温胃舒颗粒

生物制药如治疗性蛋白质、疫苗、基因与细胞治疗是一个不断快速增长药物领域。生物制药原料药和药品中蛋白质聚集体和不溶性颗粒是需要充分评估和控制的杂质，因为它们有可能引发免疫原性反应，影响产品的安全性和有效性。中美药典中现行的颗粒定义是10-100 nm为蛋白寡聚体，0.1-1 μm为亚微米颗粒/纳米聚集体，1-100 μm是亚可见颗粒/微米聚集体，∽100 μm是可见颗粒。目前基因治疗产品亚可见颗粒分析方法可参考USP787、788和789对治疗性蛋白质注射液和眼科溶液中亚可见颗粒的规定。对于含量超过100mL容器中的治疗性蛋白质注射剂，总颗粒数≥10 μm的颗粒≤6000，对于≥25 μm颗粒≤600。 不同于治疗性蛋白质产品，基因治疗产品大多采用病毒作为载体包括腺病毒（AdV）、腺相关病毒（AAV）或慢病毒（LV）、溶瘤病毒等，所以细胞、病毒和脂质纳米颗粒等递送载体本身就是颗粒，可通过大小、形态、含量和浓度的分析技术来表征。这些基于病毒载体的基因治疗产品剂型主要是注射剂，相关质量标准可参考生物大分子药物不溶性颗粒技术要求。但由于病毒颗粒异质性和复杂性，以及对最终产品的有效性和安全性可能影响，如降低病毒的转导效率和诱发免疫原性反应等，所以需要多种不同技术和方法联合使用，实现更全面更准确的基因治疗产品颗粒表征。以rAAV载体的基因治疗产品为例，病毒颗粒本身是无包膜的，二十面体结构，直径约为25nm，可形成各种不同大小的变体和聚合形态。AAV大小变异体和聚集体可增加临床实验的免疫原性，较大的AAV聚集体在转导细胞效力方面可能降低，进而改变产品疗效。目前有多种技术来表征相关产品溶液中颗粒大小，从纳米级到肉眼可见级别，对于不同粒径大小的颗粒可采用不同技术进行分析表征。对于纳米级别颗粒，可采用动态或静态光散射（Dynamic or Static Light Scattering）、SEC-HPLC、电镜（EM）、原子力显微镜 (AFM)、分析型超速离心机（AUC）、纳米颗粒跟踪分析技术（NTA，Nanosight）和非对称流场流动分级（A4F）等；对于微米级别颗粒，可采用光阻法（LO）、微流成像颗粒分析技术（MFI）、库尔特颗粒计数（Coulter counter）等。可见颗粒可采用拉曼/红外显微镜、荧光显微镜或目测法等。可用于AAV颗粒分析的代表性方法参考下图。颗粒分类中亚可见颗粒是一种聚集形式，经历了相分离并变得不溶。多个国家药典规定注射剂亚可见颗粒物检测采用光阻法（LO）和显微计数法。其中光阻法只能计数颗粒大小和数目，不能看到颗粒形态。美国药典1787推荐了微流成像颗粒分析技术作为大小和形态表征重要的方法。同时推荐在保质期内应该评估产品中2-10 μm亚可见颗粒的范围和水平，10 μm以下颗粒总数分成两组≥2-5μm和≥5-10μm来统计。2021年中国食品药品检定研究院发表文章，详细比较了微流成像颗粒分析方法和光阻法对17种单克隆抗体的亚可见微粒分析结果，显示了微流成像颗粒分析技术在准确性方面具有优势，未来可能用于放行质量控制和稳定性研究。代表性亚可见颗粒分析方法介绍微流成像颗粒分析方法（MFI）：技术原理是待测样本在流经样本检测池过程中，在固定的检测窗口处，采用高频成像检测器动态连续检测样本中颗粒物，获取一系列的数据照片，最终通过软件对所获取的颗粒物照片进行分类和计数分析。核心技术是通过精确地控制样本检测池中的流速，配合静态的图像捕获，使相邻两次成像检测液柱无重叠，从而避免对样本颗粒的重复计数，同时需要保证85%以上样本实现了颗粒成像检测，配合全景深立体成像，保证所有检测到的颗粒都在景深范围内，实现对颗粒大小检测准确性。该方法提供了样本中颗粒真实图像的原位条件，对捕获的数字图像进行分析，实现了颗粒的可视化、计数、大小调整和表征。还可根据颗粒图像、对比度和形状，可能指示颗粒的来源和类型如蛋白聚集、硅油、气泡和纤维等。与图像数据库联合使用，可识别一些颗粒，有助于了解污染源和产品性质。与光阻法和显微计数法相比，缩短了分析时间，具有更高重复性和分辨率。满足2-10 μm范围内亚可见颗粒分析需求。光阻法（LO）介绍：被检测的液体通过专门设计的流通室，与液体流向垂直的入射光束由于被液体中的粒子阻挡而减弱，从而使传感器输出的信号变化，这种信号变化与粒子通过光束时的截面积尺寸成正比。这种比例关系可以反映粒子的大小。每一个粒子通过光束时引起一个电压脉冲信号，脉冲信号的多少反映了粒子的数量。光阻法检测颗粒范围为1∽300 μm（USP 401787）。以光阻法为原理设计的微粒检测仪主要包括取样器、传感器和计算机控制的检测和数据处理系统。不同设备测量粒径范围涵盖了2∽100μm，检测粒径浓度为0∽10000个/ml，取样体积为0.2∽100 mL。符合药典对大小容量注射液和粉针剂不溶性微粒检测需求。其主要优势是可直接观察溶液中颗粒，具有大量历史数据的药典推荐方法。操作简单可进行中高通量检测。劣势是对比度低，可能会低估制剂配方中形成的不可见蛋白质颗粒，对气泡敏感，某些脱气技术会改变样本性质，更重要的只适合表征颗粒大小和分布，不能通过形态来分析颗粒。电感应区检测方法：基于库尔特原理检测颗粒，可检测0.4∽1600μm范围内的颗粒（不同商业化库尔特颗粒计数及粒度分析仪有变化）。稀释悬浮在电解液中的样本颗粒通过小孔管时，取代相同体积的电解液，在恒电流设计的电路中导致小孔管内外两电极间电阻发生瞬时变化，从而中断电场，产生电位脉冲。脉冲信号的大小和次数与颗粒的大小和数目成正比。 信号响应不受颗粒类型的影响（如颜色、硬度、不透明度和折射率变化）。本技术优势不受溶液光学特性的影响，可实现单孔中高通量样本检测。劣势是需要大样本体积，需要较低颗粒浓度，有时样品必须在电解质溶液中稀释获得足够电导率，可能会改变样品性质。同样也不能提供形态学参数。显微计数法：采用光学显微镜（LM）检测和分析颗粒，光在样品上透射或反射后通过一系列透镜，直接采用目镜观测，或数码相机采集信号成像。图像分析可使用软件系统，按照一定参数对颗粒群体进行分析。优势是可直接观察溶液中颗粒，可视化计数颗粒大小和数目，并鉴别颗粒形态。可与红外或拉曼计数整合来鉴定颗粒化学组成。但劣势是人工分析费时费力和通量低，难以看到低光学对比度颗粒，自动化程度低。颗粒鉴定表征可采用傅里叶红外光谱（FTIR）显微镜、显微拉曼光谱和扫描电镜-能谱分析（SEM-EDS）等技术，本文不做深入论述。基因治疗产品亚可见颗粒分析案例鉴于不溶性微粒研究在生物制品中重要性，有必要深入研究病毒为载体基因治疗产品中病毒颗粒聚集体和不溶性颗粒形成原因，并找到相应的解决方案来提高基因治疗产品的研发和质量控制水平。以下案例简要说明基因治疗产品亚可见微粒分析方案。AAV生产超滤工艺中颗粒监控AAV生产过程中超滤环节将AAV浓缩并置于最终制剂配方缓冲液中，作为生产工艺中关键步骤，需要深入研究和加深对AAV载体超滤的理解。美国Voyager Therapeutics公司研究超滤膜截留分子量和操作条件对复合再生纤维素（CRC）超滤膜的通量和传输的影响，采用AAV2和AAV9两个血清型病毒载体，以及对AAV超滤行为的定量理解，并指导工艺开发。利用微流成像颗粒分析方法（MFI）研究病毒浓缩超滤工艺开发过程中产生的亚可见颗粒，当通过CRC超滤膜时，膜截留分子量和操作条件对通量影响。下图结果展示1到10μm之间颗粒采用MFI检测时存在明显差异。两个批次A和B实验，对于特定的膜批次，当处理时间较长时，亚可见微粒浓度较高。与较低TMP 6.5 psig相比，当采用更高TMP（20 psig）进行超滤时，亚可见微粒浓度降低。这归因于较低TMP下超滤时，泵通过管道和通道次数增加导致。本研究可指导超滤工艺的条件设置。MFI系统具备自动进样系统，可一次自动检测多达90个样本，非常适合AAV生产过程中工艺优化。不同渗透率RC2A膜超滤的AAV2样本的不同大小颗粒评价，上图批号Lot A样本，下图Lot B样本AAV基因治疗产品稳定性研究制剂配方中AAV长期稳定性和密封容器封闭的完整性是冷冻产品两个关键方面。为了最大限度地减少化学和物理降解，也为了长期存储和运输，AAV原料药和产品制剂通常冷冻在≤-60 °C下，有时允许产品制剂短期存储在医院的2-8°C冰箱中。在制造、贴标签和临床使用过程中会在室温和冷藏条件下发生冻融循环。除了长期稳定性外，在外暴露期间AAV的稳定性也很重要。不同AAV血清型和制剂配方差异导致这期间的稳定性也会有所不同，所以在制剂配方早期开发过程中获得数据来确认AAV在制造、贴标签和临床使用期间将保持稳定是有意义的。为了研究温度、存储时间和冻融率对AAV8和AAV9稳定性的影响，美国REGENXBIO公司研究低浓度和高浓度AAV8和AAV9病毒在五个冻融循环中，预期存储以外时间的稳定性，考察病毒关键质量属性变化情况。下图是采用数字PCR检测病毒载体基因组浓度（GC/mL），结果显示病毒效力和浓度在方法误差范围内保持稳定。采用光阻法检测亚可见微粒（Particles/mL ≥10 μm）。左边第1列是配方F1中AAV8，第2列是配方F3中AAV8。每个小图中左边一对柱状图是低浓度结果和右边一对柱状图是高浓度结果。对照组标记为Cont.和累积预期存储时间外暴露样本标记为TOIS。实验结果显示TOIS后颗粒数非常低，≥2 μm的颗粒≤78个/mL，≥10μm的颗粒≤10个/mL，≥25μm的颗粒≤2个/mL，和≥50μm的颗粒0个/mL。在本研究设定实验条件下，结果表明AAV8和AAV9产品质量属性保持在可接受范围内，稳定性适合用于生产和临床使用。作者认为光阻法有局限，可能低估了半透明的蛋白质颗粒和病毒聚集体颗粒，后续研究需要采用微流成像技术对亚可见颗粒进行表征和稳定性研究。同样研究冻融条件对病毒载体稳定性影响，美国堪萨斯大学疫苗分析和制剂中心科学家（Vineet Gupta，2022，Journal of Virological Methods）研究了淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒（LCMV）载体稳定性，使用TEM、NTA和MFI三种互补的病毒颗粒表征技术研究病毒载体在冻融应激下稳定性。4种不同制剂配方（Form 1-4）在0、3和6个冻融循环条件下亚可见颗粒变化，研究冻融对病毒载体稳定性影响。参考下图，结果证明了通过MFI可检测到样本中存在大量的亚可见微粒。揭示某些制剂（制剂F1和F3）病毒载体亚可见颗粒浓度与病毒载体滴度损失之间存在负相关，制剂配方2和4没有变化。与上述研究类似，Kumru等2015年观察到在冻融循环时，特定配方中溶瘤单纯疱疹病毒1的体外效力值和亚可见颗粒浓度之间呈现负相关。基于多项研究，不同制剂配方中观察到结果可能有所不同，所以在评估病毒感染能力和稳定性时，需要同步进行亚可见颗粒研究。综上所述，基因治疗产品在研发、生产、存储等多个工艺过程中需要持续监测样本中颗粒情况，从早期到晚期开发阶段都需要监测颗粒的动态变化过程，探索研究病毒聚集体和颗粒产生的原因。可采用多种不同分析检测技术联合使用，针对纳米级和微粒级颗粒进行全范围覆盖。特别是参考中美药典对不溶性颗粒检测规定，借鉴生物大分子蛋白质药物颗粒分析经验，不同方法优势互补，采用光阻法、显微计数法和微流成像颗粒分析方法（MFI）对亚可见微粒进行深入研究，分析基因治疗原料药和药品中颗粒形成原因，可用于优化病毒载体生产和纯化工艺、筛选合适制剂配方和存储条件，提高产品质量稳定性和安全性，保证产品疗效。索取资料请扫上方二维码参考文献：Alexandra Roesch, Sarah Zolls, et al. 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Bee, Yu (Zoe) Zhang, et al. Impact of Time Out of Intended Storage and Freeze-thaw Rates on the Stability of Adeno-associated Virus 8 and 9. Journal of Pharmaceutical Sciences (2022) 1−8 Vineet Gupta, Lorena R. Antunez, et al. Development of a high-throughput RT-PCR based viral infectivity assay for monitoring the stability of a replicating recombinant Lymphocytic Choriomeningitis viral vector. Journal of Virological Methods 301 (2022) 114440

超级品牌日专题页面颗粒表征应用范围非常广泛，可以帮助人们了解粉末的流动性和填充性、药物的溶解速率、蛋白质的稳定性、涂料的光学性能等。随着人们对材料的探索不断深入，颗粒表征在科学研究和工业应用中扮演着越来越重要的角色。 马尔文帕纳科作为激光衍射粒度表征的先驱，在颗粒表征领域深耕超过半个多世纪，将颗粒表征技术从最初的针对微米级颗粒进行测量扩展至纳米级颗粒尺度，表征范围也增加了粒形、成分、浓度、Zeta电位、比表面积等物理、化学特性的测量和分析。完整的解决方案，助力科研人员和工业用户进行更精确、更高效的颗粒表征；丰富的行业经验帮助客户用颗粒表征结果指导自己的研究或生产。马尔文帕纳科颗粒表征解决方案 随着应用技术的不断发展，单一的表征方式往往难以应对日益复杂的样品测试需求，用户在测试过程中也常常为了方法开发或数据质量、异常信号等问题而苦恼，或是疲于应对大量重复测量工作，却得不到具有统计意义的测试结果。除了利用不同的测试方法相互补充，智能化成为提升测试能力的关键。马尔文帕纳科在软硬件智能化以及仪器智能化管理方面都做出了自己的尝试并取得了令人满意的结果。6月26日，仪器信息网携手马尔文帕纳科举办“颗粒表征迈入智能时代”超级品牌日。马尔文帕纳科将分享其经验，展示机器学习、智能化、自动化赋予不同颗粒表征方式的巨大能量。John Oude Egbrink（客户成功部门，马尔文帕纳科全球副总裁）邀您参会交流会议日程时间主题嘉宾14:00--14:02活动开场主持人14:02--14:20颗粒、颗粒学与颗粒学会王体壮 中国颗粒学会秘书长14:20--14:30走进总部：马尔文帕纳科颗粒表征技术的发展马尔文帕纳科总部应用专家团队14:30--14:35走近用户：我眼中的颗粒表征技术马尔文帕纳科客户采访14:35--14:40互动抽奖 第一轮精美洗漱包14:40--15:15智能化多维度颗粒表征技术 助您轻松应对粒度分析挑战 -激光衍射和形貌图像篇黎小宇 马尔文帕纳科上海应用实验室主管、粒度仪产品线资深应用专家15:15--15:20互动抽奖 第二轮多功能支架/实验室粒度仪培训名额15:20--15:40智能化多维度颗粒表征技术 助您轻松应对粒度分析挑战 -动态光散射和纳米示踪篇韩佩韦 马尔文帕纳科生命科学业务发展部门经理、微量热技术产品经理15:40--15:55智能维保，专业赋能蔡厚安 马尔文帕纳科技术中心经理15:55--16:00互动抽奖 第三轮 & 结束语双肩包/Mastersizer维护包及Smart Manager 5折优惠券 /售后服务合同5折优惠券注：（实验室培训和售后优惠券的有效期截止今年底，如果中奖者是非马尔文帕纳科用户，可置换为WMF便携餐具套装）扫描二维码报名抢位直播时间：2024年6月26日14:00-16:00；直播平台：仪器信息网3i讲堂参与此次超级品牌日活动，您将看到马尔文帕纳科总部应用专家团队分享的颗粒表征技术发展历史和幕后故事，也将听到马尔文帕纳科用户对颗粒表征分析仪器的心声。在专题报告环节，您将看到智能化多维度颗粒表征技术如何助力客户轻松应对微米及纳米颗粒分析挑战。在客户服务环节，您将对马尔文帕纳科的智能维保服务有更全面的了解。活动中除了定制礼品的抽奖，您还有机会获得维护备件大礼包、实验室粒度仪培训名额、售后服务优惠券等多项独家福利。精彩内容，不容错过，期待您的参与。

2024年6月26日，“颗粒表征迈入智能时代——马尔文帕纳科超级品牌日”活动成功举办。本次活动由马尔文帕纳科和仪器信息网联合举办，吸引2300余人观看，引发热烈讨论与交流。王体壮分享《颗粒、颗粒学与颗粒学会》活动特别邀请中国颗粒学会秘书长王体壮分享《颗粒、颗粒学与颗粒学会》。王体壮以深入浅出的方式，从狭义和广义两个维度，全面而精准地阐述了“什么是颗粒”；系统介绍了颗粒及颗粒群的特性、颗粒学的研究内容，以及中国颗粒学会的服务产品。他总结到，颗粒学是一门融合数学、物理、化学及生物学基本原理的综合性学科，研究自然万物和精神社会当中物质、能量、信息之间的相互转换关系；颗粒学致力于实现多学科交叉、多领域融合，涵盖了物理世界、化工技术、生命科学乃至社会科学等多个领域，包含了所有科学的分支。因此，可以说颗粒源自宇宙，颗粒学连接生活。走进总部：马尔文帕纳科颗粒表征技术的发展随后，马尔文帕纳科总部应用专家团队带领用户一起探索马尔文帕纳科的历史、创新和应用，深入了解马尔文帕纳科颗粒表征技术的发展以及研究、开发和生产的幕后故事。马尔文颗粒表征技术发展历程始于1958年，1970年，公司更是推出了世界上首个数字相关器，使得亚微米颗粒的测量成为现实。随后，一系列经典的颗粒表征仪器型号相继问世，如Mastersizer激光粒度仪系列、Zetasizer纳米粒度仪系列、Spraytec喷雾液滴分析仪、Morphologi静态粒度粒形分析仪系列、OMNISEC凝胶渗透色谱，以及NanoSight Pro纳米颗粒跟踪分析仪等。这些技术的演进不仅彰显了马尔文帕纳科在颗粒表征领域的卓越实力，也为全球用户提供了更为精准、高效的颗粒表征解决方案。走近用户：我眼中的颗粒表征技术紧接着，来自各行各业的马尔文帕纳科用户分享了他们和颗粒表征技术之间的故事，并畅谈了对马尔文帕纳科仪器的使用心得和宝贵建议。 随着应用技术的不断发展，单一的颗粒表征方式往往难以应对日益复杂的样品测试需求，用户在测试过程中也常常为了方法开发或数据质量、异常信号等问题而苦恼，或是疲于应对大量重复测量工作，却得不到具有统计意义的测试结果。为帮助广大用户轻松应对这一挑战，马尔文帕纳科上海应用实验室主管、粒度仪产品线资深应用专家黎小宇，生命科学业务发展部门经理、微量热技术产品经理韩佩韦先后分享了马尔文帕纳科的智能化多维度颗粒表征技术。 黎小宇分享《智能化多维度颗粒表征技术 助您轻松应对粒度分析挑战 -激光衍射和形貌图像篇》马尔文帕纳科与时俱进，在自动化与智能化方向持续创新，通过标准化的测试流程和自动化助手，极大地简化了测试过程；借助先进的机器学习和AI技术，在软硬件功能方面实现了智能化升级，为操作人员提供了从方法建立、结果分析到质量判断的全流程支持，确保了测试结果的准确性。黎小宇深入介绍了马尔文帕纳科微米级别颗粒大小和形状的表征技术，包括Mastersizer 3000+激光衍射仪法粒度仪新品、M4智能自动图像分析仪以及Spraytec喷雾液滴分析仪在自动化和智能化方面的亮点。韩佩韦分享《智能化多维度颗粒表征技术 助您轻松应对粒度分析挑战 -动态光散射和纳米示踪篇》韩佩韦则重点介绍了马尔文帕纳科纳米级颗粒表征技术。常见的纳米颗粒分析方法包括显微镜法和光散射法，但它们各有优劣。为了弥补这些分析技术的局限，马尔文帕纳科创新地开发了原理互补技术，即DLS动态光散射技术和NTA纳米颗粒跟踪技术，能够互补地解决纳米粒径测试的问题，为产品开发、工艺开发、质量控制以及分析方法提供强有力的支持。以上两种技术与智能样品助手组成了马尔文帕纳科的纳米颗粒表征解决方案。该方案采用了先进的智能算法，帮助用户更好地进行数据甄别；同时，配备的智能硬件显著降低了用户错误使用的可能性；通过智能识别，它能够触及人眼和人工操作难以达到的领域；而智能控制则极大地提高了工作效率。蔡厚安分享《智能维保，专业赋能》最后，马尔文帕纳科技术中心经理蔡厚安介绍了一项智能维保服务——Smart Manager 睿联平台。 这是一款针对马尔文帕纳科设备的云服务产品，通过云服务器，该平台能够实时在线监测设备的软硬件工作状态，实现对用户设备软硬件异常状态的即时预警。一旦发现异常情况，平台将迅速主动联系客户，协助进行现场问题排查，有效避免设备停机，从而确保用户的设备运行周期达到最大化，显著提升设备的使用效率和稳定性。更多精彩详见下方专题：马尔文帕纳科超级品牌日专题页面