巨魔芋是我们常吃的魔芋的近亲。但惊人的是:它有比一层楼还高的叶子、一人多高的花序。它开花时散发浓烈尸臭,因此被又称作“尸花”。北京植物园的巨魔芋开花,在国内尚属首次。此外,照顾过巨魔芋私生活的自然控编辑还有许多料要爆……
[b] 水浴浸提猴头菇粗多糖的研究[/b][align=left] 目前多糖的传统提取方法有水提醇沉、酸液/碱液提取、酶解法等。近年来,微波、超声波,膜处理和CO超临界萃取等方法作为辅助提取或精制,也取得了较好的提取效果。考虑到多糖是一种极性大分子化合物,溶于水而不溶于有机溶剂,本研究采用了不易导致多糖降解的水浴浸提法,并在此基础上辅以微波和超声波两种方式复合提取,不仅操作简便,缩短提取时间,并能有效提高多糖得率。[/align][align=left]水浴浸提法[/align][align=left] 一般植物性多糖的提取多采用热水浸提法,其原理是借助于热力作用使细胞膨胀,发生质壁分离,水渗入细胞壁和细胞质中,溶解液泡中的物质,使其穿过细胞壁,扩散到外部溶剂中。[/align][align=left]1 浸提时间对猴头菇多糖提取效果的影响[/align][align=left]猴头菇子实体粉碎成过20目筛,称取等量的子实体粉末(2.00克),按重量的20倍加入蒸馏水,分别于90℃水浴中浸提4 h、6 h、8 h,用3号玻璃坩埚过滤并洗涤残渣得清液,合并清液并定容至250mL,清液用超纯水再稀释10倍后,取1mL滤液测定多糖浓度,每个处理3个重复。[/align][align=left]2 浸提温度对猴头菇多糖提取效果的影响[/align][align=left]称取等量的子实体粉末(2.00克),按重量的20倍加入蒸馏水,分别于85℃、90℃、95℃水浴中提取4h,用3号玻璃坩埚过滤并洗涤残渣得清液,合并清液并定容至250mL,清液用超纯水再稀释10倍后,取1mL滤液测定多糖浓度,每个处理3个重复。[/align][align=left]3 料液比对猴头菇多糖提取效果的影响[/align][align=left]称取同等量的子实体粉末(2.00克),按重量的15倍、20倍、25倍加入蒸馏水,分别于90℃水浴中提取4h,用3号玻璃坩埚过滤并洗涤残渣得清液,合并清液并定容至250mL,清液用超纯水再稀释10倍后,取1mL滤液测定多糖浓度,每个处理3个重复。[/align][align=left]4 浸提次数对猴头菇多糖提取效果的影响[/align][align=left] 称取同等量的子实体粉末(2.00克)三份,按重量的20倍加入蒸馏水,分别于90℃水浴中提取1、2、3次,用3号玻璃坩埚过滤并洗涤残渣得清液,合并清液并定容至250mL,清液用超纯水再稀释10倍后,取1mL滤液测定多糖浓度,每个处理3个重复。[/align][align=left]5 正交试验[/align][align=left]为进一步探讨浸提参数中的时间、温度、料液比和浸提次数对子实体多糖的影响。在单因素试验和分析的基础上,进行综合4因素3水平的正交试验。[/align][align=left]结果与讨论[/align][align=left][/align][align=left]1、浸提时间对猴头菇子实体多糖的影响[/align][align=left][/align][align=left] 以过20目筛的猴头菇粉末(下面的试验相同)为实验材料,研究浸提时间对猴头菇多糖浸提效果的影响,在90℃分别浸提4h、6h、8h,实验结果如表2-2。由表2-2可知,猴头菇多糖浸提6h时,多糖浸出量较大;随着浸提时间的延长,多糖浸出量增大不显著,为了节约成本及提高效率,故选择6h作为水浴浸提的最佳条件。[/align][align=left] 表1 浸提时间对猴头菇粗多糖提取的影响[/align][align=left] Table 1 Effects of extracting time on polysaccharide yield[/align][align=left][/align] [table=492][tr][td=1,2,188] 项目[/td][td=3,1,304] 不同浸提时间的吸光值[/td][/tr][tr][td=1,1,100] 4h[/td][td=1,1,96] 6h[/td][td=1,1,108] 8h[/td][/tr][tr][td=1,1,188] OD[sub]490[/sub][/td][td=1,1,100] 0.963[/td][td=1,1,96] 1.245[/td][td=1,1,108] 1.316[/td][/tr][tr][td=1,1,188] [i]OD[/i][sub]490[/sub][/td][td=1,1,100] 0.884[/td][td=1,1,96] 1.233[/td][td=1,1,108] 1.210[/td][/tr][tr][td=1,1,188] [i]OD[/i][sub]490[/sub][/td][td=1,1,100] 0.902[/td][td=1,1,96] 1.239[/td][td=1,1,108] 1.289[/td][/tr][tr][td=1,1,188] 平均值[/td][td=1,1,100] 0.916[/td][td=1,1,96] 1.239[/td][td=1,1,108] 1.272[/td][/tr][tr][td=1,1,188] 多糖(以葡萄糖计)(ug.mL[sup]-1[/sup])[/td][td=1,1,100] 59.248[/td][td=1,1,96] 80.359[/td][td=1,1,108] 82.516[/td][/tr][tr][td=1,1,188] *差异性显著分析[/td][td=1,1,100] Aa[/td][td=1,1,96] Bb[/td][td=1,1,108] Bb[/td][/tr][/table][align=left][/align]备注:*:单因素重复性差异显著性结果,以95%为概率。[align=left][/align]2 、浸提温度对猴头菇子实体多糖的影响[align=left][/align][align=left]以猴头菇粉末为实验材料,研究浸提温度对猴头菇多糖浸提效果的影响,分别在85℃、90℃、95℃浸提6h,其多糖浸出量如表3所示。由表3可知,在90℃下产量最高,随着温度的升高,多糖浸出量反而减少,差异达到极显著,这可能是由于温度使多糖部分降解的原故。[/align][align=left] [/align]表2 浸提温度对猴头菇的多糖浸提的影响[align=left][/align]Table 2 Effectsof extracting temperature on polysaccharide yield[align=left][/align] [table=468][tr][td=1,2,188] 项目[/td][td=3,1,280] 不同浸提温度的吸光值[/td][/tr][tr][td=1,1,100] 85℃[/td][td=1,1,96] 90℃[/td][td=1,1,84] 95℃[/td][/tr][tr][td=1,1,188] [i]OD[/i][sub]490[/sub][/td][td=1,1,100] 0.574[/td][td=1,1,96] 0.963[/td][td=1,1,84] 0.414[/td][/tr][tr][td=1,1,188] [i]OD[/i][sub]490[/sub][/td][td=1,1,100] 0.562[/td][td=1,1,96] 0.889[/td][td=1,1,84] 0.453[/td][/tr][tr][td=1,1,188] [i]OD[/i][sub]490[/sub][/td][td=1,1,100] 0.581[/td][td=1,1,96] 0.945[/td][td=1,1,84] 0.462[/td][/tr][tr][td=1,1,188] 平均值[/td][td=1,1,100] 0.572[/td][td=1,1,96] 0.932[/td][td=1,1,84] 0.443[/td][/tr][tr][td=1,1,188] 多糖(以葡萄糖计)(ug.mL[sup]-1[/sup])[/td][td=1,1,100] 36.765[/td][td=1,1,96] 60.294[/td][td=1,1,84] 28.333[/td][/tr][tr][td=1,1,188] *差异性显著分析[/td][td=1,1,100] Aa[/td][td=1,1,96] Bb[/td][td=1,1,84] Bb[/td][/tr][/table][align=left][/align] 备注:*:单因素重复性差异显著性结果,以95%为概率。[align=left][/align]3 料液比对猴头菇子实体多糖的影响[align=left][/align]以猴头菇粉末为实验材料,研究料液比对猴头菇多糖浸提效果的影响,分别在90℃浸提6h,料液比为1:15、1:20、1:25,结果见表3,由表3可知,各处理间的差异性极显著。在料水为1:20时,多糖的得率最高。[align=left][/align] 表3 料液比对猴头菇的多糖浸提的影响[align=left][/align]Table3 Effectsof extracting feed-water ratio on polysaccharide yield[align=left][/align] [table=468][tr][td=1,2,188] [align=center]项目[/align] [/td][td=3,1,280] 各料液比的吸光值[/td][/tr][tr][td=1,1,100] 1 :15[/td][td=1,1,96] 1 :20[/td][td=1,1,84] 1 :25[/td][/tr][tr][td=1,1,188] [i]OD[/i][sub]490[/sub][/td][td=1,1,100] 0.829[/td][td=1,1,96] 0.884[/td][td=1,1,84] 0.441[/td][/tr][tr][td=1,1,188] [i]OD[/i][sub]490[/sub][/td][td=1,1,100] 0.687[/td][td=1,1,96] 0.856[/td][td=1,1,84] 0.563[/td][/tr][tr][td=1,1,188] [i]OD[/i][sub]490[/sub][/td][td=1,1,100] 0.734[/td][td=1,1,96] 0.810[/td][td=1,1,84] 0.478[/td][/tr][tr][td=1,1,188] 平均值[/td][td=1,1,100] 0.750[/td][td=1,1,96] 0.850[/td][td=1,1,84] 0.494[/td][/tr][tr][td=1,1,188] 多糖(以葡萄糖计)(ug.mL[sup]-1[/sup])[/td][td=1,1,100] 48.399[/td][td=1,1,96] 54.935[/td][td=1,1,84] 31.667[/td][/tr][tr][td=1,1,188] *差异性显著分析[/td][td=1,1,100] Aa[/td][td=1,1,96] Bb[/td][td=1,1,84] Bb[/td][/tr][/table][align=left][/align]备注:*:单因素重复性差异显著性结果,以95%为概率。[align=left][/align] 4 浸提次数对猴头菇子实体多糖的影响[align=left][/align][align=left]以猴头菇粉末为实验材料,研究浸提次数对猴头菇多糖浸提效果的影响,分别在90℃水浴锅中浸提1、2、3次,时间为6h,结果见表4。由表4知,在浸提2次下多糖得率最高。[/align][align=left][/align]表4 浸提次数对猴头菇的多糖浸提的影响[align=left][/align]Table 4 Effectsof extracting times on polysaccharide yield[align=left][/align] [table=468][tr][td=1,2,188] [align=center]项目[/align] [/td][td=3,1,280] 不同浸提次数的吸光值[/td][/tr][tr][td=1,1,100] 1次[/td][td=1,1,96] 2次[/td][td=1,1,84] 3次[/td][/tr][tr][td=1,1,188] [i]OD[/i][sub]490[/sub][/td][td=1,1,100] 0.566[/td][td=1,1,96] 1.215[/td][td=1,1,84] 1.220[/td][/tr][tr][td=1,1,188] [i]OD[/i][sub]490[/sub][/td][td=1,1,100] 0.576[/td][td=1,1,96] 1.220[/td][td=1,1,84] 1.242[/td][/tr][tr][td=1,1,188] [i]OD[/i][sub]490[/sub][/td][td=1,1,100] 0.581[/td][td=1,1,96] 1.209[/td][td=1,1,84] 1.119[/td][/tr][tr][td=1,1,188] 平均值[/td][td=1,1,100] 0.574[/td][td=1,1,96] 1.215[/td][td=1,1,84] 1.194[/td][/tr][tr][td=1,1,188] 多糖(以葡萄糖计)(ug.mL[sup]-1[/sup])[/td][td=1,1,100] 36.895[/td][td=1,1,96] 78.791[/td][td=1,1,84] 77.418[/td][/tr][tr][td=1,1,188] *差异性显著分析[/td][td=1,1,100] Aa[/td][td=1,1,96] Bb[/td][td=1,1,84] Bb[/td][/tr][/table][align=left][/align]备注:*:单因素重复性差异显著性结果,以95%为概率。[align=left][/align][align=left]5 单因素最佳条件下水浴提取法的多糖提取率[/align][align=left][/align][align=left]在单因素的最佳条件下:浸提时间:6h,浸提次数:2次,浸提温度:90℃下进行三次平行验证实验,试验结果(表5):平均粗多糖的含量为60.0 ug.mL[sup]-1[/sup],提取率为7.40%,RSD符合要求。[/align][align=left][/align]表5 水浴提取最优条件下多糖提取率[align=left][/align]Table5 Theextraction rate of polysaccharide under the optimum condition by water bath[align=left][/align] [table=568][tr][td=1,1,114] 实验次数[/td][td=1,1,114] 多糖含量(ug.mL[sup]-1[/sup])[/td][td=1,1,114] 多糖提取率(%)[/td][td=1,1,114] [align=center]平均提取率[/align] (%)[/td][td=1,1,114] RSD(%)[/td][/tr][tr][td=1,1,114] 1[/td][td=1,1,114] 58.48[/td][td=1,1,114] 7.31[/td][td=1,3,114] 7.40[/td][td=1,3,114] 1.0[/td][/tr][tr][td=1,1,114] 2[/td][td=1,1,114] 61.84[/td][td=1,1,114] 7.43[/td][/tr][tr][td=1,1,114] 3[/td][td=1,1,114] 59.76[/td][td=1,1,114] 7.47[/td][/tr][/table][align=left][/align][align=left]6 正交试验结果[/align][align=left][/align][align=left] 为进一步探讨工艺参数中的浸提次数(A)、料液比(B)、浸提时间(C)、浸提温度(D)对猴头菇多糖得率的影响。在单因素试验和分析的基础上,其浸提次数(A)、料液比(B)浸提时间(C)、浸提温度(D)4值作为试验水平,以猴头菇粗多糖提取率为评价指标,选用L9(3[sup]4[/sup])正交表安排试验。试验结果如表6所示。[/align][align=left] 表6 L9(3[sup]4[/sup])正交实验结果及其分析[/align][align=left][/align] Table6 Resultsand analysis of orthogonal experiment[align=left][/align][align=center] [table=555][tr][td=2,2,88] 实验号[/td][td=4,1,329] 因素[/td][td=1,1,138] 实验指标[/td][/tr][tr][td=1,1,78] A(次数)[/td][td=1,1,78] B(料液比)[/td][td=1,1,88] C(时间)[/td][td=1,1,84] D(温度)[/td][td=1,1,138] 提取率%[/td][/tr][tr][td=2,1,88] [align=center]1[/align] [/td][td=1,1,78] [align=center]1(1)[/align] [/td][td=1,1,78] [align=center]1(15)[/align] [/td][td=1,1,88] [align=center]1(4)[/align] [/td][td=1,1,84] [align=center]1(85)[/align] [/td][td=1,1,138] [align=center]51.8[/align] [/td][/tr][tr][td=2,1,88] [align=center]2[/align] [/td][td=1,1,78] [align=center]1(1)[/align] [/td][td=1,1,78] [align=center]2(20)[/align] [/td][td=1,1,88] [align=center]2(6)[/align] [/td][td=1,1,84] [align=center]2(90)[/align] [/td][td=1,1,138] [align=center]59.2[/align] [/td][/tr][tr][td=2,1,88] [align=center]3[/align] [/td][td=1,1,78] [align=center]1(1)[/align] [/td][td=1,1,78] [align=center]3(25)[/align] [/td][td=1,1,88] [align=center]3(8)[/align] [/td][td=1,1,84] [align=center]3(95)[/align] [/td][td=1,1,138] [align=center]76.5[/align] [/td][/tr][tr][td=2,1,88] [align=center]4[/align] [/td][td=1,1,78] [align=center]2(2)[/align] [/td][td=1,1,78] [align=center]1(15)[/align] [/td][td=1,1,88] [align=center]2(6)[/align] [/td][td=1,1,84] [align=center]3(95)[/align] [/td][td=1,1,138] [align=center]41.7[/align] [/td][/tr][tr][td=2,1,88] [align=center]5[/align] [/td][td=1,1,78] [align=center]2(2)[/align] [/td][td=1,1,78] [align=center]2(20)[/align] [/td][td=1,1,88] [align=center]3(8)[/align] [/td][td=1,1,84] [align=center]1(85)[/align] [/td][td=1,1,138] [align=center]74.3[/align] [/td][/tr][tr][td=2,1,88] [align=center]6[/align] [/td][td=1,1,78] [align=center]2(2)[/align] [/td][td=1,1,78] [align=center]3(25)[/align] [/td][td=1,1,88] [align=center]1(4)[/align] [/td][td=1,1,84] [align=center]2(90)[/align] [/td][td=1,1,138] [align=center]62.3[/align] [/td][/tr][tr][td=2,1,88] [align=center]7[/align] [/td][td=1,1,78] [align=center]3(3)[/align] [/td][td=1,1,78] [align=center]1(15)[/align] [/td][td=1,1,88] [align=center]3(8)[/align] [/td][td=1,1,84] [align=center]2(90)[/align] [/td][td=1,1,138] [align=center]67.5[/align] [/td][/tr][tr][td=2,1,88] [align=center]8[/align] [/td][td=1,1,78] [align=center]3(3)[/align] [/td][td=1,1,78] [align=center]2(20)[/align] [/td][td=1,1,88] [align=center]1(4)[/align] [/td][td=1,1,84] [align=center]3(95)[/align] [/td][td=1,1,138] [align=center]83.0[/align] [/td][/tr][tr][td=2,1,88] [align=center]9[/align] [/td][td=1,1,78] [align=center]3(3)[/align] [/td][td=1,1,78] [align=center]3(25)[/align] [/td][td=1,1,88] [align=center]2(6)[/align] [/td][td=1,1,84] [align=center]1(85)[/align] [/td][td=1,1,138] [align=center]74.7[/align] [/td][/tr][tr][td=1,12,36] 总 糖[/td][td=1,1,51] K[sub]11[/sub][/td][td=1,1,78] [align=center]200.8[/align] [/td][td=1,1,78] [align=center]161[/align] [/td][td=1,1,88] [align=center]197.1[/align] [/td][td=1,1,84] 2.008[/td][td=1,12,138] [/td][/tr][tr][td=1,1,51] K[sub]12[/sub][/td][td=1,1,78] [align=center]189.0[/align] [/td][td=1,1,78] [align=center]216.5[/align] [/td][td=1,1,88] [align=center]175.6[/align] [/td][td=1,1,84] 1.890[/td][/tr][tr][td=1,1,51] K[sub]13[/sub][/td][td=1,1,78] [align=center]201.2[/align] [/td][td=1,1,78] [align=center]213.5[/align] [/td][td=1,1,88] [align=center]218.3[/align] [/td][td=1,1,84] 2.012[/td][/tr][tr][td=1,1,51] [align=center]k1[/align] [/td][td=1,1,78] [align=center]66.9[/align] [/td][td=1,1,78] [align=center]53.7[/align] [/td][td=1,1,88] [align=center]65.7[/align] [/td][td=1,1,84] [align=center]66.9[/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,51] [align=center]k2[/align] [/td][td=1,1,78] [align=center]63.0[/align] [/td][td=1,1,78] [align=center]72.2[/align] [/td][td=1,1,88] [align=center]58.5[/align] [/td][td=1,1,84] [align=center]63.0[/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,51] [align=center]k3[/align] [/td][td=1,1,78] [align=center]67.1[/align] [/td][td=1,1,78] [align=center]71.2[/align] [/td][td=1,1,88] [align=center]72.8[/align] [/td][td=1,1,84] [align=center]67.1[/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,51] R[/td][td=1,1,78] [align=center]4.07[/align] [/td][td=1,1,78] [align=center]18.50[/align] [/td][td=1,1,88] [align=center]14.23[/align] [/td][td=1,1,84] [align=center]0.0407[/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,51] K[sub]21[/sub][sup]2[/sup][/td][td=1,1,78] [align=right]40320.6 [/align] [/td][td=1,1,78] [align=right]25921.0 [/align] [/td][td=1,1,88] [align=right]38848.4 [/align] [/td][td=1,1,84] 4.032[/td][/tr][tr][td=1,1,51] K[sub]22[/sub][sup]2[/sup][/td][td=1,1,78] [align=right]35721.0 [/align] [/td][td=1,1,78] [align=right]46872.3 [/align] [/td][td=1,1,88] [align=right]30835.4 [/align] [/td][td=1,1,84] 3.572[/td][/tr][tr][td=1,1,51] K[sub]23[/sub][sup]2[/sup][/td][td=1,1,78] [align=right]40481.4 [/align] [/td][td=1,1,78] [align=right]45582.3 [/align] [/td][td=1,1,88] [align=right]47654.9 [/align] [/td][td=1,1,84] 4.048[/td][/tr][tr][td=1,1,51] [align=center]Q[/align] [/td][td=1,1,78] [align=right]38841.0[/align] [/td][td=1,1,78] [align=right]39458.5[/align] [/td][td=1,1,88] [align=right]39112.9[/align] [/td][td=1,1,84] [align=center]38841.0[/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,51] [align=center]S[/align] [/td][td=1,1,78] [align=center]32.03[/align] [/td][td=1,1,78] [align=center]649.5[/align] [/td][td=1,1,88] [align=center]303.9[/align] [/td][td=1,1,84] [align=center]32.03[/align] [/td][/tr][/table][/align][align=left][/align] 表7 正交试验方差分析表[align=left][/align] Table7 Theanalysis of variance table for orthogonal experiment[align=left][/align][align=center] [table=651][tr][td=1,1,133] 变异来源[/td][td=1,1,74] [align=center]平方和[/align] [/td][td=1,1,88] [align=center]自由度[/align] [/td][td=1,1,97] [align=center]均方[/align] [/td][td=1,1,88] [align=center]F值[/align] [/td][td=1,1,172] [align=center]显著水平[/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,133] [align=center]次数A[/align] [/td][td=1,1,74] [align=center]411.7[/align] [/td][td=1,1,88] [align=center]2[/align] [/td][td=1,1,97] [align=center]205.9[/align] [/td][td=1,1,88] [align=center]32.4251[/align] [/td][td=1,5,172] [align=center] [/align] [align=center]F[sub]0.05[/sub](3,2)=19.164[/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,133] [align=center]液料比B[/align] [/td][td=1,1,74] [align=center]32.03[/align] [/td][td=1,1,88] [align=center]2[/align] [/td][td=1,1,97] [align=center]16.0[/align] [/td][td=1,1,88] [align=center]2.5222[/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,133] [align=center]时间C[/align] [/td][td=1,1,74] [align=center]649.5[/align] [/td][td=1,1,88] [align=center]2[/align] [/td][td=1,1,97] [align=center]324.8[/align] [/td][td=1,1,88] [align=center]51.1507[/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,133] [align=center]温度D[/align] [/td][td=1,1,74] [align=center]303.9[/align] [/td][td=1,1,88] [align=center]2[/align] [/td][td=1,1,97] [align=center]151.9[/align] [/td][td=1,1,88] [align=center]23.9323[/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,133] [align=center]误差[/align] [/td][td=1,1,74] [align=center]19.05[/align] [/td][td=1,1,88] [align=center]3[/align] [/td][td=1,1,97] [align=center]6.3[/align] [/td][td=1,1,88] [align=center] [/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,133] [align=center]总和[/align] [/td][td=1,1,74] [align=center]1416.19[/align] [/td][td=1,1,88] [align=center]11[/align] [/td][td=1,1,97] [align=center] [/align] [/td][td=1,1,88] [align=center] [/align] [/td][td=1,1,172] [/td][/tr][/table][/align][align=left][/align][align=left]从本试验的极差分析可知,对猴头菇多糖提取量的影响大小依次为浸提时间、浸提次数及浸提温度,料液比几乎不起影响。由方差分析表可知,相对来说A因素、C因素和D因素为重要因素, B因素为次要因素。从表2-7中可看出对猴头菇子实体总糖热水浸提的最佳工艺条件为:A[sub]3[/sub]B[sub]2[/sub]C[sub]3[/sub]D[sub]3[/sub]。通过验证实验,三次平行实验得到多糖的提取量为67.2ug.mL[sup]-1[/sup],平均多糖提取率为8.40%。未低于实际的多糖提取量7.40%,因此,正交实验法的最佳提取条件为:即在次数为3次,料液比为20:1,浸提时间为8h,浸提温度为95℃。[/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align]
魔芋粉这一类原料比较容易遇水结块凝固的,做微生物检测中前处理要怎么做稀释,10倍稀释的话完全吸不上来,现在正准备跳过10倍稀释直接做100倍稀释,不知道这样的做法行不行。
问个乳品外的问题,魔芋粉的透光率如何检测,有相关检测标准吗?检测过程有哪些注意事项?
罗望子多糖胶的理化性质,应用和标准陈炳坤[align=center][/align][align=center][font='黑体'][size=20px]罗望子多糖胶的理化性质,应用和标准[/size][/font][/align][align=left][font='times new roman'][size=18px]一、引言[/size][/font][/align][align=left][font='times new roman']罗望子(Tamarindus indica L.)又称酸角、酸豆、罗晃子、酸梅(海南)、“木罕”(傣语),为苏木科(Caesalpiniaceae)酸角属(Tamarindus)的一种高大的常绿乔木植物。罗望子原产于热带非洲,经苏丹引入印度后开始繁衍种植,现广泛分布于除南、北极洲外的其他各大洲。主要分布在我国广西、广东、福建、四川等省区的南部以及海南、台湾等海拔低于 1400m 旱坡、荒地和干热河谷地区,而我国罗望子资源最丰富的地区是云南省的南部、西南部和西部地区。此外在老挝、印度、孟加拉、缅甸、斯里兰卡、马来西亚、泰国等国也有分布。[/font][/align][align=left][font='times new roman']罗望子胶又称为罗望子多糖(Tamarind[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']Seed[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']Polysaccharide,简称TSP)。它是从豆科罗望子属植物罗望子(又称酸角)的种子胚乳中提取分离出来的一种中性多糖,易分散于冷水中,加热则形成粘稠状液体。罗望子胶有良好的耐热、耐盐、耐酸、耐冷冻和解冻性,具有稳定、乳化、增稠、凝结、保水、成膜的作用,其水溶液的粘稠性较强,黏度不受酸类和盐类等的影响,是一种用途广泛的食用胶。[/font][/align][align=left][font='times new roman'][size=18px]二、[/size][/font][font='times new roman'][size=18px]罗望子多糖胶的理化性质[/size][/font][/align][align=left][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/07/202107161936326977_6875_1608728_3.png[/img][font='calibri']罗望子胶的分子主要由[/font][font='calibri']D-[/font][font='calibri']半乳糖、[/font][font='calibri']D-[/font][font='calibri']木糖、[/font][font='calibri']D-[/font][font='calibri']葡萄糖三种单糖构成,三种单糖以[/font][font='calibri']1:2:3[/font][font='calibri']的比例组成了罗望子胶的中性聚多糖。也有研究结果表示,他们三种单糖的比例是[/font][font='calibri']1:2.25:2.8[/font][font='calibri'],其分子结构图如图[/font][font='calibri']1[/font][font='calibri']所示。除中性聚多糖存在外,也有少量的[/font][font='calibri']L-[/font][font='calibri']阿拉伯糖是以游离的形式存在于罗望子胶分子内。据报道,用不同的方法测定罗望子胶的分子量,其结果差异也有所不同。据报道,用黏度法、渗透法、铜值法和3,5-二硝基水杨酸还原法测定的结果分别是523500、546000、556000和115000。[/font][/align][align=center][font='times new roman'][color=#000000]图1[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000].[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]罗望子多糖胶的分子结构[/color][/font][/align][align=left][font='calibri']罗望子胶为自由流动、无臭无味、乳白色或淡米黄色的粉末,随着胶的纯度降低,制品的颜色逐渐加深,有油脂气味和手感,易结块,不溶于冷水,但是能在冷水中分散,能在热水中溶解,不溶于大多数有机溶剂和硫酸铵、硫酸钠等盐溶液。它本身不带电荷,属于中性植物性胶。但是当罗望子胶用金属氢氧化物或碱式盐溶液处理后,得到相应的金属络合物,能变成阴离子或阳离子衍生物。[/font][/align][align=left][font='calibri']望子胶是一种亲水性较强的植物胶。当罗望子胶在冷水中分散后被加热到85°C以上就会溶解,形成均匀的胶体溶液。胶液的黏度与质量浓度有关,当罗望子胶溶液的质量浓度小于158g/L左右时,溶液表现出牛顿流体性质 但当质量浓度大于158g/L左右时,罗望子胶溶液显示出非牛顿型流体的流变特性,即溶液具有剪切变稀的触变性或假塑性。加热煮沸对罗望子胶溶液的黏度影响相当大,罗望子胶溶液在煮沸20~30min时黏度首先达到最大值,然后下降,但热稳定性较高,在煮沸约5h以后其黏度只下降至最大值的一半。在97°C加热1h后的黏度残存率是瓜尔豆胶的2.5倍。而在-20°C下冷冻1h后测试,它的黏度影响很小。因此罗望子胶具有冷冻融化稳定性。罗望子胶在pH7.0~7.5时比较稳定,超过这个范围其黏度则会降低,在无机酸介质中黏度降低得特别显著,但在使用有机酸时,在pH2.0~7.0范围内溶液黏度受pH值的影响很小,黏度下降的原因是由于其高聚物的解聚引起的 而pH在7.0~7.5时黏度达到最高是由于其分子伸展的缘故。罗望子胶浆料的黏度随温度的降低而增加,但罗望子胶浆料遇冷不胶凝或变稠,且容易进行再分散,甚至贮藏几天之后也是如此。提纯的罗望子胶其溶液的黏度更高,以致很难制备质量浓度大于20g/L的流动性溶胶,其黏度也不受pH及钠盐、钙盐或铁盐的影响,反而随着盐溶液浓度的增高,其黏度有所增加。如添加蔗糖、D-葡萄糖、淀粉糖浆和其他低聚糖都可使其黏度增加,而添加过氧化氢会使其黏度大大降低。罗望子胶水溶液的稠性强,一般不溶于醇、醛、酸等有机溶剂,能与甘油、蔗糖、山梨醇及其他亲水性胶互溶,但遇乙醇会产生凝胶,与四硼酸钠溶液混合则形成半固态,而加热会变成稀凝胶。[/font][/align][align=left][font='calibri']凝胶是由微量的多糖类等物质与水作用并使之变硬的状态,也称果冻,从分子水平看,由于多糖类高分子链间的相互作用,形成立体的网状结构,他们之间的微小空间中的水处于被包围状态,在水溶液中,当高分子之间的相互作用力与高分子、水分子之间的相互作用力达到平衡时,就形成凝胶。多糖类的这种性质称为胶凝性[7]。罗望子胶溶液干燥后能形成有较高强度、较好透明度及弹性的凝胶。罗望子胶凝胶与果胶凝胶形成的模式相同,属于必须有糖存在下才能形成凝胶的氢键结合法,不同的是相同浓度的罗望子胶与果胶相比,凝胶强度要高得多。罗望子胶凝胶形成时,凝胶强度随煮沸时间的延长而极大地提高,当煮沸时间分别为5、7、10min时,凝胶强度分别为420、540、650N/cm[/font][font='calibri'][size=13px]2[/size][/font][font='calibri']。此外,罗望子胶能在很宽的pH范围内与糖形成凝胶,在中性溶液中煮沸长达2h而凝胶强度几乎不受影响,而在热的酸或碱性介质中,罗望子胶也会像果胶一样迅速降解,碱的降解作用与酸相比不太明显。[/font][/align][align=left][font='times new roman'][size=18px]二、[/size][/font][font='times new roman'][size=18px]罗望子多糖胶在食品工业中的应用[/size][/font][/align][align=left][font='calibri']罗望子多糖胶是一种多功能的食品添加剂,与其他动植物胶相比,罗望子多糖胶具有优良的化学性质和热稳定性。[/font][/align][align=left][font='times new roman'][size=18px]1. 在冰淇淋中的应用[/size][/font][/align][align=left][font='calibri']罗望子多糖胶作为稳定剂,分散于冰淇淋料液中,逐渐与水结合,使大量水分子与氢键相连,在结构上形成三维网状结构,控制了残余水相的流动性,使料液具有一定的粘稠度,这种性能有利于冰淇淋在凝冻时有效充入的空气,并且其无韧性的粘性使冰淇淋入口后融化性好,从而使冰淇淋组织细腻、致密、柔软,并使之有良好的保形性、抗融性和抗热震荡能力。此外,还能使冰淇淋形成纹理细小的冰晶。[/font][/align][align=left][font='calibri']罗望子多糖胶与其它稳定剂的兼容性好,表现在与卡拉胶、黄原胶、魔芋胶、刺槐豆胶、CMC 等胶体复配使用具有较好的效果,可弥补其它胶体冰晶粗大的缺陷。不会掩盖或吸附冰淇淋中的风味物质,有利于香味的充分释放,风味释放性明显优于其他胶体。一般情况下,罗望子多糖胶与其它胶体并用的协同增效作用不明显,但是每一种胶各自的优点不会互相抵消。[/font][/align][align=left][font='times new roman'][size=18px]2. 罗望子多糖胶在水冰中的应用[/size][/font][/align][align=left][font='calibri']在水冰类产品中,添加罗望子多糖胶对改善产品的组织结构非常明显,能够有效抑制冰晶的增长,得到组织非常细腻、表面光滑的产品。在此类产品中,罗望子多糖胶的粘结力强但不粘口,成型性好,耐酸、耐盐、抗融性好,既爽口又能增加产品的实物感。罗望子多糖胶的存在还可以使切片产品切面光滑,口感细腻润滑。[/font][/align][align=left][font='times new roman'][size=18px]3. 罗望子多糖胶在饮料中的应用[/size][/font][/align][align=left][font='calibri']罗望子多糖胶能在低浓度(0.05%~1.5%)下形成溶胶,粘度受酸度影响不大,在 pH 值3.2~10.5 的范围内,其粘度和色泽基本上没有变化。用作果汁饮料的增稠剂,可以增加饮用时爽滑、厚实、细腻的口感。同时,罗望子多糖胶的悬浮性还可防止果汁因长期放置而导致的小颗粒沉淀,使细小的果肉颗粒均匀地悬浮于果汁中,大大降低下沉速度。[/font][/align][align=left][font='times new roman'][size=18px]4[/size][/font][font='times new roman'][size=18px]. 用作果冻和糕点的胶凝剂[/size][/font][/align][align=left][font='calibri']罗望子多糖胶具有强保水作用,可有效地阻止温度降低时果冻和弹性糕点中的水分冷凝析出,从而形成细腻的冰晶。与其它种子胶相比,罗望子多糖胶具有优良的化学和热稳定性,使其在制作过程中加热、冷却时保持较稳定的性质。有关人员经过实验表明,制作马蹄糕时,分层现象是由于调粉浆时,有部分马蹄淀粉颗粒和其他淀粉颗粒没有充分溶胀。蒸煮过程中,未充分溶胀的淀粉颗粒因密度差而沉降使蒸出的糕体分层。当加人罗望子多糖胶后,因其对马蹄粉的增粘作用使得粉浆混合体系的粘度大大提高。因此,那些未充分溶胀的淀粉颗粒不发生沉降,形成很好的悬浮液体系,使得蒸出的糕体均匀无分层现象。制出不起丝,无黏性,耐酸性好,保形性优良,有咬劲、有弹性、润滑爽口的马蹄糕。[/font][/align][align=left][font='times new roman'][size=18px]5[/size][/font][font='times new roman'][size=18px]. 用作淀粉品质改良剂[/size][/font][/align][align=left][font='calibri']淀粉是广泛用于加工食品方面的材料,具有粘性,还可以形成食品的骨架,但是淀粉在加工各种食品的过程中,存在着许多缺点,最主要的就是已经糊化(α化)的淀粉在放置的过程中会老化(β化),致使粘度上升,甚至形成凝胶,透明的食品变成半透明或不透明,析水并生成不溶化的淀粉粒甚至沉淀等,所有这些现象都将导致食品的口感和风味受损、稳定性下降、品质变差,而加入罗望子多糖胶作为淀粉的品质改良剂能抑制淀粉老化。[/font][/align][align=left][font='calibri']罗望子多糖胶是相对分子质量 50 万以上、侧链极多的高分子多糖,添加到淀粉中时,侧链上的-OH 通过氢键与淀粉相互作用,形成一种更巨大的高分子体,这种高分子体很难定向,能够稳定地存在。另一方面,在加工过程中淀粉粒容易破裂受损,罗望子多糖胶与淀粉并用,就可以将淀粉包裹起来,防止破裂,起到保护淀粉的作用,使加工的产品在放置过程中不会出现淀粉粒的聚集和老化。此外,罗望子多糖胶还有优良的保水性,可防止析水。[/font][/align][align=left][font='calibri']罗望子多糖胶与乳化剂同时存在,抑制淀粉老化的效果比单独使用罗望子多糖胶或乳化剂大大提高。因此,罗望子多糖胶用作淀粉的品质改良剂,能稳定食品品质,改善质地和结构,提高口感和风味。[/font][/align][align=left][font='times new roman'][size=18px]6[/size][/font][font='times new roman'][size=18px]. 用于牛奶中[/size][/font][/align][align=left][font='calibri']在牛奶中添加 0.5%左右的罗望子多糖胶可增强制品的稠厚感和甜味,同时不会有黏口的感觉,用于低脂牛奶或脱脂牛奶,口感就像全脂牛奶一样;用于咖啡牛奶或果汁牛奶,可以同时增强浓厚感和甜味。[/font][/align][align=left][font='times new roman'][size=18px]7[/size][/font][font='times new roman'][size=18px]. 用于调味汁中 [/size][/font][/align][align=left][font='calibri']一些西餐用调味汁因为加入食醋使 pH 降低,这些调味汁要求有较高的粘度,若添加少量的罗望子多糖胶,由于其耐酸并有一定的增稠作用,所以可以改善调味汁的口感和稳定性。同时,罗望子多糖胶的黏附性能良好,对于烧肉、烧鸡以及蔬菜等的调味汁要求黏附在制品表面不脱落,单独使用罗望子多糖胶或将罗望子多糖胶与其它胶体并用,都能取得显著的效果。[/font][/align][align=left][font='times new roman'][size=18px]8[/size][/font][font='times new roman'][size=18px]. 用于保健食品[/size][/font][/align][align=left][font='calibri']罗望子多糖胶中的多糖是葡聚木糖,它是一种理想的膳食纤维来源。可起到防治高血症的作用,另外尚可增加小肠非扰动层的厚度,减弱糖类物质的吸收,防治糖尿病的发生发展。[/font][/align][align=left][font='calibri']总之,罗望子多糖胶在食品中的作用可以归结为以下几个方面:冰晶稳定作用,增稠稳定作用,保水作用,乳化稳定作用,悬浮稳定作用,品质改良作用,胶凝作用,保健作用。[/font][/align][align=left][font='times new roman'][size=18px]三[/size][/font][font='times new roman'][size=18px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=18px]罗望子多糖胶在其他领域的应用[/size][/font][/align][align=left][font='times new roman'][size=18px]1.[/size][/font][font='times new roman'][size=18px] [/size][/font][font='times new roman'][size=18px]罗望子多糖胶在牙膏中的应用[/size][/font][/align][align=left][font='calibri']罗望子多糖胶可以作为牙膏中的粘结剂和增稠剂,其用量为0.5%~1.2%。使用罗望子多糖胶的牙膏具有较好的稳定性,牙膏在﹣2℃的低温和55℃的高温下贮存24,其膏体的硬度和挤出性均无明显改变。特别是在加酶牙膏中,其稳定性更为突出。当采用羧甲基纤维素钠(CMC)时,牙膏膏体硬度在贮存2个月后即会降低到原值的1/6,而采用罗望子多糖胶贮存4个月后,膏体的硬度基本不变。[/font][/align][align=left][font='times new roman'][size=18px]2. 罗望子多糖胶在洗涤剂中的应用[/size][/font][/align][align=left][font='calibri']罗望子多糖胶在液体洗涤剂中作为增稠剂和稳定剂使用时,能够确保液体洗涤剂在贮存期内粘度基本不变。从而保证液体洗涤剂在垂直的硬表面上有较好的滞留性,能够充分发挥洗涤剂的清洗效果。同时,罗望子多糖胶还有一定的乳化能力和抗再沉积能力,因为罗望子多糖胶具有耐盐、耐热、耐酸性的增稠稳定作用,其粘度不受酸类和盐类等的影响。因此,它是液体洗涤剂中良好的增稠稳定剂.[/font][/align][align=left][font='times new roman'][size=18px]3. 罗望子多糖胶在烟草工业中的应用[/size][/font][/align][align=left][font='calibri']罗望子多糖胶是良好的天然粘合剂。在烟草工业中,查正根等研究发现罗望子多糖胶是生产再生烟丝(重组烟丝、膨胀烟丝)良好的粘合剂;在医药工业中,罗望子多糖胶既是药片良好的粘合剂,又是膏霜类药物的增稠剂和稳定剂。[/font][/align][align=left][font='times new roman'][size=18px]4. 罗望子多糖胶在医药行业的应用[/size][/font][/align][align=left][font='calibri']罗望子多糖胶应用于医药行业它可控制药物的释放、并具有高药物容量和高的热稳定性。例如高义霞等以罗望子多糖制备的纳米硒,可能具有硒和罗望子多糖的双重生物学功效,将在癌症的化学预防和治疗方面有光明的前景,同时可能在动物生产中将有广阔的应用前景。[/font][/align][align=left][font='times new roman'][size=18px]四[/size][/font][font='times new roman'][size=18px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=18px]罗望子多糖胶的国家标准[/size][/font][/align][align=left][font='calibri']根据国家标准G[/font][font='calibri']B [/font][font='calibri']2760-2014的规定,罗望子多糖胶的使用标准如表1所示[/font][/align][align=center][font='times new roman'][color=#000000]表1[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000].[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]罗望子多糖胶的使用标准[/color][/font][/align][table][tr][td][align=center][font='times new roman'][color=#000000]食品名称[/color][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][color=#000000]最大使用量([/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]g/kg)[/color][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][color=#000000]备注[/color][/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='times new roman'][color=#000000]冷冻饮品(食用冰除外)[/color][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][color=#000000]2[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000].0[/color][/font][/align][/td][td] [/td][/tr][tr][td][align=center][font='times new roman'][color=#000000]可可制品、巧克力和巧克力制品(包括代可可脂巧克力及制品)以及糖果[/color][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][color=#000000]2[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000].0[/color][/font][/align][/td][td] [/td][/tr][tr][td][align=center][font='times new roman'][color=#000000]果冻[/color][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][color=#000000]2[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000].0[/color][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][color=#000000]如用于果冻粉,按冲调倍数增加使用量[/color][/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='times new roman'][color=#000000]半固体复合调味料[/color][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][color=#000000]7[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000].0[/color][/font][/align][/td][td] [/td][/tr][tr][td][align=center][font='times new roman'][color=#000000]液体复合调味料[/color][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][color=#000000]3[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000].0[/color][/font][/align][/td][td] [/td][/tr][tr][td][align=center][font='times new roman'][color=#000000]果酱[/color][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][color=#000000]5[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000].0[/color][/font][/align][/td][td] [/td][/tr][tr][td][align=center][font='times new roman'][color=#000000]果糕类[/color][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][color=#000000]2[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]0.0[/color][/font][/align][/td][td] [/td][/tr][tr][td][align=center][font='times new roman'][color=#000000]果蔬汁(浆)类饮料[/color][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][color=#000000]3[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000].0[/color][/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman'][color=#000000]以即饮状态计,相应的固体饮料按照稀释倍数增加使用量[/color][/font][/align][/td][/tr][/table][align=left][/align][align=left][font='times new roman'][color=#000000]罗望子多糖胶没有国家检测标准,这是因为罗望子多糖胶是一种中性多糖,在检测时无法分辨罗望子多糖胶与其他多糖,因此没有专门的国家检测标准。[/color][/font][/align][align=left][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]参考文献:[/color][/size][/font][/align]
请问植物多糖~就是纤维素多糖是酸性还是碱性?
[font=SimSun, STSong, &]比如花魔芋精粉遇到碳酸钠会变成浅蓝色[/font][font=SimSun, STSong, &]黄魔芋精粉遇到碳酸钠会变为浅红色[/font][font=SimSun, STSong, &]各位有知道这些变色机理的吗?[/font]
大家好 我现在用药典方法 提取多糖 测黄精中多糖含量 即取60度干燥恒重的生黄精粉末0.25g,精密称定,置圆底烧瓶中,加80%乙醇150ml回流提取1h,趁热滤过,残渣用80%乙醇洗涤3次,每次10ml,将残渣及滤纸置烧瓶中,加水150ml,加热回流1h,趁热滤过,残渣及烧瓶用水洗涤4次,每次10ml,合并滤液与洗液,放冷,转移至250ml容量瓶中,加水至刻度,摇匀 精密吸取1ml至10ml具塞干燥试管中,加水至2ml,摇匀,在冰水浴中缓慢滴加0.2%蒽酮-硫酸溶液,至刻度,混匀,放冷后至水浴用保温10min,取出,立即置冰水浴中冷却10min,取出,以相应试剂为空白,照紫外可见分光光度计在582nm波长处测定吸光度。 我分别按上述方法提了6次样品,测得多糖含量 68% 左右。 实在搞不懂到底哪里出了问题,使测出的多糖含量这么高。。。 在做含量测定时,分别吸取1ml多糖液、1ml水和8ml0.2%蒽酮硫酸溶液时 都是用吸量管吸取的 这样重复性比较好 但是就是含量出奇的高 求高人指点 是我哪个地方需要注意下么?
我现在正在做植物中多糖的提取、分离和纯化,在测定多糖分子量时,若没有除蛋白会不会影响结果?还有多糖要多纯才能进行测定分子量呢?谢谢
本人最近测定枸杞多糖含量时,所用测定方法均为2005年版药典枸杞项下,结果出现如下问题:测定枸杞提取物(注:厂家未提供提取方法)枸杞多糖含量时,直接称样水溶解然后测定,结果所测提取物含量高达95%;按药典方法进行前处理,测出值也高达70%;而厂家提供的是50%。另外,我们公司有一种产品,45度白酒,其中添加了葛根黄酮提取物和这种枸杞提取物,结果所测枸杞多糖含量也与理论添加量有很大差别。请问:像我这种情况,在测定枸杞多糖时,需要像药典中那样前处理吗?有哪些更好的方法?多糖测定时葛根黄酮会不会影响?测定提取物和测定白酒中多糖含量时方法是否可以一致?不行的话又分别该怎样测定? 恳请问各位专家朋友指点迷津!谢谢![/color][/color][/color]
各位: 有做过微生物多糖提取的朋友吗?请问微生物多糖是怎么提取的。小弟急着要了解哈,谢谢!
苯酚-硫酸法是一种常用的检测粗多糖含量的方法,其原理是苯酚-硫酸试剂可与游离的寡糖、多糖中的己糖、糖醛酸起显色反应,在480-490 nm处有最大吸收值,吸收值与糖含量呈线性关系。此法是先用标准品多糖制作标准曲线后,再通过多糖的显色反应测定吸光度,然后根据其在曲线上的位置推算出多糖的浓度从而推算其含量。此法操作简单、快速、灵敏、重复性好,对每种多糖仅需制作一条标准曲线[1]。目前大家研究较多的、生物活性较高的一些真菌多糖,如香菇多糖、灵芝多糖、姬松茸多糖、猴头菇多糖、灰树花多糖等[2],在结构上大多是以β-(1→3)、β-(1→4)或β-(1→6)糖苷键连接的葡聚糖,另外,分子量也一般分布在十几万到几十万之间。因此,由北京卫生防疫站建立,经中国预防科学院营养与食品卫生研究所验证的《粗多糖含量的测定方法》中建议使用50万分子量的葡聚糖作为标准品[3]。为行业内粗多糖含量的测定统一了标准,使各企业之间多糖类产品更具有可比性。燕麦β-葡聚糖是一种β-(1→3)-(1→4)键接的线性葡聚糖,在结构、粘度等其他物理性质上与常见的植物和真菌多糖很相似,适合作为植物、真菌来源多糖含量测定的标准品。但由于多糖纯化困难,市面上不少葡聚糖纯度较低,不适合作为标准品。下面,我们来比较两种不同纯度的燕麦β-葡聚糖产品作为多糖标准品的区别。1 材料与方法1.1 实验材料高纯度燕麦β-葡聚糖PS-Con-Ⅰ由武汉百特纯大分子科技有限公司提供,纯度大于97%(其中,另外3%主要是结合水),低纯度燕麦β-葡聚糖由某食品研究所提供,纯度约50%,苯酚、浓硫酸均为化学纯。1.2 实验方法样品溶解:高纯度燕麦β-葡聚糖经70℃水浴,15min后完全溶解。低纯度燕麦β-葡聚糖70℃水浴,30min后仍有不溶物,升高溶解温度至90℃后继续溶解30min,仍有少量不溶物,过滤。溶液配制:配制0.1mg/ml葡聚糖标准溶液,50mg/ml苯酚溶液备用。标准曲线的制作:精密吸取葡聚糖标准液0.10,0.40, 0.80,1.20,1.60,2.00ml(分别相当于葡聚糖0.01,0.04,0.08,0.12,0.16,0.20mg),补充水至2.0mL,加入苯酚溶液1.0ml,混匀,再加入浓硫酸5ml,混匀,沸水浴2分钟,混匀,冷却后用分光光度计在485nm波长处以试剂空白溶液为参比,测定吸光度值(A),以A为横坐标,葡聚糖含量C为纵坐标绘制标准曲线。2 结果与分析2.1 样品溶解高纯度燕麦β-葡聚糖溶解速度较快,溶液澄清透明,说明此产品溶解性良好。低纯度燕麦β-葡聚糖难以溶解,且溶解1h后仍有不溶物存在,说明此产品溶解性差,杂质较多。 2.2 标准曲线下表为两种标准品分别配制不同葡聚糖浓度(含量)反应后得到的吸光值:葡聚糖含量(mg)0.010.040.080.120.162.00高纯度标样吸光值0.0530.0800.2000.2620.3530.450低纯度标样吸光值0.0010.0550.1130.1730.2400.320通过数据处理,得到标准曲线如下:高纯度燕麦β-葡聚糖 C=0.4657A-0.0068 (R=0.9955)低纯度燕麦β-葡聚糖 C=0.609A+0.0101(R=0.9985)比较这两个标准曲线发现,当待测样品吸光值一定,使用低纯度葡聚糖作为标准品得到的标准曲线计算葡聚糖含量值时,明显高于高纯度标准品。究其原因,低纯度葡聚糖所含杂质较多,在作为标准品时,部分杂质不能溶解,却计入了标准品葡聚糖总量,因此,使得结果偏高。另外,即使溶解的物质中,也有可能存在部分不能参加反应的蛋白等杂质,同样会造成结果偏高。由以上数据和分析可以得出,测定粗多糖含量不能使用低纯度葡聚糖作为标准品,应尽量选用高纯度葡聚糖标准品,按照国家建议方法和行业标准进行检测,这样才能保证各企业多糖系列产品在含量和纯度上的可比性,有利于规范企业行为和保健品市场。参考文献[1] 胡居吾,范青生,肖小年. 粗多糖测定方法的研究. 江西食品工业. 2005, 1[2] 李明元. 真菌粗多糖测定方法的研究. 食品研究与开发. 2007, 5[3] 粗多糖的测定方法. 北京卫生防疫站建立,经中国预防科学院营养与食品卫生研究所验证. 食品伙伴网[em0805]
亚甲基蓝比色法测定海参不同组织酸性黏多糖含量http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTotal-HYKX201103014.htm不知道有没有版友做过海参中的多糖呀?看到这样一篇文章不知道有没有版友手里有呀?是否能分享一下如果有做过的版友也可以分享一下你的经验,谢谢!!
黄芪多糖提取用水提,还是醇提出膏率跟纯度哪个好一点
苯酚-硫酸法是一种常用的检测粗多糖含量的方法,其原理是苯酚-硫酸试剂可与游离的寡糖、多糖中的己糖、糖醛酸起显色反应,在480-490 nm处有最大吸收值,吸收值与糖含量呈线性关系。此法是先用标准品多糖制作标准曲线后,再通过多糖的显色反应测定吸光度,然后根据其在曲线上的位置推算出多糖的浓度从而推算其含量。此法操作简单、快速、灵敏、重复性好,对每种多糖仅需制作一条标准曲线[1]。目前大家研究较多的、生物活性较高的一些真菌多糖,如香菇多糖、灵芝多糖、姬松茸多糖、猴头菇多糖、灰树花多糖等[2],在结构上大多是以β-(1→3)、β-(1→4)或β-(1→6)糖苷键连接的葡聚糖,另外,分子量也一般分布在十几万到几十万之间。因此,由北京卫生防疫站建立,经中国预防科学院营养与食品卫生研究所验证的《粗多糖含量的测定方法》中建议使用50万分子量的葡聚糖作为标准品[3]。为行业内粗多糖含量的测定统一了标准,使各企业之间多糖类产品更具有可比性。燕麦β-葡聚糖是一种β-(1→3)-(1→4)键接的线性葡聚糖,在结构、粘度等其他物理性质上与常见的植物和真菌多糖很相似,适合作为植物、真菌来源多糖含量测定的标准品。但由于多糖纯化困难,市面上不少葡聚糖纯度较低,不适合作为标准品。下面,我们来比较两种不同纯度的燕麦β-葡聚糖产品作为多糖标准品的区别。1 材料与方法1.1 实验材料高纯度燕麦β-葡聚糖PS-Con-Ⅰ由武汉百特纯大分子科技有限公司提供,纯度大于97%(其中,另外3%主要是结合水),低纯度燕麦β-葡聚糖由某食品研究所提供,纯度约50%,苯酚、浓硫酸均为化学纯。1.2 实验方法样品溶解:高纯度燕麦β-葡聚糖经70℃水浴,15min后完全溶解。低纯度燕麦β-葡聚糖70℃水浴,30min后仍有不溶物,升高溶解温度至90℃后继续溶解30min,仍有少量不溶物,过滤。溶液配制:配制0.1mg/ml葡聚糖标准溶液,50mg/ml苯酚溶液备用。标准曲线的制作:精密吸取葡聚糖标准液0.10,0.40, 0.80,1.20,1.60,2.00ml(分别相当于葡聚糖0.01,0.04,0.08,0.12,0.16,0.20mg),补充水至2.0mL,加入苯酚溶液1.0ml,混匀,再加入浓硫酸5ml,混匀,沸水浴2分钟,混匀,冷却后用分光光度计在485nm波长处以试剂空白溶液为参比,测定吸光度值(A),以A为横坐标,葡聚糖含量C为纵坐标绘制标准曲线。2 结果与分析2.1 样品溶解高纯度燕麦β-葡聚糖溶解速度较快,溶液澄清透明,说明此产品溶解性良好。低纯度燕麦β-葡聚糖难以溶解,且溶解1h后仍有不溶物存在,说明此产品溶解性差,杂质较多。 2.2 标准曲线下表为两种标准品分别配制不同葡聚糖浓度(含量)反应后得到的吸光值:葡聚糖含量(mg)0.010.040.080.120.162.00高纯度标样吸光值0.0530.0800.2000.2620.3530.450低纯度标样吸光值0.0010.0550.1130.1730.2400.320通过数据处理,得到标准曲线如下:高纯度燕麦β-葡聚糖 C=0.4657A-0.0068 (R=0.9955)低纯度燕麦β-葡聚糖 C=0.609A+0.0101(R=0.9985)比较这两个标准曲线发现,当待测样品吸光值一定,使用低纯度葡聚糖作为标准品得到的标准曲线计算葡聚糖含量值时,明显高于高纯度标准品。究其原因,低纯度葡聚糖所含杂质较多,在作为标准品时,部分杂质不能溶解,却计入了标准品葡聚糖总量,因此,使得结果偏高。另外,即使溶解的物质中,也有可能存在部分不能参加反应的蛋白等杂质,同样会造成结果偏高。由以上数据和分析可以得出,测定粗多糖含量不能使用低纯度葡聚糖作为标准品,应尽量选用高纯度葡聚糖标准品,按照国家建议方法和行业标准进行检测,这样才能保证各企业多糖系列产品在含量和纯度上的可比性,有利于规范企业行为和保健品市场。参考文献[1] 胡居吾,范青生,肖小年. 粗多糖测定方法的研究. 江西食品工业. 2005, 1[2] 李明元. 真菌粗多糖测定方法的研究. 食品研究与开发. 2007, 5[3] 粗多糖的测定方法. 北京卫生防疫站建立,经中国预防科学院营养与食品卫生研究所验证. 食品伙伴网
[b]摘要:目的:[/b][color=#000000]探索提取温度、液固比和提取时间对泽泻多糖产率的影响,得到提取泽泻[/color][color=#000000]多糖最优工艺条件。[/color][b]方法:[/b][color=#000000]用均匀设计实验优化泽泻[/color][color=#000000]多糖的提取工艺,用苯酚硫酸法测出每次实验所得多糖的纯度,再求得每次实验纯多糖的得率,然后应用回归分析的方法分析实验得出的数据,以纯多糖的得率为指标,对提取温度、液固比、提取次数和提取时间3个因素进行分析,得出最佳工艺条件,并进行验证。[/color][b]结果:[/b][color=#000000]实验得出茵陈多糖的最佳提取条件是:提取温度100℃、提取时间135 min、提取液固比40:1。[/color][b]结论:[/b][color=#000000]验证实[/color][color=#000000]验平均得率为8.83%,预测值是8.28%,二者很接近,说明我们得到的最佳工艺条件是可靠的。[/color]1前言[color=#000000]泽泻为泽泻科植物泽泻[i]Alsima orientalis(sam.)Juzep.[/i]的干燥块茎,分布在中国、韩国和日本等国。性味甘、淡、寒,归肾、膀胱经[sup][/sup]。作为常用中药,是六味地黄丸、龙胆泻肝丸、五苓散等临床常用重要方剂的主要组成[sup][/sup]。具有利水渗湿,泄热,化浊降脂等功效,用于治疗小便不利,水肿胀满,泄泻尿少,痰饮眩晕,热淋涩痛,高脂血症等症[sup][/sup]。1.1泽泻的化学成分泽泻中的三萜类化合物主要有:泽泻醇A、泽泻醇A-24-乙酸酯、泽泻醇B-23-乙酸酯、表泽泻醇A、11-去氧泽泻醇A、泽泻醇C、泽泻醇C-23-乙酸酯、16,23-氧化泽泻醇E、泽泻醇F、阿里泽泻醇A和阿里泽泻醇B等原萜烷型四环三萜[sup][/sup]。从生物途径归纳,三萜类都是由 23- 泽泻醇 B 衍生而来[sup][/sup]。中药泽泻中获得的倍半萜类化合物多数为愈创木烷型。现分离到的倍半萜化合物主要有:泽泻醇,环氧泽泻烯,Orientalol A,B,C,Sulfooriental A,B,C,D[sup][/sup]。Yamaguchi等首次从泽泻鲜品中分离出一个贝壳杉烷型四环二萜类化合物,并最终确定了绝对构型为(-)-16R-ent-kauranre-2,12-doine[sup][/sup]。彭国平等从泽泻中分离出两个新的贝壳杉烷型四环二萜类化合物:泽泻二萜醇(Oriediterpenol)及泽泻二萜醇苷 (Oriediter-penoside)[sup] [/sup]。泽泻除了萜类成分外,此外,泽泻还含挥发油、多糖、蒽醌、磷脂、蛋白质及淀粉等成分[sup][/sup]。如胡萝卜素-6-硬酸脂、β-谷甾醇、三十烷、正二十烷、卫矛醇、挥发油(内含糖醛)、少量生物碱、天门冬素、脂肪酸、树脂、植物凝集素、大黄素、酸性多糖,胆碱,以及大量淀粉、蛋白质、氨基酸和钾、钙、镁等金属元素[sup][/sup]。1.2 泽泻的药理作用现代研究表明,泽泻有明显的利尿,抑制肾结石形成,降血压,降血脂及抗动脉粥样硬化,抗脂肪肝,抗肾炎活性和调节免疫等作用[sup][/sup]。1.3立题依据多糖具有多种生物活性, 具有提高免疫, 降血糖,抗肿瘤, 抗病毒等功能, 被认为是构成生命的四大基本物质之一。由于其独特功能和较低的毒性, 多糖类化合物在抗衰老、 抗病毒和肿瘤治疗、 糖尿病治疗等方面有良好的应用前景。另外,多糖可以改善食品的食用品质、加工特性和外观特性, 可用于抑制脂质氧化, 稳定酸性饮料, 也可作为乳化剂等, 在食品中的用途十分广泛[sup][/sup]。目前已发现的天然多糖有几百种,其中植物多糖对肿瘤治疗及调节机体免疫力效果显著,同时还有治疗肝炎、抗衰老等药理作用,且毒副作用很小[sup][/sup]。由于泽泻的药理作用显著,而关于泽泻多糖研究的文献很少,因此对于泽泻多糖的研究也具有很大的意义。开发泽泻多糖产品,首先需要把多糖从泽泻中提取出来。笔者决定对泽泻多糖的提取工艺进行研究,对其提取条件进行优化,从而为泽泻多糖的深入开发利用提供实验依据。本课题我们就重点探讨泽泻多糖的最佳提取条件,通过对泽泻多糖提取过程中影响泽泻多糖产率、纯度的因素进行单因素实验,然后进行均匀设计实验,用线性回归的分析方法分析实验得出的数据,寻找泽泻多糖的最优化工艺条件。1.4提取方法的确定提取植物多糖的方法有多种,一般是采用水提醇沉法,采用水提醇沉法提取,可防止引起糖苷键的断裂[sup][/sup]。李小凤等[sup][/sup]通过单纯的水提醇沉法对泽泻多糖进行了提取和含量测定。此外,很多研究对多糖的水提醇沉工艺做了优化,如朱秀灵等[sup][/sup]采用超声波辅助提取银杏叶多糖;缪建等[sup][/sup]采用酶法结合水提醇沉法提取银杏叶多糖;金汝城等[sup][/sup]采用均匀设计优化超声波法提取黄芪多糖。由于实验设备有限,本实验采用水提醇沉法对泽泻多糖进行提取。[/color][color=#000000]2 实验材料2.1实验仪器FA2104N型电子分析天平(上海民桥精密科学仪器有限公司)HH-1数显恒温水浴锅(金坛市晶玻实验仪器厂)80-2离心机(上海荣泰生化工程有限公司)RE-52A旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)GZX-9070电热恒温鼓风干燥箱(上海博讯实业有限公司医疗设备厂)DZF-6050真空干燥箱(巩义市予华仪器责任有限责任公司)SHD-Ⅲ型循环水式多用真空泵(保定市新区阳光科教仪器厂)BCD-223MT冰箱(河南新飞电器有限公司)722可见分光光度计(上海菁华科技仪器有限公司)24目,100目标准筛(浙江上虞市华丰五金仪器有限公司)2.2实验材料和试剂泽泻(河北省安国药材市场)无水乙醇(分析纯,天津市美琳工贸有限公司)蒸馏水(实验室自制)葡萄糖(分析纯,天津市科密欧化学试剂有限公司)苯酚(分析纯,天津市福晨化学试剂厂)浓硫酸(分析纯,北京化工厂)[/color][color=#000000]3实验方法3.1泽泻粗多糖的提取流程将预备好的泽泻放入70℃真空烘箱中干燥2h,粉碎取过24目筛,不可过100目筛的粉末,装在密封袋中置于干燥器中备用。泽泻多糖提取的实验流程如下:精密称定已制备的泽泻粉末5.000g于500mL圆底烧瓶中,加入规定液固比的蒸馏水,用恒温水浴锅T℃水浴加热不同时间,先用脱脂棉过滤得粗滤液,然后用布氏漏斗抽滤粗滤液,通过旋蒸仪旋转蒸发将所得滤液浓缩至约10mL,加95%乙醇30mL,置具塞锥形瓶中,冰箱4℃放置约18h,然后用10mL试管离心(3000rpm,10min),弃去上清液,得沉淀,于50℃、0.099MPa真空干燥箱中放置3.5h后,关闭电源,真空放置过夜。然后,将所得沉淀与离心管一起称重,通过差量法计算多糖产率。其中,液固比、水浴温度T、提取时间t及提取次数根据实验过程中考察因素的改变,作相应更改。粗多糖产率=粗多糖质量/泽泻样品质量×100%3.2 泽泻纯多糖含量的测定本课题中,泽泻提取工艺最佳条件分析中所用的是纯多糖含量,粗多糖的数值只是作为参考数值。本实验中是通过苯酚-浓硫酸反应使多糖显色,在紫外可见分光光度计490nm处测得吸光度,然后通过将数据代入当天测得的标准曲线中,计算出相应多糖浓度,从而计算出不同提取条件下泽泻中纯多糖的含量。3.2.1 标准曲线的绘制标准液的配制:称取葡萄糖0.1259g于100mL容量瓶中,加蒸馏水至刻度,摇匀得1.259g/L的储备液,分别精密量取储备液1.0mL、0.8mL、0.6mL、0.4mL、0.2mL,置于25mL的容量瓶中,加水至刻度,摇匀。则得五个不同浓度的标准液。配制5%苯酚溶液:称取苯酚1.2508g于烧杯中,用加热至约50℃的蒸馏水溶解,转移至25mL的容量瓶中,加水至刻度,摇匀,避光保存以备用。标准曲线的绘制:取2mL移液管,分别取2mL蒸馏水和五个标准溶液于六根具塞试管中,再用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液枪[/color][/url][/color][/url]移取1mL5%的苯酚溶液,快速加入上述具塞试管中,充分混匀,用5mL移液管取5mL浓硫酸快速加入上述试管中,盖好试管塞,充分摇匀。从放入沸水浴中计时,沸水浴15min,冷水浴10min,室温放置5min(六个溶液之间间隔3min加硫酸)。将上述反应30min后的溶液分别在490nm处测定吸光度,以吸光度A为纵坐标,以葡萄糖标准溶液C(Co=50.36)为横坐标,绘制标准曲线。(见图1-1)标准曲线的线性范围为:0.10072×10[sup]-4[/sup]g/mL ~0.50360×10[sup]-4[/sup]g/mL曲线方程:A=0.0165C-0.0216,相关系数:r=0.9998[/color][align=center][img=,619,343]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/08/201908261725042952_9256_3237657_3.png!w619x343.jpg[/img][/align][align=center]图1-1 标准曲线[/align][align=center] [/align]3.2.2 苯酚-浓硫酸法测多糖含量分别取不同提取条件下所得粗多糖0.040g于小烧杯中,加少量温水搅拌使其溶解,转移至250mL容量瓶中,加蒸馏水至刻度,摇匀。使用前用布氏漏斗抽滤,滤去不溶物,得澄清滤液。然后用2mL移液管分别移取2mL上述滤液于具塞试管中,再用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液枪[/color][/url][/color][/url]移取1mL 5%的苯酚溶液,快速加入上述具塞试管中,充分混匀,用5mL移液管取5mL浓硫酸快速加入上述试管中,充分摇匀,盖好试管塞。沸水浴15min,冷水浴10min,室温放置5min,反应完全后在490nm处测定其吸光度,每次需配制空白对照用来校正可见分光光度计。将测得的吸光度带入标准曲线方程中计算出所配溶液的多糖浓度,进而可计算出纯多糖的产率。3.2.3 纯多糖产率的计算纯多糖产率=(纯多糖浓度×体积×粗多糖质量)/(粗多糖测样量×泽泻质量)×100%3.3 单因素实验3.3.1 液固比对泽泻多糖提取率的影响考察液固比,是为了能够在使用较少溶剂的情况下提取出最多的多糖,这不光能够减少工业生产中单位产量水的使用量,同样也为多糖提取液后期处理减少了时间和成本,具有重要的经济和生态效益。在结合前人相关中药材多糖提取实验的基础上,确定考察液固比为10:1、20:1、30:1、40:1、50:1。纯多糖产率见表3-1。[align=center] 表3-1 液固比对多糖提取率的影响 [/align] [table=582][tr][td]提取温度[/td][td] [align=center]80℃[/align] [/td][td=2,1] 提取时间[/td][td] [align=center]2.5h[/align] [/td][td=2,1] [align=center]提取次数[/align] [/td][td]1[/td][/tr][tr][td] [align=center]液固比(mL/g)[/align] [/td][td=2,1] 10:1[/td][td=2,1] 20:1[/td][td]30:1[/td][td]40:1[/td][td] [align=center]50:1[/align] [/td][/tr][tr][td]多糖产率(%)[/td][td=2,1] 3.38[/td][td=2,1] 3.46[/td][td]5.43[/td][td]7.87[/td][td]6.81[/td][/tr][/table]3.3.2 提取温度对泽泻多糖提取率的影响中药材提取过程中,温度是极其重要的条件。通过查阅文献及综合各方面考虑,确定提取温度为60℃、70℃、80℃、90℃、100℃。多糖产率见表3-2。[align=center]表3-2 提取温度对多糖提取率影响[/align] [table=640][tr][td]液固比[/td][td] [align=center]20:1[/align] [/td][td=2,1] [align=center]提取时间[/align] [/td][td] [align=center]2.5h[/align] [/td][td=2,1] [align=center]提取次数[/align] [/td][td=2,1] [align=center]1次[/align] [/td][/tr][tr][td]提取温度[/td][td=2,1] [align=center]60℃[/align] [/td][td=2,1] [align=center]70℃[/align] [/td][td] [align=center]80℃[/align] [/td][td=2,1] [align=center]90℃[/align] [/td][td] [align=center]100℃[/align] [/td][/tr][tr][td]多糖产率(%)[/td][td=2,1] [align=center]1.81[/align] [/td][td=2,1] [align=center]2.87[/align] [/td][td] [align=center]4.55[/align] [/td][td=2,1] [align=center]5.75[/align] [/td][td] [align=center]9.57[/align] [/td][/tr][/table][color=fuchsia] [/color]3.3.3 提取时间对泽泻多糖提取率的影响通过查阅文献,本实验确定考察时间为0.5h、1h、1.5h、2h、2.5h、3h、3.5h。多糖产率见表3-3。[align=center]表3-3 提取时间对多糖提取率的影响[/align] [table=653][tr][td]液固比[/td][td] [align=center]20:1[/align] [/td][td=2,1] [align=center]提取温度[/align] [/td][td] [align=center]80℃[/align] [/td][td=3,1] [align=center]提取次数[/align] [/td][td=2,1] [align=center]1次[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]提取时间(h)[/align] [/td][td=2,1] 0.5[/td][td=2,1] 1[/td][td] [align=center]1.5[/align] [/td][td]2[/td][td] [align=center]2.5[/align] [/td][td]3[/td][td] [align=center]3.5[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]多糖产率(%)[/align] [/td][td=2,1] [align=center]3.57[/align] [/td][td=2,1] 3.38[/td][td] [align=center]4.75[/align] [/td][td] [align=center]5.04[/align] [/td][td] [align=center]5.00[/align] [/td][td] [align=center]4.55[/align] [/td][td] [align=center]5.15[/align] [/td][/tr][/table]3.3.4 提取次数对泽泻多糖提取率的影响众所周知,在最合适的料液比、提取温度、提取时间条件下,提取次数越多,药物的有效成分在中药材中溶出的就会越多,提取率相应就会越高,但提取次数决定操作成本,提取次数越多,成本越高,且工艺用水量大。所以根据前人提取数据,将提取次数定为1次、2次、3次。多糖产率见表3-4。[align=center]表3-4 提取次数对多糖提取率的影响[/align] [table=582][tr][td]提取温度[/td][td] [align=center]80℃[/align] [/td][td=2,1] [align=center]提取时间[/align] [/td][td] [align=center]2.5h[/align] [/td][td] [align=center]液固比[/align] [/td][td] [align=center]20:1[/align] [/td][/tr][tr][td]提取次数[/td][td=2,1] [align=center]1[/align] [/td][td=2,1] [align=center]2[/align] [/td][td=2,1] [align=center]3[/align] [/td][/tr][tr][td]多糖产率(%)[/td][td=2,1] [align=center]3.46[/align] [/td][td=2,1] [align=center]5.71[/align] [/td][td=2,1] [align=center]8.68[/align] [/td][/tr][/table]3.4 均匀设计实验3.4.1 均匀设计实验方案在泽泻(均为5g干粉)多糖提取工艺中,我们要考察的主要因素有:提取温度、料液比及提取时间三个因素。根据单因素实验结果确定各因素的取值范围:提取温度X[sub]1[/sub] :55℃~100℃;料液比X[sub]2[/sub]:1:15~1:60:提取时间X[sub]3[/sub]:1.5h~3.75h。再根据各种因素的取值范围、试验精度要求,按提取温度间隔5℃,液料比间隔5,提取时间间隔0.25h,设计出一个3因素10水平的均匀设计表。根据均匀设计表中所列的提取条件,按照泽泻粗多糖的提取流程,对泽泻粗多糖进行提取,并计算其产率。(见表4-1)提取得到粗多糖并测定多糖纯度,进而求得纯多糖产率。[align=center]表4-1 均匀设计实验数据[/align] [table=638][tr][td] [table][tr][td] [table=100%][tr][td] 条件 编号[/td][/tr][/table] [/td][/tr][/table][img=,98,65]https://bbs.instrument.com.cn/xheditor/xheditor_skin/blank.gif[/img][img=,84,52]https://bbs.instrument.com.cn/xheditor/xheditor_skin/blank.gif[/img][/td][td] [align=center]温度(℃)[/align] [/td][td] [align=center]料液比[/align] [align=center](g/mL)[/align] [/td][td] [align=center]时间(min)[/align] [/td][td] [align=center]粗多糖产率(%)[/align] [/td][td] [align=center]纯多糖产率(%)[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]1[/align] [/td][td] [align=center]55[/align] [/td][td] [align=center]1:35[/align] [/td][td] [align=center]180[/align] [/td][td] [align=center]14.24[/align] [/td][td] [align=center]1.22[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]2[/align] [/td][td] [align=center]60[/align] [/td][td] [align=center]1:60[/align] [/td][td] [align=center]120[/align] [/td][td] [align=center]15.44[/align] [/td][td] [align=center]1.67[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]3[/align] [/td][td] [align=center]65[/align] [/td][td] [align=center]1:30[/align] [/td][td] [align=center]225[/align] [/td][td] [align=center]12.72[/align] [/td][td] [align=center]1.27[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]4[/align] [/td][td] [align=center]70[/align] [/td][td] [align=center]1:55[/align] [/td][td] [align=center]165[/align] [/td][td] [align=center]14.94[/align] [/td][td] [align=center]2.50[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]5[/align] [/td][td] [align=center]75[/align] [/td][td] [align=center]1:25[/align] [/td][td] [align=center]105[/align] [/td][td] [align=center]13.62[/align] [/td][td] [align=center]3.74[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]6[/align] [/td][td] [align=center]80[/align] [/td][td] [align=center]1:50[/align] [/td][td] [align=center]210[/align] [/td][td] [align=center]23.82[/align] [/td][td] [align=center]6.55[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]7[/align] [/td][td] [align=center]85[/align] [/td][td] [align=center]1:20[/align] [/td][td] [align=center]150[/align] [/td][td] [align=center]23.19[/align] [/td][td] [align=center]5.98[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]8[/align] [/td][td] [align=center]90[/align] [/td][td] [align=center]1:45[/align] [/td][td] [align=center]90[/align] [/td][td] [align=center]23.05[/align] [/td][td] [align=center]5.71[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]9[/align] [/td][td] [align=center]95[/align] [/td][td] [align=center]1:15[/align] [/td][td] [align=center]195[/align] [/td][td] [align=center]16.52[/align] [/td][td] [align=center]4.92[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]10[/align] [/td][td] [align=center]100[/align] [/td][td] [align=center]1:40[/align] [/td][td] [align=center]135[/align] [/td][td] [align=center]39.93[/align] [/td][td] [align=center]8.74[/align] [/td][/tr][/table]3.4.2 最优提取条件的选择用SPSS 19.0统计软件,以纯多糖得率为评价指标对各因素进行线性回归分析,模型的优度通过复相关系数和方差分析来判定。结果如表4-2。[align=center]表4-2 回归方程[/align] [table=638][tr][td] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]回归方程式[/align] [/td][td] [align=center]R[/align] [/td][td] [align=center]P[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]回归方程1[/align] [align=center]回归方程2[/align] [align=center]回归方程3[/align] [/td][td] [align=center]Y=-9.850+0.164X[sub]1[/sub]+0.033X[sub]2[/sub]+0.001X[sub]3[/sub][/align] [align=center]Y=-7.595+0.153X[sub]1[/sub][/align] [align=center]Y=3.780-0.002X[sub]2[/sub] X[sub]3[/sub]+3.004E-5 X[sub]1[/sub]X[sub]2[/sub] X[sub]3[/sub] [/align] [/td][td] [align=center]0.919[/align] [align=center]0.902[/align] [align=center]0.960[/align] [/td][td] [align=center]0.008[/align] [align=center]0.000[/align] [align=center]0.000[/align] [/td][/tr][/table]表4-2中,Y为纯多糖得率,X1为提取温度,X2为液固比,X3为提取时间。方程1,R[sup]2[/sup]= 0.844,P值为0.008,回归非常显著,常数项和X1项P值分别0.041和0.002小于0.05 ,回归显著,有统计意义,而X2,X3均回归不显著,方程1多糖产率预测值为7.98%;方程2为将各项及其交叉乘积项全部纳入进行逐步回归的结果,我们发现,最后的方程中只保留了X1项,方程2的 R[sup]2[/sup]= 0.813,常数项和X1项P值分别为0.006和0.000,均小于0.01,回归亦非常显著有效,其预测值为7.66%。方程3为全体向后回归分析结果,R[sup]2[/sup]= 0.922,P值为0.000,常数项乘积项P值分别为0.001,0.000和0.000,均小于0.01 。故回归非常显著,其预测值为8.28%。3.4.3 最优提取条件的验证综合上述三方程的回归结果,及均匀设计和单项实验的结果,我们采取提取温度100℃、提取时间为135 min、提取料液比为40,即第10组的条件为最佳条件,并重复3次进行实验验证。结果见表4-3。[align=center]表4-3 最优提取条件测得的多糖含量[/align] [table][tr][td] [align=center]实验编号[/align] [/td][td] [align=center]提取条件[/align] [/td][td] [align=center]粗多糖得率(%)[/align] [/td][td] [align=center]纯多糖得率(%)[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]1[/align] [/td][td=1,4] [align=center]提取温度:100℃[/align] [align=center]料液比:1:40[/align] [align=center]提取时间:135 min[/align] [/td][td] [align=center]32.24[/align] [/td][td] [align=center]8.57[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]2[/align] [/td][td] [align=center]28.64[/align] [/td][td] [align=center]8.99[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]3[/align] [/td][td] [align=center]28.99[/align] [/td][td] [align=center]8.92[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]平均值[/align] [/td][td] [align=center]29.96[/align] [/td][td] [align=center]8.83[/align] [/td][/tr][/table]4 实验结果4.1 单因素实验结果4.1.1 液固比采用提取温度80 ℃,加热2.5h,提取1次,考察了液固比对提取收率的影响。图4-1表明,固液比从10:1增到20:1多糖产率并无太大变化,液固比从20:1增到30:1纯多糖产率提高了56.94 %,同样,从30:1到40:1纯多糖产率又提高了44.94%。而在40:1到50:1之间,反而下降。主要是由于开始增加提取液体积有利于细胞内容物的溶出,而液固比到达40:1之后,多糖成分已基本溶出,故多糖产率并没有提高,反倒降低。考虑到工业生产中水的用量和多糖产率的综合因素,可以得出40:1应为最佳提取液固比。[align=center][img=,542,271]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/08/201908261726359481_8405_3237657_3.png!w542x271.jpg[/img][/align][align=center]图4-1 液固比对泽泻粗多糖得率的影响[/align][align=center] [/align]4.1.2 提取温度采用液固比为20:1,提取时间2.5h,提取1次,考察了提取温度对多糖产率的影响,结果见图4-2。由图中可以看出,当温度从60 ℃上升到70 ℃时,粗多糖得率共提高了58.56%,从70℃到80℃,提高了58.54%,80℃到90℃,提高了26.37%,从90℃到100℃,提高了66.43%。随着温度的上升,多糖产率一直在增加,说明温度的提高对多糖的溶出有显著影响。显然,从60℃到90℃,多糖产率几乎呈线性上升,从90℃到100℃,较60℃到90℃上升更快,且产率最高。过低的温度会造成提取物溶出少甚至不溶出,而较高温度会显著提高多糖产率。所以,即使较高的温度会略微增加能源上的成本,但是却使多糖产率增加数倍,提高药材利用率,大大降低总生产成本。综合以上各方面因素考虑,得出多糖的最佳提取温度为100 ℃。[align=center][img=,556,281]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/08/201908261727189034_3165_3237657_3.png!w556x281.jpg[/img][/align][align=center]图4-2 提取温度对泽泻多糖得率的影响[/align][align=center] [/align]4.1.3 提取时间中药材有效药物成分溶出需要一定的时间,较短会造成药物有效成分无法最大限度地溶出,过长的提取时间则会导致有效成分分解。采用提取温度80 ℃,液固比20:1,提取1次,考察了提取时间对多糖得率的影响,结果见图4-3。可以看出,提取时间超过2h后多糖得率并未继续增加,反而下降;而2h之前,多糖得率增加显著,从1h到2h增加了49.11%。虽然在3.5h处总产率较2h增加了0.11%,但是提取时间却较2h多出将近一倍,大大增加了生产成本,故2h为最佳提取时间。[align=center][img=,560,260]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/08/201908261727397775_5830_3237657_3.png!w560x260.jpg[/img][/align][align=center]图4-3 提取时间对泽泻多糖得率的影响[/align]4.1.4 提取次数采用提取温度80 ℃,提取时间2.5h,液固比20:1,考察了提取次数对多糖得率的影响,结果见图4-4。结果发现:提取3次时多糖得率最高,比1次提取提高了1.5倍,差别显著。而提取两次较提取一次,也提高了65.03%,提高显著。提取三次的多糖产率是提取一次的2.5倍。因此,从约成本,提高药材利用率的角度考虑,确定最佳提取次数为3次。[align=center][img=,548,269]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/08/201908261727581933_5743_3237657_3.png!w548x269.jpg[/img][/align][align=center]图4-4 提取次数对泽泻多糖得率的影响[/align][align=center] [/align]4 . 2 均匀设计实验结果本实验采用水提醇沉法提取泽泻多糖,通过对料液比、提取时间、提取温度等三个可控条件进行均匀设计实验,结合实验及生产实际,确定了泽泻多糖提取的最优条件,并利用该最优条件测定了泽泻多糖的含量,计算出了纯多糖的得率。结果见表4-4。[align=center]表4-4 泽泻多糖提取最优条件及多糖含量[/align] [table][tr][td=4,1] [align=center]最优提取条件[/align] [/td][td=1,2] [align=center]粗多糖得率[/align] [align=center](%)[/align] [/td][td=1,2] [align=center]纯多糖得率[/align] [align=center](%)[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]提取温度[/align] [/td][td] [align=center]提取料液比[/align] [/td][td] [align=center]提取时间[/align] [/td][td] [align=center]提取次数[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]100℃[/align] [/td][td] [align=center]1:40[/align] [/td][td] [align=center]135 min[/align] [/td][td] [align=center]1次[/align] [/td][td] [align=center]29.96[/align] [/td][td] [align=center]8.83[/align] [/td][/tr][/table]所得纯多糖实际产率8.83%与理论得率8.28%十分接近。[color=#000000]5 讨论5 . 1多糖提取与含量测定过程(1)在多糖提取过程中,除待测因素温度、料液比、提取时间按要求改变外,其他条件均应保持一致,以减少系统误差,增加数据的准确性。(2)在转移多糖溶液的过程中要尽可能的减少损失及其操作的一致,如粗过滤完抽滤时滤渣滤棉中残余多糖成分的转移,旋蒸浓缩提取液后的转移和离心过程中多糖的转移应最大程度减少多糖损失量,并保持操作的一致性。(3)在绘制标准曲线及用苯酚-硫酸法测多糖含量时,加入苯酚后一定要混匀,以防止硫酸直接氧化苯酚,导致糖类反应不完全。此外,苯酚须现用现配,避光保存。(4)在硫酸与糖反应时,一般方法是加入苯酚和硫酸后摇匀,直接室温放置30min后测其吸光度,为了保证反应完全,本实验在加入硫酸并摇匀后,先沸水浴15min,再冷水浴10min,再室温放置5min后测量吸光度。并在测量时保证每组的反应时间一致。(5)纯多糖含量的测定过程,为了保证数据的准确性,单因素实验中同一组的最好同时测,均匀设计实验的十组最好同一天测完。(6)由于实验时间有限,对于泽泻多糖测定时,采用的是以往经验的可见光范围490nm进行测定,这是实验中不完善的地方,准确的操作应通过实验找到多糖吸光度最大的波长进行测定。5 . 2 单因素实验由于单因素只是考虑单个提取条件对产率的影响,不能考虑到多种因素共同的影响,所以只是作为参考结果,对于单因素对多糖提取的影响具有参考价值,但是从总的生产上来说,均匀设计具有更加实用的价值。本实验中,单因素最优条件为:液固比40:1,提取温度100℃,提取时间2h,提取次数3次。单因素中提取次数的结果中提取两次较提取一次产率的增长值,还没有提取三次较提取两次的增长值大。可能是因为提取温度不够高,多糖溶出较慢所致。单从单因素的角度来看提取三次为最佳条件。但是从生产过程考虑,提取次数的增加会增加很大工作量,一般会选择一次就能提取完全的条件。而均匀设计实验中也证明,在100℃,40:1,135min条件下多糖的产率就可以达到8.74%,比单因素实验中提取三次的量还要高,故选择一次为最佳提取次数。5 . 3 均匀设计实验均匀设计实验结果8.83%同实验分析的理论结果8.28%较为接近,这也证明了实验数据的准确性,并通过回归分析确定了实验的最佳提取条件。均匀设计是在单因素的基础上进行的,综合两个实验的数据结果,不难发现提取的最佳条件为:提取温度100℃、提取时间为135 min、提取料液比为40、提取一次。5 . 4 整体结果讨论单因素实验中,我们可以得到以下关于单因素对多糖提取率的影响。提取次数与多糖产率呈正相关,提取时间也是呈正相关。提取时间与多糖产率的关系是到一定时间就达到稳定,即超过这个时间显著性不过。液固比与多糖产率的关系是存在一个峰值,低于此值,产率随液固比增加而增加,超过此值则随液固比增加而产率降低。这也给我们一些启发,对于这些植物药中似多糖类水溶性物质的提取条件也应存在此种规律,可作为以后研究的参考。均匀设计实验是在单因素的基础上,综合考虑了提取时间、温度和液固比对多糖产率的影响,是较符合实际生产条件的一项实验,具有较高的应用参考价值。当然,除了本课题中考虑到的因素,可能还有其他未被考虑到的一些因素。均匀设计只是以线性回归的方式对实验数据进行分析,而现在有更为先进的如响应面分析法等。这都说明多糖的提取工艺有很大的提升空间。参考文献 中药大辞典.上海:上海科学技术出版社,2006:2067Xie Min.Phmaracology of traditional Chinese medical formulas.Beijing:The People’s Public Health Publish House,2007 国家药典委员会编.中国药典(一部).中国医药出版社,2010:213 黄珍,刘咏松.泽泻降血脂药理作用及物质基础研究进展.山西中医学院学报,2008,9(5):55~56 陈曦.泽泻的研究现状与进展.中国民族民间医药,2011,20(9):50~51,53 臧萍.泽泻的研究现状及展望.中国中医药现代远程教育,2009,07(6):180~182Yamaguchi K.Akauurane derivative isolated from Alisma orientale Acta Crystallogr SectC Cryst. Struct .医药导报,2003,22(5):295Peng GP,LouFC.Isolation and indentification of diterpenoids fromAlisma orientalis .Actapharmaceutica sinica,2002,37:950~954 丁霞,吴水生.泽泻的研究进展.中医药信息,2008,25(5):19~21 王建平,傅旭春,泽泻的药理作用和临床研究进展.2011年浙江省医学会临床药学分会学术年会论文汇编,2011 冯欣煜,姚志凌.泽泻药理研究与临床新用.中国医药指南,2007,S1:37~38 尹艳,高文宏,于淑娟,等.多糖提取技术的研究进展.食品工业科技,2007,28(2):248~250 吴华振.植物多糖的药理作用及应用进展.实用医技杂志,2005,12(7):1803~1804 杨艳,徐应淑.川、黔地区金钗石斛多糖的含量测定.中国药房,2010,21(27):2552~2554 李小凤,韦庆宁,史柳芝,等.泽泻多糖的提取及含量测定.山东化工,2012,41(7):26~28 朱秀灵,戴清源,冯宏波.超声波辅助提取银杏叶多糖工艺研究. 安徽工程科技学院学报,2010,25(3):6~8 缪建,杨文革,周彬.银杏叶多糖提取工艺的优化. 中国食品添加剂,2007,12(2):153~156 金汝城,周术涛,张东博,等.均匀设计优化超声波法提取黄芪多糖的研究. 安徽农业科学,2009,37(12):5498~5499[/color][align=center] [/align]
请问有没有做过利用Thermo 的SEC 色谱柱测多糖分子量或者分离多糖的?可行么?有什么注意的地方?
有版友做过粗多糖吗?样品处理大家都是怎么做的?尤其是在沉淀粗多糖的那一步,洗涤残渣,如何保证清洗干净,只是去掉上清液还是需要过滤?如果要过滤有需要用什么过滤呢?希望做过的版友来一起讨论一下!谢谢
求各位业内人仕魔芋胶和卡拉胶的复配比例
我们现在有一根Sepax Nanofilm SEC-150凝胶柱,我看介绍这种柱子主要是用于测定蛋白、肽类的,查网上资料说这种柱子可以代替Tosoh公司的TSK G-2000SW,但是TSK G-2000SW一般也是测试蛋白等,测多糖类一般用TSK gel PW 系列,现在想测试多糖,不知道能不能用Sepax Nanofilm SEC-150凝胶柱来测,哪位高手做过这方面的实验,请给点意见,我是刚刚接触GPC,什么都不懂呀,学习中……
请问多糖的含量可以用高效液相色谱来测定吗?现在的方法大多用紫外可见分光光度法来检测的。
最新发现与创新 科技日报上海6月29日电(记者左朝胜)今天,在上海浦东召开的化学糖生物学国际研讨会上,中科院上海药物研究所无限极多糖联合实验室公布了他们的最新研究成果:肠道为香菇多糖(Lentinan)等中草药多糖预留的秘密通道被发现。这些中草药多糖可以经由该通道被人体完整吸收,进而随血液达到全身各处,发挥其各种生物生理功效。 多糖是自然界中含量最丰富的物质之一,广泛存在于动物细胞膜、植物和微生物细胞壁中,对维持生命活动起着至关重要的作用。大量药理和临床研究发现,多糖、特别是中草药多糖,具有调节免疫、抗辐射、抗肿瘤、抗病毒、抗衰老、调节血糖、保护胃肠系统等作用。自1986年日本批准香菇多糖应用于临床以来,目前在中国、美国、韩国、日本及一些欧洲国家,已有几十种多糖被批准应用于疾病的治疗或辅助治疗。同时,多糖还被广泛应用于保健食品。 但由于多糖的分子量一般都很大,如果一个水分子相当面包屑那么大的话,一个高活性多糖分子起码会像一个汉堡包。水分子可以自由进出肠道壁细胞,多糖也可以吗?这个问题一直困惑着中外科学家。 2009年,中科院上海药物研究所丁侃研究员与无限极(中国)有限公司联合开展多糖吸收机制研究,经过几年努力,利用Caco-2细胞、多糖荧光标记等手段,终于找到了肠道给多糖预留的秘密通道——clathrin蛋白。 多糖可借助clathrin蛋白进入肠道细胞内,然后再进入毛细血管,随血液到达全身各处,与其受体结合发挥各种生物活性。该研究成果得到了美国功能性糖组学协会、国际糖复合物组织的赞赏和肯定,并得到世界各国多糖研究领域专家的关注。这项成果为多糖各种生理功效的活性机制研究奠定了坚实的基础,不但为口服吸收与口服有效提供了新依据,而且为多糖靶向治疗提供了可能性。 《科技日报》(2013-6-30 一版)
有关多糖换算因素的计算问题,求助高手,如下面的换算因素怎么计算:其中W是用哪个数据,还有稀释因素是多少?至于具体的换算因素结果,不需要 精密称取干燥的多糖约25.00mg,置100ml容量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度,摇匀,作为贮备液。精密吸取贮备液 5.0ml,稀释至 50ml,取其中的2.0ml置试管中,照标准曲线的制备项下的方法测定吸收度,从回归方程中求出多糖液中的果糖含量,按下式计算,换算因素f=W/(C×D),其W 为多糖的重;C为多糖液中果糖浓度;D为多糖稀释因数. 计算 f值。结果,测得A=0.360,算出f=。
请问植物多糖~就是纤维素多糖是酸性还是碱性?
多糖的酸水解和碱水解有什么区别,什么时候应该酸水解或碱水解呢?
请教如何出去多糖中的单糖和双糖
公司新生产的药中含有一种叫云芝多糖的原料,在检验过程中遇到了一些问题,想请教一下论坛里的老师。云芝多糖是多孔菌科植物云芝的干燥子实体提取的多糖。其中一项理化检验标准:取本品(云脂多糖原料)适量,置锥形瓶中,加斐林试液甲、乙各10ml,煮沸3-4分钟,冷却,滤过,取滤液适量,用12%的盐酸调至酸性,取5ml加热10分钟,冷却中和,再加斐林试液甲乙各10ml,煮沸2分钟,溶液中应析出红色氧化亚铜沉淀。但是我在做的过程中发现:加斐林试液甲乙各10ml煮沸后冷却,就有红色沉淀物析出,过滤后照标准做下去,得不到最后的结论??不知道是什么原因?想请教一下论坛里的老师帮忙给解答一下。谢谢!
本人最近测定枸杞多糖含量时,所用测定方法均为2005年版药典枸杞项下,结果出现如下问题:测定枸杞提取物(注:厂家未提供提取方法)枸杞多糖含量时,直接称样水溶解然后测定,结果所测提取物含量高达95%;按药典方法进行前处理,测出值也高达70%;而厂家提供的是50%。另外,我们公司有一种产品,45度白酒,其中添加了葛根黄酮提取物和这种枸杞提取物,结果所测枸杞多糖含量也与理论添加量有很大差别。请问:像我这种情况,在测定枸杞多糖时,需要像药典中那样前处理吗?有哪些更好的方法?多糖测定时葛根黄酮会不会影响?测定提取物和测定白酒中多糖含量时方法是否可以一致?不行的话又分别该怎样测定? 恳请问各位专家朋友指点迷津!谢谢!
我的多糖在做单糖组成时测到有葡萄糖、果糖、甘露糖、木糖,而做的核磁解析出了果糖、葡萄糖,另外解出一个鼠李糖,但是单糖组成并未测到鼠李糖,想问一下这种情况正常吗,会不会被审稿人所质疑
多糖分子量怎么求,可以有具体点的方法吗