细胞外酸化率

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  • 华龛生物 细胞外泌体
    外泌体（Exosomes)是细胞外囊泡的一种，粒径大小在 30-150nm。目前主要应用于疾病治疗、药物载体、疾病诊断等。• 华龛生物生产的3D ExoTrix细胞外泌体产品在3D仿生培养环境中获得，质量高，产量大• 采用自动化、规模化、标准化的3D FloTrix干细胞大规模扩增培养工艺实现封闭式培养、自动化收集，单批次可实现1013个外泌体收获，同时避免了人工操作增加染菌风险• 外泌体高表达TSG101、CD81和CD63，电镜结果显示外泌体结构完整，为经典外泌体结构
    供应商： 北京华龛生物科技有限公司
    品牌： 华龛生物
    价格： 面议
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  • 88-9105巴罗克外旋冻存管1ml无内毒素和细胞毒素
    81-70550.5ml冷冻管，可站立，棕色，聚丙烯材质，伽玛射线灭菌，不带书写区，管与盖配套，无RNase、无DNase，50套/袋，10袋/盒，4盒/箱2000个/箱巴罗克Biologix81-70560.5ml螺口管，可站立，透明色，聚丙烯，伽玛射线灭菌，不带书写区，管与盖配套，无RNase、无DNase，50套/袋，10袋/盒，4盒/箱2000个/箱巴罗克Biologix81-71541.5ml冻存管，可站立，透明色，聚丙烯，伽玛射线灭菌，不带书写区，管与盖配套，无RNase、无DNase，50套/袋，10袋/盒，4盒/箱2000个/箱巴罗克Biologix81-72042.0ml冻存管，可站立，透明色，聚丙烯，伽玛射线灭菌，不带书写区，管与盖配套，无RNase、无DNase，50套/袋，10袋/盒，4盒/箱2000个/箱巴罗克Biologix81-72052ml棕色避光螺口管，可站立，棕色，聚丙烯，伽玛射线灭菌，不带书写区，管与盖配套，50套/袋，10袋/盒，4盒/箱2000个/箱巴罗克Biologix81-82042.0ml冻存管，可站立，透明色，聚丙烯，伽玛射线灭菌，带书写区，管与盖配套，无RNase、无DNase，50套/袋，10袋/盒，4盒/箱2000个/箱巴罗克Biologix88-6200S常规冻存管，米字底，2ml外旋，带白色盖子，可站立，侧面条形码、数字码，伽马射线灭菌；无内毒素和细胞毒素，无DNA酶、RNA酶和人类DNA；专为液氮和超低温冰箱使用而设计；25套/袋，40袋箱1000个/箱巴罗克Biologix88-6201S常规冻存管，米字底，2ml外旋，带红色盖子，可站立，侧面条形码、数字码，伽马射线灭菌；无内毒素和细胞毒素，无DNA酶、RNA酶和人类DNA；专为液氮和超低温冰箱使用而设计；25套/袋，40袋箱1000个/箱巴罗克Biologix88-6202S常规冻存管，米字底，2ml外旋，带绿色盖子，可站立，侧面条形码、数字码，伽马射线灭菌；无内毒素和细胞毒素，无DNA酶、RNA酶和人类DNA；专为液氮和超低温冰箱使用而设计；25套/袋，40袋箱1000个/箱巴罗克Biologix88-6203S常规冻存管，米字底，2ml外旋，带蓝色盖子，可站立，侧面条形码、数字码，伽马射线灭菌；无内毒素和细胞毒素，无DNA酶、RNA酶和人类DNA；专为液氮和超低温冰箱使用而设计；25套/袋，40袋箱1000个/箱巴罗克Biologix88-6204S常规冻存管，米字底，2ml外旋，带黄色盖子，可站立，侧面条形码、数字码，伽马射线灭菌；无内毒素和细胞毒素，无DNA酶、RNA酶和人类DNA；专为液氮和超低温冰箱使用而设计；25套/袋，40袋箱1000个/箱巴罗克Biologix88-6205S常规冻存管，米字底，2ml外旋，带紫色盖子，可站立，侧面条形码、数字码，伽马射线灭菌；无内毒素和细胞毒素，无DNA酶、RNA酶和人类DNA；专为液氮和超低温冰箱使用而设计；25套/袋，40袋箱1000个/箱巴罗克Biologix88-6207S常规冻存管，米字底，2ml外旋，带透明盖子，可站立，侧面条形码、数字码，伽马射线灭菌；无内毒素和细胞毒素，无DNA酶、RNA酶和人类DNA；专为液氮和超低温冰箱使用而设计；25套/袋，40袋箱1000个/箱巴罗克Biologix88-6500S常规冻存管，米字底，5ml外旋，带白色盖子，可站立，侧面条形码、数字码，伽马射线灭菌；无内毒素和细胞毒素，无DNA酶、RNA酶和人类DNA；专为液氮和超低温冰箱使用而设计；25套/袋，40袋/盒1000个/箱巴罗克Biologix88-6501S常规冻存管，米字底，5ml外旋，带红色盖子，可站立，侧面条形码、数字码，伽马射线灭菌；无内毒素和细胞毒素，无DNA酶、RNA酶和人类DNA；专为液氮和超低温冰箱使用而设计；25套/袋，40袋/盒1000个/箱巴罗克Biologix88-6502S常规冻存管，米字底，5ml外旋，带绿色盖子，可站立，侧面条形码、数字码，伽马射线灭菌；无内毒素和细胞毒素，无DNA酶、RNA酶和人类DNA；专为液氮和超低温冰箱使用而设计；25套/袋，40袋/盒1000个/箱巴罗克Biologix88-6503S常规冻存管，米字底，5ml外旋，带蓝色盖子，可站立，侧面条形码、数字码，伽马射线灭菌；无内毒素和细胞毒素，无DNA酶、RNA酶和人类DNA；专为液氮和超低温冰箱使用而设计；25套/袋，40袋/盒1000个/箱巴罗克Biologix88-6504S常规冻存管，米字底，5ml外旋，带黄色盖子，可站立，侧面条形码、数字码，伽马射线灭菌；无内毒素和细胞毒素，无DNA酶、RNA酶和人类DNA；专为液氮和超低温冰箱使用而设计；25套/袋，40袋/盒1000个/箱巴罗克Biologix88-6505S常规冻存管，米字底，5ml外旋，带紫色盖子，可站立，侧面条形码、数字码，伽马射线灭菌；无内毒素和细胞毒素，无DNA酶、RNA酶和人类DNA；专为液氮和超低温冰箱使用而设计；25套/袋，40袋/盒1000个/箱巴罗克Biologix88-6507S常规冻存管，米字底，5ml外旋，带透明盖子，可站立，侧面条形码、数字码，伽马射线灭菌；无内毒素和细胞毒素，无DNA酶、RNA酶和人类DNA；专为液氮和超低温冰箱使用而设计；25套/袋，40袋/盒1000个/箱巴罗克Biologix88-6210S常规冻存管，米字底，2.0ml内旋，带白色盖子，可站立，侧面条形码、数字码，伽马射线灭菌；有O型圈，PP材质，可站立，带书写区；液氮条件下-196℃到121℃，可反复冻融；25套/袋，40袋箱1000个/箱巴罗克Biologix88-6211S常规冻存管，米字底，2.0ml内旋，带红色盖子，可站立，侧面条形码、数字码，伽马射线灭菌；有O型圈，PP材质，可站立，带书写区；液氮条件下-196℃到121℃，可反复冻融；25套/袋，40袋箱1000个/箱巴罗克Biologix88-6212S常规冻存管，米字底，2.0ml内旋，带绿色盖子，可站立，侧面条形码、数字码，伽马射线灭菌；有O型圈，PP材质，可站立，带书写区；液氮条件下-196℃到121℃，可反复冻融；25套/袋，40袋箱1000个/箱巴罗克Biologix88-6213S常规冻存管，米字底，2.0ml内旋，带蓝色盖子，可站立，侧面条形码、数字码，伽马射线灭菌；有O型圈，PP材质，可站立，带书写区；液氮条件下-196℃到121℃，可反复冻融；25套/袋，40袋箱1000个/箱巴罗克Biologix88-6214S常规冻存管，米字底，2.0ml内旋，带黄色盖子，可站立，侧面条形码、数字码，伽马射线灭菌；有O型圈，PP材质，可站立，带书写区；液氮条件下-196℃到121℃，可反复冻融；25套/袋，40袋箱1000个/箱巴罗克Biologix88-6215S常规冻存管，米字底，2.0ml内旋，带紫色盖子，可站立，侧面条形码、数字码，伽马射线灭菌；有O型圈，PP材质，可站立，带书写区；液氮条件下-196℃到121℃，可反复冻融；25套/袋，40袋箱1000个/箱巴罗克Biologix88-6217S常规冻存管，米字底，2.0ml内旋，带透明盖子，可站立，侧面条形码、数字码，伽马射线灭菌；有O型圈，PP材质，可站立，带书写区；液氮条件下-196℃到121℃，可反复冻融；25套/袋，40袋箱1000个/箱巴罗克Biologix88-6050至尊冻存管-六边底，0.5ml外旋，带白色平盖，伽马射线灭菌，侧面预置一维码和编码数字，无内毒素和细胞毒素，无DNA酶、RNA酶和人类DNA；专为液氮和超低温冰箱使用而设计，25套/袋，40袋箱1000个/箱巴罗克Biologix88-6051至尊冻存管-六边底，0.5ml外旋，带红色平盖，伽马射线灭菌，侧面预置一维码和编码数字，无内毒素和细胞毒素，无DNA酶、RNA酶和人类DNA；专为液氮和超低温冰箱使用而设计，25套/袋，40袋箱1000个/箱巴罗克Biologix88-6052至尊冻存管-六边底，0.5ml外旋，带绿色平盖，伽马射线灭菌，侧面预置一维码和编码数字，无内毒素和细胞毒素，无DNA酶、RNA酶和人类DNA；专为液氮和超低温冰箱使用而设计，25套/袋，40袋箱1000个/箱巴罗克Biologix88-6053至尊冻存管-六边底，0.5ml外旋，带蓝色平盖，伽马射线灭菌，侧面预置一维码和编码数字，无内毒素和细胞毒素，无DNA酶、RNA酶和人类DNA；专为液氮和超低温冰箱使用而设计，25套/袋，40袋箱1000个/箱巴罗克Biologix88-6054至尊冻存管-六边底，0.5ml外旋，带黄色平盖，伽马射线灭菌，侧面预置一维码和编码数字，无内毒素和细胞毒素，无DNA酶、RNA酶和人类DNA；专为液氮和超低温冰箱使用而设计，25套/袋，40袋箱1000个/箱巴罗克Biologix88-6055至尊冻存管-六边底，0.5ml外旋，带紫色平盖，伽马射线灭菌，侧面预置一维码和编码数字，无内毒素和细胞毒素，无DNA酶、RNA酶和人类DNA；专为液氮和超低温冰箱使用而设计，25套/袋，40袋箱1000个/箱巴罗克Biologix88-6057至尊冻存管-六边底，0.5ml外旋，带透明平盖，伽马射线灭菌，侧面预置一维码和编码数字，无内毒素和细胞毒素，无DNA酶、RNA酶和人类DNA；专为液氮和超低温冰箱使用而设计，25套/袋，40袋箱1000个/箱巴罗克Biologix88-6100至尊冻存管-六边底，1.0ml外旋，带白色平盖，伽马射线灭菌，侧面预置一维码和编码数字，无内毒素和细胞毒素，无DNA酶、RNA酶和人类DNA；专为液氮和超低温冰箱使用而设计，25套/袋，40袋箱1000个/箱巴罗克Biologix88-6101至尊冻存管-六边底，1.0ml外旋，带红色平盖，伽马射线灭菌，侧面预置一维码和编码数字，无内毒素和细胞毒素，无DNA酶、RNA酶和人类DNA；专为液氮和超低温冰箱使用而设计，25套/袋，40袋箱1000个/箱巴罗克Biologix88-6102至尊冻存管-六边底，1.0ml外旋，带绿色平盖，伽马射线灭菌，侧面预置一维码和编码数字，无内毒素和细胞毒素，无DNA酶、RNA酶和人类DNA；专为液氮和超低温冰箱使用而设计，25套/袋，40袋箱1000个/箱巴罗克Biologix88-6103至尊冻存管-六边底，1.0ml外旋，带蓝色平盖，伽马射线灭菌，侧面预置一维码和编码数字，无内毒素和细胞毒素，无DNA酶、RNA酶和人类DNA；专为液氮和超低温冰箱使用而设计，25套/袋，40袋箱1000个/箱巴罗克Biologix88-6104至尊冻存管-六边底，1.0ml外旋，带黄色平盖，伽马射线灭菌，侧面预置一维码和编码数字，无内毒素和细胞毒素，无DNA酶、RNA酶和人类DNA；专为液氮和超低温冰箱使用而设计，25套/袋，40袋箱1000个/箱巴罗克Biologix88-6105至尊冻存管-六边底，1.0ml外旋，带紫色平盖，伽马射线灭菌，侧面预置一维码和编码数字，无内毒素和细胞毒素，无DNA酶、RNA酶和人类DNA；专为液氮和超低温冰箱使用而设计，25套/袋，40袋箱1000个/箱巴罗克Biologix88-6107至尊冻存管-六边底，1.0ml外旋，带透明平盖，伽马射线灭菌，侧面预置一维码和编码数字，无内毒素和细胞毒素，无DNA酶、RNA酶和人类DNA；专为液氮和超低温冰箱使用而设计，25套/袋，40袋箱1000个/箱巴罗克Biologix88-6150至尊冻存管-六边底，1.5ml外旋，带白色平盖，伽马射线灭菌，侧面预置一维码和编码数字，无内毒素和细胞毒素，无DNA酶、RNA酶和人类DNA；专为液氮和超低温冰箱使用而设计，25套/袋，40袋箱1000个/箱巴罗克Biologix88-6151至尊冻存管-六边底，1.5ml外旋，带红色平盖，伽马射线灭菌，侧面预置一维码和编码数字，无内毒素和细胞毒素，无DNA酶、RNA酶和人类DNA；专为液氮和超低温冰箱使用而设计，25套/袋，40袋箱1000个/箱巴罗克Biologix88-6152至尊冻存管-六边底，1.5ml外旋，带绿色平盖，伽马射线灭菌，侧面预置一维码和编码数字，无内毒素和细胞毒素，无DNA酶、RNA酶和人类DNA；专为液氮和超低温冰箱使用而设计，25套/袋，40袋箱1000个/箱巴罗克Biologix88-6153至尊冻存管-六边底，1.5ml外旋，带蓝色平盖，伽马射线灭菌，侧面预置一维码和编码数字，无内毒素和细胞毒素，无DNA酶、RNA酶和人类DNA；专为液氮和超低温冰箱使用而设计，25套/袋，40袋箱1000个/箱巴罗克Biologix88-6154至尊冻存管-六边底，1.5ml外旋，带黄色平盖，伽马射线灭菌，侧面预置一维码和编码数字，无内毒素和细胞毒素，无DNA酶、RNA酶和人类DNA；专为液氮和超低温冰箱使用而设计，25套/袋，40袋箱1000个/箱巴罗克Biologix88-6155至尊冻存管-六边底，1.5ml外旋，带紫色平盖，伽马射线灭菌，侧面预置一维码和编码数字，无内毒素和细胞毒素，无DNA酶、RNA酶和人类DNA；专为液氮和超低温冰箱使用而设计，25套/袋，40袋箱1000个/箱巴罗克Biologix88-6157至尊冻存管-六边底，0.5ml外旋，带透明平盖，伽马射线灭菌，侧面预置一维码和编码数字，无内毒素和细胞毒素，无DNA酶、RNA酶和人类DNA；专为液氮和超低温冰箱使用而设计，25套/袋，40袋箱1000个/箱巴罗克Biologix88-9050至尊冻存管-六边底，0.5ml外旋，带白色平盖，伽马射线灭菌，底部预置二维码，侧面预置一维码和数字码，无内毒素和细胞毒素，无DNA酶、RNA酶和人类DNA；专为液氮和超低温冰箱使用而设计，25套/袋，40袋箱1000个/箱巴罗克Biologix88-9051至尊冻存管-六边底，0.5ml外旋，带红色平盖，伽马射线灭菌，底部预置二维码，侧面预置一维码和数字码，无内毒素和细胞毒素，无DNA酶、RNA酶和人类DNA；专为液氮和超低温冰箱使用而设计，25套/袋，40袋箱1000个/箱巴罗克Biologix88-9052至尊冻存管-六边底，0.5ml外旋，带绿色平盖，伽马射线灭菌，底部预置二维码，侧面预置一维码和数字码，无内毒素和细胞毒素，无DNA酶、RNA酶和人类DNA；专为液氮和超低温冰箱使用而设计，25套/袋，40袋箱1000个/箱巴罗克Biologix88-9053至尊冻存管-六边底，0.5ml外旋，带蓝色平盖，伽马射线灭菌，底部预置二维码，侧面预置一维码和数字码，无内毒素和细胞毒素，无DNA酶、RNA酶和人类DNA；专为液氮和超低温冰箱使用而设计，25套/袋，40袋箱1000个/箱巴罗克Biologix88-9054至尊冻存管-六边底，0.5ml外旋，带黄色平盖，伽马射线灭菌，底部预置二维码，侧面预置一维码和数字码，无内毒素和细胞毒素，无DNA酶、RNA酶和人类DNA；专为液氮和超低温冰箱使用而设计，25套/袋，40袋箱1000个/箱巴罗克Biologix88-9055至尊冻存管-六边底，0.5ml外旋，带紫色平盖，伽马射线灭菌，底部预置二维码，侧面预置一维码和数字码，无内毒素和细胞毒素，无DNA酶、RNA酶和人类DNA；专为液氮和超低温冰箱使用而设计，25套/袋，40袋箱1000个/箱巴罗克Biologix88-9057至尊冻存管-六边底，0.5ml平盖，带透明平盖，伽马射线灭菌，底部预置二维码，侧面预置一维码和数字码，无内毒素和细胞毒素，无DNA酶、RNA酶和人类DNA；专为液氮和超低温冰箱使用而设计，25套/袋，40袋箱1000个/箱巴罗克Biologix88-9100至尊冻存管-六边底，1.0ml外旋，带白色平盖，伽马射线灭菌，底部预置二维码，侧面预置一维码和数字码，无内毒素和细胞毒素，无DNA酶、RNA酶和人类DNA；专为液氮和超低温冰箱使用而设计，25套/袋，40袋箱1000个/箱巴罗克Biologix88-9101至尊冻存管-六边底，1.0ml外旋，带红色平盖，伽马射线灭菌，底部预置二维码，侧面预置一维码和数字码，无内毒素和细胞毒素，无DNA酶、RNA酶和人类DNA；专为液氮和超低温冰箱使用而设计，25套/袋，40袋箱1000个/箱巴罗克Biologix88-9102至尊冻存管-六边底，1.0ml外旋，带绿色平盖，伽马射线灭菌，底部预置二维码，侧面预置一维码和数字码，无内毒素和细胞毒素，无DNA酶、RNA酶和人类DNA；专为液氮和超低温冰箱使用而设计，25套/袋，40袋箱1000个/箱巴罗克Biologix88-9103至尊冻存管-六边底，1.0ml外旋，带蓝色平盖，伽马射线灭菌，底部预置二维码，侧面预置一维码和数字码，无内毒素和细胞毒素，无DNA酶、RNA酶和人类DNA；专为液氮和超低温冰箱使用而设计，25套/袋，40袋箱1000个/箱巴罗克Biologix88-9104至尊冻存管-六边底，1.0ml外旋，带黄色平盖，伽马射线灭菌，底部预置二维码，侧面预置一维码和数字码，无内毒素和细胞毒素，无DNA酶、RNA酶和人类DNA；专为液氮和超低温冰箱使用而设计，25套/袋，40袋箱1000个/箱巴罗克Biologix88-9105至尊冻存管-六边底，1.0ml外旋，带紫色平盖，伽马射线灭菌，底部预置二维码，侧面预置一维码和数字码，无内毒素和细胞毒素，无DNA酶、RNA酶和人类DNA；专为液氮和超低温冰箱使用而设计，25套/袋，40袋箱1000个/箱巴罗克Biologix88-9107至尊冻存管-六边底，1.0ml平盖，带透明平盖，伽马射线灭菌，底部预置二维码，侧面预置一维码和数字码，无内毒素和细胞毒素，无DNA酶、RNA酶和人类DNA；专为液氮和超低温冰箱使用而设计，25套/袋，40袋箱1000个/箱巴罗克Biologix88-9150至尊冻存管-六边底，1.5ml外旋，带白色平盖，伽马射线灭菌，底部预置二维码，侧面预置一维码和数字码，无内毒素和细胞毒素，无DNA酶、RNA酶和人类DNA；专为液氮和超低温冰箱使用而设计，25套/袋，40袋箱1000个/箱巴罗克Biologix88-9151至尊冻存管-六边底，1.5ml外旋，带红色平盖，伽马射线灭菌，底部预置二维码，侧面预置一维码和数字码，无内毒素和细胞毒素，无DNA酶、RNA酶和人类DNA；专为液氮和超低温冰箱使用而设计，25套/袋，40袋箱1000个/箱巴罗克Biologix88-9152至尊冻存管-六边底，1.5ml外旋，带绿色平盖，伽马射线灭菌，底部预置二维码，侧面预置一维码和数字码，无内毒素和细胞毒素，无DNA酶、RNA酶和人类DNA；专为液氮和超低温冰箱使用而设计，25套/袋，40袋箱1000个/箱巴罗克Biologix88-9153至尊冻存管-六边底，1.5ml外旋，带蓝色平盖，伽马射线灭菌，底部预置二维码，侧面预置一维码和数字码，无内毒素和细胞毒素，无DNA酶、RNA酶和人类DNA；专为液氮和超低温冰箱使用而设计，25套/袋，40袋箱1000个/箱巴罗克Biologix88-9154至尊冻存管-六边底，1.5ml外旋，带黄色平盖，伽马射线灭菌，底部预置二维码，侧面预置一维码和数字码，无内毒素和细胞毒素，无DNA酶、RNA酶和人类DNA；专为液氮和超低温冰箱使用而设计，25套/袋，40袋箱1000个/箱巴罗克Biologix88-9155至尊冻存管-六边底，1.5ml外旋，带紫色平盖，伽马射线灭菌，底部预置二维码，侧面预置一维码和数字码，无内毒素和细胞毒素，无DNA酶、RNA酶和人类DNA；专为液氮和超低温冰箱使用而设计，25套/袋，40袋箱1000个/箱巴罗克Biologix88-9157至尊冻存管-六边底，1.5ml平盖，带透明平盖，伽马射线灭菌，底部预置二维码，侧面预置一维码和数字码，无内毒素和细胞毒素，无DNA酶、RNA酶和人类DNA；专为液氮和超低温冰箱使用而设计，25套/袋，40袋箱1000个/箱巴罗克Biologix88-9210至尊冻存管-六边底，2ml内旋，带白色盖子，聚丙烯，底部预置二维码，侧面预置一维码和数字码，可反复冻融；管体双色印刷，有书写区，黑色刻度印刷；伽马射线灭菌，无RNase、无DNase、无内毒素和外源DNA；专为液氮和超低温冰箱使用而设计，25套/袋，40袋箱1000个/箱巴罗克Biologix88-9211至尊冻存管-六边底，2ml内旋，带红色盖子，聚丙烯，底部预置二维码，侧面预置一维码和数字码，可反复冻融；管体双色印刷，有书写区，黑色刻度印刷；伽马射线灭菌，无RNase、无DNase、无内毒素和外源DNA；专为液氮和超低温冰箱使用而设计，25套/袋，40袋箱1000个/箱巴罗克Biologix88-9212至尊冻存管-六边底，2ml内旋，带绿色盖子，聚丙烯，底部预置二维码，侧面预置一维码和数字码，可反复冻融；管体双色印刷，有书写区，黑色刻度印刷；伽马射线灭菌，无RNase、无DNase、无内毒素和外源DNA；专为液氮和超低温冰箱使用而设计，25套/袋，40袋箱1000个/箱巴罗克Biologix88-9213至尊冻存管-六边底，2ml内旋，带蓝色盖子，聚丙烯，底部预置二维码，侧面预置一维码和数字码，可反复冻融；管体双色印刷，有书写区，黑色刻度印刷；伽马射线灭菌，无RNase、无DNase、无内毒素和外源DNA；专为液氮和超低温冰箱使用而设计，25套/袋，40袋箱1000个/箱巴罗克Biologix88-9214至尊冻存管-六边底，2ml内旋，带黄色盖子，聚丙烯，底部预置二维码，侧面预置一维码和数字码，可反复冻融；管体双色印刷，有书写区，黑色刻度印刷；伽马射线灭菌，无RNase、无DNase、无内毒素和外源DNA；专为液氮和超低温冰箱使用而设计，25套/袋，40袋箱1000个/箱巴罗克Biologix88-9215至尊冻存管-六边底，2ml内旋，带紫色盖子，聚丙烯，底部预置二维码，侧面预置一维码和数字码，可反复冻融；管体双色印刷，有书写区，黑色刻度印刷；伽马射线灭菌，无RNase、无DNase、无内毒素和外源DNA；专为液氮和超低温冰箱使用而设计，25套/袋，40袋箱1000个/箱巴罗克Biologix88-9217至尊冻存管-六边底，2ml内旋，带透明盖子，聚丙烯，底部预置二维码，侧面预置一维码和数字码，可反复冻融；管体双色印刷，有书写区，黑色刻度印刷；伽马射线灭菌，无RNase、无DNase、无内毒素和外源DNA；专为液氮和超低温冰箱使用而设计，25套/袋，40袋箱1000个/箱巴罗克Biologix
    供应商： 上海希言科学仪器有限公司
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    厂商： 安捷伦科技(中国)有限公司
    品牌： 安捷伦/Agilent Technologies
    型号： 安捷伦Seahorse XF Pro
    价格： 面议
  • 布鲁克timsTOF SCP单细胞质谱系统 400-860-5168转0230
    timsTOF SCP—— 拓展单细胞研究视野timsTOF SCP 专为无偏深度 4D-定量单细胞蛋白组学、免疫肽组学、表观蛋白质组学和翻译后修饰组学（ PTM ）设计，和 scRNA-seq 技术形成补充，从而拓展单细胞研究的视野。重新定义单细胞蛋白质组学 —— 发现真正的蛋白质组异质性拓展单细胞研究视野超高灵敏度：开创性的新的离子源几何设计，让离子传输效率提高 5 倍，并带来更高的稳定性。数据更完整：数据非依赖性采集 —— 平行累积连续碎列（ dia-PASEF ）超越定量重复性的极限，为大规模研究细胞异质性铺平道路。超快采集速度：高采集速度与 dia-PASEF 灵敏度相结合，可采用短色谱梯度进行样本分析，从而减少极低的样本量分析时的色谱稀释效应。更稳定：经过双正交反射后，离子再进入捕集离子淌度谱（ TIMS ）中，连续分析数千个样本也无需仪器的清洗。重新定义单细胞蛋白质组学先进的离子透镜和 PASEF 技术，可从单个细胞中发现细胞异质性和生物学特性基于质谱的蛋白质组学已成为现代研究理解生物功能和疾病机制的主要工具。健康或疾病组织看起来是同质的，但其蛋白质组是非常不同的。破解每个细胞中的蛋白组的差异（ 细胞异质性 ）是充分理解其功能的关键。timsTOF SCP 采用了一个全新改进的离子源概念，结合平行积累连续碎裂（ PASEF ）采集方法的优势，提供了极高的速度和灵敏度，以应对单细胞的蛋白组或后几个细胞的翻译后修饰的分析挑战。开创性的离子传输技术发现真正的蛋白质组异质性timsTOF SCP 采用经过改进的离子源几何设计，包括 1 毫米离子传输毛细管可将离子传输提升五倍，更高压力级的离子漏斗和八级真空系统。更大的离子传输毛细管带来超高灵敏度，额外的正交离子反射和高压离子漏斗，提供独立的、差分真空系统，依然维持了 timsTOF 仪器系列所固有的系统稳定性。蛋白质组学性能的显著提升timsTOF SCP 全新的设计提高了离子在离子源里的传输，更高的真空度维持了仪器的稳定性，这些改进让离子传输提升近 5 倍。当与以 100 nL/min 流速运行的 Evosep One Whisper 方法和 dia-PASEF 方法相结合时，Evosep One 的灵敏度比以前的高流速方法提高了约 100 倍，这使得单细胞水平的无偏蛋白质组学具有非常好的重现性和稳定性，并首次实现每个细胞覆盖约 1,500 种蛋白质。双 TIMS，CCS 支持的分析捕集离子淌度谱（ TIMS ）首先是前级的气相分离技术，在高性能液相色谱（HPLC）和质谱分离的基础上，离子淌度带来的额外的一个维度分离，降低了样品的复杂离，提高了峰容量和分析的可靠性。同样重要的是，TIMS 还对特定质量和淌度值的离子进行累积和聚焦，从而实现灵敏度和速度的独特提升。通过双 TIMS 技术，前部 TIMS 进行离子累积的同时，后部 TIMS 跟据离子淌度对离子进行释放，这样的设计可以实现近 100% 的离子利用率。这个过程也即为碰撞横截面（ CCS ）辅助的平行累积连续碎裂（ PASEF ）分析。支持 CCS 的分析为数据进一步的分析提供了很多的可能性，从更可靠的化合物鉴定到更可靠的数据库比对，以及的更大确定性到自信的库匹配，以及降低大型数据集中的误发现率（ false discovery rates，FDRs ）。免疫肽组学和其它富集工作流程的理想检测工具除了无偏真单细胞蛋白质组学应用外，timsTOF SCP 还提供了出色的灵敏度，可用于一些需要进行肽段富集的工作流程，比如免疫肽组学研究就需求从血浆或组织中纯化免疫肽开始。由于免疫多肽在这些样本中以相对较低的丰度存在，timsTOF SCP 是理想的免疫肽组学分析，在可用材料有限的情况下进行新生抗原发现，比如生物活检的样本。timsTOF SCP 突破性的灵敏度还可用于在癌症信号通路的研究中的磷酸化蛋白质组学研究。PASEF肽段离子通过捕集离子淌度谱（ TIMS ） 分离，洗脱（ ~ 100 ms ），并在四极杆飞行时间质谱（ QTOF ）上进行检测，生成 TIMS MS 热图。在 PASEF 方法中，相同的 TIMS 分离后的离子又通过四极杆对特定离子进行逐一隔离。母离子和碎片离子谱图按离子淌度值进行对齐。平行积累序列碎片（ PASEF ）技术实现了 120 Hz 的扫描速度， 使用 PASEF 通过多次选择低丰度肽来提高低丰度肽的 MS/MS 谱图质量。PASEF ：鸟枪法蛋白质组学的完美选择由 PASEF 驱动的 timsTOF SCP 提供 120 Hz 的扫描速度，而不会牺牲灵敏度或分辨率，这是通过四极杆筛选离子和碰撞池中的离子碎裂与 TIMS 中肽段离子包释放保持同步而实现的。PaSER Run & Done —— 无偏单细胞分析数据的实时质量控制imsTOF SCP 可以以超过 120 Hz 的扫描速度，对数百个微量样本（ 200 ng ）进行分析。这改变了蛋白质组学的研究方式，但增加的数据量对数据分析提出了新的要求。数据分析已经成为许多工作流程中常见的瓶颈。现代分析方法经常需要在 timsTOF SCP上生成数百个数据，布鲁克已经推出的实时数据库搜索功能 —— 实时并行数据库搜索引擎（ PaSER ），从而消除了这一障碍，使用 PaSER， LC-MS 运行一旦完成，结果就即使呈现 —— 也就是 “ Run & Done ”。MaxQuant/Perseus 和 PEAKS Studio 数据处理开放式数据格式允许研究人员直接使用原始数据，并使用自己选择的先进软件。MaxQuant 软件通过保留时间、离子淌度、质量和信号强度来提取 4 维（ 4D ）特征。这有利于肽、蛋白质和翻译后修饰的鉴定和定量。PEAKS Studio 将 de novo 测序与传统数据库搜索相结合，并对 timsTOF 原始数据的处理进行了优化。超高灵敏度的 dia-PASEF 加持的 4D-蛋白质组学CCS 支持的分析使鉴定更可靠timsControl 允许针对感兴趣的离子进行 dia-PASEF 窗口的自定义，并能调整质量隔离窗口，TIMS 的扫描范围，和循环时间，以使 dia-PASEF 方法适应不同的色谱方法有趣的离子。结合 Evosep One 系统的低流速方法与 timsTOF SCP 高灵敏度的 dia-PASEF 方法，可从 500pg 细胞消化液内鉴定出超过 2,000 个蛋白质，从 250pg 的细胞被鉴定出超过 1,500 个蛋白质。这展示了真正的单细胞蛋白质组学所需的灵敏度。从 250pg 中鉴定出的蛋白质的丰度范围约为 4 个数量级，可以在单细胞水平上进行蛋白质组定量分析。探索肿瘤微环境理解 TME 及其浸润性免疫细胞可被认为是影响疾病进展、治疗反应和患者生存的关键步骤。凭借其高灵敏度，timsTOF SCP 能够在 FFPE 组织样本的激光捕获显微切割（ LMD ）获得的细胞上获得足够的蛋白质组深度。典型的工作流如图所示。在 timsTOF SCP 仪器上，细胞标记物用于识别肿块中的黑色素瘤癌细胞和那些与基质密切相关的细胞，随后通过 LMD 对这两个群体分割，然后进行无偏 4D-蛋白质组学分析。关键发现：富集分析揭示了中枢和外周黑色素瘤细胞之间的差异调控蛋白，有可能进行疾病分型以指导临床决策。结果由 Matthias Mann 教授提供。
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    厂商： 布鲁克道尔顿(Bruker Daltonics)
    品牌： 布鲁克/Bruker
    型号： timsTOF SCP
    价格： 面议
  • 赛默飞Attune NxT流式细胞仪 400-807-5250
    InvitrogenTM AttuneTM NxT，快速且不堵的流式细胞仪！突破传统流式50年技术瓶颈，创新的声波聚焦技术助力流式新发现！Invitrogen Attune NxT流式细胞仪是一款全新的台式流式细胞分析仪，采用创新的声波聚焦技术，在保证高精确度的同时可以10倍极速上样；仪器配置灵活，最高可达4激光14色，可满足各种实验方案和实验室预算要求。Attune NxT流式细胞仪具有以下优势：专利声波聚焦技术，实现极速精准上样；专业防堵塞，大细胞、粘细胞轻松上；稀有细胞超灵敏高通量分析，全血样本免洗免裂解；顶级平顶光斑激光器，无需调光路；配置可达4激光16参数，模块化设计，可现场升级；可配备自动化工作站，实现24小时无人值守上样。什么是声波聚焦？Attune NxT流式细胞仪采用超声波 (超过2 MHz) 和流体动力学双重聚焦模式，将样本细胞沿液流的中心轴汇聚成一条直线。声波聚焦基本不受进样速率的影响，这使细胞能够强聚焦于激光检测点，与样本-鞘液的比率无关，所以可以在极高的样本通量下实现高精度分析。此外，Attune NxT利用注射泵进样系统进行上样，无需绝对计数微球即可实现细胞绝对计数——可最大程度地降低成本，缩短样本制备时间。相比之下，采用单纯流体动力学聚焦的流式细胞仪最高进样速度受限，而且提高流速会增大样本核心流的宽度、细胞重合率升高，使得检测信号的CV值变大。稀释样本，但不影响数据质量裂解红细胞 (RBC) 会造成待测细胞的损失和损伤。极高的样本采集速率（高达1,000 μL/分钟）使得Attune NxT流式细胞仪能够提供免洗免裂解的实验方案，最大程度地避免细胞损失，简化样本制备过程。该特性尤其适用于那些浓度较低的样本，诸如海水、脑脊液 (CSF)、干细胞及细胞数量较少的稀释样本，这些样品分析的采集时间通常较长。采用Attune NxT流式细胞仪，即便是稀释样本，亦可快速采集，且不影响数据质量。可以对诸如小鼠血液和骨髓等难以采集的样本、细针抽吸样本或低细胞产量的样本直接进行荧光标记然后稀释上样，无需洗涤或进行红细胞裂解。在高样本采集速率下可轻松实现采集——您可在四分钟内运行至多4 mL样本。这种样本制备过程不会造成样本损失，且可对所有珍贵样本进行全面检测。快速检测稀有细胞少量细胞群体的分析需要多次采集才能获得准确且值得信赖的结果，这导致其采集时间较长。Attune NxT流式细胞仪的样本运行速率比其他流式细胞仪快10倍——高达1,000 μL/分钟，每次运行能采集2 x 107个细胞，可以快速且准确地检测稀有细胞，且不影响数据质量。在各种进样速率下保证同样的精度和灵敏度Attune NxT流式细胞仪可以在您需要时提供更高的灵敏度。即便是在1,000 μL/分钟的高进样速率下，您也可以维持精确的聚焦。声波聚焦提供的精确聚焦使研究人员能够获得更小的CV值，更好地检测弱荧光信号和背景，从而减少差异，改善信号分离效果 。最大程度地减小数据差异细胞周期分析是必须精确检测多个细胞群体之间的荧光强度差异的实例之一。采用Attune NxT流式细胞仪，不论样本进样速率如何变化，都可以最大程度地减小结果的差异。即使采用高流速上样，也可以获得相同的实验结果 。符合您的规格标准的软件Attune NxT软件采用直观且易于使用的界面，能提供强大的数据采集和分析功能。您可以方便地建立、自定义并保存实验供将来研究之用。自动进行补偿，并可根据补偿指南进行设置。分析软件为数据分析效率最大化设计，其对较大的数据组的刷新速度快 (高达2,000万次/样本)，当您作出调整时，能够立即显示于数据曲线上。软件采用独特的工具简化了实验设置，包括利用滤光片配置管理器进行试剂选择。您可以从预置或定制试剂下拉菜单中选择试剂，根据仪器上的优化通道匹配适当的试剂，然后应用于曲线标志。服务与支持Attune NxT流式细胞仪可享受全球技术支持和服务项目。我们致力于提供个性化的服务，自从您向我们的销售代表购买Attune NxT仪器之日起，仪器可终生享受服务。Attune NxT流式细胞仪可享受一年的全面服务计划，包括：? 综合培训 (每台仪器2位用户)? 应用和分析支持? 全球技术服务? 预防性维护应用领域 ? 癌症 ? 免疫学? 侧群细胞分析 ? 人类间充质干细胞 ? 细胞周期分析 ? 细胞增殖 ? 免疫分型 ? 海洋样品分析 ? 微生物学? 植物研究 ? 磷酸化蛋白检测
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    厂商： 赛默飞世尔科技生命科学产品
    品牌： Invitrogen
    型号： Attune NxT
    价格： 50万 - 100万元
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  • 综述：细胞外泌体颗粒表征测量技术新进展

    何为细胞外泌体？　　外泌体最早发现于体外培养的绵羊红细胞上清液中，是细胞主动分泌的大小较为均一，直径为40~100纳米，密度1.10~1.18 g/ml的囊泡样小体。细胞外泌体携带多种蛋白质、mRNA、miRNA，参与细胞通讯、细胞迁移、血管新生和肿瘤细胞生长等过程并且有可能成为药物的天然载体，应用于临床治疗。　　然而，测量技术手段的局限限制了外泌体在这些领域的研究进展。所以，在这篇文章中，作者总结了外泌体的纯化方法（离心法、过滤离心法、密度梯度离心法、免疫磁珠法以及色谱法），比较了现存各种外泌体测量技术（电子显微镜、动态光散射技术及纳米微粒追踪分析术）在外泌体尺寸和表征研究中的应用。原文点击——综述：细胞外泌体颗粒表征测量技术新进展

  • CIK细胞的制备方法

    【背景】CIK是“Cytokine-Induced Killer Cells”的缩写，中文全称为“细胞因子诱导的杀伤细胞”。 CIK是单个核细胞在CD3单抗和多种细胞因子(包括IFN-g, IL-2等)的作用下培养获得的一群以CD3+CD56+细胞为主要效应细胞的异质细胞群， 其既具有T淋巴细胞强大的抗肿瘤活性，又具有NK细胞(自然杀伤细胞)的非MHC(主要组织相容性抗原)限制性肿瘤杀伤能力。CIK细胞具有杀瘤活性高、杀瘤谱广，对正常组织毒性低，体外可高度扩增等特点，是目前临床上广泛使用的过继性免疫治疗细胞。【培养原理】CIK培养用细胞因子和抗体：nCD3激发型单抗：T细胞活化的第一信号来自于T细胞表面的受体，即T细胞抗原受体(T cell antigen receptor, TCR)与APC提呈的抗原的特异性结合，也就是T细胞对抗原的特异性识别。TCR是由2条不同肽链构成的异二聚体，在T细胞表面，其与CD3分子通过非共价键结合，形成TCR/CD3复合体。TCR识别特异性抗原后会引起CD3和T细胞表面的辅助受体CD4或CD8分子的胞浆尾部聚集，进而激活与胞浆尾部相连的酪氨酸激酶(Lck, Fyn和ZAP-70等)，促使CD3分子胞浆区的免疫受体酪氨酸活化基序(immunoreceptor tyrosine-based activation motif, ITAM)中的酪氨酸(Y)磷酸化。磷酸化的酪氨酸(pY)进一步磷酸化下游含酪氨酸的蛋白，从而引起激酶活化的级联反应(磷脂酰肌醇途径或MAP激酶途径等)，最终通过激活转录因子，使其进入细胞核内，结合于调控T细胞增殖和活化的靶基因(如IL-2和IFN-g等)，引起基因的表达和转录，T细胞因而由静止状态转为增殖和活化状态。由上可见，CD3分子在T细胞活化信号的转导中起着极其关键的作用。CD3激发型单抗与T细胞表面CD3分子特异性结合后，可引起CD3分子胞浆区ITAM基序中酪氨酸的磷酸化，进而导致T细胞增殖和活化的下游信号的激活，从而使T细胞增殖和活化。也就是说，CD3激发型单抗能够模拟抗原与TCR/CD3复合物的识别和激活过程，从而引起T细胞的增殖与活化，因此是CIK细胞培养中不可或缺的刺激因素。此外，CD3激发型单抗在选用时一定要注意克隆号。研究表明，仅克隆号为OKT-3的CD3激发型单抗可以刺激所有人的T细胞的增殖，而其它克隆号的CD3激发型单抗仅能刺激一部分人的T细胞。因此，在进行CIK培养时，最好选用OKT-3克隆，以保证每个患者的T细胞均能被激活。nIL-2 (白细胞介素-2)IL-2最初发现时被称为T细胞生长因子(T cell growth factor, TCGF)，是引起T细胞增殖最重要的细胞因子。IL-2既是自分泌细胞因子，也是旁分泌细胞因子，其通过与T细胞表面的IL-2受体(IL-2R)的特异性结合而促使T细胞活化，并进入细胞分裂状态。此外，IL-2还可刺激NK细胞的生长并增强其杀伤能力。因此CIK细胞培养中须添加IL-2，以促进T细胞的增殖与活化。nIFN-g (干扰素-g)IFN-g 具有上调外周血淋巴细胞表面IL-2R表达的作用，因此会增强T细胞对IL-2促增殖反应的敏感度和强度。在诱导CIK细胞形成的过程中加入IFN- g ，可降低IL-2的用量。研究发现，IFN-g加入的顺序与CIK的细胞毒活性密切相关。先加入IFN- g，培养24后再加入IL-2，可明显提高CIK的细胞毒活性。nIL-1a(白细胞介素-1a)IL-1a也可以介导外周血淋巴细胞表面上调表达IL-2R。当IL-1a与IFN-g和激发型CD3单抗合用时，可以明显提高CIK 的细胞毒作用。【细胞制备】1．外周血单个核细胞的采集1.1用血细胞分离机采集患者自身的外周血单个核细胞50-100mL；1.2淋巴细胞分离液密度梯度离心法进一步纯化单个核细胞(PBMC)；1.3无血清培养液洗涤2次，获得纯度在90%以上的PBMC。2．CIK细胞的培养及鉴定2.1将PBMC按1-2 x 106/ml的浓度悬浮于无血清培养液中，加入1,000 U/ml 的重组人IFN-g，37oC，5%CO2培养箱中培养；2.224h 后加入50ng/ml 的CD3 单克隆抗体和300 U/ml 的重组人IL-2，刺激CIK 细胞的生长和增殖；注：此时也可同时加入100 U/ml的重组人IL-1a。2.3每3天半量换液或扩瓶一次，并补加重组人IL-2 300 U/ml；2.4在培养的第14d，收获CIK细胞。2.5CIK细胞质控：2.9.1台盼蓝染色检测：活细胞应在80%以上；2.9.2流式细胞仪检测细胞表面CD3、CD8、CD56等分子的表达：CD3+CD56+细胞的比例应在20%以上。2.9.3细胞杀伤实验：以CIK细胞为效应细胞，以肿瘤细胞(可为原代肿瘤细胞或肿瘤细胞株)为靶细胞，将效应细胞与靶细胞按10 : 1(数目比) 的比例加入96 孔U 型板中，每孔含靶细胞1 x 104个，终体积为200 ml，设3个复孔。培养4h，然后取培养上清，用乳酸脱氢酶(LDH) 试剂盒检测效应细胞对靶细胞的杀伤率。2.9.4收获细胞前，取少量培养物进行细菌、真菌培养，并检测支原体、衣原体，及内毒素(标准：病原学检测阴性，内毒素5 Eu)。【步骤简图】http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/04/B1366873006_small.jpg 【推荐试剂】http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/04/B1366873008_small.jpg 注：Animal Free意为无动物成分。无动物成分的重组细胞因子在生产过程中不会有任何动物源性物质，尤其是牛蛋白的混入，使得最终获得的重组人蛋白中不含任何动物成分。这样可避免动物病原体(如疯牛病，克雅氏病等)的污染及外源蛋白引起的机体异种排斥和过敏反应，因此细胞治疗的体外细胞培养过程中最好使用无动物成分的重组细胞因子。【其它相关试剂】 http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/04/B1366873009_small.jpg【参考文献】 Li R, Wang C, et al. Autologous cytokine-induced killer cell immunotherapy in lung cancer: a phase II clinical study. Cancer Immunol Immunother. 2012; 61:2125-2133

  • 【求助】请问有关细胞与细胞外基质间(胶原纤维)的光传输？

    我们专题主要是研究胶原纤维，费伦有提过胶原纤维存在红外光传输的特征波段，不过在国内外研究极少提到有关细胞与细胞外基质的光传输，大都是提到有关化学反应的过程，现在是想找在胶原纤维的UV与IR光谱里那一个波峰，透过纤连蛋白(fibronectin)传输光讯号到细胞上的受体，之前是有找到有关细胞不含胞器(只剩肌动蛋白丝actin、整键蛋白integrin)也能移动，所以我们就假设细胞的移动可能是胶原纤维所操控，讲得有点多了，因为就只差这一点专题就完成了，可以请专家提出一些意见吗？谢谢[IMG]http://www.cella.cn/book/10/images/image006.jpg[/IMG]

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  • 李灵军与叶慧团队合作成果：生物素硫醇标签辅助质谱法对蛋白质瓜氨酸化进行全局分析
    瓜氨酸化是影响蛋白质结构和功能的关键的翻译后修饰。尽管它与各种生物过程和疾病发病紧密相关，但由于缺乏有效的方法来富集、检测和定位该翻译后修饰，其潜在机制仍然知之甚少。近期，威斯康星大学麦迪逊分校李灵军教授课题组报道了生物素硫醇标签的设计和开发，该标签能够通过质谱法对瓜氨酸化进行衍生化、富集来实现可靠的鉴定。作者对小鼠组织的瓜氨酸化蛋白质组进行了全局分析并且从432种瓜氨酸化蛋白质中识别出691个修饰位点，这是迄今为止最大的瓜氨酸化数据集。作者发现并阐述了这个翻译后修饰的新的分布和功能并且表示该方法有希望为进一步破译瓜氨酸化的生理和病理作用奠定基础。这项工作以“Enabling Global Analysis Of Protein Citrullination Via Biotin Thiol Tag-Assisted Mass Spectrometry”为题发表在国际化学权威杂志Analytical Chemistry上 (https://doi.org/10.1021/acs.analchem.2c03844)，文章作者为Yatao Shi#, Zihui Li#, Bin Wang#，Xudong Shi , Hui Ye, Daniel G. Delafield, Langlang Lv, Zhengqing Ye, Zhengwei Chen, Fengfei Ma，Lingjun Li*。此外，李灵军教授课题组进一步拓展了此方法的实用性。作者通过应用二甲基化亮氨酸(DiLeu)等重标记策略第一次实现了瓜氨酸化的高通量定量研究，并利用这一方法揭示了瓜氨酸化在人体细胞DNA损伤及修复过程中的重要作用。相关成果以“12-Plex DiLeu Isobaric Labeling Enabled High-Throughput Investigation of Citrullination Alterations in the DNA Damage Response”为题同样发表在Analytical Chemistry上(https://doi.org/10.1021/acs.analchem.1c04073)，文章作者为Zihui Li, Bin Wang, Qinying Yu, Yatao Shi, Lingjun Li*。　　研究的主要内容　　作者设计了一种生物素硫醇标签，它可以很容易的以低成本合成并且可以与瓜氨酸残基和2,3-丁二酮发生特异性反应(图 1a)。这种衍生化不仅增加了质量转移以允许更可靠的鉴定，而且还引入了生物素部分，使修饰分子的后续富集成为可能。该生物素硫醇标签设计具有紧凑的结构，在高能碰撞解离 (HCD) 期间仅产生两个碎片/诊断离子(图 1b)。 因此，肽主链可以保持良好的裂解效率，并在 HCD 或电子转移解离 (ETD) 期间分别产生丰富的b/y或c/z离子系列。在 HCD(图 1c)、ETD或电子转移/高能碰撞解离(EThcD)碎裂下，衍生化肽标准品的序列收集质谱图几乎完全覆盖相应的肽序列。实验结果表明生物素硫醇标签衍生的瓜氨酸化肽可以产生用于解析及标注的高质量的串联质谱图，并且与各种裂解技术相结合时可以提高瓜氨酸化位点的识别可信度。　　图1|用于瓜氨酸化分析的生物素硫醇标签设计。a，使用生物素硫醇标签和 2,3-丁二酮对瓜氨酸肽进行衍生化。 b，HCD、ETD 或 EThcD 片段化后生物素硫醇标签衍生的瓜氨酸化肽的片段化位点。c，HCD 裂解后生物素硫醇标签衍生的瓜氨酸肽标准品 SAVRACitSSVPGVR 的串联质谱图。　　在接下来的实验中作者使用该生物素硫醇标签和基于质谱的自下而上的蛋白质组学方法对瓜氨酸化进行分析(图2a)。作者在体外利用 PAD(一种可以催化瓜氨酸化的酶)催化的人组蛋白 H3 蛋白来验证这个过程。作为未被PAD催化的阴性对照，未发现组蛋白的肽段被鉴定为瓜氨酸化，证明了生物素标签反应的高特异性(图 2b)。在体外 PAD 处理后，作者 发现许多精氨酸残基被催化为瓜氨酸，并且大量的位点被高可信度的鉴定为瓜氨酸化位点(图 2c)，进一步表明该方法的高效性。在 HCD 碎裂后，其产生了一系列丰富的 b/y 离子，可以帮助准确的表征在同一肽段上单个(图 2d)以及多个(图 2e)瓜氨酸化位点。　　图2|使用生物素硫醇标签进行体外瓜氨酸化分析。a，使用生物素硫醇标签进行蛋白质瓜氨酸化分析的实验工作流程。b、c，在体外 PAD 处理之前 (b) 和之后 (c) 组蛋白 H3 蛋白的瓜氨酸化分析。 已识别的瓜氨酸化位点在序列中以蓝色字母突出显示。 序列下方的红色矩形表示鉴定的瓜氨酸化肽，而瓜氨酸化位点以蓝色显示。 d，PAD处理的组蛋白 H3 (R64Cit) 的已鉴定瓜氨酸化肽的串联质谱图示例。 e，PAD 处理的组蛋白 H3 的同一肽上鉴定的两个瓜氨酸化位点(R70Cit 和 R73Cit)的串联质谱图示例。　　接下来，作者们尝试利用所开发的方法对复杂的生物样本中的瓜氨酸化进行全局分析，并希望能够以此提供阐明生物体中瓜氨酸化调节机制的依据。首先，作者对小鼠的六个身体器官和五个大脑区域进行了深入的瓜氨酸组分析，生成了第一个小鼠瓜氨酸组组织特异性数据库。作者从432种瓜氨酸化蛋白质中以高置信度的方式鉴定了691个瓜氨酸化位点(图 3a)。更重要的是，这些蛋白质中约有 60% 未曾在UniProt 数据库检索并被报道，这一结果极大地扩展了对瓜氨酸化以及这些底物蛋白质如何受到瓜氨酸化影响的理解。作者发现结果中与 UniProt 数据库的已知的瓜氨酸位点重叠部分较少(图 3b)，这可能是因为 UniProt 中描述的近 40% 的瓜氨酸化位点是基于相似性外推理论而没有实际的实验证据。此外，许多报道的位点位于组蛋白上，尤其是蛋白质末端，可能会逃过自下而上质谱策略的检测(图 3b)。图 3c 展示了单位点瓜氨酸化和多位点瓜氨酸化蛋白质分布情况，其中 70% 的已鉴定蛋白质仅有一个瓜氨酸化位点被检测到。　　这个新发现的瓜氨酸化蛋白质组为推测瓜氨酸化的调控机制提供了宝贵的资源。例如，作者在髓鞘碱性蛋白(MBP)上鉴定到了九个瓜氨酸化位点，而在 UniProt 数据库中只有四个(图3d)。作者的结果提供了高质量的串联质谱图，不仅证实了已知修饰位点的存在(图3e)，而且还高可信度的识别了未知的位点(图 3f)。然后作者进行了瓜氨酸化肽段的序列分析，发现在鉴定的瓜氨酸化位点两侧并没有高度保守的氨基酸序列模式(图3g)，但是谷氨酸残基更频繁地出现在瓜氨酸的N末端侧附近。这与Fert-Bober 等人报道的小鼠瓜氨酸组分析结论一致。另一方面，Tanikawa 等人发现在人体组织和血浆中大约五分之一的 PAD4 底物含有 RG/RGG 基序。同样，Lee 等人及相关研究人员观察到天冬氨酸和甘氨酸残基在瓜氨酸化位点出现频率偏高。值得注意的是，这些研究使用了不同的人源细胞系或组织，因此作者的结果可能表明在不同物种之间瓜氨酸化位点周围的序列模式是不同的。为了更好地辨别瓜氨酸化蛋白质所涉及的功能，作者展示了基因本体论(GO)富集分析的热图，其显示了二十个最显著富集的细胞成分(图3h)以及KEGG途径(图3i)。作者发现小鼠大脑组织和身体器官之间存在明显差异，而瓜氨酸蛋白更多地参与大脑功能。具体来说瓜氨酸化蛋白质集中在轴突、髓鞘、核周体和突触中，因此在中枢神经系统中可能发挥着重要的作用。　　图3|不同小鼠组织的大规模瓜氨酸组分析。a，不同小鼠组织中已鉴定的瓜氨酸化蛋白和瓜氨酸化位点的数量。 b，本研究中鉴定的瓜氨酸化位点与 UniProt 数据库中报告的位点比较。 c，每个鉴定的瓜氨酸化蛋白质的瓜氨酸化位点数量分布。d，本研究中确定的瓜氨酸化位点与 UniProt 数据库中关于髓鞘碱性蛋白的瓜氨酸化位点的比较。e、f，在髓磷脂碱性蛋白 R157Cit (e) 和 R228Cit (f) 上鉴定的两个瓜氨酸化位点的示例串联质谱图。g，鉴定的瓜氨酸化肽的序列。瓜氨酸化位点位于中间的“0”位置。字母的高度表示每个氨基酸在特定位置的相对频率。 h,i，使用 Metascape 生成的热图显示不同小鼠组织中显着丰富的(p 值 0.01)细胞成分 (h) (KEGG) 通路 (i)。　　为了进一步拓展该方法的实用性，作者应用了二甲基化亮氨酸(DiLeu)等重标记策略，第一次实现了对瓜氨酸化进行高通量的定量研究。作者首先使用瓜氨酸化标准肽段进行测试，证明在优化反应条件下DiLeu标记和生物素硫醇标记反应可以分步进行而不互相干扰(图 4B，4C)。同时，将标准肽段按照已知比例进行4-plex DiLeu标记并混合，再进行生物素硫醇标记和瓜氨酸化分析，结果显示了非常好的定量准确性(图5)。作者进一步优化了运用该方法在复杂生物样品中进行定量分析的实验方法，并且证明此方法依然可以实现极佳的定量准确度和精确度(图6)。　　图4|瓜氨酸化标准肽段测试DiLeu标记和生物素硫醇标记分步反应的特异性和效率　　图5|瓜氨酸化标准肽段测试DiLeu标记和生物素硫醇标记定量分析的准确性　　图6|复杂生物样品测试DiLeu标记和生物素硫醇标记定量分析的准确度和精确度　　作者接下来应用该方法对DNA损伤中瓜氨酸化的作用进行了研究。作者在MCF7细胞中用三种方法造成了DNA损伤，并定量分析了蛋白质瓜氨酸化的变化。作者一共鉴定到63种瓜氨酸化蛋白以及其包含的78个瓜氨酸化位点，并发现三个实验组中的瓜氨酸化表达相比于对照组呈现出非常不同的趋势(图7A)，这一结果表明瓜氨酸化在不同类型的DNA损伤模型中具有差异性的作用。通过对实验组中显著变化的瓜氨酸化蛋白进行生物过程网络分析，作者发现瓜氨酸化主要对DNA代谢，蛋白结构变化，翻译以及DNA修复等过程进行调控(图 7B，7C)。该实验结果表明蛋白瓜氨酸化对DNA损伤以及相关发病机理具有非常重要的作用。　　图7|高通量定量分析研究瓜氨酸化在DNA损伤中的变化及作用(来源：Anal. Chem.)　　小结　　本文章介绍了一种生物素硫醇标签的设计和开发，该标签可与瓜氨酸化肽段发生特异性反应并极大地提高了瓜氨酸化的富集和检测效率。在使用标准肽和重组蛋白证明该方法的有效性后，作者进一步优化了从复杂生物样品中检测瓜氨酸化的实验过程。通过此方法对小鼠五个大脑区域和六个身体器官的蛋白质瓜氨酸化进行分析，作者鉴定出432个瓜氨酸化蛋白以及691个瓜氨酸化位点，这是迄今为止最大的数据集。该研究揭示了这种翻译后修饰可能在神经系统中发挥的关键作用，并表明它们在包括呼吸和糖酵解在内的许多代谢过程中也可能发挥着重要作用。总的来说，实验结果表明蛋白质瓜氨酸化在不同组织中具有广泛分布并参与各种生物过程，这扩展了目前对蛋白质瓜氨酸化生理作用的认知和理解。此外，作者进一步拓展了此方法的实用性，通过应用DiLeu等重标记策略第一次实现了瓜氨酸化的高通量定量研究，并利用这一方法揭示了瓜氨酸化在人体细胞DNA损伤及修复过程中的重要作用。更重要的是，该方法可以提供一种普适、简单而强大的检测方法来明确鉴定蛋白质瓜氨酸化，这也将启发和有益于未来对这种翻译后修饰在生理和病理条件下的功能作用的研究。　　相关研究成果近期发表在Analytical Chemistry上的两篇文章中, 通过生物素硫醇标签辅助质谱法对蛋白质瓜氨酸化进行全局分析文章的共同第一作者是威斯康星大学麦迪逊分校博士生石亚涛，李子辉，王斌，并与中国药科大学叶慧教授课题组合作 应用二甲基化亮氨酸等重标记策略进行蛋白质瓜氨酸化高通量定量研究文章的第一作者是威斯康星大学麦迪逊分校博士生李子辉，两篇文章通讯作者为李灵军教授。更多关于李灵军教授研究团队的最新研究进展欢迎登陆课题组网站：https://www.lilabs.org/
    时间： 2022-12-30
    作者： ONE
  • ​整合结构质谱法和计算模拟法探究糖原磷酸化酶中磷酸化介导的蛋白变构调控和构象动态性
    大家好，本周为大家介绍一篇本课题组发表在ACS Chem. Biol.上的文章，Insights into Phosphorylation-Induced Protein Allostery and Conformational Dynamics of Glycogen Phosphorylase via Integrative Structural Mass Spectrometry and In Silico Modeling1。变构调节在自然界中广泛存在，可以用于调控细胞过程。糖原磷酸化酶（GP）是第一个被鉴定出的与变构调节相关的磷酸化蛋白。GP是一个分子量约196kD的同源二聚体蛋白，是糖代谢中重要的组分，也是2型糖尿病及癌症的靶点。AMP结合以及Ser14的磷酸化介导了GP的变构调节，使其构象从非活化的T-state GPb（未磷酸化状态）转变为活化的R-state GPa（磷酸化状态）。即使目前X-射线晶体学法解析出了GP的原子级蛋白结构，但受限于较大分子量，其结构动态性的检测较为困难，因此与GP变构调节相关的结构动态变化过程仍较为模糊。核磁共振（NMR）谱及分子动力学（MD）模拟等是探究蛋白质结构动态性的常用方法，但NMR分析存在分子量上限，且样品消耗量大，MD模拟的时间尺度和力场准确度有限。质谱（MS）法具有快速、灵敏的特点，是蛋白质结构、动态性以及构象变化分析中强有力的一款技术。氢氘交换质谱（HDX-MS）通过监测蛋白骨架酰胺氢原子与溶液中氘的交换来反映蛋白质构象动态性，因此适用于探究由配体、蛋白结合或共价修饰引起的蛋白质构象变化。同时，多个软件实现了由HDX-MS数据计算保护因子（PFs）和吉布斯自由能，从而提取残基水平的蛋白动态性信息。此外，在先前的工作中2, 3，我们整合了native MS和top-down方法（native top-down，nTD-MS技术），成功实现了多个蛋白复合物的一级序列到高阶结构等多方面信息的检测（包括测序、翻译后修饰、配体结合、结构稳定性、朝向等）。整合多种结构质谱法（整合结构质谱法）可以有效填补传统生物物理法中结构到动态性联系中的空缺，更好地表征变构调控现象。本文整合了HDX-MS、nTD-MS、PF分析、MD模拟以及变构信号分析检测了磷酸化介导的GP变构调控的结构和动态性基础，为GP的变构调控过程提供了见解。根据X-射线晶体学结构报道（图1a），T-state GPb转变为R-state GPa时，二聚体界面中N-末端尾部、α2、cap’（图1b）以及tower-tower helices区（图1c）发生了明显的结构重排，导致催化位点开放，从而底物磷酸吡哆醛（PLP）可以结合。尽管有晶体学报道，但与变构调控关联的构象动态性仍有待探寻。图1.（a）磷酸化介导T-state GPb（PDB：8GPB）向R-state GPa（PDB：1GPA）的构象转变；亚基相互作用界面：（b）C端区域和（c）tower-tower helices，GPb为蓝色，GPa为绿色。首先我们通过nTD-MS进行了检测。如图2a、b，谱图中观察到了GPb的单体和二聚体信号，其中二聚体为主要形式；GPa除了单体和二聚体外，谱图中还存在少量四聚体，但仍以二聚体为主要形式。当增加sampling cone（SC）电压时，GPb、GPa保留了其二聚体形式（图2c、d）。随后我们选择离子（29+）并在trap池中进行了碎裂（图2e、f、g、h），谱图低质荷比区GPa的碎片相对峰强度较GPb高，说明GP的二聚体互作界面较为稳定，且GPb亚基结构较GPa稳定。nTD-MS不仅能够探究GPb、GPa的结构差异，也能够为接下来的HDX-MS实验做好前期样品质量检查工作。图2.不同活化条件下GPb、GPa的nTD-MS谱图。（a、b）SC=40V；（c、d）SC=150V；（e、f）SC=150V、trap=100eV；（g，h）SC=150V、trap=200eV。左侧为GPb，右侧为GPa。随后我们进行了HDX-MS实验。图3a中展示了五个时间点的HDX heat map。图3b为通过PyHDX软件计算产生的PF值。其中N-端（1-22）以及tower helix前的loop区域（256-261）的氘代值较高、PF值较低，说明这些区域较为柔性或是结构较为无序。此外我们发现，tower-tower helices（262-276）区域的氘代值较低、PF值较高，表明helices的旋转可能是由前端可塑性铰链区触发的，而非helices本身的变形和重塑引起的，这些发现在晶体结构数据中均有吻合之处。除这两个区域外，GPa和GPb基本保持了稳定的整体结构。而从1μs原子级MD模拟计算得到的均方根波动（RMSF）和溶剂可及表面（SASA）中我们也发现（图3c），这两个区域数据与HDX-MS信息有所吻合，但MD模拟中部分区域未和HDX-MS相吻合的区域可能跟序列覆盖不足相关。图3. （a、d）GPb和GPa在不同标记时间下的氘代热图并映射到结构中（PDB: 1GPA）。（b、e）基于HDX-MS数据计算得到的PF值并映射到晶体结构中。（c、f）MD模拟中RMSF和SASA值并映射到结构中。从氘代差异图（图4a）中可以看出，4个区域呈氘代降低趋势（红色方框），多个区域呈氘代上升趋势（蓝色方框）（GPa-GPb）。而PF差的变化趋势与氘代变化趋势基本一致（图4b）。由数据可知，N-端和tower-tower helices的变化说明磷酸化介导的变构稳定了这两个区域，α1-cap-α2区域的动态性轻微下降。除此之外多个区域（尤其是tower-tower helices序列后的区域）均表现为PF值下降，说明相比于GPb，GPa催化位点附近的区域动态性增强了。接下来我们根据HDX kinetic plot特征将其进行了分类，并详细讨论了所属区域的变化。图4.（a）GPa-GPb HDX-MS的氘代差异图。（b）GPb到GPa PF的变化。 首先是N-端和C-端的变化（图5）。N-端残基1-22表现氘代下降，这说明N-端具有一定可塑性。受N-端区域磷酸化和结构变化影响，C-端区域也产生了一定的变化。此外，残基30-50（cap区）和残基111-117（α4back-loop）区表现氘代下降，而103-109（α4front）表现氘代上升。根据晶体结构推测，cap区和α4back-loop的氘代变化受N-末端变化影响，原有的残基相互作用被打破，形成新的残基间相互作用，同时这两个区域也经历了结构重排，因此表现出较明显的氘代变化。残基88-99（β2-α3）和残基125-141（β3-L-α6）氘代上升。总的来说，磷酸化使得cap′/α2界面互作增强了，同时磷酸化基团和精氨酸残基的静电相互作用是cap区产生变化的主要原因，而α1和α2起到锚定作用，其相对位置基本保持不变。图5.GPb（a）和GPa（b）的N-端和C-端区域的局部结构和HDX动力学曲线（c）。 此外，tower-tower helices（α7，残基262-278）区的变化同样值得关注（图6）。250s loop是表面暴露区域，未与其他区域发生接触，其氘代下降可能是因为自身结构的收缩。而肽段262-267和268-274氘代下降提示该区域可能发生了低周转率或强互作的结合反应。280s loop区氘代值上升。这些变化均说明，tower-tower helix的角度的改变不仅影响了二聚体界面结构，而且还影响了其靠近催化位点的周围区域。因此我们结合晶体结构推测，磷酸化和N-端相对位置的改变，使250s loop自身结构收缩，从而打破了Tyr262' -Pro281和Tyr262-Tyr280′之间的相互作用，导致两个亚基的tower helices发生相对滑动，倾斜角度增加。图6.GPb（a）和GPa（b）tower helix区域的局部结构和HDX动力学曲线（c）。 最后是催化位点、PLP结合位点和糖原存储位点的变化情况（图7）。催化位点周围多数区域均表现氘代上升趋势。我们推测，随着Pro281、Ile165和Asn133间的相互作用被打破，Arg569与Ile165、Pro281、Asn133间的互作也随之打破，因此催化位点和PLP结合位点周围的残基溶剂可及性上升，局部区域结构变得更为灵活，催化位点开放并转变为活化构象。糖原储存位点位于GP表面，距离催化位点30Å，除了α23（残基699−708）外，HDX-MS在糖原存储区没有观察到明显的变化。图7.GPb（a）和GPa（b）的催化位点和PLP（橙色）结合位点的局部结构和HDX动力学曲线（c）。结合以上所有数据，我们对磷酸化调节的动态机制进行了推测（流程图1）。磷酸化后，N-端尾部残基与acidic patch的互作被打破，也导致N-端尾部的有序化以及C-端尾部的无序化以及伴随的其他结构变化。通过在pSer14和Arg69和Arg43′之间形成新的盐桥，N-端残基被重定位，随之带来的是Asp838和His36′间的盐桥断裂。随着三级和四级结构的转变，250s loop收缩并发挥类似“门环”的作用，当其收缩时，Tyr262′-Pro281与Tyr262-Tyr280′之间的相互作用、276-279区与162-164区之间的氢键也被打破，导致tower helix发生相对滑动，tower-tower helices之间的作用被打破，同时将结构变化传递到催化位点。最后，280s loop和催化位点以及PLP结合位点附近的残基松动，通往催化位点和底物磷酸盐识别位点的通道打开，酶得以活化。流程图1.GP变构调节过程中，被打破（蓝色）或新形成的（红色）关键残基相互作用。 本文整合nTD-MS、HDX-MS、PF分析和MD模拟检测了GP磷酸化变构调节过程的结构和动态基础，通过该整合结构手段揭示了GP构象柔性、局部动态性以及长程变构调控构象变化中值得关注的信息。各个方法具有各自的优势，但也在一定层面存在局限，我们期待将HDX-MS信息与计算模拟信息进行更深度的整合以实现二者对蛋白质结构更精确的分析。撰稿：罗宇翔编辑：李惠琳原文：Insights into Phosphorylation-Induced Protein Allostery and Conformational Dynamics of Glycogen Phosphorylase via Integrative Structural Mass Spectrometry and In Silico Modeling李惠琳课题组网址：https://www.x-mol.com/groups/li_huilin参考文献1.Huang, J. Chu, X. Luo, Y. Wang, Y. Zhang, Y. Zhang, Y. Li, H., Insights into Phosphorylation-Induced Protein Allostery and Conformational Dynamics of Glycogen Phosphorylase via Integrative Structural Mass Spectrometry and In Silico Modeling. ACS Chem. Biol. 2022.2.Li, H. Nguyen, H. H. Ogorzalek Loo, R. R. Campuzano, I. D. G. Loo, J. A., An integrated native mass spectrometry and top-down proteomics method that connects sequence to structure and function of macromolecular complexes. Nat. Chem. 2018, 10 (2), 139-148.3.Li, H. Wongkongkathep, P. Van Orden, S. L. Ogorzalek Loo, R. R. Loo, J. A., Revealing ligand binding sites and quantifying subunit variants of noncovalent protein complexes in a single native top-down FTICR MS experiment. J. Am. Soc. Mass Spectrom. 2014, 25 (12), 2060-8.
    时间： 2022-06-29
    作者： ONE
  • 小贝倾情助力细胞外囊泡研究 ——贝克曼库尔特“细胞外囊泡专题研讨班”纪实
    最近，小贝家分别在北京和广州举办了“细胞外囊泡专题研讨班”，获得老师和同学们空前热情的参与，有的甚至千里迢迢、不远万里专程参加。是什么引起大家如此高涨的参与热情呢？当前研究的热点——外泌体。对于外泌体（又称细胞外囊泡，Extracellular Vesicles），相信大家都不陌生，它是指细胞膜上脱落或由细胞分泌的，具有双层膜结构囊泡状异质性群体，包括外泌体（Exs）、膜微粒（MP）和微囊泡(EVs)。细胞外囊泡和细胞内囊泡，有着相似的磷脂双分子层结构，包含有蛋白和核酸等生物大分子，大小在40nm-1000nm，是细胞进行物质运输、信号转导、实现生理功能的重要工具。细胞外囊泡广泛存在于细胞培养上清及各种体液，参与细胞间通讯、细胞迁移和免疫调节等多种反应。囊泡水平升高与糖尿病、艾滋病以及癌症等疾病相关，有望成为这类疾病的诊断及评估疾病预后标志物。如今，越来越多的研究者开始着眼于对细胞外囊泡进行准确的定型和定量研究。2013年10月7日，诺贝尔生理学或医学奖授予了发现细胞囊泡运输调控机制的三位科学家。外周血中有着大量的外泌体，来自不同的细胞。另外，外泌体和肿瘤微环境、肿瘤细胞迁移有着神秘联系。对于这些未知的领域，目前还缺乏研究，主要原因在于对于这种200nm以下颗粒的检测，显微镜显得力不从心，电镜又高不可及。因此强大的工具和完美的解决方案的显得尤其重要。有鉴于此，我们有幸邀请到了来自 Beth Israel Deaconess Medical Center and Harvard Medical School的Vasilis Toxavidis和John Tigges——两位有着丰富的流式细胞术和外泌体研究经验的学者，请他们和国内的学者进行外泌体研究的交流，分享经验。8月24日，首都北京，骄阳似火，然而参加“贝克曼库尔特细胞外囊泡专题研讨班-北京站”活动的老师和同学，有着胜似骄阳的热情，有图为证。现场不得不临时加座，才能满足大家学习和交流的热情。8月29日，羊城广州，骤雨初歇，寒潮来袭，公路上随处可见台风肆略的痕迹，这些却丝毫没有阻挡来自全国各地的40多位老师的脚步。大家齐聚中山大学，热情参与我们广州站的活动。两场研讨班，早上均为报告部分。Vasilis Toxavidis和John Tigges从理论角度讲述了外泌体检测的问题、误区和解决方案；从散射光检测原理、流式细胞仪硬件、再到样本制备，系统的阐述了外泌体的检测，并以实例讲述了心肌细胞源外泌体和红细胞源外泌体的研究结果，提出了Nano Flow Cytometry（NanoFACS）的概念。首先，来自美国哈佛干细胞研究所资源总监、哈佛医学院贝斯以色列女执事医疗中心流式技术平台负责人Vasilis Toxavidis先为大家做了流式分析EVs的技术原理、硬件可行性等方面的报告。Vasilis以MoFloXDP和CytoFLEX为教学案例，深入浅出地讲解，时时博得与会者的掌声，给大家提供了流式在微颗粒检测研究的新思路。随后，美国哈佛医学院贝斯以色列女执事医疗中心外囊泡检测中心主任John Tigges进一步介绍了利用流式细胞术研究细胞外囊泡， 并结合HF患者EVs检测案例，抽丝剥茧，逐一分析如何解决细胞外囊泡检测中问题、缺陷，阐述EVs在疾病研究中的实际意义，使大家茅塞顿开。其幽默的演讲风格也深受老师们喜爱，引得台下提问连连，将整个研讨会推上了小高潮。接着，来自贝克曼库尔特生命科学部的霍德华，讲述了贝克曼库尔特的超高速离心机——Optima XPN在样本制备和外泌体获取方面的完整工作流程。超速离心分离，是从生物体液和细胞培养样品中分离纯化外泌体的黄金标准，可以准确地重复获取外泌体，同时最大限度减少蛋白质聚集体和其他膜离子的共纯化。上午的理论部分结束后，大家对细胞外囊泡检测，超离技术助力样本采集和精准流式技术助力囊泡研究有了全面、清晰、深刻的认识。北京站的实验操作部分，在中科院过程工程研究所的、阵容强大的三台CytoFLEX流式细胞分析仪旁展开。John Tigges和Vasilis Toxavidis现场演示了如何在CytoFLEX上进行外泌体的检测。利用CytoFLEX的WDM技术和灵活的滤光片调整特点，John Tigges轻松实现200nm以下的颗粒检测，并找到外周血中神秘的外泌体。CytoFLEX使用VSSC检测Megamix-Plus微球结果及线性表现：CytoFLEX检测血液中的细胞外囊泡结果：由于FAPD的优势CytoFLEX对颗粒大小的检测保持很好的线性。出众的分辨率不仅能将噪音与细胞外囊泡很好的分开，而且还可以对外囊泡群体进行细分，分别研究其抗体表达情况。广州站的实践操作部分在中山大学北校区医学院实验室进行。大家在两位美国专家的指导下，领略了MoFlo Astrios EQ和CytoFLEX精准检测细胞外囊泡的神奇魅力。EVs的大小通常只有40nm-100nm，超出传统流式的检测范围。但MoFlo Astrios EQ的增强型双前向角设计和CytoFLEX的雪崩光电二极管以超高的分辨率和灵敏度，有效地区分噪音信号和检测囊泡。连续五轮操作培训，让操作者切身感受了一把迅速快捷、多参数细胞外囊泡检测。两场培训班内容丰富、实用，而又易于理解。到会的老师和同学纷纷表示获益匪浅。贝克曼库尔特的超高速离心机（Optima XPN）和超灵敏流式细胞仪（CytoFLEX）实现了双剑合璧，为科研工作者提供了完美且可行的外泌体检测解决方案。* 本产品仅用于科研，不用于临床诊断。(此项活动得到中国科学院过程工程所和中山大学的大力协助，特此表示感谢！)
    时间： 2017-09-11
    作者： 贝克曼库尔特
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