G课堂 | 酶，你不行！

昨天是二十四节气的小雪，最近全国的温度都会降在10摄氏度以下。从今天起，各位同学一定要做好保暖措施。虽然我们感觉天气寒冷，可是我们的蛋白超级喜欢这个温度！一般来说，在短时间内，蛋白在4-6摄氏度可以保持相对稳定，这对于我们纯化的实验来说至关重要。除了高温外，我们还有另外一个破坏蛋白质结构的罪魁祸首——蛋白酶。

虽然蛋白酶在维持活细胞的正常功能中起着至关重要的作用，但没有研究人员会喜欢他们蛋白样品中含有蛋白酶，这是因为蛋白酶会一直“咀嚼”目标蛋白，特别是如果目标蛋白含量本来就很低，蛋白损失的后果就会更加严重。

值得庆幸的是，我们有着大量的蛋白酶抑制剂可以拯救我们蛋白。在适当含量的抑制剂的帮助下，可以防止这些蛋白酶在分离和纯化您的样品以及进行随后的下游应用（例如蛋白质印迹，报告基因分析，蛋白质活性测定等）的过程中水解您的蛋白。

        蛋白酶抑制剂：它们是什么以及它们是如何工作的？

蛋白酶抑制剂是通过可逆地或不可逆地结合到蛋白酶活性位点或通过修饰它们的结构使蛋白酶的活性失活或阻断的一种生物或化学化合物。蛋白酶抑制剂可以基于其作用的蛋白酶（即丝氨酸蛋白酶，半胱氨酸蛋白酶，天冬氨酸蛋白酶和金属蛋白酶）和/或其作用机制（即可逆和不可逆抑制剂）进行分类。

在实验室中，我们会见到一些蛋白酶抑制剂如AEBSF（4-（2-氨基乙基）苯磺酰氟盐酸盐），抑肽酶，bestatin，EDTA / EGTA，亮肽素，胃蛋白酶抑制剂A和PMSF（苯基甲磺酰氟）等。其中，AEBSF和PMSF在实验室中最为常见，因为这些化合物在抑制几种丝氨酸蛋白酶（例如胰蛋白酶，胰凝乳蛋白酶和凝血酶）的作用方面表现出色，这些蛋白酶恰好是细胞和组织样品中最主要的蛋白酶组，在干扰样品的蛋白酶中占有很大的比例。 

         Tips：如何选择正确的蛋白酶抑制剂？

         正如前所述，目前商业化的蛋白酶抑制剂各种各样，并且随着科研人员的研究，其数量仍在不断增加。那么如何才能找到最适合您的实验的蛋白酶抑制剂？。

一、使用混合试剂Cocktail。

蛋白酶抑制剂的混合物通常是在裂解细胞，均化组织或执行破坏细胞膜释放蛋白酶的任何方案时的首选和最合理的选择。通过使用Cocktail，您可以更好地保护您的蛋白质免受广泛多种蛋白酶的作用，且无需花费大量时间去选择“某一种”，再经过昂贵的试验和错误找到正确的抑制剂。另外，蛋白酶抑制剂Cocktail以其固有的良好可靠性和重复性在科学家中也很受欢迎。

    如果您想在不影响细胞健康的情况下保存您的蛋白质，我们依然建议您使用蛋白酶抑制剂Cocktail。只要确保您选择的鸡尾酒含有所有类型的蛋白酶的抑制剂即可，因为一旦纯化过程完成，这些不必要的抑制剂也可以轻易地从样品中除去。

二、需要更精准的选择方法。

因为不同的抑制剂的工作方式不同，所以在选择合适的特定抑制剂之前，您可能需要确定阻断哪种蛋白酶。尽可能在确定重点关注前，广泛地进行筛选，参考历史文献，继而针对感兴趣的组织和蛋白质采取更有针对性的方法。

通过?KTA™ 系统利用亲和层析，您也可以轻松除去样品中滞留的蛋白酶。

好了，我们下期再见。

品牌简介

        ?KTA™在瑞典语里是真实或纯正的意思，是GE Healthcare 层析系统的品牌，全球超过 100,000 科学家选用该系统在蛋白分离和纯化领域取得突破和进展。这个高贵的血统正飞速进入新一代：?KTA™ avant与?KTA™ pure。自1996引入以来，?KTA™对全世界科学家意味着卓越的纯化性能。

       几乎可以纯化任何生物分子，使?KTA™蛋白纯化系统可以应对最简单和最艰难的挑战。?KTA™平台涵盖了从科研实验室到工艺开发再到大规模生产所有层析和切向流过滤技术。

       ?KTA™系统由智能可扩展的UNICORN软件操作，使您更容易控制纯化工艺的每个阶段。

       广泛的预装层析柱、层析介质、切向流过滤、?KTA™系统和UNICORN软件一起提供完整的解决方案，获得更好的结果。

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