G5U Plus HiFi DNA Polymerase

G5U Plus High-Fidelity DNA Polymerase， 由HaiGene分子酶进化平台（in silico Design & invitro Evolution Workflow）筛选获得，

其融合Q5和Q5U DNA聚合酶的性能于一体，使其成为一酶多用的全能选手。G5U Plus DNA聚合酶来源于高保真DNA聚合酶，

并加入了增强的延伸结构，使其具有长片段扩增、高产、快速扩增能力。强压力筛选的外切活性区域，使其具有超保真性能

（与Q5同水平），底物活性中心的改造，使其具有dUTP渗入的能力和扩增含尿嘧啶模板的能力。 G5U Plus DNA聚合酶具有4kb/min以

上的延伸速度，可轻松扩增8kb的基因组DNA、20kb的λDNA。该酶具有5’-3’的聚合酶活性、强3’-5’的外切酶活产物为平末端。

许多具有高保真扩增性能的聚合酶来为 B型 DNA 聚合酶，在遇到 DNA 模板中的尿嘧啶碱基时停止复制。 G5U Plus删除了尿嘧啶结合域

，使其能够读取和扩增含有尿嘧啶的模板，该性能赋予其独特的“U” 特征。该特征有两个重要的应用方向：

（1）用于超保真扩增重亚硫酸氢盐转化、脱氨基、或受损 DNA；（2）在超保真扩增中搭配dUTP和热敏UDG，用于防止 PCR 体系中

携带污染。此外，也多用于USER 克隆。

HotStart G5U Plus DNA聚合酶是具有热启动功能的版本，由独特适配体封闭酶活性中心，在反应结束恢复室温后，适配体可逆的重新

封闭聚合酶。其热启动功能确保在25℃以下无活性，高于50℃后迅速恢复100%活性。热启动功能便于室温建立反应体系、

有效的降低低温下的非特异扩增、提高多重超保真扩增效果，使超保真扩增达到最佳。

主要特征

超保真扩增：与Q5 DNA聚合酶同水平的保真性能，是载体构建、点突变、NGS模板扩增、基因合成的最佳用酶。

识别dUTP底物：能够读取和扩增含有尿嘧啶的模板，具有“U” 特征。

防污染扩增：在PCR扩增中可以使用dUTP完全替代dTTP，建立防污染高保真扩增。

快速扩增：具有4kb/min的扩增能力。

长片段扩增：质粒、λDNA 等简单模板>20 kb，复杂基因组模板>8 kb。

单位定义

一个活力单位即在72°C条件下，30分钟内催化10 nmol dNTP的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量。

储存

（1）酶储存液：10mM Tris-HCl，pH7.6，100mM NaCl，0.05% Tween20, 1mM DTT，0.5mM EDTA，50%甘油。

（2）置于-20°C以下，可保存3年。

应用实例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物组进行的LAMP测试。Bst4.0 SYBR Green试剂可在标准定量PCR仪或恒温荧光仪上进行反应。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应25min的检测结果，可以看到检测反应<20min(达平台期)。

应用实例2： 用 LP1002引物组进行的LAMP测试。OG变色法为终点变色策略，在反应结束后，倒置反应管，溶解管盖上染料后，阳性样本呈现出醒目的绿色，阴性表现出橙色，区分明显。且该方法不受样本类型限制，杂质耐受性很好。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应20min后检测结果。

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应用实例3：采用荧光酶活测定法在30℃和60℃条件下测定HotStart Bst 4.2，结果显示与未加入Aptamer的对照比较来看。HotStart Bst 4.2在30℃条件下酶活几乎无活性，而60℃条件下1min内酶活完全释放，恢复100%活性