细胞运动

生命科学的研究已进入了细胞组学的研究，科学家们渴求探究细胞深层次和综合性信息，既提供细胞群体的群体信息，也关注个体细胞的差异，既能看到细胞表型的特点，更能研究细胞的功能，但目前的流式细胞技术已无法满足科学家们的应用需求。Merck Millipore公司2012年推出的FlowSight多维全景流式细胞仪第一次实现了从群体到个体，从表型到功能的综合细胞分析，引领流式细胞技术进入了崭新的时代。 FlowSight是下一代专家级流式细胞仪FlowSight是一款体积小巧，但是功能强大的下一代专家级流式细胞仪。该系统革命性地设计提高了信噪比以及荧光检测的灵敏度。标配12个检测通道，除了传统荧光强度信息，还能获得&ldquo 每个细胞&rdquo 的明场、暗场以及10个荧光图像。FlowSight可以最多配置四根激光管（405, 488, 561, 642 nm），并加配785nm激光器专用于SSC信号检测，同时还可配置96孔板自动上样系统（AutoSampler）。FlowSight具有低于10MESF的超高检测灵敏度，特别对于弱信号的检测，有明显的优势。 FlowSight突破传统流式局限，实现圈门不再靠猜FlowSight与其他传统流式细胞仪不同之处在于它带来了每个细胞的真实图像。对于每个细胞，它能够生成12张图片。所获得的图片能够鉴别来自细胞质、细胞膜和细胞核的荧光。您只需点击散点图中的每个点或直方图中的每个点，即可查看与之对应的细胞图片。因此使用者再也不用靠猜测来判断设门是否准确。在FlowSight中，设门后，使用者可以通过观察所设门内外的细胞图片来确认设门是否准确。 FlowSight拓展了流式细胞技术的应用范围，获得前所未有的深入的细胞信息1. 细胞周期细化分析FlowSight可以将细胞周期分析和有丝分裂细胞分析结合起来。如下图所示，研究人员利用FlowSight对THP-1细胞周期进行分析（如下图左图所示），通过观察每个时期的细胞图片，FlowSight不仅可以分析细胞的G0/G1,S,G2/M期，还可将M期细分为分裂前期，中期，晚期，末期，获得最全面的细胞周期数据。 2. 八色免疫分型免疫分型通常用来鉴别血细胞亚群。FlowSight最多能够同时检测10色荧光，最大程度地满足研究者的实验需求。在这个例子中，研究人员用抗CD45, CD14, CD16, CD19, CD3, CD4和 CD123的抗体以及DAPI染料对细胞进行标记。通过一系列设门分析，他们鉴别了以下细胞类群： (A) CD3+ T细胞, CD4+ 辅助T细胞 (B) CD16+ 粒细胞 (C) CD19+ B 细胞 (D) CD14+ 单核细胞 (E) CD123+ pDC/嗜碱性粒细胞. 3．NFkB核转位研究NF-&kappa &beta 作为一种广泛存在的转录因子，被激活由胞浆转入胞核，从而参与炎症反应、免疫反应、细胞凋亡、肿瘤发生等。可以将细胞核和NF-&kappa &beta 分别用DAPI和FITC染色，FlowSight可观察每个细胞是否发生 NF-&kappa &beta 核转位，并量化分析NFkB核转位程度以及发生核转位细胞的比例。FlowSight革命性地光路设计，实现独特应用FlowSight系统平台也是由液流系统，光学系统和电子系统等三大部分组成。液流系统将样本细胞悬液和系统鞘液注入流动室中，使细胞在鞘液流的约束下聚焦在液流的中心，逐个流过检测窗口。光学系统中光源照射通过检测窗口的细胞，从而产生光信号。光源分为两种，其一用于产生明场细胞图像，另一种是用于产生荧光细胞图像的激光器。光源照射细胞产生的光信号被大数值孔径的物镜收集，然后通过光路系统传递到由二向色镜构成的滤光片堆栈（Dichroic Filter Stack）。光信号在这里被分成不同波段投射到TDI CCD的相应检测通道上，产生一个明场细胞图像，一个暗场细胞图像（Side Scatter，SSC）及至多10个不同荧光通道的细胞图像。FlowSight的光路系统能够自动调整焦距，并实时测定细胞运动速度，而其采用高端航空遥拍CCD进行信号采集，信噪比比PMT提高10-20倍，上述这些手段保证了系统采集到的细胞图像的质量和荧光信号的灵敏度。 综上，FlowSight多维全景流式细胞仪，采用革命性的技术，解决了传统流式细胞仪无法获得细胞个体信息的局限，真正让流式细胞仪睁开了&ldquo 眼睛&rdquo ，不仅可以对大量细胞进行统计学分析，而且还能观察细胞形态，极大地拓展了传统流式细胞仪的应用。虽然FlowSight是在2011年推出的，但是Amnis公司的下一代流式技术已经非常成熟，全球装机已经超过200台，超过300篇文献发表，其中大量Nature、Science和Blood等高水平文章。

体内活细胞存在于动态的生理环境中，受到广泛的机械刺激，包括拉伸、压缩、剪切应力和流体静压力等。然而在一般的体外培养和分析条件下，细胞没有受到来自生长环境的力学刺激。通过国产细胞单轴牵张系统，可以提供与体内细胞相似的生理环境，帮助研究人员分析各种细胞培养应用中的拉伸负荷的生化变化，包括肌肉、肺、心脏、血管、皮肤等。详情介绍CELL TANK国产细胞牵张拉伸应力培养系统技术背景：当前细胞基础研究以二维静态培养为主，这种平面培养与实际“动态+立体"模式差别很大，导致细胞形态学、细胞分化、细胞间相互作用与体内动态环境产生明显差异。比如细胞骨架重组、细胞形态以及基因蛋白表达改变等。 细胞牵张系统将带来跨领域的创新：●动物实验前更可靠的评估●干细胞分化机制●机械刺激力与癌症的相关性●生医材料与细胞动态特性研究●体外疾病微环境的快速建立 CellTank一体式细胞牵张拉伸培养系统 CELL TANK为细胞和组织模型提供机械拉伸条件的平台。CELL TANK为细胞牵张系统使科学家能够轻松而精确地将仿生机械应变应用于细胞和组织。 国产细胞单轴牵张系统 预埋横杆式培养腔室 拉伸腔体共有三款 分别为32*32mm；20*20mm；10*10mm国产细胞单轴牵张系统 可视化图形操作界面 HOW TO USE1. 细胞外基质涂层进行预处理，将细胞接种到腔室中，细胞粘附在基底上，开始过夜培养过程。2. 细胞增殖后，选择拉伸模式并开始循环刺激。3. 根据实验目标收获/处理细胞，分析数据。优势 均匀负载培养腔室采用预埋横杆技术，保证每个细胞都沿着拉伸轴均匀地承受应变，非轴向方向上的次级载荷极低 高再现性高精度步进电机保证在各种速度和拉伸比组合中实现一致的运动程序，机械稳定性与拉伸膜的优越弹性相结合，保证高度可重复的力学刺激 一体式控制自带触摸控制屏，无需电脑。内置ARM芯片，高效稳定运行的同时简单易用 多样的拉伸模式灵活配置不同牵张加载周期、大小、频率、持续时间，静态保持、正弦波形、三角波形、矩形以及各种特制波形 高通量培养腔室有效拉伸面积32×32mm，PDMS材质基底适配各种实验室分析技术，包括细胞固定和荧光成像等 设备参数 外形尺寸 350x330x110 mm主机重量 3 kg拉伸腔体 4个，32x32 mm / 8个，20x20 mm控制模式 三角波、正弦波、方波及其组合最大应变率 30%最高拉伸速率 30 mm/s最高循环频率 2 Hz基底膜厚度 0.2 mm使用环境 CO2培养箱 横杆拉伸技术局部应变率更均匀 免费试用三个月为方便您亲自验证产品，我们承诺免费为所有中国用户提供3个月的试用期如果您感兴趣的话，我们可以为您提供试样服务，请联系：

流式分析服务流式细胞术工作原理是在细胞分子水平上通过单克隆抗体对单个细胞或其他生物粒子进行多参数、快速的定量分析。它可以高速分析上万个细胞，并能同时从一个细胞中测得多个参数，具有速度快、精度高、准确性好的优点，是当代先进的细胞定量分析技术之光源、液流通路、信号检测传输和数据的分析系统是流式细胞仪的主要组成。目前临床中运用流式细胞仪进行外周血白细胞、骨髓细胞以及肿瘤细胞等的检测是临床检测的重要组成部分。 应用应用十分广泛，常见的有细胞周期、细胞凋亡、细胞表面因子染色、胞内因子染色、线粒体膜电位染色、ROS检测、细胞分选等。送样要求1.细胞(1)细胞周期检测a.细胞没固定:不含EDTA的胰酶消化细胞，终止后，离心去掉含胰酶的上清，PBS洗涤1-2次，用无血清培养基重悬细胞，常温送样。b.细胞已进行固定:请标明是否固定过夜，固定的细胞需要4°C送样。c.细胞悬液或贴壁细胞:每份样本至少1×106个细胞. (2)细胞凋亡检测a.已染色的样本:请标明染色的荧光标记，标记好的样本请避光，4°Cb.未标记的样本:①不含EDTA的胰酶消化细胞，终止后，离心去掉含胰酶的上清，PBS洗涤1-2次，用无血清培养基重悬细胞，常温或4°C送样②不做任何处理，将培养好的细胞，按原来的培养皿/板或培养瓶直接送样。将原来的培养上清吸出放在一离心管中，标明样本标号，原孔添加新的不含血清培养基，覆盖细胞表面，常温或4C运送。C.细胞悬液或贴壁细胞:每份样本至少1×106个细胞 (3)细胞表面/胞内抗原检测a.样本处理:①不含EDTA的胰酶消化细胞，终止后，离心去掉含胰酶的上清，PBS洗涤1-2次，用无血清培养基重悬细胞，4°C送样。②不做任何处理，将培养好的细胞，按原来的培养皿/板或培养瓶直接送样，4°C运送。b.细胞悬液或贴壁细胞:每份样本至少1×106个细胞。C.客户需提供一抗抗体或由我司代购:请标注抗体的种属，公司和货号等抗体详细信息。(4)细胞阳性?檢测a.必须提供一份不含任何芡光的空白参照，标明样本所携带的芡光标记，特殊标记请标明激发光和发射光的波长。b.细胞悬液或贴壁细胞:每份样本至少1×106个细胞。c.抗体:请标注抗体的种属，公司和货号等抗体详细信息。 2.血液样本a.请标注血液样本是否携带传染性，使用抗凝管储存，常温或4.C运送。b.抗体:请标注抗体的种属，公司和货号等抗体详细信息。 3.组织a.需浸泡在无菌的生理盐水或PBS中，无菌保存于4.C，并标记样本名称以及种属，注意:如果样本为非正常种属的，请标明是否携带传染性。b.抗体:请标注抗体的种属，公司和货号等抗体详细信息。应用检测异倍体的肿瘤细胞，检测药物，基因或蛋白等对细胞周期的影响。 2、 Annexin V/PII双染法 细胞凋亡研究不仅受到基础医学界的重视，也日益受到临床医学领域的青睐。通过检测药物、基因或蛋白对细胞凋亡及凋亡调控基因的影响，在肿瘤防治、老年痴呆、艾滋病、自身免疫病，心肌梗塞等研究上都发挥着积极的作用。3、流式鉴定细胞表面抗体实验原理基本原理就是用荧光标记的单克隆抗体来识别细胞表面的抗原(也就是所谓的表面标记)，然后通过流式细胞仪来检验表面抗原的多少和种类(也就是荧光强度，代表了抗体结合的种类和数量)来鉴定细胞是哪类 应用细胞鉴定分类等，检测阳性表达细胞的比例。实验流程1、制备样品的单细胞悬液2、标记流式抗体3、流式上机检测。 4、活性氧(ROS)检测实验原理活性氧检测( Reactive Oxygen Species Assay Kit是一种基于荧光染料 DCFH-DA(2，7- Dichlorodi- hydrofluoresceindiacetate)的荧光强度变化，定量检测细胞内活性氧水平的最常用方法。 DCFH-DA本身没有荧光，可以自由穿过细胞膜。进入细胞内后，可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不会通透细胞膜，因此探针很容易被积聚在细胞內。细胞内的活性氧能够氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF。绿色荧光强度与活性氧的水平成正比。在大激发波长480nm，大发射波长525nm处，使用荧光显微镜，流式细胞仪或激光共聚焦显微镜等检测荧光信号。 Rosup为活性氧阳性诱导药物，根据其荧光光信号强度，可分析活性氧的真正水平。检测原位裝载探针法:激光共聚焦显徴镜直接观察，或收集细胞后用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测。收集细胞后装载探针:用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测，也可以用激光共聚焦显微镜直接观察。 4、线粒体膜电位检测实验原理JC-1是一种碳氰化合物类阳离子芡光染料，可作为检测线粒体跨膜电位指示剂。JC-1在细胞内以聚合体和单体两种不同的物理形式存在，分别处于不同的荧光发射峰。当JC-1浓度低或膜电位水平低时，主要以单体形式存在，激发波长为527nm，呈绿色荧光 当丁C-1浓度升高或线粒体膜电位水平较高时，形成聚合物，发出红色的芡光，激发波长为590nm。当细胞发生凋亡时，线粒体跨膜电位被去极化，JC-1从线粒体内释放，红光强度减弱，以单体的形式存在于胞质内发绿色荧光，根椐这特征就可以检测线粒体膜电位的变化。实验流程1.细胞培养 2.用适当的方法诱导细胞凋亡，同时设立阴性对照组和阳性对照组，收集细胞 3.用PBS洗涤细胞三次，收集不多于1×10的细胞 4.取100pL10× Incubation Buffer/加900L灭菌去离子水稀释成1× Incubation Buffer，混匀并预热至37＂C 5.吸取500uL1× Incubation Buffer，加入1uLJC-1，涡旋混匀配成C1工作液6.取500LJC-1工作液将细胞均匀悬浮，37C，5％C02的培养箱中孵育15～20min7.室温离心(200opm，5min)收集细胞，用1× Incubation Buffer洗两次8.吸取500uL10× Incubation Bufferp重新悬浮细胞 9.流式细胞仪检测，分析。 原代细胞分离与鉴定实验原理原代细胞分离:体外将动物某组织，经酶法或机械处理法分离成单细胞，并在合适的培养基中筛选出特定细胞，使得目的细胞得以生存、生长和繁殖，称为原代细胞分离。 服务特点1.细胞纯度高:原代分离得到的目的细胞高纯度可达到95％以上2.细胞活力强:原代分离的细胞一般不能长久传代，提供PO-P3代的细胞，活力达80％以上，无污染 注:部分原代细胞无法传代，如心肌细胞3.多种鉴定方式:可根据需求提供流式细胞检测、免疫细胞化学、 Realtime PCR及蛋白印迹等多种检测方法。细胞活力测定服务 服务简介CCK-8( Cell Counting kit-8)试剂中含有WST-8，可被细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲臢产物(Formazan)，生成的甲鰧物的数量与活细胞的数量成正比，可采用酶联免疫检測仪在450nm波长处测定其光吸收值，间接反映活细胞数量。 免疫荧光检测服务简介细胞免疫化学与免疫组织化学实验都是依据抗原抗体反应和化学显色的原理，采用标记的特异性抗体对组织或细胞内抗原的分布进行原位检测技术。细胞免疫化学将培养处理后的细胞爬片、固定、破膜、封闭后，加入一抗与抗原蛋白结合，再加入标记有荧光素的二抗与一抗进行反应，后通过荧光显徴镜或者激光共聚焦扫描显微镜进行荧光拍摄来显示细胞中靶蛋白的表达变化和定位 应用检测靶蛋白如内分泌激素、蛋白质、多肽、核酸、神经递质、受体、细胞因子、细胞表面抗原、肿瘤标志物。 细胞迁徙与侵袭服务服务简介细胞迁移是指细胞在接收到内源或外源迁移信号后而产生的移动。细胞迁移是通过胞体形变进行的缓慢的定向移动，涉及细胞觅食、伤口痊愈、胚胎发生、免疫反应、感染和癌症转移等生理现象。因此通过对细胞迁移的研究，对阻止癌症转移、异体植皮等医学应用方面具有一定意义。细胞侵袭实验则是研究肿瘤细胞对基质膜消化后的迁移运动，肿瘤细胞须经血管基底膜穿入深面间质后才能侵袭组织和转移至远处。 肿瘤细胞侵袭迁移能力的改变通常采用 Transwell/室进行检測。 Transwel小室是一种膜滤器，也认为是一种有通透性的支架Permeable Supports)。这层膜帯有徴孔，孔径大小0.1-12.0um，根据不同需要可用不同材料，一般常用的是聚碳酸酯膜。将Transwell/室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上室内盛装上层培养液，下室内盛装下层培养液，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。我们将细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可用影像到上室内的细胞，从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。服务优势1、根据上室和下室的不同处理， transwell r可用于研究共培养、细胞趋化、细胞迁移和侵袭等 2、不同孔径的膜可供选择，满足不同的实验需求 3、统计学分析，定量分析结果更可靠。 应用应用包括细胞迁移、趋化(趋化因子对细胞的定向诱导)，侵袭(癌细胞侵袭上指肿瘤细胞向局部侵犯或远处转移，共培养(同一培养体系里，两种细胞非接触性培养)。细胞迁移侵袭上涉及多个步骤、高度完整的过程，在癌症转移、动脉粥样硬化和关节炎等疾病恶化中起重要作用。 细胞克隆形成实验服务简介细胞克隆形成率即细胞接种存活率，表示接种细胞后贴壁的细胞成活并形成克隆的数量。贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆，而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。应用如要观察外源基因表达后较短时间内就能检测的细胞功能，可使用瞬时转染/感染。即在转染后24至96小时内收获细胞 如需要长期观察外源基因表达的作用，进行长期药理学研究、基因治疗研究、遗传调控机制研究或需要进行大规模蛋白合成则需要构建稳转株实验流程1.取对数生长期的各组细胞，分别用0.25％胰蛋白酶消化并吹打成单个细胞，并把细胞悬浮在10％胎牛血清的DMEM培养液中备用。 2.将细胞悬液作梯度倍数稀释，每组细胞分別别以每50、100、200个细胞的梯度密度分別接种含10mL37C预温培养液的皿中并轻轻转动，使细胞分散均匀。置37C5％C02及饱和湿度的细胞培养箱中培养2～3周。 3.经常观察，当培养皿中出现肉眼可见的克隆时，终止培养。弃去上清液，用PBS小心浸洗2次。加4％6多聚甲醛固定细胞5mL固定15分钟。然后去固定液，加适量 GIMSA应用染色液染10～30分钟，然后用流水缓慢洗去染色液，空气干燥。 4.将平皿倒置并叠加一张带网格的透明胶片，用肉眼直接计数克隆，或在显徴镜(低倍镜)计数大于10个细胞的克隆数。后计算克隆形成率。克隆形成率=(克隆数/接种细胞数)×100％细胞黏附实验服务简介细胞黏附性是维持组织结构稳定的基本条件，也是细胞运动和发挥功能的调节因素，并且对细胞的增殖、分化有重要影响。通常可分为两类，即细胞与细胞黏附和细胞与基质黏附。机体内许多细胞，如上皮细胞，需要牢固地定在某处发挥功能 另一些细胞，如白细胞，活跃运动，就需要不断调节细胞黏附。细胞黏附性的改变在肿瘤转移过程中也发挥着重要作用。恶性肿瘤具有从原发瘤分离及在体内扩散的能力，提示这些细胞在相互识别及黏附机制方面发生了改变。血管形成实验服务简介在原有的毛细血管和(或)微静脉基础上通过血管内皮细胞的迁移和增殖，从已存在的血管处以芽生或非芽生(套迭)形式形成新的、以毛细血管为主的血管系统过程称之为血管生成，通过体外模拟血管生成的过程对研究血管形成机制、发现促进或抑制血管生成药物十分重要。稳转细胞株筛选服务简介在基因功能的研究中，将目的基因有效导入靶细胞，是功能研究的前提条件之一。根据不同的实验需求可以选择瞬时转染/感染和稳转细胞株构建。 瞬时转染/感染的特点:外源DNA不整合到宿主的染色体中，一个宿主细胞中可以存在多个拷贝数，产生短时间内的高水平的表达(只能持续几天) 外源基因的表达水平不存在整合位点的问题，不会受到周围染色体元件的影响 瞬时转染所需的人力和时间稳转少，但DNA摄入效率和表达水平在不同实验中差异较大，因此表达不长久也不稳定。 稳转细胞株的特点:经合适的药物浓度进行药物筛选后，可得到外源DNA整合到宿主染色体的细胞，这些细胞可以长时间表达外源目的基因，稳定表达细胞株弥补了瞬时感染(或转染)实验中外源基因表达时间短的缺陷，便于长期观察。稳转细胞的筛选需根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的药物，常用的抗性筛选有嘌呤霉素( puromycin）、潮霉素(hygromycin)、新霉素( neomycin)、灭稻瘟素( Blasticidin)等。若实验需求构建稳转细胞株，我们建议通过慢病毒感染细胞进行药物筛选的方法，此方法较质粒转染可以更加有效的将外源基因整合入基因组，且整合位点处于转录相对活跃的区域，从而获得更加高效表达外源基因的稳转株细胞。应用如要观察外源基因表达后较短时间内就能检测的细胞功能，可使用瞬时转染/感染。即在转染后24至96小时内收获细胞 如需要长期观察外源基因表达的作用，进行长期药理学研究、基因治疗研究、遗传调控机制硏究或需要进行大规模蛋白合成则需要构建稳转株。