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巨魔芋是我们常吃的魔芋的近亲。但惊人的是:它有比一层楼还高的叶子、一人多高的花序。它开花时散发浓烈尸臭,因此被又称作“尸花”。北京植物园的巨魔芋开花,在国内尚属首次。此外,照顾过巨魔芋私生活的自然控编辑还有许多料要爆……
[b] 水浴浸提猴头菇粗多糖的研究[/b][align=left] 目前多糖的传统提取方法有水提醇沉、酸液/碱液提取、酶解法等。近年来,微波、超声波,膜处理和CO超临界萃取等方法作为辅助提取或精制,也取得了较好的提取效果。考虑到多糖是一种极性大分子化合物,溶于水而不溶于有机溶剂,本研究采用了不易导致多糖降解的水浴浸提法,并在此基础上辅以微波和超声波两种方式复合提取,不仅操作简便,缩短提取时间,并能有效提高多糖得率。[/align][align=left]水浴浸提法[/align][align=left] 一般植物性多糖的提取多采用热水浸提法,其原理是借助于热力作用使细胞膨胀,发生质壁分离,水渗入细胞壁和细胞质中,溶解液泡中的物质,使其穿过细胞壁,扩散到外部溶剂中。[/align][align=left]1 浸提时间对猴头菇多糖提取效果的影响[/align][align=left]猴头菇子实体粉碎成过20目筛,称取等量的子实体粉末(2.00克),按重量的20倍加入蒸馏水,分别于90℃水浴中浸提4 h、6 h、8 h,用3号玻璃坩埚过滤并洗涤残渣得清液,合并清液并定容至250mL,清液用超纯水再稀释10倍后,取1mL滤液测定多糖浓度,每个处理3个重复。[/align][align=left]2 浸提温度对猴头菇多糖提取效果的影响[/align][align=left]称取等量的子实体粉末(2.00克),按重量的20倍加入蒸馏水,分别于85℃、90℃、95℃水浴中提取4h,用3号玻璃坩埚过滤并洗涤残渣得清液,合并清液并定容至250mL,清液用超纯水再稀释10倍后,取1mL滤液测定多糖浓度,每个处理3个重复。[/align][align=left]3 料液比对猴头菇多糖提取效果的影响[/align][align=left]称取同等量的子实体粉末(2.00克),按重量的15倍、20倍、25倍加入蒸馏水,分别于90℃水浴中提取4h,用3号玻璃坩埚过滤并洗涤残渣得清液,合并清液并定容至250mL,清液用超纯水再稀释10倍后,取1mL滤液测定多糖浓度,每个处理3个重复。[/align][align=left]4 浸提次数对猴头菇多糖提取效果的影响[/align][align=left] 称取同等量的子实体粉末(2.00克)三份,按重量的20倍加入蒸馏水,分别于90℃水浴中提取1、2、3次,用3号玻璃坩埚过滤并洗涤残渣得清液,合并清液并定容至250mL,清液用超纯水再稀释10倍后,取1mL滤液测定多糖浓度,每个处理3个重复。[/align][align=left]5 正交试验[/align][align=left]为进一步探讨浸提参数中的时间、温度、料液比和浸提次数对子实体多糖的影响。在单因素试验和分析的基础上,进行综合4因素3水平的正交试验。[/align][align=left]结果与讨论[/align][align=left][/align][align=left]1、浸提时间对猴头菇子实体多糖的影响[/align][align=left][/align][align=left] 以过20目筛的猴头菇粉末(下面的试验相同)为实验材料,研究浸提时间对猴头菇多糖浸提效果的影响,在90℃分别浸提4h、6h、8h,实验结果如表2-2。由表2-2可知,猴头菇多糖浸提6h时,多糖浸出量较大;随着浸提时间的延长,多糖浸出量增大不显著,为了节约成本及提高效率,故选择6h作为水浴浸提的最佳条件。[/align][align=left] 表1 浸提时间对猴头菇粗多糖提取的影响[/align][align=left] Table 1 Effects of extracting time on polysaccharide yield[/align][align=left][/align] [table=492][tr][td=1,2,188] 项目[/td][td=3,1,304] 不同浸提时间的吸光值[/td][/tr][tr][td=1,1,100] 4h[/td][td=1,1,96] 6h[/td][td=1,1,108] 8h[/td][/tr][tr][td=1,1,188] OD[sub]490[/sub][/td][td=1,1,100] 0.963[/td][td=1,1,96] 1.245[/td][td=1,1,108] 1.316[/td][/tr][tr][td=1,1,188] [i]OD[/i][sub]490[/sub][/td][td=1,1,100] 0.884[/td][td=1,1,96] 1.233[/td][td=1,1,108] 1.210[/td][/tr][tr][td=1,1,188] [i]OD[/i][sub]490[/sub][/td][td=1,1,100] 0.902[/td][td=1,1,96] 1.239[/td][td=1,1,108] 1.289[/td][/tr][tr][td=1,1,188] 平均值[/td][td=1,1,100] 0.916[/td][td=1,1,96] 1.239[/td][td=1,1,108] 1.272[/td][/tr][tr][td=1,1,188] 多糖(以葡萄糖计)(ug.mL[sup]-1[/sup])[/td][td=1,1,100] 59.248[/td][td=1,1,96] 80.359[/td][td=1,1,108] 82.516[/td][/tr][tr][td=1,1,188] *差异性显著分析[/td][td=1,1,100] Aa[/td][td=1,1,96] Bb[/td][td=1,1,108] Bb[/td][/tr][/table][align=left][/align]备注:*:单因素重复性差异显著性结果,以95%为概率。[align=left][/align]2 、浸提温度对猴头菇子实体多糖的影响[align=left][/align][align=left]以猴头菇粉末为实验材料,研究浸提温度对猴头菇多糖浸提效果的影响,分别在85℃、90℃、95℃浸提6h,其多糖浸出量如表3所示。由表3可知,在90℃下产量最高,随着温度的升高,多糖浸出量反而减少,差异达到极显著,这可能是由于温度使多糖部分降解的原故。[/align][align=left] [/align]表2 浸提温度对猴头菇的多糖浸提的影响[align=left][/align]Table 2 Effectsof extracting temperature on polysaccharide yield[align=left][/align] [table=468][tr][td=1,2,188] 项目[/td][td=3,1,280] 不同浸提温度的吸光值[/td][/tr][tr][td=1,1,100] 85℃[/td][td=1,1,96] 90℃[/td][td=1,1,84] 95℃[/td][/tr][tr][td=1,1,188] [i]OD[/i][sub]490[/sub][/td][td=1,1,100] 0.574[/td][td=1,1,96] 0.963[/td][td=1,1,84] 0.414[/td][/tr][tr][td=1,1,188] [i]OD[/i][sub]490[/sub][/td][td=1,1,100] 0.562[/td][td=1,1,96] 0.889[/td][td=1,1,84] 0.453[/td][/tr][tr][td=1,1,188] [i]OD[/i][sub]490[/sub][/td][td=1,1,100] 0.581[/td][td=1,1,96] 0.945[/td][td=1,1,84] 0.462[/td][/tr][tr][td=1,1,188] 平均值[/td][td=1,1,100] 0.572[/td][td=1,1,96] 0.932[/td][td=1,1,84] 0.443[/td][/tr][tr][td=1,1,188] 多糖(以葡萄糖计)(ug.mL[sup]-1[/sup])[/td][td=1,1,100] 36.765[/td][td=1,1,96] 60.294[/td][td=1,1,84] 28.333[/td][/tr][tr][td=1,1,188] *差异性显著分析[/td][td=1,1,100] Aa[/td][td=1,1,96] Bb[/td][td=1,1,84] Bb[/td][/tr][/table][align=left][/align] 备注:*:单因素重复性差异显著性结果,以95%为概率。[align=left][/align]3 料液比对猴头菇子实体多糖的影响[align=left][/align]以猴头菇粉末为实验材料,研究料液比对猴头菇多糖浸提效果的影响,分别在90℃浸提6h,料液比为1:15、1:20、1:25,结果见表3,由表3可知,各处理间的差异性极显著。在料水为1:20时,多糖的得率最高。[align=left][/align] 表3 料液比对猴头菇的多糖浸提的影响[align=left][/align]Table3 Effectsof extracting feed-water ratio on polysaccharide yield[align=left][/align] [table=468][tr][td=1,2,188] [align=center]项目[/align] [/td][td=3,1,280] 各料液比的吸光值[/td][/tr][tr][td=1,1,100] 1 :15[/td][td=1,1,96] 1 :20[/td][td=1,1,84] 1 :25[/td][/tr][tr][td=1,1,188] [i]OD[/i][sub]490[/sub][/td][td=1,1,100] 0.829[/td][td=1,1,96] 0.884[/td][td=1,1,84] 0.441[/td][/tr][tr][td=1,1,188] [i]OD[/i][sub]490[/sub][/td][td=1,1,100] 0.687[/td][td=1,1,96] 0.856[/td][td=1,1,84] 0.563[/td][/tr][tr][td=1,1,188] [i]OD[/i][sub]490[/sub][/td][td=1,1,100] 0.734[/td][td=1,1,96] 0.810[/td][td=1,1,84] 0.478[/td][/tr][tr][td=1,1,188] 平均值[/td][td=1,1,100] 0.750[/td][td=1,1,96] 0.850[/td][td=1,1,84] 0.494[/td][/tr][tr][td=1,1,188] 多糖(以葡萄糖计)(ug.mL[sup]-1[/sup])[/td][td=1,1,100] 48.399[/td][td=1,1,96] 54.935[/td][td=1,1,84] 31.667[/td][/tr][tr][td=1,1,188] *差异性显著分析[/td][td=1,1,100] Aa[/td][td=1,1,96] Bb[/td][td=1,1,84] Bb[/td][/tr][/table][align=left][/align]备注:*:单因素重复性差异显著性结果,以95%为概率。[align=left][/align] 4 浸提次数对猴头菇子实体多糖的影响[align=left][/align][align=left]以猴头菇粉末为实验材料,研究浸提次数对猴头菇多糖浸提效果的影响,分别在90℃水浴锅中浸提1、2、3次,时间为6h,结果见表4。由表4知,在浸提2次下多糖得率最高。[/align][align=left][/align]表4 浸提次数对猴头菇的多糖浸提的影响[align=left][/align]Table 4 Effectsof extracting times on polysaccharide yield[align=left][/align] [table=468][tr][td=1,2,188] [align=center]项目[/align] [/td][td=3,1,280] 不同浸提次数的吸光值[/td][/tr][tr][td=1,1,100] 1次[/td][td=1,1,96] 2次[/td][td=1,1,84] 3次[/td][/tr][tr][td=1,1,188] [i]OD[/i][sub]490[/sub][/td][td=1,1,100] 0.566[/td][td=1,1,96] 1.215[/td][td=1,1,84] 1.220[/td][/tr][tr][td=1,1,188] [i]OD[/i][sub]490[/sub][/td][td=1,1,100] 0.576[/td][td=1,1,96] 1.220[/td][td=1,1,84] 1.242[/td][/tr][tr][td=1,1,188] [i]OD[/i][sub]490[/sub][/td][td=1,1,100] 0.581[/td][td=1,1,96] 1.209[/td][td=1,1,84] 1.119[/td][/tr][tr][td=1,1,188] 平均值[/td][td=1,1,100] 0.574[/td][td=1,1,96] 1.215[/td][td=1,1,84] 1.194[/td][/tr][tr][td=1,1,188] 多糖(以葡萄糖计)(ug.mL[sup]-1[/sup])[/td][td=1,1,100] 36.895[/td][td=1,1,96] 78.791[/td][td=1,1,84] 77.418[/td][/tr][tr][td=1,1,188] *差异性显著分析[/td][td=1,1,100] Aa[/td][td=1,1,96] Bb[/td][td=1,1,84] Bb[/td][/tr][/table][align=left][/align]备注:*:单因素重复性差异显著性结果,以95%为概率。[align=left][/align][align=left]5 单因素最佳条件下水浴提取法的多糖提取率[/align][align=left][/align][align=left]在单因素的最佳条件下:浸提时间:6h,浸提次数:2次,浸提温度:90℃下进行三次平行验证实验,试验结果(表5):平均粗多糖的含量为60.0 ug.mL[sup]-1[/sup],提取率为7.40%,RSD符合要求。[/align][align=left][/align]表5 水浴提取最优条件下多糖提取率[align=left][/align]Table5 Theextraction rate of polysaccharide under the optimum condition by water bath[align=left][/align] [table=568][tr][td=1,1,114] 实验次数[/td][td=1,1,114] 多糖含量(ug.mL[sup]-1[/sup])[/td][td=1,1,114] 多糖提取率(%)[/td][td=1,1,114] [align=center]平均提取率[/align] (%)[/td][td=1,1,114] RSD(%)[/td][/tr][tr][td=1,1,114] 1[/td][td=1,1,114] 58.48[/td][td=1,1,114] 7.31[/td][td=1,3,114] 7.40[/td][td=1,3,114] 1.0[/td][/tr][tr][td=1,1,114] 2[/td][td=1,1,114] 61.84[/td][td=1,1,114] 7.43[/td][/tr][tr][td=1,1,114] 3[/td][td=1,1,114] 59.76[/td][td=1,1,114] 7.47[/td][/tr][/table][align=left][/align][align=left]6 正交试验结果[/align][align=left][/align][align=left] 为进一步探讨工艺参数中的浸提次数(A)、料液比(B)、浸提时间(C)、浸提温度(D)对猴头菇多糖得率的影响。在单因素试验和分析的基础上,其浸提次数(A)、料液比(B)浸提时间(C)、浸提温度(D)4值作为试验水平,以猴头菇粗多糖提取率为评价指标,选用L9(3[sup]4[/sup])正交表安排试验。试验结果如表6所示。[/align][align=left] 表6 L9(3[sup]4[/sup])正交实验结果及其分析[/align][align=left][/align] Table6 Resultsand analysis of orthogonal experiment[align=left][/align][align=center] [table=555][tr][td=2,2,88] 实验号[/td][td=4,1,329] 因素[/td][td=1,1,138] 实验指标[/td][/tr][tr][td=1,1,78] A(次数)[/td][td=1,1,78] B(料液比)[/td][td=1,1,88] C(时间)[/td][td=1,1,84] D(温度)[/td][td=1,1,138] 提取率%[/td][/tr][tr][td=2,1,88] [align=center]1[/align] [/td][td=1,1,78] [align=center]1(1)[/align] [/td][td=1,1,78] [align=center]1(15)[/align] [/td][td=1,1,88] [align=center]1(4)[/align] [/td][td=1,1,84] [align=center]1(85)[/align] [/td][td=1,1,138] [align=center]51.8[/align] [/td][/tr][tr][td=2,1,88] [align=center]2[/align] [/td][td=1,1,78] [align=center]1(1)[/align] [/td][td=1,1,78] [align=center]2(20)[/align] [/td][td=1,1,88] [align=center]2(6)[/align] [/td][td=1,1,84] [align=center]2(90)[/align] [/td][td=1,1,138] [align=center]59.2[/align] [/td][/tr][tr][td=2,1,88] [align=center]3[/align] [/td][td=1,1,78] [align=center]1(1)[/align] [/td][td=1,1,78] [align=center]3(25)[/align] [/td][td=1,1,88] [align=center]3(8)[/align] [/td][td=1,1,84] [align=center]3(95)[/align] [/td][td=1,1,138] [align=center]76.5[/align] [/td][/tr][tr][td=2,1,88] [align=center]4[/align] [/td][td=1,1,78] [align=center]2(2)[/align] [/td][td=1,1,78] [align=center]1(15)[/align] [/td][td=1,1,88] [align=center]2(6)[/align] [/td][td=1,1,84] [align=center]3(95)[/align] [/td][td=1,1,138] [align=center]41.7[/align] [/td][/tr][tr][td=2,1,88] [align=center]5[/align] [/td][td=1,1,78] [align=center]2(2)[/align] [/td][td=1,1,78] [align=center]2(20)[/align] [/td][td=1,1,88] [align=center]3(8)[/align] [/td][td=1,1,84] [align=center]1(85)[/align] [/td][td=1,1,138] [align=center]74.3[/align] [/td][/tr][tr][td=2,1,88] [align=center]6[/align] [/td][td=1,1,78] [align=center]2(2)[/align] [/td][td=1,1,78] [align=center]3(25)[/align] [/td][td=1,1,88] [align=center]1(4)[/align] [/td][td=1,1,84] [align=center]2(90)[/align] [/td][td=1,1,138] [align=center]62.3[/align] [/td][/tr][tr][td=2,1,88] [align=center]7[/align] [/td][td=1,1,78] [align=center]3(3)[/align] [/td][td=1,1,78] [align=center]1(15)[/align] [/td][td=1,1,88] [align=center]3(8)[/align] [/td][td=1,1,84] [align=center]2(90)[/align] [/td][td=1,1,138] [align=center]67.5[/align] [/td][/tr][tr][td=2,1,88] [align=center]8[/align] [/td][td=1,1,78] [align=center]3(3)[/align] [/td][td=1,1,78] [align=center]2(20)[/align] [/td][td=1,1,88] [align=center]1(4)[/align] [/td][td=1,1,84] [align=center]3(95)[/align] [/td][td=1,1,138] [align=center]83.0[/align] [/td][/tr][tr][td=2,1,88] [align=center]9[/align] [/td][td=1,1,78] [align=center]3(3)[/align] [/td][td=1,1,78] [align=center]3(25)[/align] [/td][td=1,1,88] [align=center]2(6)[/align] [/td][td=1,1,84] [align=center]1(85)[/align] [/td][td=1,1,138] [align=center]74.7[/align] [/td][/tr][tr][td=1,12,36] 总 糖[/td][td=1,1,51] K[sub]11[/sub][/td][td=1,1,78] [align=center]200.8[/align] [/td][td=1,1,78] [align=center]161[/align] [/td][td=1,1,88] [align=center]197.1[/align] [/td][td=1,1,84] 2.008[/td][td=1,12,138] [/td][/tr][tr][td=1,1,51] K[sub]12[/sub][/td][td=1,1,78] [align=center]189.0[/align] [/td][td=1,1,78] [align=center]216.5[/align] [/td][td=1,1,88] [align=center]175.6[/align] [/td][td=1,1,84] 1.890[/td][/tr][tr][td=1,1,51] K[sub]13[/sub][/td][td=1,1,78] [align=center]201.2[/align] [/td][td=1,1,78] [align=center]213.5[/align] [/td][td=1,1,88] [align=center]218.3[/align] [/td][td=1,1,84] 2.012[/td][/tr][tr][td=1,1,51] [align=center]k1[/align] [/td][td=1,1,78] [align=center]66.9[/align] [/td][td=1,1,78] [align=center]53.7[/align] [/td][td=1,1,88] [align=center]65.7[/align] [/td][td=1,1,84] [align=center]66.9[/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,51] [align=center]k2[/align] [/td][td=1,1,78] [align=center]63.0[/align] [/td][td=1,1,78] [align=center]72.2[/align] [/td][td=1,1,88] [align=center]58.5[/align] [/td][td=1,1,84] [align=center]63.0[/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,51] [align=center]k3[/align] [/td][td=1,1,78] [align=center]67.1[/align] [/td][td=1,1,78] [align=center]71.2[/align] [/td][td=1,1,88] [align=center]72.8[/align] [/td][td=1,1,84] [align=center]67.1[/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,51] R[/td][td=1,1,78] [align=center]4.07[/align] [/td][td=1,1,78] [align=center]18.50[/align] [/td][td=1,1,88] [align=center]14.23[/align] [/td][td=1,1,84] [align=center]0.0407[/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,51] K[sub]21[/sub][sup]2[/sup][/td][td=1,1,78] [align=right]40320.6 [/align] [/td][td=1,1,78] [align=right]25921.0 [/align] [/td][td=1,1,88] [align=right]38848.4 [/align] [/td][td=1,1,84] 4.032[/td][/tr][tr][td=1,1,51] K[sub]22[/sub][sup]2[/sup][/td][td=1,1,78] [align=right]35721.0 [/align] [/td][td=1,1,78] [align=right]46872.3 [/align] [/td][td=1,1,88] [align=right]30835.4 [/align] [/td][td=1,1,84] 3.572[/td][/tr][tr][td=1,1,51] K[sub]23[/sub][sup]2[/sup][/td][td=1,1,78] [align=right]40481.4 [/align] [/td][td=1,1,78] [align=right]45582.3 [/align] [/td][td=1,1,88] [align=right]47654.9 [/align] [/td][td=1,1,84] 4.048[/td][/tr][tr][td=1,1,51] [align=center]Q[/align] [/td][td=1,1,78] [align=right]38841.0[/align] [/td][td=1,1,78] [align=right]39458.5[/align] [/td][td=1,1,88] [align=right]39112.9[/align] [/td][td=1,1,84] [align=center]38841.0[/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,51] [align=center]S[/align] [/td][td=1,1,78] [align=center]32.03[/align] [/td][td=1,1,78] [align=center]649.5[/align] [/td][td=1,1,88] [align=center]303.9[/align] [/td][td=1,1,84] [align=center]32.03[/align] [/td][/tr][/table][/align][align=left][/align] 表7 正交试验方差分析表[align=left][/align] Table7 Theanalysis of variance table for orthogonal experiment[align=left][/align][align=center] [table=651][tr][td=1,1,133] 变异来源[/td][td=1,1,74] [align=center]平方和[/align] [/td][td=1,1,88] [align=center]自由度[/align] [/td][td=1,1,97] [align=center]均方[/align] [/td][td=1,1,88] [align=center]F值[/align] [/td][td=1,1,172] [align=center]显著水平[/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,133] [align=center]次数A[/align] [/td][td=1,1,74] [align=center]411.7[/align] [/td][td=1,1,88] [align=center]2[/align] [/td][td=1,1,97] [align=center]205.9[/align] [/td][td=1,1,88] [align=center]32.4251[/align] [/td][td=1,5,172] [align=center] [/align] [align=center]F[sub]0.05[/sub](3,2)=19.164[/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,133] [align=center]液料比B[/align] [/td][td=1,1,74] [align=center]32.03[/align] [/td][td=1,1,88] [align=center]2[/align] [/td][td=1,1,97] [align=center]16.0[/align] [/td][td=1,1,88] [align=center]2.5222[/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,133] [align=center]时间C[/align] [/td][td=1,1,74] [align=center]649.5[/align] [/td][td=1,1,88] [align=center]2[/align] [/td][td=1,1,97] [align=center]324.8[/align] [/td][td=1,1,88] [align=center]51.1507[/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,133] [align=center]温度D[/align] [/td][td=1,1,74] [align=center]303.9[/align] [/td][td=1,1,88] [align=center]2[/align] [/td][td=1,1,97] [align=center]151.9[/align] [/td][td=1,1,88] [align=center]23.9323[/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,133] [align=center]误差[/align] [/td][td=1,1,74] [align=center]19.05[/align] [/td][td=1,1,88] [align=center]3[/align] [/td][td=1,1,97] [align=center]6.3[/align] [/td][td=1,1,88] [align=center] [/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,133] [align=center]总和[/align] [/td][td=1,1,74] [align=center]1416.19[/align] [/td][td=1,1,88] [align=center]11[/align] [/td][td=1,1,97] [align=center] [/align] [/td][td=1,1,88] [align=center] [/align] [/td][td=1,1,172] [/td][/tr][/table][/align][align=left][/align][align=left]从本试验的极差分析可知,对猴头菇多糖提取量的影响大小依次为浸提时间、浸提次数及浸提温度,料液比几乎不起影响。由方差分析表可知,相对来说A因素、C因素和D因素为重要因素, B因素为次要因素。从表2-7中可看出对猴头菇子实体总糖热水浸提的最佳工艺条件为:A[sub]3[/sub]B[sub]2[/sub]C[sub]3[/sub]D[sub]3[/sub]。通过验证实验,三次平行实验得到多糖的提取量为67.2ug.mL[sup]-1[/sup],平均多糖提取率为8.40%。未低于实际的多糖提取量7.40%,因此,正交实验法的最佳提取条件为:即在次数为3次,料液比为20:1,浸提时间为8h,浸提温度为95℃。[/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align]
魔芋粉这一类原料比较容易遇水结块凝固的,做微生物检测中前处理要怎么做稀释,10倍稀释的话完全吸不上来,现在正准备跳过10倍稀释直接做100倍稀释,不知道这样的做法行不行。