RCA滚环扩增试剂盒

滚环扩增（rolling circle amplification，RCA）是近几年发展起来的一种核酸恒温扩增方法。以环状DNA为模板，通过一个短的DNA引物（与部分环状模板互补），在phi29 DNA 聚合酶催化下将dNTPs转变成单链DNA，此单链DNA包含成百上千个重复的模板互补片段。这种方法不仅可以直接扩增DNA和RNA，还可以实现对靶核酸的信号放大，灵敏度达到一个拷贝的核酸分子，因此在核酸检测中具有很大的应用价值和潜力。 因其高灵敏度、高特异性和可操作性，RCA技术在基础研究、实际检测、医疗诊断及纳米材料等方面都有很好的应用，结合细胞原位检测、单核苷酸多态性SNPs，蛋白质分析、免疫芯片和全基因组的扩增等研究都能发挥其巨大的优势。

本滚环扩增试剂盒配备的phi29 DNA聚合酶具有链置换和连续合成特性，可连续合成长达70kb的DNA片段。另外，该酶具有3’→5’外切酶校读功能，合成的DNA片段保真性高。试剂盒配备的Random Hexamers为6碱基随机引物可对目标分子进行指数放大（通常放大100~10000倍）。

储存

-20℃可保存3年，避免反复冻融。

应用实例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物组进行的LAMP测试。Bst4.0 SYBR Green试剂可在标准定量PCR仪或恒温荧光仪上进行反应。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应25min的检测结果，可以看到检测反应<20min(达平台期)。

应用实例2： 用 LP1002引物组进行的LAMP测试。OG变色法为终点变色策略，在反应结束后，倒置反应管，溶解管盖上染料后，阳性样本呈现出醒目的绿色，阴性表现出橙色，区分明显。且该方法不受样本类型限制，杂质耐受性很好。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应20min后检测结果。

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应用实例3：采用荧光酶活测定法在30℃和60℃条件下测定HotStart Bst 4.2，结果显示与未加入Aptamer的对照比较来看。HotStart Bst 4.2在30℃条件下酶活几乎无活性，而60℃条件下1min内酶活完全释放，恢复100%活性