CNS前沿文献追踪 - CART对抗实体瘤有临床试验结果了

CART治疗血液性肿瘤很早之前就取得了不错的效果，但对于实体瘤由于缺乏肿瘤特异性表达的表面抗原，CART的应用一直受限！表皮生长因子受体（EGFR）突变在许多实体瘤中常见，特别是胶质瘤中有大约30%的病例会出现突变体EGFRvIII - 这为肿瘤免疫治疗提供了靶标！

7月份Science Translational Medicine上线了一篇关于EGFRvIII-directed CAR T cells对抗脑胶质瘤的临床试验结果文章，文章阐述了靶向EGFRvIII的CART喜人的临床效果！此次分享关注的不是CART对抗实体瘤的疗效，而是研究者们是如何从繁复的肿瘤免疫网络中“抽丝剥茧”设计出EGFRvIII-directed CAR T cells！笔者将这篇7月份Science Translational Medicine之前的一篇Science Translational Medicine挖了出来，分享给大家！

这个研究团队前期是由EGFRvIII单抗的scFv段开始，整合共刺激域、跨膜结构域之类进行CAR（嵌合抗原受体-没有写错哦）的设计的，如下图:

一共三种CAR：3C10.BBz和3C10.28BBz的scFv是鼠源的，139.BBz的scFv是人源的

该研究团队由以上三种CAR出发，优化设计出了取得喜人临床试验结果的EGFRvIII-directed CAR T cells，具体思路整理如下：

三种CAR对EGFRvIII抗原选择性上并无明显差异

三种CAR对EGFRvIII抗原选择性上并无明显差异

尽管选择性无差异，但表达鼠源3C10.BBz CAR的T细胞起效更早，因此选取3C10.BBz CAR作为“先导结构”

3C10 scFv是鼠源的，直接整合并应用于人的CART会引起HAMA反应，因此需要将此鼠源的scFv人源化，研究者设计一系列人源化的scFv，用流式评估他们对突变型和野生型EGFR的亲和力，如下图：

人源化scFv 2173尽管对突变型亲和力低，但即便在高浓度条件下也不会与野生型EGFR结合，因此选取2173

用SPR测定scFv段对突变型、野生型EGFR的结合常数，从结合常数能看出2173对突变型EGFR的选择性

将2173 scFv整合到CAR并在T细胞中表达，流式分析对可溶性EGFR的识别、结合能力 - 2173 CAR能选择性的结合突变型EGFR

2173 CAR T细胞能选择性的裂解表达EGFR突变型的细胞并对此种细胞产生响应分泌IFN-γ

2173 CAR T细胞在EGFR突变型的刺激下能够特异性的增殖，且多轮刺激并不会造成增殖停滞

为更进一步验证2173 CAR T细胞的特异性、安全性，研究者设计了另一种CAR T细胞 - Cetux-CAR（野生型、突变型EGFR均能识别结合），将两种CAR T细胞放到了一起做了一系列对比实验！

相较Cetux-CAR T细胞，2173 CAR T细胞只结合突变型EGFR

相较Cetux-CAR T细胞，2173 CAR T细胞只在合突变型EGFR刺激时发生增殖分泌特定细胞因子

相较Cetux-CAR T细胞，2173 CAR T细胞只选择性杀伤表达突变型EGFR的U87细胞

2173 CAR T细胞不会杀伤人的角质细胞 - 安全性更好，而Cetux-CAR T细胞会

将人的皮肤移植到小鼠身上，给予两种CAR T细胞，发现Cetux-CAR T细胞组会有免疫细胞浸润到表皮、真皮，而2173 CAR T细胞组不会 - 安全性更好 

最后，评估体内抗肿瘤效果：

2173 CAR T细胞能抑制肿瘤生长、延长存活时间

 O'Rourke D M, Nasrallah M P, Desai A, et al. A single dose of peripherally infused EGFRvIII-directed CAR T cells mediates antigen loss and induces adaptive resistance in patients with recurrent glioblastoma.[J]. Science Translational Medicine, 2017.

Johnson L A, Scholler J, Ohkuri T, et al. Rational development and characterization of humanized anti–EGFR variant III chimeric antigen receptor T cells for glioblastoma.[J]. Science Translational Medicine, 2015.

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