti-PD L1、anti-CTLA4等）可解除免疫抑制提高肿瘤免疫活性，杀灭肿瘤细胞！但此类药物解除免疫抑制的作用会引起过度的免疫激活，临床上68.7%的病人会出现三级甚至四级的副作用！此次分享的内容 - 作者通过利用可与细胞外基质（ECM）结合的多肽修饰PD L1和CTLA4抗体，瘤旁注射，将抗体“锁”在肿瘤部位以降低全身反应，具体内容如下：设计：利用可与ECM结合的胎盘生长因子-2（PIGF-2）的123-144肽段修饰抗体 电泳、质谱表征修饰后的抗体：重链、轻链都键合了多肽 只有多肽修饰后的抗体可与8中不同的细胞外基质蛋白结合 多肽修饰不影响抗体对抗原的结合瘤旁注射抗体6天后肿瘤组织冰冻切片检测：只有多肽修饰组在肿瘤部位仍可检出抗体，多肽修饰提高了抗体定位于肿瘤部位的能力 多肽修饰显著降低血浆中抗体浓度多肽修饰后血清中细胞因子上调副作用得到显著抑制 多肽修饰后淋巴细胞不再浸润到肝，不再引起糖尿病 验证安全性之后用多种细胞、多个给药方式验证有效性：多肽修饰抗体有更优异的抗肿瘤活性 验证有效性之后看机制：多肽修饰促进了T细胞对肿瘤组织的浸润 验证有效性之后看机制：多肽修饰促进了肿瘤部位T细胞的激活，但不影响Treg细胞比例 验证有效性之后看机制：多肽修饰促进了肿瘤部位抑瘤效应分子的生成验证有效性之后看机制：多肽修饰不影响肿瘤引流淋巴结中效应T细胞及Treg细胞比例，提高了记忆T细胞及PD-1+ CD8+细胞比例（还做了脾-略）机制研究时发现多肽修饰后肿瘤引流淋巴结中记忆T细胞比例升高，研究瘤旁注射修饰抗体对远距离肿瘤生长是否有抑制作用（抗转移能力）：左侧瘤旁注射修饰抗体不但能抑制左侧肿瘤生长，而且对右侧肿瘤生长亦产生抑制作用！ 前面是在移植性肿瘤模型上验证的有效性，在临床相关肿瘤模型上验证有效性：多肽修饰提高了抗体抗肿瘤作用 综上，文章作者利用多肽修饰降低了抗体药物的副作用，提高了活性，究其本质这来源于对抗体药物“药代动力学”性质的改进：巧妙的利用多肽结构上的选择性将抗体药物“锁死”在肿瘤部位，免得它们到处“惹是生非”！ Ishihara J, Fukunaga K, Ishihara A, et al. Matrix-binding checkpoint immunotherapies enhance antitumor efficacy and reduce adverse events[J]. Science Translational Medicine, 2017, 9(415). 想了解更多CNS级期刊最新内容，请关注我们的公众号，常有更新哦，也可加笔者微信交流：qianle522568！

昨天是二十四节气的小雪，最近全国的温度都会降在10摄氏度以下。从今天起，各位同学一定要做好保暖措施。虽然我们感觉天气寒冷，可是我们的蛋白超级喜欢这个温度！一般来说，在短时间内，蛋白在4-6摄氏度可以保持相对稳定，这对于我们纯化的实验来说至关重要。除了高温外，我们还有另外一个破坏蛋白质结构的罪魁祸首——蛋白酶。虽然蛋白酶在维持活细胞的正常功能中起着至关重要的作用，但没有研究人员会喜欢他们蛋白样品中含有蛋白酶，这是因为蛋白酶会一直“咀嚼”目标蛋白，特别是如果目标蛋白含量本来就很低，蛋白损失的后果就会更加严重。值得庆幸的是，我们有着大量的蛋白酶抑制剂可以拯救我们蛋白。在适当含量的抑制剂的帮助下，可以防止这些蛋白酶在分离和纯化您的样品以及进行随后的下游应用（例如蛋白质印迹，报告基因分析，蛋白质活性测定等）的过程中水解您的蛋白。        蛋白酶抑制剂：它们是什么以及它们是如何工作的？蛋白酶抑制剂是通过可逆地或不可逆地结合到蛋白酶活性位点或通过修饰它们的结构使蛋白酶的活性失活或阻断的一种生物或化学化合物。蛋白酶抑制剂可以基于其作用的蛋白酶（即丝氨酸蛋白酶，半胱氨酸蛋白酶，天冬氨酸蛋白酶和金属蛋白酶）和/或其作用机制（即可逆和不可逆抑制剂）进行分类。在实验室中，我们会见到一些蛋白酶抑制剂如AEBSF（4-（2-氨基乙基）苯磺酰氟盐酸盐），抑肽酶，bestatin，EDTA / EGTA，亮肽素，胃蛋白酶抑制剂A和PMSF（苯基甲磺酰氟）等。其中，AEBSF和PMSF在实验室中最为常见，因为这些化合物在抑制几种丝氨酸蛋白酶（例如胰蛋白酶，胰凝乳蛋白酶和凝血酶）的作用方面表现出色，这些蛋白酶恰好是细胞和组织样品中最主要的蛋白酶组，在干扰样品的蛋白酶中占有很大的比例。          Tips：如何选择正确的蛋白酶抑制剂？         正如前所述，目前商业化的蛋白酶抑制剂各种各样，并且随着科研人员的研究，其数量仍在不断增加。那么如何才能找到最适合您的实验的蛋白酶抑制剂？。一、使用混合试剂Cocktail。蛋白酶抑制剂的混合物通常是在裂解细胞，均化组织或执行破坏细胞膜释放蛋白酶的任何方案时的首选和最合理的选择。通过使用Cocktail，您可以更好地保护您的蛋白质免受广泛多种蛋白酶的作用，且无需花费大量时间去选择“某一种”，再经过昂贵的试验和错误找到正确的抑制剂。另外，蛋白酶抑制剂Cocktail以其固有的良好可靠性和重复性在科学家中也很受欢迎。    如果您想在不影响细胞健康的情况下保存您的蛋白质，我们依然建议您使用蛋白酶抑制剂Cocktail。只要确保您选择的鸡尾酒含有所有类型的蛋白酶的抑制剂即可，因为一旦纯化过程完成，这些不必要的抑制剂也可以轻易地从样品中除去。二、需要更精准的选择方法。因为不同的抑制剂的工作方式不同，所以在选择合适的特定抑制剂之前，您可能需要确定阻断哪种蛋白酶。尽可能在确定重点关注前，广泛地进行筛选，参考历史文献，继而针对感兴趣的组织和蛋白质采取更有针对性的方法。通过?KTA™ 系统利用亲和层析，您也可以轻松除去样品中滞留的蛋白酶。 好了，我们下期再见。品牌简介        ?KTA™在瑞典语里是真实或纯正的意思，是GE Healthcare 层析系统的品牌，全球超过 100,000 科学家选用该系统在蛋白分离和纯化领域取得突破和进展。这个高贵的血统正飞速进入新一代：?KTA™ avant与?KTA™ pure。自1996引入以来，?KTA™对全世界科学家意味着卓越的纯化性能。       几乎可以纯化任何生物分子，使?KTA™蛋白纯化系统可以应对最简单和最艰难的挑战。?KTA™平台涵盖了从科研实验室到工艺开发再到大规模生产所有层析和切向流过滤技术。       ?KTA™系统由智能可扩展的UNICORN软件操作，使您更容易控制纯化工艺的每个阶段。       广泛的预装层析柱、层析介质、切向流过滤、?KTA™系统和UNICORN软件一起提供完整的解决方案，获得更好的结果。北京德泉兴业商贸有限公司为GE healthcare北京及山东科学仪器独家授权。现已提供全线产品支持，欢迎来函及致电：

什么是离心机离心机是一种高速旋转机械，它是利用离心力，不同物质在离心场中沉淀速度的差异，对混合溶液进行快速分离的专门设备，是一种将装有样品溶液的离心管、瓶或袋韵转头置于离心轴上，利用转头绕轴高速旋转所产生的强大离心力，使样品中不同性质颗粒相互分离的特殊装置，可以实现样品的分析、分离。离心机分类按用途可分为: 分析式离心机和制备式离心机按转速可划分为：普通离心机(低速)：高速离心机：8000 ～30000r／rain；                            超速离心机：30000 ～80000r／min；     超高速离心机：>80000r／min；按结构可分为: 台式离心机、多管微量台式离心机、细胞涂片离心机、血液洗涤台式离心机、高速冷冻离心机、大容量低速冷冻离心机、低速冷冻离心机、台式高速冷冻离心机、台式低速自动平衡离心机等按体积和容量可分为: 落地式离心机，台式离心机和迷你（掌上）离心机。落地式的处理容量大体积大，迷你离心机处理容量小体积小。可以根据实验目的和实验需要，选择不同容量、不同转速、不同温度控制的离心机。离心机机构离心机结构主要由转头、系统控制、电机驱动系统、制冷系统和机械系统等几部分组成。转子是离心机的主要配件。简单的说，可以将离心机分为主机和可拆卸的转子（转头）两部分，一个多功能主机通常可以配多个转子，靠不同型号的转子来满足不同的需要来实现其“多功能”的,这样可以有效的降低采购成本。转头的选择？离心管、离心瓶的选择？控制系统如何工作？更多内容，期待下次分享。

        免疫检查点抑制剂（PD-1抗体等）在临床上展现出可喜的效果，但仅有部分病人对此类药物有响应！原因在于这类药物是通过阻断肿瘤细胞与免疫细胞互作（T细胞表面PD-1与肿瘤细胞表面PD-L1互作）而起效的，当免疫细胞无法浸润到肿瘤部位时，即便抗体药物能与肿瘤细胞表面PD-L1结合，肿瘤部位由于缺少可对肿瘤细胞进行“杀戮”的T细胞，药物也无法发挥作用！       此次分享的是关于溶瘤病毒的内容：溶瘤病毒可作为诱饵，调动免疫系统，将T细胞吸引到肿瘤部位！这篇Cell将溶瘤病毒与PD-1抗体联用进行了临床试验 - 溶瘤病毒将CD8+ T细胞吸引到肿瘤部位，PD-1抗体解除免疫抑制促进T细胞对肿瘤细胞的杀伤，达到1+1大于2的效果！具体内容如下： 溶瘤病毒设计：选择性的在肿瘤细胞复制并分泌GM-CSF 给药方案：第一周给予溶瘤病毒Talimogene Laherparepvec，第六周给予PD-1抗体药物Pembrolizumab 联合给药后，肿瘤生长受到了抑制，病人存活率升高        对于患者疾病得到治愈是最为重要的，但对于我们研究者来讲，造福患者是一方面，研究疾病发生发展是另一个很重要的任务！文章作者对于联合给药方案对病患细胞、分子水平所产生的影响进行了深入的研究。CR, complete response; PD, progressive disease; PR, partial response联合给药对于PD-1抗体单独给药无效的低CD8+细胞浸润、PD-L1-、IFNγ-病人仍有效 肿瘤组织切片IHC结果：第6周给予病毒后肿瘤部位CD8+细胞浸润增加 深入到效应分子granzyme B、转录层面看到给予病毒后T细胞的变化病毒促进T细胞浸润到肿瘤部位，促进肿瘤细胞表达PD-L1 前面数据主要关注肿瘤微环境的变化，文章作者还对循环T细胞亚型进行了分析-溶瘤病毒对于循环T细胞也有激活作用       肿瘤免疫治疗是个极具前景的方向：CART关注的是实际和肿瘤细胞斗争的T细胞，通过修饰使T细胞像导弹一样对肿瘤细胞进行精确打击；免疫检查点抑制剂关注的是肿瘤微环境，营造合适的“氛围”促进免疫细胞对肿瘤的杀伤；溶瘤病毒是个桥梁，将T细胞“拉”到肿瘤部位 - 这一切都来源于基础研究、都是以基础研究成果为基础的。 Ribas A, Dummer R, Puzanov I, et al. Oncolytic Virotherapy Promotes Intratumoral T Cell Infiltration and Improves Anti-PD-1 Immunotherapy.[J]. Cell, 2017, 170(6):1109. 想了解更多CNS级期刊最新内容，请关注我们的公众号，常有更新哦，也可加笔者微信交流：qianle522568！ 

       相对传统方法，微波合成多肽，可以得到更高的纯度和产率。Initiator+ Alstra既适合小试研究，又能满足大量制备。高效的微波反应，精确的温度控制，数分钟内完成一次氨基酸耦合不管是侧链加成还是成环反应，Alstra都可以轻松应对高精度的注射泵保证了移液的精确性!操作简单       10英寸触摸屏操作，系统有常用方法，用户也可以自己编辑。可以使用“Wizard”设置方法。系统会自动给出需要的试剂量。全程监控       全自动完成合成洗脱，去保护（Fmoc）偶联，可人工加入贵重的试剂。易于暂停/重启动， 便于取样检测分析。可自动计算出试剂及氨基酸消耗量。灵活，准确       试剂的放置和取用非常灵活。适应小试和大量研究，数字计量泵精确输送试剂。独特的双针头设计，杜绝了交叉污染。振荡混合       独特的振荡混合技术，效果好。合成量得以达到2mmol。节省成本       数字计量泵几乎无试剂损失。 进行小量合成时（例如：5μmol），更能体现出来。完成复杂的合成      可以完成很多复杂的、传统方法无法实现的多肽合成反应。 特点和优势微波辅助多肽合成全自动或半自动操作反应瓶和氨基酸瓶是一次性的，无交叉污合成量：5μmol-2mmol触摸屏操作，界面简洁，友好在试剂瓶架上，灵活选择试剂系统有常用方法，用户也可以自己编辑独特的振荡混合技术，实现高效合成精确的数字计量泵易于暂停/重新启动整个系统管路没有阀门，便于清洁维护可以接惰性气体，保证惰性环境下进行反应体积小，可放置于通风橱可进行支链多肽的合成系统可以计算出需要的氨基酸随时可以更改方法结果可以自动E-mail给实验者UV监测 微波辅助化学合成适用Fmoc及Boc多肽合成方法

       作为生物体的重要组成部分和生命活动的重要物质基础，蛋白质几乎参与了所有的生命活动，包括生物体内的物质代谢、免疫反应、信号转导、催化作用等。因此，研究蛋白-蛋白相互作用，并进一步勾画出生物体内蛋白相互作用网络，有利于我们更加透彻地理解生命活动基础。       传统的免疫共沉淀、gst pull down、far western blot等生化方法需要进行蛋白免疫印迹检测，工作量大、时间长，尤其是在进行大规模蛋白截短筛选或药物靶点筛选时，更需要配置多块凝胶进行电泳、转膜、孵育、曝光，过多的操作步骤会引入更多的影响因素，影响结果的真实性。       酶标仪可对微孔板进行读数，一次检测可获得整个孔板的数据。利用荧光分子标记待研究蛋白，当该蛋白与另一蛋白发生相互作用时，荧光会因为蛋白分子运动特性或两蛋白分子间距离的改变而改变。酶标仪的高级荧光检测功能能够识别这种荧光的改变，反映所需研究蛋白是否与其他蛋白发生相互作用以及这种相互作用的程度。目前，适用于酶标仪的蛋白相互作用检测方法主要有以下三种：荧光能量共振转移、荧光偏振和alpha筛选。一、荧光能量共振转移（fluorescence resonance energy transfer, fret）       荧光能量共振转移是较早发展起来的一门技术，随着绿色荧光蛋白应用技术的发展，fret已经成为检测活体中生物大分子纳米级距离和纳米级距离变化的有力工具。       荧光能量共振转移是距离很近的两个荧光分子间产生的一种能量转移现象。当供体荧光分子的发射光谱与受体荧光分子的吸收光谱重叠，并且两个分子的距离在10nm范围以内时，就会发生一种非放射性的能量转移，即fret现象，使得供体的荧光强度比它单独存在时要低的多（荧光猝灭），而受体发射的荧光却大大增强（敏化荧光）。受体荧光强度与供体荧光强度的比值，则反映了两种蛋白间相互作用的强弱（图1）图1 荧光能量共振转移原理示意图二、荧光偏振（fluorescence polarization，fp）           光波可以在任何一个平面上均匀振动。当其通过某个平面时，有可能受到平面作用将光波分成不均匀光束。可能在某一个方向上的振动强度强或弱于其他方向的振动强度，这种光称为偏振光。（图2）图2 偏振光示意图       荧光分子在受到偏振光激发时，如果分子保持静止，该分子将发出固定偏振平面的发射光（发射光仍保持偏振性）。然而，如果分子旋转或翻转，那么发射光的偏振平面将不同于初始激发光的偏振平面。为了检测a、b两种蛋白间是否有相互作用，可使用荧光素标记a蛋白，单独的a蛋白分子小，旋转或翻转速度快，因此偏振光激发产生的发射光偏振程度低；当a蛋白与b蛋白发生相互作用时，形成大分子，运动相对较慢，因此偏振光激发产生的发射光偏振程度较高。利用酶标仪检测发射光偏振改变程度，能够估计a、b两种蛋白相互作用强弱。（图3）图3 荧光偏振原理示意图三、alpha筛选(alphascreen)       alphascreen系统含有两种核心物质，一种为donor bead，另一种为 acceptor bead，当 donor bead所带有的a分子与acceptor bead所带有的b分子产生交互作用时，可以680nm激光去激发donor bead表面所带有的光敏感物质，使其催化周遭的氧分子形成活化态，此活化态的氧分子可与邻近的acceptor bead产生化学冷光化反应，并进一步由能量转换激发acceptor bead所带有的荧光物质产生520-620 nm的荧光信号，反映a、b两分子是否发生相互作用以及相互作用程度。（图4）图4 alpha筛选原理示意图       当然，包括alpha筛选在内的多种分子互作检测技术不仅能够用来反映分子间相互作用，还可以通过竞争结合检测目的分子浓度。camp作为第二信使，在细胞信号转导过程中具有重要作用。反应体系中donor bead包被了亲和素，用来偶联生物素化的camp，acceptor bead表面为anti-camp抗体。生物素化的camp能够将donor bead与acceptor bead距离拉近，单体氧分子能够传递至acceptor bead，发生化学反应，转化成光信号。当细胞裂解液加入反应体系时，胞内游离的camp与生物素标记的camp竞争性结合抗体，荧光强度降低，间接反映细胞裂解液中游离camp浓度。       利用酶标仪进行高通量分子互作筛选，能够大大提高靶向药物、蛋白功能域筛选效率，并反映出目标分子的浓度。这将大大加快生命科学研究过程中人们认识完整信号转导通路的速度，并帮助找到信号通路关键节点的关键干预位点，加快生命科学研究成果向医学应用的转化。

        提到肿瘤免疫疗法人们最先想起的往往是CART或免疫检查点抑制剂，这次分享一个新的肿瘤免疫治疗策略-双特异性抗体ERY974（已进入临床一期试验），如上图：抗体带有两个不同的可变区，其中一个识别结合肿瘤抗原glypican 3，另一个用于结合T细胞，双特异性抗体起一个“连接臂”的作用，将T细胞召集到肿瘤部位。相较于CART和免疫检查点抑制剂，双特异性抗体不依赖CAR /TCR，无需MHC复合物提呈抗原。具体内容如下：双特异性抗体结构示意图：两条重链分别来自anti-GPC3 antibody (clone GC33)和anti-CD3 antibody (clone CE115)，使用轻链替换技术经过筛选得到匹配的轻链。作者对一些位点进行了突变（值得参考借鉴）：L235R/S239K/N297A - 消除抗体和Fcγ受体的结合，避免非特异的激活免疫反应，E356K/K439E - 促进重链异源二聚化，K196Q - 避免抗体产生同源二聚，为纯化提供便利。在细胞系上检测筛得的双特异性抗体ERY974对两种抗原结合的特异性 IHC检测肿瘤抗原GPC3在肿瘤组织和正常组织中的表达情况：肿瘤组织高表达，正常组织只有胎盘和子宫内膜有表达-提示女性患者特别是孕期患者存在on target off tumor风险In vitro：PBMC做效应细胞，双特异抗体ERY974能特异性的对表达肿瘤抗原GPC3的细胞发挥TDCC作用（T cell–dependent cellularcytotoxicity ）In vitro：PBMC做效应细胞，只有表达肿瘤抗原GPC3的细胞才能引发ERY974诱导的T细胞激活 - 还是看特异性In vitro：PBMC做效应细胞，只有表达肿瘤抗原GPC3的细胞才能引发ERY974诱导的T细胞增殖 - 依然看特异性In vivo：ERY974特异性的抑制表达GPC抗原肿瘤的生长，不抑制不表达GPC3抗原的肿瘤（SK-HEP-1）生长In vivo实验中肿瘤组织切片：ERY974能促进T细胞对肿瘤部位的浸润 - 肿瘤微环境角度 RNA测序：ERY974能使免疫相关基因表达上调免疫检查点抑制剂效果不好的肿瘤细胞系ERY974也能发挥很强的抑瘤作用猕猴模型得到的药代动力学数据副作用主要体现在细胞因子风暴上，猕猴模型上监测不同剂量下血液中细胞因子浓度变化在给予ERY974前，给予地塞米松能极大缓解双特异性抗体引起的细胞因子上调且不影响ERY974的抗肿瘤作用Ishiguro T, Sano Y, Komatsu SI, Kamata-Sakurai M, et al. An anti–glypican 3/CD3 bispecific T cell–redirecting antibody for treatment of solid tumors[J]. Science translational medicine , 2017 , 9 (410).想了解更多CNS级期刊最新内容，请关注我们的公众号，常有更新哦，也可加笔者微信交流：qianle522568！

        2014年7月24日，美国马里兰州，弗朗西斯·凯尔西平静的度过了她的100岁生日，外面的世界对她来说已经没有多少吸引力了，除了FDA（美国食品药品监督管理局）之外，世界也早已将她遗忘。        1957年前后，德国格仑南苏制药厂开发的沙立度胺（又名反应停），可以使孕妇呕吐，恶心的症状得到明显的改善，迅速风靡欧洲，“反应停”被大量生产、销售，仅在联邦德国就有近100万人服用过“反应停”。        1960年9月，刚刚入职FDA一个月的凯尔西收到了厂商寄来的样本,申请进入美国市场，实际上，该药自1957年首次用作处方药起，已被加拿大及超过二十个欧洲国家准予上市，但凯尔西对此仍十分谨慎，并要求进一步的临床试验。尽管面临着制药企业、游说集团以及妇女界的压力，她坚持要求厂商补充信息，以解释一项英文研究中记载的神经系统副作用。       在拉锯战进行中，1961年《柳叶刀》发表文章直指反应停可致婴儿畸形，四肢短如海豹的鳍足而被称为海豹肢症。       一场大风暴来临，各国迅速下架反应停，但是在加拿大及欧洲还是陆续出现了约2万名海豹肢症患儿。由于凯尔西的坚持，美国一共只出现了17名海豹肢症患者。 1962年，凯尔西获得杰出联邦公民总统奖，约翰·肯尼迪总统为她颁奖。        然而，反应停引起婴儿畸形的原因是什么呢，这里不得不提的一个概念——手性化合物，手性化合物是指分子结构相同，但左右排列相反，如实物与其镜中的映体。人的左右手、结构相同，然而拇指至小指的顺序不同，左手是由左向右，右手则是由右向左，所以叫做“手性”，也就是指一对分子，由于它们像人的两只手一样彼此不能重合，又称为手性化合物。反应停药物中包含的两种不同构形的光学异构体中，只有(R)-异构体起镇定作用，而(S)-异构体则有致畸作用。       从反应停事件开始，对于药物手性的认识与检测开始被人们重视，现在，利用旋光仪对药物进行检测已经是各国的强制规定。在食品药品安全检测方面，德泉始终坚持为客户提供最优质的检测仪器。如上述的旋光仪，我们与国际先进的研发制造厂商“InsMark Instrument Technology UK Ltd”以及“InsMark 上海”达成长期战略合作伙伴，将最灵敏最稳定的手性检测旋光仪带给用户，与用户一起守护我们健康安全的食药环境。

一、什么是SNP？       SNP，即单核苷酸多态性，是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异而引起的一种DNA序列多态性。SNP研究具有广泛意义，在农业领域中，可以进行性状基因的精细定位、分子辅助育种、种子资源鉴定等；在医学领域中，则主要是疾病的分子遗传机制研究、疾病基因定位、药物敏感或疾病易感性位点筛选等。二、SNP研究内容有哪些？       SNP的研究主要分为SNP的发现及SNP的基因分型。       SNP的发现是应用的基础，需要在一定数量样本的全基因组范围内，经过统计学分析得到少量可能与疾病或性状关联的SNPs。这时基因芯片或NGS（Next Generation Sequencing，第二代测序技术）技术在单个样品的大量SNP检测中具有优势。       SNP的基因分型是应用的技术手段。这一过程需要检测大量样本的少量SNPs，而基因芯片或NGS技术则由于其高成本不太适和此阶段的研究。KASP（Kompetitive Allele Specific PCR，竞争性等位基因特异性PCR）因其经济灵活的特点，作为国际上主流SNP检测方法之一，替代传统的高通量测序，在SNP分型研究中发挥重要作用。三、KASP技术原理       便宜而准确的基因SNP分型方法一直是遗传学家追求的手段。KASP方法利用通用荧光探针，就可以通过简单的touch-down PCR的方法实现SNP分型。图 11、含有SNP的单位基因-1和单位基因-2作为模板；针对等位基因SNP位点设计的两个正向引物和一个通用反向引物；每条正向引物尾部有特异性序列，可与荧光标记结合。（图1）图 22、第一轮PCR，能够和模板互补的正向引物得到延伸，无法和模板互补的正向引物无法延伸；第二轮PCR，正向引物互补的特异性序列得以延伸，这步完成把通用标签序列引入与SNP对应的PCR产物。（图2）图 33、随着PCR循环数增加，扩增子数量呈指数增长，荧光探针更多地退火到新合成的互补链上，发出荧光。不同颜色荧光即反映不同SNP类型，使用酶标仪对实验结果进行检测就能够达到我们的最终实验目的。（图3）四、KASP检测的意义       作为一项灵活、经济、准确的SNP检测方法，KASP被广泛应用于各个领域。常规科研客户通量并没有想象中的高，96、384即可满足需求。因此KASP技术结合酶标仪使用完全可以满足绝大多数客户需求。农业方向，KASP有利于筛选出动、植物有利性状控制基因，并指导后续品种改良，也有利于对已改良品种进行基因验证。医学方面，KASP可用于先天性疾病筛查以及癌症治疗过程中的药物毒性反应、药物敏感性反应预测。图 4 

       为什么呢，当然了，原因众多，iphone 已经不单单是在卖产品，还有产品附带的设计，故事，情怀等等。但是今天我们只从硬件来分析——OLED异形全面屏。这块屏幕占iphone硬件成本的20%，而之前所有的iphone无一例外的都是LCD屏。       小编先给大家理一下显示屏的发展史，CRT(阴极射线管，老式大块头的电视机标配)→LCD（液晶显示器，使得各种平板电视、手机成为可能）→OLED(有机发光二极管，iphone X，本次文章主角)→QLED(量子点发光二极管，三星，LG，京东方等都在攻艰克难，不知道iphone 10能不能用得上。)       OLED有哪些优点呢，一、亮度、色彩、响应时间都非LCD可以媲美；二、功耗，OLED是自发光，功耗大大降低；三、屏幕可以更薄，使得柔性成为可能。       介绍了这么多，下面就进入重点了，大家知道LED从研发到进入iphone X经历了多少年吗——56年！1961年德州仪器Robert Biard和Gary Pittman首先为红外线发光二极管申请专利。56年的时间里，无数科研工作者，为了给人类带来更加丰富的色彩与视觉震撼而不懈努力，即使到现在仍在持续进行。下面举几个简单的例子，顺带插播一下BIOTAGE在这个过程中做的贡献。例1、2013年德国科学家Matthias Wagner与Christian Reus利用Biotage微波合成仪合成蒽类OLED，实现蓝绿红光自由转换                    （dx.doi.org/10.1021/ja406766e | J. Am. Chem. Soc. 2013, 135, 12892?12907）例2.2011年印度理工学院Atul Goel与R. S. Anand教授利用Biotage微波合成仪合成热稳定的芘类烯烃蓝色发光二管（dx.doi.org/10.1021/jo2011768 | J. Org. Chem. 2011, 76, 7474–7481）       以上两个例子只是简单的列举了OLED在被用到iphone X上之前，科研工作者投入的大量人力、物力、财力。除此之外还要承受巨大的压力，就像之前介绍的显示设备发展历史与趋势，科学家早就开始进行下一代显示设备QLED的研发（例3.Biotage微波合成仪合成硅量子点DOI: 10.1021/jacs.6b03155），但是研发初始阶段，没有一个人可以确定这个方向就是正确的，很多科研项目在投入了大量的精力之后，还是以失败告终。       但是，科研的步伐从来不会因为惧怕失败而停止，一代又一代科学家在能源、材料、信息以及生命科学等领域摸索前行，作为一家仪器代理商，我们可以做的就是将最先进，最适合，最省时省力的合成、分析、处理设备以及相关的服务提供给科研工作者。       最后，与动辄几十万上百万甚至上千万的科研仪器对比，iphone X的价格是不是还好。

Western blotting是研究蛋白表达最常用的经典技术，常用于检测靶蛋白的丰度、检测蛋白的修饰、蛋白相互作用研究中。常用化学荧光、化学发光和荧光三种方式对结果进行成像和定量分析。1）化学荧光：化学荧光采用ECL Plus底物代替化学发光检测底物ECL检测Western blotting信号，具有灵敏度高、线性范围宽的特点。ECL Plus试剂与HRP标记的二抗反应，反应产物在488nm激光激发下能够产生发射光，发射光通过Cy2滤光片由检测器接受，并转化为电信号。化学荧光可由激光共聚焦成像仪Amersham Typhoon检测，超大检测面积，可同时检测20张10×8cm印迹膜，其高通量的特点非常适合需要大量进行Western blotting检测的实验室。2） 近红外双通道荧光用近红外荧光标记的二抗取代HRP标记的二抗进行Western blotting检测，在抗体孵育结束后，即可直接利用激光共聚焦成像仪Amersham Typhoon进行成像，不需要添加ECL底物，不需要在暗室进行X光片曝光，减少了实验步骤，节省时间，也节约了实验成本。印迹膜在近红外波段具有较低的自发荧光，使得在成像时容易获得极低的背景，保证检测的高灵敏度。同时，近红外荧光具有宽的线性范围，使得定量更准确。通过双近红外荧光标记的二抗，不需要stripping和reprobing即可在同一张膜上同时检测目的蛋白和内参蛋白，实现同一泳道内参蛋白归一化，使定量更准确。同时，双通道检测更便于研究蛋白磷酸化水平。3）三通道荧光使用双色荧光标记二抗和一个荧光直接标记的一抗，可以在一张膜上同时检测三个蛋白，如内参蛋白、目的蛋白和磷酸化蛋白。在磷酸化水平的检测中，引入内参蛋白归一化校正不同泳道间的上样量差异，使得实验设计更严谨，所得结果更准确。Fig.1 Western Blotting 不同检测方法方法原理示意图4）总蛋白归一化，定量更准确利用上样的总蛋白含量进行泳道间归一化，避免了内参蛋白选择烦恼。总蛋白归一化可基于荧光染料的蛋白质预标记技术，即在上样前，通过Cy5染料将蛋白标记上红色荧光。电泳结束后直接获得SDS-PAGE电泳图像，无需染色；也可在转印结束后根据膜上Cy5信号强度，判断转印情况；总蛋白信号代替内参蛋白用于归一化处理，结果更准确。总蛋白归一化与内参蛋白归一化相比具有：更宽的检测范围，更强的蛋白信号，含量不受处理条件影响的特点。 好了，今天和大家分享的就是这么多了。 新的学期已经到来，一定要抓紧学习，有所收获哦。Bye！ Amersham™ 品牌简介20世纪40年代，Amersham（安马西亚,GE医疗生命科学的前身）开创了放射性同位素示踪剂产品，促进分子生物学的重大进展，最终创造分子生物学史上的里程碑，如DNA测序。接下来的几十年间，Amersham继续为科学与医学做出重要贡献，如推出世界上第一款测量糖尿病患者的胰岛素水平的放射免疫分析试剂盒。Amersham创新传统为非放射性标记的发展做出重要贡献。1990年，Amersham ECL试剂成为第一个用于Western Blotting的化学发光底物，成为“化学发光”的代名词，至今文献引用排名第一。GE 医疗生命科学提供广泛的Amersham化学发光、化学荧光与荧光检测的成像产品组合，成为业界的高质量和高可靠性的不二选择。北京德泉兴业商贸有限公司为GE healthcare北京及山东科学仪器独家授权。现已提供全线产品支持，欢迎来函及致电：   

 现有的CAR-T都是利用病毒等载体将编码CAR的基因序列随机整合到T细胞基因组内，这种随机的基因整合有引起细胞癌变的风险，此次整理、分享的内容是利用CRISPR Cas9系统将靶向CD19的CAR基因片段“定点”整合到TRAC（T-cell receptor α constant）位点，将CAR的表达置于TRAC的调控之下，这种“定点”整合不但不影响CAR的表达，而且还能够增强CAR-T的“威力”！ 文章大概思路整理如下：CAR的整合位点（TRAC第一个外显子5’末端）及实验流程 CRISPR Cas9能有效的将TCR knock out，同时将CAR knock in - 蛋白水平  CRISPR Cas9能有效的将TCR knock out，同时将CAR knock in - 核酸水平相较于病毒载体组（RV-1928z）的随机整合，基于CRISPR Cas9的定点整合组（TRAC-1928z）CAR的表达变异系数更小、更均一 In vitro实验中随机整合和定点整合CAR-T裂解肿瘤细胞的能力及自身增殖能力并无差异 In vivo实验中TRAC-1928z定点整合组活性更好 对骨髓CAR-T、肿瘤细胞检测：RAC-1928z定点整合组（蓝色）CAR-T细胞数目不会减少，同时能使骨髓肿瘤细胞数目较少对各组CAR-T细胞亚型进行分析：随机整合组（红色、绿色）亚型呈现终末分化（terminal differentiation）和疲劳亚型（exhaustion） 对各组CAR表达水平进行分析：定点整合组（TRAC-1928z）CAR-T在infusion之后CAR的表达水平不会下调，表达稳定，而随机整合组（RV-1928z-TCR-和RV-1928z）在infusion之后CAR的表达下调，且下调不是转录层面变化引起的 让T细胞表达CAR之后（Transduction5天后）在无抗原刺激、静息条件下看CAR-T的自发分化及信号激活：随机整合组表现出自发的T细胞分化和信号激活 抗原刺激后看细胞分化水平（细胞亚型、转录因子），随机整合组过快的进入了终末分化（terminal differentiation） 上面验证了将CAR基因序列定点整合到TRAC调控之下所带来的优势-These results indicated that the improved efficacy of TRAC-CAR T cells is related to its CAR expression level by reducing tonic signalling and delaying T-cell differentiation upon stimulation. 那整合到其他位点会是怎样的效果？文章作者又额外做了B2M和几个启动子对CAR-T功能的影响，如下： 将CAR定点整合到不同位点以及在不同启动子调控之下CAR的表达水平比较在无抗原刺激、静息条件下看CAR-T的自发分化：CAR的表达水平越高，自发分化越明显 选取有代表性的4组，比较在抗原刺激下CAR-T的分化：TRAC-1928z组和B2M-1928z组表现为central memory表型评估不同CAR-T体内效果：只有TRAC-1928z组表现出抑瘤作用、提高存活率的疗效 比较各组在抗原刺激下CAR表达的调控模式：CAR的下调是基于受体的internalization之后的降解，而下调之后的上调需要转录层面的“支持”（提供新的mRNA） Eyquem J, Mansilla-Soto J, Giavridis T, et al. Targeting a CAR to the TRAC locus with CRISPR/Cas9 enhances tumour rejection[J]. Nature, 2017, 543(7643):113. 想了解更多CNS级期刊最新内容，请关注我们的公众号，常有更新哦，也可加笔者微信交流：qianle522568！ 

 CART治疗血液性肿瘤很早之前就取得了不错的效果，但对于实体瘤由于缺乏肿瘤特异性表达的表面抗原，CART的应用一直受限！表皮生长因子受体（EGFR）突变在许多实体瘤中常见，特别是胶质瘤中有大约30%的病例会出现突变体EGFRvIII - 这为肿瘤免疫治疗提供了靶标！7月份Science Translational Medicine上线了一篇关于EGFRvIII-directed CAR T cells对抗脑胶质瘤的临床试验结果文章，文章阐述了靶向EGFRvIII的CART喜人的临床效果！此次分享关注的不是CART对抗实体瘤的疗效，而是研究者们是如何从繁复的肿瘤免疫网络中“抽丝剥茧”设计出EGFRvIII-directed CAR T cells！笔者将这篇7月份Science Translational Medicine之前的一篇Science Translational Medicine挖了出来，分享给大家！这个研究团队前期是由EGFRvIII单抗的scFv段开始，整合共刺激域、跨膜结构域之类进行CAR（嵌合抗原受体-没有写错哦）的设计的，如下图:一共三种CAR：3C10.BBz和3C10.28BBz的scFv是鼠源的，139.BBz的scFv是人源的 该研究团队由以上三种CAR出发，优化设计出了取得喜人临床试验结果的EGFRvIII-directed CAR T cells，具体思路整理如下：三种CAR对EGFRvIII抗原选择性上并无明显差异三种CAR对EGFRvIII抗原选择性上并无明显差异尽管选择性无差异，但表达鼠源3C10.BBz CAR的T细胞起效更早，因此选取3C10.BBz CAR作为“先导结构”3C10 scFv是鼠源的，直接整合并应用于人的CART会引起HAMA反应，因此需要将此鼠源的scFv人源化，研究者设计一系列人源化的scFv，用流式评估他们对突变型和野生型EGFR的亲和力，如下图：人源化scFv 2173尽管对突变型亲和力低，但即便在高浓度条件下也不会与野生型EGFR结合，因此选取2173用SPR测定scFv段对突变型、野生型EGFR的结合常数，从结合常数能看出2173对突变型EGFR的选择性将2173 scFv整合到CAR并在T细胞中表达，流式分析对可溶性EGFR的识别、结合能力 - 2173 CAR能选择性的结合突变型EGFR2173 CAR T细胞能选择性的裂解表达EGFR突变型的细胞并对此种细胞产生响应分泌IFN-γ2173 CAR T细胞在EGFR突变型的刺激下能够特异性的增殖，且多轮刺激并不会造成增殖停滞 为更进一步验证2173 CAR T细胞的特异性、安全性，研究者设计了另一种CAR T细胞 - Cetux-CAR（野生型、突变型EGFR均能识别结合），将两种CAR T细胞放到了一起做了一系列对比实验！相较Cetux-CAR T细胞，2173 CAR T细胞只结合突变型EGFR相较Cetux-CAR T细胞，2173 CAR T细胞只在合突变型EGFR刺激时发生增殖分泌特定细胞因子相较Cetux-CAR T细胞，2173 CAR T细胞只选择性杀伤表达突变型EGFR的U87细胞2173 CAR T细胞不会杀伤人的角质细胞 - 安全性更好，而Cetux-CAR T细胞会将人的皮肤移植到小鼠身上，给予两种CAR T细胞，发现Cetux-CAR T细胞组会有免疫细胞浸润到表皮、真皮，而2173 CAR T细胞组不会 - 安全性更好 最后，评估体内抗肿瘤效果：2173 CAR T细胞能抑制肿瘤生长、延长存活时间 O'Rourke D M, Nasrallah M P, Desai A, et al. A single dose of peripherally infused EGFRvIII-directed CAR T cells mediates antigen loss and induces adaptive resistance in patients with recurrent glioblastoma.[J]. Science Translational Medicine, 2017.Johnson L A, Scholler J, Ohkuri T, et al. Rational development and characterization of humanized anti–EGFR variant III chimeric antigen receptor T cells for glioblastoma.[J]. Science Translational Medicine, 2015. 想了解更多CNS级期刊最新内容，请关注我们的公众号，常有更新哦，也可加笔者微信交流：qianle522568！ 

双荧光素酶报告基因系统简介        双报告基因同时用于同一实验系统进行检测，通常一个报告基因作为内参，另一个报告基因用来指征系统指标变化。其中，作为内参的基因与组成型启动子偶联，其表达不受实验条件改变的影响；指征系统变化的基因与调控启动子偶联，其表达与调控启动子转录活力相关。通过这种方法，可减少细胞数目、细胞活力以及细胞转染和裂解效率等内在变化因素所削弱的实验准确性。        近几年来，氯霉素乙酰转移酶（CAT），β-半乳糖苷酶（β-Gal），或葡萄醛酸糖苷酶（GUS）作为内参基因，与萤火虫荧光素酶报告基因相互搭配进行双报告基因检测。但是，这些内参基因削弱了荧光素酶快速、灵敏、线性应答范围较宽的优势，正逐渐被海肾荧光素酶取代。        如同萤火虫荧光素酶，海肾荧光素酶的活性也不需要翻译后修饰，一旦翻译完成即可行使报告基因功能。双荧光素酶报告基因检测过程中，萤火虫和海肾荧光素酶活性是在同一裂解液中分步检测的，在完成萤火虫荧光素酶活性（实验报告基因）检测后，萤火虫荧光被快速淬灭，并同时激活海肾荧光素酶活性（对照报告基因）。通过综合两种基本化学检测，对转染细胞裂解液或无细胞转录/翻译系统中的两种荧光素酶报告基因进行快速而准确的定量，可以真实灵敏的反映所需研究生物过程在特定药物、蛋白或病毒影响下的变化。双荧光素酶报告基因检测注意事项1、报告基因检测受多种因素影响（载体状态、细胞状态、转染量、转染效率、裂解效率、加样精度、检测过程等），因此同批次样品检测值也可能出现浮动。所以实验一般需要做3个或3个以上复孔。2．细胞培养时间不宜过长，12-36h内最好；长时间培养后，细胞难裂解3．双荧光素酶报告基因的载体选择：a)萤火虫荧光素酶建议选取pGL-3或pGL-4的载体或自己构建相应的载体； b)海肾荧光素酶建议选取phRL-TK或pGL-4代载体或自己构建相应的载体。建议海肾载体不使用强启动子（如SV40、CMV），而选用中等强度的启动子（如TK）4．双荧光素酶报告基因的载体比例：根据实验具体情况调整。建议作一个预实验来调整（萤火虫载体与海肾载体比例分别用1：10、1：20、1：50、1：100），萤火虫荧光素酶检测发光值大于海肾荧光素酶发光值的比例较好。5．最适反应温度：室温（20-22℃）。各个组分（细胞裂解产物，底物工作液等）都需要调整到室温。6．双荧光素酶反应体积：20ul（细胞裂解产物）-100ul（萤火虫荧光素酶底物）-100ul（海肾荧光素酶底物），底物量可根据实际情况调整，但一定要保证底物过量，不然会造成检测结果出现大的偏差。7．细胞裂解产物存放：常温不超过6小时；-20℃一个月；-80℃半年。 8．裂解产物与底物混合（手动加样）：要求混合快速、混合时间一致，避免荧光素酶衰变的影响。9．发光半衰期：a)单荧光素酶检测，萤火虫荧光素酶的发光半衰期约12min b)双荧光素酶检测，萤火虫荧光素酶的发光半衰期约9min，海肾荧光素酶的发光半衰期约2min10．检测结果样品检测发光值应该远大于仪器背景值，例如10000。如果样品发光值过于接近仪器背景值，说明样品中荧光素酶过少，需要考虑转染量、转染效率、裂解效率等因素。 

       近期我们持续报道了微波化学近年来的发展以及在不同领域的应用，微波合成相对于传统加热合成，拥有众多优点——更短的反应时间、更高的产率、可重复性强、纯化过程简单，所需溶剂更少，越来越受到科研工作者的关注。但是不知道大家有没有注意到一个问题，为什么关于微波合成的反应机理一直少之又少呢？       这就要从如何获取反应机理谈起了——原位测试法，意思就是在反应进行中对反应物质的变化进行实时监测，最重要的一项测试就是原位拉曼测试，通过拉曼光谱的变化判断分子结构的改变，进而得出反应机理与动力学，这对优化反应、探索新方法异常重要。对于常规的加热装置来说，原位拉曼很容易实现，因为反应过程中可以敞口，或者随时取反应液，但是对于微波合成来说，反应过程中，高温高压密封，因此很难进行原位测试。图1.Diels-Alder反应       Jena公司与Biotage联手，利用非接触式镜片实现了Diels-Alder反应的微波合成机理探索。（参考文献：RamanRxn Systems™ Application Note  Number 314）图2.微波反应过程中拉曼图谱展示分子结构的变化图3.不同反应条件下的测试曲线       北京德泉兴业商贸有限公司，提供全面实验室解决方案。公司秉承“德泉”的企业文化，以诚实，守信的经营理念为基础，以产品、技术、服务的经营模式为契机，合作于国内外的优秀企业，知名品牌，崇尚科学精神，服务科学事业。北京德泉兴业商贸有限公司  产品部  产品经理 吕心鹏联系电话：13701225031

伴随着行业技术的快速发展、客户需求的不断进步，如何满足客户需求，实现行业价值越来越值得探讨。为了实现共进、共赢的目标，北京德泉兴业商贸有限公司特开展“互利合作，共享未来”系列代理商交流活动。定期邀请代理商朋友走进德泉、感受德泉、了解德泉，交流产品技术、沟通行业发展、探讨客户需求，共赢发展，一路同行。2017年7月27日，北京德泉系列代理商交流会第一期如期开展。有厂家的技术讲解、有德泉的细心准备、更有代理商朋友的热情配合。IKA、梅特勒-托利多、默克密理博，通用大餐为您奉上；Biotage化学合成、Beckman流式细胞术，技术食粮不可或缺。 有茶歇的热情交流，有午餐的嬉笑熟识，更有知识、未来的分享探讨，未来的路上，感谢有你，一路同行！       第一期没有参与到？ok，没问题！经过德泉市场部的精心准备，第二期代理商交流会马上与您见面。北京时间8月15日下午2点，第二期代理商会我们不见不散。欲了解更多内容，欢迎扫描下方二维码报名参与，北京德泉与您不见不散！      北京德泉兴业商贸有限公司      市场部      联系电话：010-63836985 

加州劳伦斯国家实验室在NATURE上发表了一篇利用碳纳米管在细胞膜之间进行分子离子运输的文章（doi:10.1038/nature13817） 完美展示了纳米材料与 生命科学的交叉应用，这项工作的复杂度与意义在此不详述（图1），今天与大家讨论的是其中的一个实验细节。图1.合成、表征及分子离子运输过程特性从文章中（图2）大家可以看到一款比较特殊的仪器（V-10超高速溶剂蒸发工作站），将溶剂蒸发掉的同时，使得留下的固体粉末可以在玻璃壁上形成图2.实验细节    一层固体膜。这里作者没有使用常规的蒸发手段，是因为在纳米材料与生物交叉领域，对时间的把控、对上样方法的要求，对样品连续性的处理，都是普通蒸发手段无法满足的，从搅拌、天平、纯水到刚刚说到的V-10（图3），以及后续表征用的透射电镜，作者都精益求精——工欲善其事，必先利其器。图3.V-10超高速溶剂蒸发工作站V-10可高效安全的将无机和有机相溶剂快速蒸干，尤其适用于各种高沸点溶剂的蒸发旋干（图4），如DMF/DMSO/NMP等，保证了进行反应后处理的便利性，避免了反应条件设计的后顾之忧。溶剂时间（min）12ml NMP1812ml DMSO1512ml DMF712ml Water1612ml DCM412ml 50% ACN in Water15图4.高沸点溶剂蒸发所需时间

二氧化碳培养箱作为精密培养设备，长期以来要求CO2浓度、温度、控制精度高，误差小。今天我们来为大家推荐一个二碳箱小精灵-宾德CB60，其结构紧凑、体积小巧，不仅能大大提高实验室空间利用率，还可节约高达45%的运营成本。 CB60体积虽小，但却拥有最高的配置（可用于三气培养）和如下全面特点，可应用于要求较高的体外授精实验或日常的组织培养实验。 1.一体成型的无缝内腔设计，无尖角或边缘，设计有助于清洁并防止污染物的沉积。2.Permadry双盘加湿系统，确保了它在湿度高于95%的环境中保持内腔干燥、无水汽凝结。箱体内增湿水盘的水位也十分易于观察，方便添加/更换水盘中的水。  3.在其他技术方面，这台小小的CB型号同样也能够与150L和210L的大型号相竞争：如通过文丘里效应的专利气体混合头，二氧化碳和空气的混合物能被注人员到箱体内部。由于内室是在轻微的真空环境下，混合物能够均匀的分布，由此实现了箱体需风扇即可混匀气体的功能，从根源上控制了污染。4.标配的红外线传感器，对二氧化碳浓度的监测更精准，无偏差。 5.标配操作简单的180℃干热灭菌，可彻底杀死芽孢。 宾德这款小巧玲珑的型号主要运用于细胞生物，细胞组织工程，微生物，医药行业，体外授精，人类和兽医以及口腔技术等领域。这款稳定性、可靠性、均匀性都俱佳的小精灵是您实验可靠的小帮手。欢迎来电垂询：北京德泉兴业商贸有限公司 010--63836985

重磅产品出炉——德国HEKA扫描电化学显微镜，看到名字大家可能比较陌生但是又似曾相识，如果你认为这款仪器是扫描电镜和电化学工作站的简单叠加，那么你就OUT了!HEKA ElProscan是一台扫描电化学显微镜，用于研究样品的电化学活性表面。它属于扫描探针显微镜（AFM, STM, SECM）家族的一员。由德国弗莱堡Albert-Ludwig大学材料研究中心的Dr.Jurgen Heinze（教授）合作开发了ElProscan仪器。2005年HEKA公司创立了ElProscan品牌，它包括传统的SECM实验方法及扩展功能。整个系统包括三个主要部分，定位系统，双恒电位仪，数据采集系统。定位系统控制微电极在溶液中电化学活性样品表面上进行三维扫描，因此ElProscan可用作传统的SECM仪器并且具有更多的功能。ElProscan与传统的SECM不同之处在于它不仅仅记录针尖的电流信号，而且在针尖上可实现任何电化学实验方法的应用（用可编程脉冲发生协议Programmable Pulse Protocol来完成）。在脉冲发生协议运行过程中，在样品上应用独立的电化学实验方法并同时在针尖上应用不同的方法。因此ElProscan还具有电化学活性表面修饰的功能。 图1、典型的实验配置图 超微电极(UME)在溶液中接近样品表面上方扫描，在电极表面由于氧化还原反应所溶解的物质形成法拉第电流   随着针尖向样品表面逼近，可测出电流的变化。电化学惰性表面抑制针尖表面的氧化还原物质扩散并导致针尖电流逐渐减小（正反馈） 图2、ELProscan反馈模式 当样品是电化学活性表面，针尖电流逐渐增大。这是因为在样品表面再生了反应后的氧化还原物质，并在针尖再次进行反应（正反馈）。    反射光成像透射光成像 图3、透射和反射光成像重叠成像 图4、表面形态（左）电化学活性表面（右）图5、仪器本尊ElProscan系统具有多重应用领域如：表面分析功能、金属沉积、导电聚合物沉积、酶活性成像、催化材料表面活性等，就像扫描电镜一样，我们能罗列的仅仅是其中的少数应用。后续会持续更新其在各领域的具体应用。 

片名：速度与激情9导演：北京德泉兴业商贸有限公司   供应商：默克化工技术（上海）有限公司演职人员：北京大学客户、张广利（区域销售）、罗平华、王建龙（工程师）等故事梗概：北京时间2017年6月22日，Merck公司发布最新一代Milli-Q IQ 7000水纯化系统，超纯水解决方案。北京时间7月23日，在大家都还在感慨新机型的优异性能时，北京区第一台IQ-7000超纯水机已经完成装机！用时一个月，从发布到应用，德泉用速度成就效率，用激情回馈热情！北京德泉兴业商贸有限公司为默克化工技术（上海）有限公司授权经销商，提供技术、产品、服务的全方位实验室解决方案。至臻技术，无忧服务，北京德泉期待您的来电，010-63836980！

    恶性胶质瘤难治主要有两个原因：1、血脑屏障（bbb）阻碍抗肿瘤药物到达肿瘤部位杀伤肿瘤细胞；2、即便采用手术切除肿瘤的治疗策略，浸润至脑实质的肿瘤细胞无法被切除，造成肿瘤的复发。    这次分享的是一个新的对抗恶性胶质瘤的策略（如下图）：中性粒细胞（ne）具有通过血脑屏障到达肿瘤部位的能力，特别是肿瘤切除术后局部的炎症反应更能为ne“导航”，将ne引导到肿瘤部位！文章作者创造性的将包有紫杉醇（ptx）的脂质体装载到中性粒细胞中，利用中性粒细胞的“靶向”能力，使紫杉醇能够穿过血脑屏障、准确到达肿瘤部位发挥作用！细节整理如下：将ptx“包”进脂质体后进行表征从小鼠体内分离中性粒细胞，流式检测ptx脂质体能够装置的中性粒细胞中，且不影响中性粒活力装载了ptx脂质体之后中性粒细胞功能（粘附、转移、“杀伤异物”）不受影响装载了ptx脂质体的中性粒细胞在适当条件刺激下能够将ptx释放出来体外模型上证明中性粒细胞能够带着脂质体“进入”实体瘤内部且能够实现可控的杀伤肿瘤细胞的作用（原文中进行了更多角度的验证，此处只摘录部分）肿瘤切除术并不能完全切除浸润到脑实质中的肿瘤细胞，术后一段时间肿瘤会复发肿瘤切片上可见中性粒细胞出现，印证了ne有到达肿瘤部位的能力尾静脉注射装置了ptx的中性粒细胞之后，ne在手术切除组有很强的靶向脑部能力，暗示将ptx带过了难以通过的血脑屏障实际测定ptx体内分布，确证ptx通过了血脑屏障在脑部聚集载有ptx的中性粒细胞组治疗效果显著：抑制了肿瘤细胞对脑实质的浸润、小鼠存活时间增长 xue j, zhao z, lei z, et al. neutrophil-mediated anticancer drug delivery for suppression of postoperative malignant glioma recurrence[j]. nature nanotechnology, 2017. 想了解更多cns级期刊最新内容，请关注我们的公众号，常有更新哦，也可加笔者微信交流：qianle522568！