细胞培养上清液样品

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细胞培养上清液样品相关的耗材

  • TU212（人喉癌细胞）的培养步骤及方法！
    TU212（人喉癌细胞）的培养步骤及方法！ 一、细胞简介平台编号：bio-106163a规格：1*10 6拉丁属名：TU212（人喉癌细胞）型号：HTX2130细胞名称：TU212人喉癌细胞生长特性：贴壁组织来源：人喉癌细胞培养基：89%1640+10%FBS+1%双抗物种：人规格：2X10^6 cells培养温度：37℃引种来源：BioSample传代：1：2~1：4传代，两天左右换液。冻存液：92%完全培养基+8%DMSO（可以根据实验室条件自行选择）。包装：专业的无菌保温运输包装。细胞用途：仅供科研使用。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用。 二、细胞特性1）来源：头颈鳞癌2）形态：上皮细胞样，贴壁生长3）含量：1x1064）污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性5）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装 三、细胞接收后的处理方法1）收到细胞后，请检查发货培养瓶的状况，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。2）在显微镜下确认细胞生长状态时，最好在低倍镜（4或5X物镜)下进行，能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X和20×物镜下，同时给刚收到的细胞拍照，（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为细胞需要售后时提供收到细胞时细胞状态的依据。3）观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h。4）贴壁细胞：在运输过程中贴壁细胞会有脱落的现象，如发现贴壁细胞有脱落或者脱落后抱团生长，可将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和未贴壁细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到加有按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基的原培养瓶中（或新的培养瓶中）。5）悬浮细胞：T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中（加入按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基）。6）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议1：2传代。 四、细胞培养步骤1、培养基及培养冻存条件准备：1）准备IMDM培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。2、细胞处理：1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入250px皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2、加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3、按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4、将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。注：第一次传代推荐传代比例为1:2，以后传代比例可根据客户需要自己决定。 五、TU212（人喉癌细胞）的注意事项1、收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。2、收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。3、由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。4、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。 六、TU212（人喉癌细胞）的运输和保存可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式（1）干冰运输，收到后立即转入液氮或者-80度冰箱冻存或直接复苏；（2）存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。（3）收到细胞后请拍照，3天内如果发现污染，请及时拍照与我们联系。 中国微生物菌种查询网自设细胞系板块，是细胞株提供中心,专业提供代次低、周期短、活性好的细胞株。与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！
    供应商： 北京百欧博伟生物技术有限公司
    品牌： 百欧博伟生物
    价格： ¥1760
  • 细胞培养瓶 细胞培养皿
    EasyDish™ 易用细胞培养皿 EasyDish培养皿的独特设计为实验室中贴壁细胞培养和易用性提供一系列益处，包括：1. 握环设计：使用皿的时候，保证盖子的安放，戴手套操作时皿易于掌控和操作2. 专有的凹槽设计：● 保证无菌的同时最佳的通风● 最大限度减少盖子和皿边缘质检的摩擦● 限制盖子的随意滑动● 增加了皿的物理性能3. 增加了皿的外边缘尺寸：允许皿堆叠在一起，保证在细胞培养运输期间具有最大的稳定性和安全性4. 皿底部的方向标记：简化显微镜下的细胞定位5. 书写区域：提高细胞培养物的可追溯性6. 再密封包装：提高了打开包装时皿的清洁程度7. 已经过γ射线辐照灭菌产品货号厂商货号直径，mm规格，mm培养面积，cm2/孔Nunclon Δ表面处理外部高度，mm建议工作容量，mL数量，每包/箱表价807-310-100001504603535×108.8+13310/5001385807-310-100011504626060×1521.5+16510/280852807-310-10002150464100100×1556.7+1712.510/1501144807-310-10003150466100100×2056.7+2112.510/2401355807-310-10004150468150150×20145+213510/802089 标准细胞培养皿使用细胞培养皿进行各种尺寸和样式的各类应用，以适应不同的实验需要。这些培养皿经过 Nunclon™ Delta 表面处理（专有的细胞培养表面处理），能够为各种类型的细胞提供最大的黏附力。● 顶部和底部的堆叠圈使操作更加简便，堆叠更加稳固。● 已经过γ射线辐照灭菌• 提供圆形、矩形和正方形三种样式• 盖子与皿之间的通气缝设计可供选择 产品货号厂商货号直径，mm规格，mm培养面积，cm2/孔Nunclon Δ表面处理透气性外部高度，mm建议工作容量，mL数量，每包/箱表价807-311-100001503184035×108.8+-12310/5004525807-311-100011749264035×108.8++12320/500 6859807-311-100021748886060×1520.8++15520/500 24379807-311-100031503266060×1521.5+-15510/4003915807-311-100041695586060×1521.5++15510/4004298807-311-10005157150147150×20150++153520/500 7103807-311-100061710994035×108.8-+12310/4004319807-311-100071503406060×1521.5-+1555/204346807-311-100081749433535×108.8Nunclon Sphera超低吸附表面35/203789807-311-100091749446060×1521.5Nunclon Sphera超低吸附表面55/203792807-311-1001017494590100×2056.7Nunclon Sphera超低吸附表面12.55/203797807-311-10011166508245×245，方形500Nunclon Sphera超低吸附表面251354/164339807-311-10012240835245×245，方形500-252254/164225807-311-10013240845245×245，方形低缘478-202155/201947细菌培养皿用于医院环境、食品科学或制药行业的样品。 这些培养皿专为最佳的细胞培养应用和细胞类型而设计，带模制网格，由于全部平整并且高度统一，在自动分发器内表现出色。● 用于真菌、细菌和其他微生物培养● 接触培养皿适用于医院环境以及食品科技和制药工业● 由于表面光滑以及高度均匀，自动分配器可以很好地执行操作● 深孔细菌培养皿允许较长的培养期● 与自动系统相兼容 产品货号厂商货号外部尺寸(含盖)，mm通风孔培养面积，cm2已灭菌数量 每包/箱表价807-312-10000263991100×15+58+20/3201963.96 807-312-10001249964140×20+145+10/801983.27 Sterili 30 至 140 mm 皮氏培养皿Sterilin培养皿，规格多样，从30到140mm的都有，以满足您不同的需求。• 小的培养皿主要用于恒温孵育箱内培养样品• 55mm的培养皿可配合47mm的膜过滤器使用，适用于水质检测• 50mm的培养皿(货号：124)底部深度超过20mm，可以用于盛装液体培养基，方便操作• 140mm的培养皿采用EN ISO24998培养皿标准制作，对尺寸控制严格• 全程无菌制造产品货号厂商货号产品描述孔数底部直径×高度，mm灭菌性个/包数量/箱表价807-101-10000121V培养皿，30mm335.0×11.0无菌108006648.51 807-101-10001122-NPT培养皿，50mm152.0×14.5无菌10700询价807-101-10002124培养皿，50mm，较深型150.0×20.3无菌20500询价807-101-10003PF55培养皿，55mm055.0×12.0无菌151620询价807-101-10004123-NPT培养皿，60mm160.0×15.1无菌10540询价807-101-10005PF55V培养皿，55mm355.5×12.0无菌101620询价807-101-10006501V培养皿，140mm3138.9×21.1无菌10801499.38 Sterili 标准 90 mm 皮氏培养皿Sterilin标准型90mm的培养皿是微生物学家用于固体培养基上培养微生物的首选培养基。• 适用于自动化倾倒液体• 采用对细胞无毒的聚苯乙烯制成• 镜面加工的模具保证良好的光学性能• 有全程无菌制造的，也有最后采用γ射线灭菌• 有单孔的、三孔的、也有无孔的• 三孔-方便气体交换，适用于短期培养• 单孔-限制气体交换，减少蒸发量，防止脱发，适用于长期培养• 无孔-适用于无氧，长期培养• 浅培养皿有助于最大化孵育空间• 只能体外使用符合标准：采用EN ISO 24998：2008培养皿标准制作，对尺寸控制严格 产品货号厂商货号产品描述孔数底部直径×高度，mm灭菌性个/包数量/箱表价807-101-10007101R20培养皿，90mm19.42×15.9无菌205001696.92 807-101-10008101/IRR培养皿，90mm189.42×15.9无菌205002372.77 807-101-10009101VR20培养皿，90mm389.42×16.1无菌205001696.92 807-101-10010101V/IRR培养皿，90mm389.42×16.1无菌205002399.01 807-101-10012101RT/IRR培养皿，90mm089.42×15.7无菌205002402.76 Sterilin专用培养皿Sterilin专用型培养皿适用于您的一些非标准用途• 全程无菌制造• 只能在体外使用有颜色的培养皿，90mm• 方便辨识，特别有利于在教学实验室中的团体合作• 采用不含镉、对细胞无毒的染料分区的培养皿，90mm• 适用于有不同培养基的、需要孵育保存的• 有单磨砂标记，便于采用自动化倾倒装置的倾倒量的控制方形培养皿，100mm• 无分区，适用于抗生素敏感性检测• 有区分(25×5ml)，适用于小容量培养基或者是样品储存• 有分区培养皿使用时可用带孔盖，也可用不带孔的盖 产品货号厂商货号产品描述孔数底部直径×高度，mm颜色灭菌性个/包数量/箱表价807-101-10013101VBLUE蓝色培养皿，90mm389.25×16.2蓝色无菌205001805.51 807-101-10014101VRED红色培养皿，90mm389.25×16.2红色无菌205001858.38 注意：此产品有最低订购量限制，请联系客服以获知详细信息。培养皿和生物测定皿存放架用于准备培养基、接种、培养和储存● 聚碳酸酯框架；白色聚碳酸酯柱● 可高温高压灭菌消毒的细菌培养皿架● 具有平滑的圆角、指握手柄和橡胶底● 透明，可从侧面看到培养情况● 需要简单组装产品货号厂商货号产品描述包装表价807-701-100005920-0060可放置皿直径3.93in.(100mm),皿数量：42玻璃皿/54塑料皿1个/盒，2个/箱询价807-701-100015921-0060可放置皿直径2.36in.(60mm),皿数量：56玻璃皿/72塑料皿1个/盒，2个/箱询价807-701-100025922-0024可放置皿直径3.93in.(100mm),皿数量：42玻璃皿/54塑料皿1个/盒，4个/箱询价
    供应商： 美瑞泰克科技——Labbuy实验室商城
    品牌： NUNC
    价格： ¥1385
  • 细胞培养系统冷却器
    细胞培养系统冷却器,细胞培养系统由中国领先的进口精密仪器和实验室仪器旗舰型服务商-孚光精仪进口销售！孚光精仪精通光学,服务科学,欢迎垂询！细胞培养系统工作：细胞放置于载玻片上，然后置入到特殊的封闭型细胞培养皿中细胞培养系统提供一种可灌注层流的培养皿。细胞培养系统控温器,上层玻璃去除来自样品腔的热量，这部分热量将被流动的制冷液体带走细胞培养系统冷却器使用O型环环绕样品室，使得制冷液体可以在O型环内流动，从而高效率地带走热量细胞培养系统利用电子泵和重力的作用，使得制冷的液体流动，与样品腔产生热交换从而带走热量，而在这个过程中，细胞始终安全地放置于独立的光学腔，不受外部热量的影响。细胞培养系统如果室温下使用高数值孔径的物镜，就必须对物镜和所观察的样品室进行热隔离或对物镜制冷细胞培养系统冷却器不同的配置方案方案一：细胞培养系统底部带制冷管的样品室,5型不镀膜的微通道盖片，50盖玻片，30个垫圈（样品室具有加热和制冷能力时使用）方案二：细胞培养系统0mm孔径的样品室底部带有制冷管, 5型非镀膜微通道盖片，50盖玻片，30个垫圈方案三：细胞培养系统仅仅出售样品室的制冷适配器，用于对样品进行额外制冷。细胞培养系统冷却器和欧洲进口的培养系统冷却器,包含制冷型的培养皿,是封闭的制冷型细胞培养系统,可对物镜制冷,也可以对培养皿封闭隔离温度,是理想的控温器
    供应商： 孚光精仪（中国）有限公司
    品牌： 孚光精仪
    价格： ￥2000
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细胞培养上清液样品相关的仪器

  • Millicell 24孔细胞培养扳 400-886-5615
    仪器简介：Millicell 24孔板组件用于支持细胞附着，生长和区分的各种细胞应用。Millicell 24孔板组件不但用于细胞培养和分析，还可以用于手动或自动的细胞种植，喂养和清洗系统。技术参数：Millicell 24-well Cell Culture Plate Assembly, PCF, 0,4 µ m，包括 24-孔过滤板, 接受底盘和盖子或Millicell 24-well Cell Culture Plate Assembly, PET, 1 µ m，包括 24-孔过滤板, 接受底盘和盖子主要特点：新的24孔细胞培养板组件使用及其方便，可靠。其主要特点有：无须独立的细胞培养板和接受底盘，可以直接从底侧输入口添加培养液；一旦移开接受底盘，细胞培养板可以站立，保护细胞单层；另外，新的24孔细胞培养板还有加宽的孔边，和加大的标签面积，使用更方便。24 孔培养板上盖的独特“tear-drop”孔设计降低了膜底气泡的形成，使细胞单层能得到充分的营养。如果使用单孔底盖，Millicell assembly 可以通过隔板防止培养液的泄漏和污染。
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    厂商： 默克化工技术（上海）有限公司
    品牌： Millipore
    型号： Millicell
    价格： 5000 - 9999元
  • 蜂巢式细胞培养系统 400-860-5168转1222
    蜂巢式细胞培养系统是一个专门用于细胞产品培养的设备，并满足GMP无菌化生产要求的密闭式集成化操作系统，为细胞产品提供高智能化持续的无菌培养环境。蜂巢式细胞培养系统配备了转运小车和蜂巢式细胞培养站组合，可满足大规模、多样本量的细胞培养要求。产品特点1. 为细胞生产培养全过程提供A级洁净环境，符合GMP的无菌要求。2. 系统控制和环境监控数据的实时记录并储存，实现生产培养全过程的数据可追溯。3. 紧凑的一体化设计，有效节省空间，无需较大的建筑物空间布局。4. 只需安装于D级及以上洁净环境中，降低了高级别洁净室建造及运行成本。5. 蜂巢培养系统采用模块化设计，可灵活拓展培养空间，满足大规模、不同批次细胞同时培养的要求。6. 可视化培养过程监测系统可识别每个独立培养单元，通过监控进行批次管理，满足FDA21 CFR part11 电子记录、电子签名、审计追踪要求。7. 提供高保障的细胞无菌培养环境，利用过氧化氢灭菌技术实现对培养箱进行多维灭菌保护。8. 集成快速灭菌站，可单独对培养单元进行灭菌。9. 配备转运小车，实现培养箱与细胞制备工作站的快速灵活对接，保障细胞操作到培养全流程处于无菌环境，防止交叉污染。
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    厂商： 浙江泰林生物技术股份有限公司
    品牌： 泰林生物/tailin
    型号： 蜂巢式细胞培养系统
    价格： 面议
  • BEOnChip 细胞培养微流控芯片 400-860-5168转4807
    BEOnChip 细胞培养微流控芯片一、关于BEOnChipBeonchip S. L.于2016年由Rosa Monge（机械工程博士），Ignacio Ochoa（生物学博士）和Luis Fernández（微技术博士）于2016年在萨拉戈萨大学成立。工程师和生物学家的合作是设计人性化和容易使用的器官芯片设备的关键，用于体外模拟身体的生理环境。在Beonchip，我们使用材料和微细加工技术来创建下一代体外测试平台，从而实现以前不可能或只能在体内进行的体外实验。因此，减少了开发新药，化妆品和化学品所需的成本和时间跨度。二、BEOnChip 细胞培养微流控芯片BEOnchip 微流控芯片包括标准芯片和定制化芯片其中标准用于细胞培养的微流控芯片有四种，分别为BE-FLOW， BE-DOUBLEFLOW, BE-TRANSFLOW, BE-GRADIENT 1、 BE-flow 标准细胞培养微流控芯片BE-Flow是易于使用的设备，专门用于流动状态下的长时间细胞培养。它允许在两个独立的通道中进行长期2D或3D培养。BE-Flow与微流体泵系统兼容，由于剪切应力在基因表达中起主要作用，此芯片适合血管研究。Be-Flow设备允许在通道的顶部和底物进行2D培养，也可用于两种不同的细胞类型单层共培养，实现流动状态下2D 细胞培养，用于研究循环肿瘤细胞，免疫细胞，细菌，真菌，病毒等的2D 培养。Be-Flow每包含有10个单独包装的芯片，每个芯片在发货前都进行灭菌，芯片存储于室温干燥无直接阳光照射处（15-25℃）。BE-Flow 微流控细胞培养芯片的应用包括血管研究，机械剪切应力研究，3D培养物上的间隙流动，滚动和粘附或循环颗粒实验2、 BE-doubleflow 细胞共培养微流控芯片BE-Doubleflow由两个通过多孔膜连接的可灌注通道组成。探索仿生环境中不同 2D 和 3D 培养物之间的crosstalk，并通过选择适合孔径来控制相互作用的效率。BE-Doubleflow允许在缺氧环境或流动状态下在上皮培养中起作用时（肾脏，肝脏，心脏，肺，肠道等）进行内皮/上皮屏障共培养。此外两个可灌注通道为研究循环颗粒（细菌，免疫反应，循环肿瘤细胞）的影响提供了适合的环境。3、 BE-Transflow standard 细胞培养微流控芯片BE-Transflow是通用的细胞培养平台。它允许通过多孔膜将培养孔与微流体通道连接在一起来研究复杂的培养构型。这是气液界面（ALI）培养，内皮/上皮屏障和crosstalk研究的细胞培养微流控芯片。BE-Transflow细胞培养微流控芯片在 2D 或 3D 培养上进行气液界面 （ALI） 实验，自动更换培养基，用于上皮培养、毒性测试、吸收测试等。也用于创建内皮-上皮屏障：使用上部孔进行2D或3D上皮细胞培养，将内皮细胞接种在下面的灌注通道中。最常见的应用是血脑屏障（BBB），肠道，皮肤，肺等。4、 BE-gradient 梯度细胞培养芯片BE-gradient其设计将电化学梯度应用于3D细胞培养物。BE-gradient与多种类型的光学显微镜兼容（倒相差，共聚焦，荧光等）。Be-Gradient由一个用于细胞培养的中央腔室和通过3个微型通道连接到中央腔室的两侧通道组成。侧通道用于模拟血管。贴壁2D培养不仅可以在中央腔室中，还可以在侧通道中进行培养。每个芯片有两个独立的实验通道，可以将电化学梯度应用于3D细胞培养物。首先将细胞混合在液体水凝胶中，然后将其接种到中央腔室中。水凝胶聚合完成后，通过侧向通道注入不同浓度的化合物的培养基，并实时监测效果。例如在营养，氧气或药物梯度的条件下研究细胞迁移，血管生成研究等。BEOnchip微流控细胞培养芯片的特点：• 易于使用：Be-Flow与光学显微镜（共聚焦，荧光等）兼容，可在显微镜下轻松操作。• 易于连接：Be-Flow 与微流体流量控制系统（注射器、蠕动泵、压力控制系统、摇臂系统等）兼容。• 无非特异性吸收：与其他PDMS器件不同，Be-Flow由疏脂的热塑性材料制成，不会出现非特异性药物吸收问题，允许通过荧光检测进行免疫化学。• 无渗透性：这些材料对氧气和水蒸气的渗透性极低，通过控制它们在培养基中的浓度来精确控制微通道内的气体。• 细胞回收：Be-Flow中使用的细胞培养物可以很容易地回收以进行进一步的实验。
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    厂商： 大连力迪流体控制技术有限公司
    品牌： BEOnChip
    型号： BE-flow
    价格： 5000元
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细胞培养上清液样品相关的试剂

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细胞培养上清液样品相关的方案

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细胞培养上清液样品相关的论坛

  • 气质或者液质联用检测血清或细胞培养上清中的胆固醇中间代谢产物

    想检测血清或细胞培养上清中的胆固醇中间代谢产物，是用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/bp][color=#3333ff]气质联用[/color][/url]的好，还是[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用[/color][/url]的好！ 样品需要经过怎么处理呀！ 非常感谢！ 以前完全没接触过这方面的技术。谢谢回答！

  • 【分享】细胞培养知识

    细胞培养知识1 冷冻管应如何解冻？ 取出冷冻管后， 须立即放入37 °C 水槽中快速解冻， 轻摇冷冻管使其在1 分钟内全部融化， 并注意水面不可超过冷冻管盖沿， 否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时， 必须注意安全， 预防冷冻管之爆裂。 2 细胞冷冻管解冻培养时， 是否应马上去除DMSO？ 除少数特别注明对DMSO 敏感之细胞外， 绝大部分细胞株（包括悬浮性细胞）， 在解冻之后， 应直接放入含有10-15ml新鲜培养基之培养角瓶中， 待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO 即可， 如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附之问题。 3 可否使用与原先培养条件不同之培养基？ 不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基， 若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基， 细胞大都无法立即适应， 造成细胞无法存活。 4 可否使用与原先培养条件不同之血清种类？ 不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源， 所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清， 在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。 5 何谓FBS, FCS, CS, HS ? FBS (fetal bovine serum) 和FCS (fetal calf serum) 是相同的意思， 两者都是指胎牛血清， FCS 乃错误的使用字眼， 请不要再使用。CS (calf serum) 则是指小牛血清。HS (horseserum) 则是指马血清。

  • 细胞培养FAQ

    细胞培养FAQ： 1 冷冻管应如何解冻？ 取出冷冻管后， 须立即放入37 °C 水槽中快速解冻， 轻摇冷冻管使其在1 分钟内全部融化， 并注意水面不可超过冷冻管盖沿， 否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时， 必须注意安全， 预防冷冻管之爆裂。 2 细胞冷冻管解冻培养时， 是否应马上去除DMSO？ 除少数特别注明对DMSO 敏感之细胞外， 绝大部分细胞株（包括悬浮性细胞）， 在解冻之后， 应直接放入含有10-15ml新鲜培养基之培养角瓶中， 待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO 即可， 如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附之问题。 3 可否使用与原先培养条件不同之培养基？ 不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基， 若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基， 细胞大都无法立即适应， 造成细胞无法存活。 4 可否使用与原先培养条件不同之血清种类？ 不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源， 所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清， 在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。 5 何谓FBS, FCS, CS, HS ? FBS (fetal bovine serum) 和FCS (fetal calf serum) 是相同的意思， 两者都是指胎牛血清， FCS 乃错误的使用字眼， 请不要再使用。CS (calf serum) 则是指小牛血清。HS (horseserum) 则是指马血清。 6 培养细胞时应使用5 % 或10% CO2？或根本没有影响？ 一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作为pH 的缓冲系统， 而培养基中NaHCO3 的含量将决定细胞培养时应使用的CO2 浓度。当培养基中NaHCO3 含量为每公升3.7 g 时，细胞培养时应使用10 % CO2；当培养基中NaHCO3 为每公升1.5 g 时， 则应使用5 % CO2 培养细胞。 7 何时须更换培养基？ 视细胞生长密度而定， 或遵照细胞株基本数据上之更换时间，按时更换培养基即可。 8 培养基中是否须添加抗生素？ 除于特殊筛选系统中外， [font=宋

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  • 岛津“细胞培养上清液方法包”介绍
    “细胞培养上清液方法包”采用超快速三重四极杆液质联用仪（LCMS-8040/8045/8050/8060），仅需 17分钟（包含分析时间和平衡时间），使用最优化的MRM参数，可同时监测分析95种化合物（不仅可分析培养基的基础成分也可分析细胞的代谢产物，包括氨基酸类、核苷酸类、维生素类、糖类以及其他类化合物等）的相对丰度变化。该方法包既可分析高浓度组分（例如葡萄糖和谷氨酰胺），也可分析低浓度组分（例如维生素等）。该方法包无需标准品，只需一个内标即可检测细胞培养过程中各组分随时间的变化曲线和培养基批次间的一致性。如用户需要对培养基或者细胞培养上清液中组分进行绝对定量，则需要另行准备对应的标准品，从而通过内标法对组分进行绝对定量。 “细胞培养上清液方法包”前处理操作简单方便，流程如下图所示： “细胞培养上清液方法包”中95个化合物（糖类、氨基酸类、维生素类、核苷酸类以及其他的抗生素、有机酸、生长因子等）列表详见表1。该方法包所检测化合物可增加扩展，也可根据用户需求选择性除去不关注化合物。 表 1. “细胞培养上清液方法包”中96种化合物列表（包含一个内标）关于岛津 岛津企业管理（中国）有限公司是（株）岛津制作所于1999年100%出资，在中国设立的现地法人公司，在中国全境拥有13个分公司，事业规模不断扩大。其下设有北京、上海、广州、沈阳、成都分析中心，并拥有覆盖全国30个省的销售代理商网络以及60多个技术服务站，已构筑起为广大用户提供良好服务的完整体系。本公司以“为了人类和地球的健康”为经营理念，始终致力于为用户提供更加先进的产品和更加满意的服务，为中国社会的进步贡献力量。
    时间： 2017-11-16
    作者： 岛津
  • 岛津推出《细胞培养上清液及培养基组分分析应用文集》
    现代生物技术一般认为包括基因工程技术、细胞工程技术、酶工程技术和发酵工程技术，而这些技术的发展几乎都与细胞培养有密切关系，特别是在医药领域的发展。比如基因工程药物或疫苗在研究生产过程中很多是通过细胞培养来实现的；细胞工程中更是离不细胞培养，杂交瘤单克隆抗体，完全是通过细胞培养来实现的。正在倍受重视的基因治疗、细胞治疗也要经过细胞培养过程才能实现，发酵工程和酶工程有的也与细胞培养密切相关。总之，细胞培养在整个生物技术产业的发展中起到了关键的核心作用。开发合适的培养基配方与优化细胞培养条件是保证产品质量、产量以及批次之间一致性的重要因素，尤其是抗体药物偶联物、双靶点/特异抗体类药物、抗体片段融合蛋白等相对分子量大、结构复杂的抗体类药物，对其重要性不言而喻。而对于生物类似药的研发与质量控制来说，尽可能通过优化工艺缩小差异，更有利于生物类似药与原研参比品的质量对比研究，提高生物类似药的质量研究结果与参比品之间的相似性，从而使各项质量属性达到预先设置的可接受范围。目前生物制品公司的生物过程工艺开发与优化偏重于监测常规的温度、搅拌、溶解气体、OD值等理化条件和少数培养基成分与代谢物等的变化，缺乏对于细胞培养上清液组分直接、全面且快速的客观动态数据分析，因此无法精准优化细胞培养工艺条件，甚至影响抗体类药物等的产品品质；而培养基生产商为了开发高效低成本培养基配方，并且要保证批次间一致性，则需要投入大量的人力物力，配备不同检测功能的仪器来实现培养基成分的全方位检测。 为满足快速全面分析细胞培养上清液组分和培养基组分，将基础碳源、氮源、核酸、维生素和其他主要代谢物同时检测分析的需求，我们开发出“细胞培养上清液方法包”。该技术平台采用超快速三重四极杆液质联用仪，仅需17分钟，即可同时监测95种细胞培养上清液营养成份和代谢物等的相对丰度变化 。无需用户自行开发方法，即装即用。所有目标化合物信息与实验方法全内置，且根据需要可增加，可拓展。为增进用户对“细胞培养上清液方法包”的深入了解和方便使用，岛津企业管理（中国）有限公司分析中心整理编写了本册《细胞培养上清液及培养基组分分析应用文集》。本册文集介绍了“细胞培养上清液方法包”在不同培养基组分分析以及细胞培养过程监控中的应用，共收录应用文章 10 篇，为相关领域的客户使用该系统提供参考。 关于岛津 岛津企业管理（中国）有限公司是（株）岛津制作所于1999年100%出资，在中国设立的现地法人公司，在中国全境拥有13个分公司，事业规模不断扩大。其下设有北京、上海、广州、沈阳、成都分析中心，并拥有覆盖全国30个省的销售代理商网络以及60多个技术服务站，已构筑起为广大用户提供良好服务的完整体系。本公司以“为了人类和地球的健康”为经营理念，始终致力于为用户提供更加先进的产品和更加满意的服务，为中国社会的进步贡献力量。
    时间： 2017-11-15
    作者： 岛津
  • 【聚焦外泌体】之从细胞培养上清液中分离外泌体的准备
    对于外泌体研究的新手来说，细胞培养上清液是非常好的实验材料，外泌体相对容易收集。我们可以首先从细胞上清开始来熟悉整个外泌体的研究流程，充分了解整个流程需要使用的仪器、试剂以及准备时间，对我们后续的实验安排有很大帮助。其中比较重要的一点是要确定有足够的初始细胞上清液来收集外泌体，以保证我们能够拿到足够多的蛋白、核酸来进行后续分析。我们可以逆向思维，通过后续检测所需蛋白/核酸量——外泌体量——细胞上清量，来确定初始细胞上清体积。先从细胞上清开始，熟悉了整个过程后，我们再进行其他相对较难的实验材料进行研究。01细胞系选择无论贴壁细胞或是悬浮细胞，能分泌更多外泌体的细胞系肯定是优先选择的。一般说来，肿瘤细胞的外泌体分泌水平要高一些，但并不是所有肿瘤细胞系都能分泌足够多的外泌体，我们可以借鉴文献中的细胞系推荐1。以常用基因转染的HEK293为例，是比较公认的分泌外泌体水平较高的细胞系。或者，以每100ml的细胞上清收集到的外泌体蛋白可达到5~20μg范围作为标准2，例如我们可以从100ml的细胞上清中获得10μg的外泌体蛋白，如果后续要做蛋白质组学分析（需50μg蛋白），那么初始细胞上清就需要扩大到之前的5倍，500ml，500ml上清差不多是通过离心方法可处理的大样品量了。如果后面收集到的外泌体蛋白都不够进行一次WB，那就要考虑一下是不是要换个细胞系了。如果外泌体蛋白小于3μg，那么考虑到扩大体系的实验难度和后续实验的顺利进行，那证明我们用的细胞系不太合适做外泌体研究。*虽然很多生物样品或是细胞系在文献中没有出现过，许多外泌体相关的数据库（ExoCarta, Vesiclepedia, Evpedia等）可以提供帮助，在上面我们可以查到有哪些细胞系已经有人成功进行外泌体提取了。或者也可以咨询一些做外泌体的生物公司，看看他们是用哪些细胞系来制备商业化的标准外泌体样品的。02优化细胞培养条件及细胞系选择影响外泌体质量和回收率的另外一个重要因素是在收集之前细胞的培养状态。好的收集时间段是细胞状态好、生长旺盛，即处于对数期的细胞3，并且在细胞传代之前收集细胞上清，这个时候细胞所分泌的外泌体量达到高4。准备好的细胞上清液，细胞密度也要适合，贴壁细胞如果细胞密度过高会出现接触抑制，对所分泌的外泌体也会有影响。所以，理想的条件是在细胞融合达到70%~80%后的40~48h后收集外泌体（此时约融合至90%）。要注意，为了避免FBS外泌体的污染5，收集外泌体的40~48h之前需换成无血清培养基，注意此时40~48h仅作为推荐参考。像有些细胞在无血清培养基培养24h后没有发生存活率和细胞形态改变，那么可以进行上清收集。如果出现死细胞增加、细胞形状改变、状态变差等情况时，使用EV-delepted FBS培养基来代替无血清培养基，EV-delepted FBS可以直接购买也可以自己制备（使用SW 41Ti转头在4℃，35,000rpm(Rmax 210,000 ×g)离心16h后小心收集上清）。但是这样仍无法完全避免血清外泌体的污染，需要清楚样品中血清外泌体的含量，增加一组没有培养细胞的培养基的平行样品作为阴性对照是必要的。03外泌体的提取方法目前被大家认可的方法就是超速离心，因为超离的方法可以收集到完整的细胞外囊泡群，并且几乎所有的实验材料（细胞上清、血液、体液等）都可以通过超离的方法来进行外泌体提取。当然超离的方法也有需要改善的地方，比如样品量很小的情况下，超离对外泌体的回收率不高，但是超离作为一种物理分离的方法，可以在不破坏外泌体群体特性的情况下进行分离的。当前，除了超离外还有许多外泌体分离方法，每种方法都有它的优势和劣势，首先我们需要理解各种分离方法的原理和特点，再根据我们的实验需求才能找到合适的外泌体提取方法。超离方法是可以获得整个外泌体群体，适合于研究整个外泌体群体特性。Yoshioka博士：众多外泌体分离方法中，我们使用超离沉降的方法作为实验室提取外泌体的标准方法5（见下图）。这个Protocol主要包括三个步骤：1.小心收集细胞上清并低速（4℃，2,000xg，10分钟）去除悬浮细胞（死细胞）。2.用0.22μm孔径过滤器过滤上步中收集到的包含外泌体的上清液，去除大颗粒和细胞碎片。3.将上步中的滤液进行超离处理，使用贝克曼库尔特SW 41Ti水平转头、13.2ml超净离心管（Product Number:344059，Beckman Coulter），4℃下35,000rpm(Rmax 210,000xg)离心70分钟。离心过后外泌体在离心管底聚集成沉淀，通常是肉眼不可见的。然后用预先过了0.22μm孔径过滤器的PBS进行清洗，洗掉与外泌体一起沉降的成分，例如微颗粒和蛋白。小心倾倒掉第3步超离后的上清，残留少量液体进行2~3s的涡旋振荡重悬沉淀，然后加入PBS，重悬后的样品同样的条件再进行一次超离。再次超离过后的外泌体仍然需要重悬，倾倒掉上清后，再进行2~3s的涡旋振荡重悬，这时的外泌体样品就可以进行下步分析了。从离心管中转移外泌体样品到储存管（比如1.5ml微量离心管）时，在吸取时我们可以用移液枪先大概测量一下样品体积，后面在储存管中补充PBS到我们之前预估的样品体积，比如，我们想收集到100μl的外泌体样品，但是从离心管中转移到微量管中只有80μl（注意：使用13.2ml超净离心管，平均下来每次收集到的外泌体样品大概80μl），我们加20μl PBS到微量管中再混匀一下就可以保存了。外泌体样品可以在4℃保存，并且要尽量早的用于分析。另外，外泌体样品是不能反复冻融的，与细胞类似，反复冻融过程会破坏外泌体。现在大家普遍认为外泌体是具有异质性的，整个外泌体群还可以细分为亚群（例如尺寸、蛋白表达等），不同的亚群也具备不同的特性，正如前文所说，通过超离的方法可以收集完整的外泌体群体。也有些文献也报道过使用不同的离心条件，可以将尺寸大小不同的外泌体亚群分开。目前，还没有特别统一的外泌体超离提取步骤，像转头类型、离心管类型、离心力以及离心时间等离心条件在不同的文献上都会有些许的差异。04参考文献1. Yokoi A. In Takahiro Ochiya, Yusuke Yoshioka. Exosomes encourage the medical innovation. Kagaku-Dojin Publishing Co., 2018 p.122-134 [Article in Japanese]2. Valadi H et al. Nat Cell Biol. 2007 9(6): 654–6593. Beckman Coulter. Interview article: Basics and Vision of Exosome Research. 20154. Urabe F et al. Clin Transl Med. 2017 6(1): 455. Yokoi A. In Takahiro Ochiya, Yusuke Yoshioka. Exosomes encourage the medical innovation. Kagaku-Dojin Publishing Co., 2018 p.122-134 [Article in Japanese]
    时间： 2019-09-04
    作者： 北京德泉
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