生金色链霉菌（金霉素链霉菌）的培养方法与注意事项！ 生金（金霉素）链霉菌的孢子丝柔曲，初旋至松敞螺旋形。孢子卵圆形至柱形，表面光滑。主要用于产生氯四环素，金霉素，四环素。 一、菌种简介平台编号：Bio-01680提供形式 冻干物拉丁属名：Streptomyces Aureofaciens中文译名：生金色链霉菌（金霉素链霉菌）拉丁学名：Streptomyces aureofaciens原始编号：A-249菌株来源：←中国医学科学院抗生素研究所直接来源国家：中国保藏时间：12/1/1959其他保藏编号：=NRRL 2209 =JCM 4008 =ATCC 10762 =DSM 40127 =ATCC 10762 =ATCC 23884 =CBS 664.68 =IFO 12594 =IFO 128生物危害：四类模式菌株：模式菌株菌株用途：金霉素；模式菌株；Produces aureomycin , chlortetracycline, tetracycline培养温度：28℃培养基：0038    用途：模式菌株；产生氯四环素，金霉素，四环素注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、培养基ISP-2 培养基酵母提取物 4.0 g 麦芽提取物 10.0 g 葡萄糖 4.0 g 琼脂 15.0 g蒸馏水 1.0 L PH 7.3 三、保藏条件斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存。  四、培养方法1、平板划线分离法:把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环圈在平板培养基表面,通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞,经培养后生长繁殖成单菌落。2、稀释涂布平板法将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养,在稀释度足够高的菌液里,聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞,从而能在培养基表面形成单个菌落。上述两种方法虽然都可以实现观察菌落特征的目的,但平板划线分离法不能对菌落计数,而稀释涂布平板法培养过程复杂,对平板的要求比较高,可参照以下步骤:a、制备平板培养基将氯化钠蔗糖琼脂培养基加热溶化并冷却至65℃,向氯化钠蔗糖琼脂培养基中加入克林霉素溶液3~5ml并混合均匀,然后取20ml混合均匀的培养基溶液倒入培养皿,轻轻摇动培养皿,使培养基溶液均匀分布在培养皿底部,待培养基溶液凝固后即得平板培养基。b、制备活性污泥混合液称取活性污泥土样15g,放入盛100ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶中,振摇15~20min混合均匀,用一支1ml无菌吸管从中吸取1ml土壤悬液加入盛有9ml无菌水的大试管中充分混匀,制成活性污泥混合液。c、培养基涂布从活性污泥混合液中吸取0.2ml,滴在平板培养基表面的中央位置,用无菌玻璃涂棒将活性污泥混合液沿同心圆方向轻轻地向外扩展,使之分布均匀。 五、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、菌种恢复培养前，建议将收到的菌种安瓿保存在 6-10°C 的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，如在说明建议的培养时间还未长起来，请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间，直至菌种培养完成，有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长，一般来说菌种培养稳定后才能用于您的后续实验。3、初次使用时请严格按照本说明书推荐条件和操作步骤进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、恢复培养厌氧菌时，在操作过程中应严格控制厌氧条件：制作培养基时，应使用厌氧螺口试管，并利用高纯氮气去除试管和培养基中的氧气，使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、与菌种相关的其它信息请参阅微生物菌种查询网网站(www.biobw.org）。 六、保存方法1、传代保存法：培养基的浓度不宜过高,营养成分不宜过于丰富,尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种,则应在培养基中添加少量碳酸钙。2、液体石蜡覆盖保存法：该法较前一种方法保存菌种的时间更长,适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。3、悬液保存法：①蒸馏水保存法：适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌,将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。②糖液保存法：适用于酵母菌,如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗处保存,可长达10年。除此之外,也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。4、载体保存法：①土壤保存法;②砂土保存法;③硅胶保存法;④磁珠保存法;⑤麸皮保存法;⑥纸片(滤纸)保存法。5、常用的冷冻保存法：①低温冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃):低温冷冻保存时使用螺旋口试管较为方便,也可在棉塞试管外包裹塑料薄膜。保存时菌液加量不宜过多,有些可添加保护剂。此外,也可用φ5mm的玻璃珠来吸附菌液,然后把玻璃珠置于塑料容器内,再放入低温冰箱内进行保存的。②干冰保存法(-70℃左右):即将菌种管插入干冰内,再置于冰箱内进行冷冻保存。③液氮保存法(-196℃):是适用范围最广的微生物保存法。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                    HS683人脑胶质瘤细胞的培养方式与质量检测！ 一、细胞简介平台编号：Bio-51606细胞信息：HS683细胞规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶英文名称：HS683中文名称：人脑胶质瘤细胞物种：人组织：脑细胞形态：成纤维细胞样，贴壁生长细胞描述：该细胞源自76岁白人男性的左颞叶侧胶质瘤组织，有微绒毛，无桥粒。Amelogenin：X，Y；CSF1PO：9，13；D13S317：8，12；D16S539：9，10；D18S51：12，14；D19S433：14；D21S11：27，33.2；D2S1338：18，20；D3S1358：14，16；D5S818：11，12；D7S820：11；D8S1179：12，13；FGA：21.2，22；TH01：6，8；TPOX：8，11；vWA：18，20；规格：T25方瓶或1ml冻存管细胞数量：1×10^6组织来源：人脑胶质瘤生长方式：贴壁生长细胞形态：成纤维细胞样培养液：H-DMEM+10%FBS+1%P/S培养条件：37℃，5%CO2运输方式：常温运输（T25方瓶）或干冰运输（冻存管）用途：STR鉴定正确注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、培养方式1、培养基：HS683 专用培养基【 DMEM 高糖；10%FBS；1%双抗】2、培养环境：37℃、5%CO23、传代培养：当细胞密度达到 80%以上时，可以进行传代，传代比例 1:2~1:4，1~2 天传代一次。（1）用巴氏滴管吸出细胞培养瓶内的培养基；（2）加入 1ml 的 PBS，轻轻晃动润洗细胞，然后将 PBS 吸出；（3）加入 1ml 的胰酶，轻轻晃动浸润细胞，然后放在培养箱内消化 1~3 分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间）；（4）在显微镜下观察，发现细胞变圆，轻轻晃动细胞便开始脱落，这时可以终止消化；（5）加入 4ml 含血清的完全培养基，用移液器吹打细胞，使细胞脱落并形成单细胞悬液；（6）将细胞悬液转移到 15ml 的离心管，1000rpm 离心 5min；（7）离心完成后吸出上清丢弃，再用移液管取 10ml 完全培养基将细胞重悬，轻轻吹打混匀；（8）将细胞悬液分装到两个新的 T25 细胞培养瓶中，放在 37℃的 CO2培养箱中进行培养。4、细胞冻存：使用本公司无血清冻存液可直接将细胞冻存在-80℃（无需使用程序降温盒），细胞在-80℃可保存 3 年，长期保存建议使用液氮罐。5、冷冻复苏细胞：将含有 1mL 细胞冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入 5mL 培养基混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 5 分钟，弃去上清液，补加 4-6mL 完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入 6cm 皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。 三、质量检测1、STR 鉴定：正确2、细菌检测：阴性3、支原体检测：阴性 四、售后服务1、收到细胞后请及时查看瓶身有无破损，是否漏液等现象；2、用 75%的酒精喷洒培养瓶之后，放在培养箱中静置 2-4 小时以稳定细胞状态，然后用显微镜观察细胞状态并拍照记录，40 倍和 100 倍照片各一张（细胞在运输过程中存在少量的漂浮或者死亡属于正常现象）；3、原瓶中的培养基在细胞传代之后不建议继续使用，请配制新的完全培养基或者购买本公司的专用培养基；4、建议定期对细胞进行拍照记录；收到细胞后 7 天内，对细胞生长状态有任何问题，可申请售后。5、强烈建议：在第一次细胞传代时，使用附赠或者购买本公司配置的细胞培养瓶将细胞按照 1:2 进行传代，可以对比测试自配的培养基是否可以养好细胞。如果有以上任何问题，请及时联系本公司。 五、注意事项1、本产品仅限于科研用途，若用于临床诊断、治疗等其它用途，本公司概不负责！2、若使用本产品发表科学论文，请标注：HS683 由北京百欧博伟生物技术有限公司（biobw）提供。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                 类球红细菌（球形红杆菌）单层冻干管打管说明！ 类球红细菌是中国农业科学网收藏的一种非模式菌株。球形（0.7～4µm）,在含糖培养基中为卵形，2～2.5×2.5～3.5µm。光能异养菌，兼性好氧，厌氧条件下光照培养，在黑暗中好氧生长。厌氧液体培养物最初为淡污绿棕色，后为暗棕色。主要用于分类；研究；教学。 一、菌种简介平台编号：Bio-53131规格：冻干物拉丁属名：Cereibacter Sphaeroides菌株名称：类球红细菌（球形红杆菌）其他编号：ATCC49419培养基编号：133、厌氧培养温度：25-30℃液体厌氧,在40瓦钨丝灯光照下培养培养时间：5-7 天用途：降低糖蜜废水注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、储存条件冻干物请置于 2-8℃保存，培养完成后应放光照保存，放置于阳光可照的窗台上。  三、培养条件112 Van Niel's Yeast AgarK2HPO4 1.0 g MgSO4 0.5 g酵母提取物 10.0 g 琼脂 20.0 g蒸馏水 1000 ml pH 7.0-7.2. 121℃高压灭菌 15 分钟 四、注意事项1）干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取 0.3ml 的培养液（即以上建议的配方不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解，吸入全部菌悬液转接在 10-20ml密封性较好的螺口管中，培养液必须加满至整支管中，每天转动位置使光照均匀，但不能强烈摇动，；如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；2）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；3）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；4）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；5）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。 五、单层冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。2、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在 4-10℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥并抽真空保存的，开启后必须一次使用完，不能留菌粉下次使用；另外，安瓿管里大部分是用牛奶作为保护剂，里面菌体为少数，复苏时要全部菌悬液接在新鲜培养基上，否则可能造成复苏不成功；3、冻干菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，有时延滞期较长，如在说明书建议的培养时间还未长起来，请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间，直至菌种培养完成；有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长，一般来说菌种稳定后才能用于您的后续实验。暂不启开的安瓿管应于 4℃中保藏（特殊除外）。4、冻干管打开后需一次用完，不能留存。5、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   人胰腺癌细胞的培养操作与应用及研究动态！ 一、背景 人胰腺癌细胞来自一个胰腺癌病人的腹水中的细胞移植到裸鼠后建立了这个细胞株。在本库通过支原体检测。人胰腺癌细胞通过STR检测。可以表达CEA，人胰腺相关抗原、人胰腺特异性抗原和黏蛋白。 二、人胰腺癌细胞培养操作 1）复苏人胰腺癌细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2）人胰腺癌细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 2.加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。 4.将细胞悬液按1：2比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为类； 1.人胰腺癌细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入1ml含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 2.4 min 1000rpm离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存1ml细胞悬液，注意冻存管做好标识。 3.将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 三、应用 人胰腺癌细胞可以用于SPINK1慢病毒过表达载体和其稳转AsPC-1细胞株的构建及其对人胰腺癌细胞增殖的影响： 制作包含人SPINK1基因的完整编码区序列的慢病毒过表达载体,用此载体感染人胰腺癌AsPC-1细胞,并建立SPINK1过表达的稳转AsPC-1细胞株,以此来探索此基因在胰腺癌细胞中是否具有促进肿瘤细胞增殖和克隆形成的能力,并为今后进一步的研究奠定基础。 方法：首先构建SPINK1慢病毒过表达载体,包装病毒并产生病毒颗粒。应用PCR方法扩增SPINK1基因的全部编码序列,经琼脂糖凝胶电泳鉴定正确后切胶回收DNA,将其与慢病毒载体(pLenti-CMV-2A-GFP)同时用限制性内切酶酶切后,用T4 DNA连接酶进行连接,将构建好的人SPINK1慢病毒过表达载体(pLenti-CMV-hSPINK1-2A-GFP)进行转化,提取DNA进行酶切后,通过琼脂糖凝胶电泳和基因测序进行鉴定。 用已鉴定正确的SPINK1慢病毒过表达载体和慢病毒包装混合质粒共转染293T细胞产生病毒颗粒,过滤并高速离心浓缩病毒颗粒。然后用此病毒颗粒感染并建立SPINK1过表达稳转AsPC-1细胞株,使用嘌呤霉素(2ug/ml)药物筛选病毒感染后的阳性克隆并扩增,培养成SPINK1过表达稳转AsPC-1细胞株。 通过实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和Western Blot的方法检测病毒感染后SPINK1基因在mRNA水平与蛋白水平上的表达变化。 最后用CCK-8法、台盼蓝染色法、流式细胞仪检测SPINK1基因对人胰腺癌AsPC-1细胞增殖能力的影响,并通过平板细胞克隆形成实验来检测SPINK1基因对人胰腺癌AsPC-1细胞克隆形成能力的影响。 结果：经酶切、琼脂糖凝胶电泳实验和基因测序鉴定,证实SPINK1慢病毒过表达载体(pLenti-CMV-h SPINK1-2A-GFP)构建正确。SPINK1慢病毒过表达载体和慢病毒包装混合质粒共转染293T细胞后,在荧光显微镜下可观察到许多绿色荧光点,并伴有漂浮细胞和破裂细胞,感染效率可达90%。 用慢病毒颗粒感染AsPC-1细胞,经嘌呤霉素药物筛选出阳性克隆,将阳性克隆连续培养扩增数代后经Real-time PCR和Western Blot的方法检测,SPINK1基因可在AsPC-1细胞中稳定高效地表达,与阴性对照相比病毒感染后的SPINK1基因在mRNA水平与蛋白水平上的表达量分别上调了25倍和5倍。 在CCK-8实验中,SPINK1过表达AsPC-1细胞的光密度值为1.4 OD,对照组细胞的光密度值为1.0 OD,差异有统计学意义(P 流式细胞仪检测细胞周期的实验中,SPINK1过表达AsPC-1细胞处于DNA合成期(S期)和DNA合成后期/分裂期(G2/M期)的DNA百分比为38.89%,与其对照的亲本AsPC-1细胞百分比为22.02%,差异有统计学意义(P 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                 沙福芽孢杆菌的培养方法与使用范围及应用前景！ 沙福芽孢杆菌是Bacillus属的微生物，原产地为中国。该菌株为杆状，以二分裂方式增殖。主要用途为分类；研究；教学及生物防治花生线虫病。 一、菌种简介平台编号：Bio-60109提供形式：冻干物拉丁属名：Bacillus Safensis中文名称：沙福芽孢杆菌属名：Bacillus种名加词：safensis来源历史：←天津市工业微生物研究所(1.01552)收藏时间：2007.12.28资源归类编码：15131311101模式菌株：非模式菌株主要用途：研究；生产具体用途：生物防治花生线虫病。特征特性：G+，细胞呈杆状；芽孢椭圆形，中生到次端生，壁薄；肉汁琼脂平板培养菌落光滑，薄，扁平，蔓延，成树状，半透明；明胶液化，不可以水解淀粉，不还原硝酸盐，VP实验阳性。    生物危害程度：四类致病对象：无培养基：蛋白胨 5.0g，牛肉浸取物 3.0g，NaCl 5.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH7.0。[注] 培养芽孢杆菌时加入5mg MnSO4·H2O，则有利于产生芽孢。培养温度：30℃资源保藏类型：培养物保存方法：真空冷冻干燥法实物状态：有实物共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享源数据主键：21743用途：研究；生产；生物防治花生线虫病。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、形态特征沙福芽孢杆菌，为杆状，以二分裂方式增殖。菌落为白色，不规则形状，边缘不整齐，扁平，光滑，有光泽，黏稠。产芽孢。无蛋白水解酶，可分泌淀粉酶，接触酶，氧化酶。向培养基中加入锰离子培养后菌落和平板均变褐色。  三、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯 菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在上延续使用半年左右。6、如果有些菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。 四、使用范围(1)合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚,组成成分精确,重复性强,而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏(Czapek)培养基等。 (2)天然培养基。由天然物质制成,如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤,前者用于培养霉菌,后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定,也难以确定,但配制方便,营养丰富,培养效果好,所以常被采用。 (3)半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类,或在合成培养基的基础上添加某些天然成分,如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。 五、应用前景沙福芽孢杆菌(bacillus safensis)是芽孢杆菌的一种，革兰氏染色呈阳性，嗜温异养。最早是在2006年喷气推进实验室中的航天器和组装设施表面分离获得的。之后，沙福芽孢杆菌被陆续发掘出来，并被证明具有多种功能，应用前景广阔。1、首先，沙福芽孢杆菌具有强抗逆性。有研究将48种菌株送往国际空间站，仅沙福芽孢杆菌jpl-merta-8-2在太空中的生长状况比在地球上的生长状况好60％。沙福芽孢杆菌对土壤中的重金属离子也有很强的代谢作用。有研究从锰矿土壤中分离得到一株耐锰菌b.safensis s2、其耐锰能力高达2200mg/l，且其能量代谢水平随着作用时间的延长和锰离子浓度的提高而上升，从而产生大量的腺嘌呤核苷三磷酸(atp)以应对锰的毒害作用。也有研究发现了一株产吲哚乙酸(iaa)的抗镍(ni)和铬(cd)的b.safensis n4菌株，该菌株与生物炭联合对ni和cd复合污染的土壤具有较好的修复效果，为利用产iaa菌修复重金属污染土壤提供了参考。沙福芽孢杆菌对油脂也有很强的降解效果。有研究从坎波斯盆地的油田中分离出一种b.safensis cfa-06菌株，该菌株能够降解芳族化合物和石油芳烃馏分，经鉴定该菌能产生过氧化氢酶(bspmo)和一种新型氧化还原酶(bscat)。3、也有研究通过16s rdna测序鉴定出一株在有机溶剂中能稳定产脂肪酶的菌株b.safensis dvl-43，该菌株在酯化、酯交换和生物转化反应中具有很高的价值。沙福芽孢杆菌也可以作为植物根际菌减轻非生物胁迫，从而促进植物生长，在可持续农业中具有很深的应用潜力。有研究从小麦根际和白茅根际分离得到的一种b.safensis菌株，该菌株可促进6个小麦品种的根系生长，并可提高地上部的生物量、株高、产量和叶绿素含量，还可以使小麦植株能更有效地抵御水分胁迫，增加植株中的相对含水量，并提高抗氧化反应。4、沙福芽孢杆菌还具有较强的抗菌活性，应用前景广泛。有研究发现，从甜叶菊根际土壤中分离得到的b.safensis stjp(naimcc-b-02323)菌株有较强的生物防治活性，可产生具有抗真菌功能的挥发性有机化合物类胞外代谢产物，对植物病原菌alternaria alternata的菌丝生长和分生孢子的形成起到抑制作用，具有开发成绿色生物杀菌剂的潜力。5、也有研究从表面灭菌的绿豆种子中分离到一株新菌株b.safensis c3，该菌株可产生大小约为3.3kda的多肽，对大肠杆菌、地毯草黄单胞菌和丁香假单胞菌具有抗菌活性，且该多肽对羧肽酶y和胞内蛋白酶gluc的水解具有抗性，表明该多肽是细菌素as-48的一种改良变种，为开发用于治疗的新型细菌素提供了新途径。还有研究从橄榄油污染的土壤中分离得到b.safensis f4菌株，该菌株可生产脂肽类生物表面活性剂，经最小抑菌浓度(mic)测定表明其对多种病原菌均具有重要的抑菌活性，特别是对形成生物膜的表皮葡萄球菌s61菌株具有抗粘附活性，mic为6.25mg/ml，抗粘附活性超过80％，在预防传染病方面有很好的应用前景。6、还有研究发现b.safensis能有效减少新型隐球菌抗氧化黑色素的生成和抗吞噬多糖荚膜的产生，降低新型隐球菌的毒力，还能够抑制新型隐球菌生物膜的形成，但对已经形成的生物膜的抑制作用不明显，还可以使白色念珠菌的细胞壁降解。也有研究发现b.safensis b21菌株可产生的抗真菌化合物伊枯草菌素iturin a2和iturin a6，并可以通过破坏菌丝膜的通透性来抑制稻瘟病菌菌丝的生长，可开发为用于稻瘟病生物防治的生物农药。沙福芽孢杆菌还具有抗癌潜力。有研究发现b.safensis rb-5菌株可产出一种rna酶，该酶具有二聚体结构和良好的结构稳定性，且受常见盐离子的抑制较低，在37℃时有合理的半衰期，具有较低的溶血活性，能强烈抑制许多人体转化细胞的增殖，具有开发成新型抗癌药物的潜力。同时，b.safensis f4菌株生产的脂肽类生物表面活性剂对t47d乳腺癌细胞和b16f10小鼠黑色素瘤细胞均具有抗肿瘤活性。此外，来自智利北部阿塔卡马沙漠土壤的b.safensis rp10的基因组分析表明，这种细菌适应于高重金属、高盐条件、低碳和低能源来源的土壤中生活，揭示了沙福芽孢杆菌在改善重金属污染和助植物抗环境胁迫方面均具有较大的应用潜力。7、但由于沙福芽孢杆菌发现得较晚，目前对诱变后的沙福芽孢杆菌研究得较少。有研究通过紫外照射分离出了一株突变体b.safensis lau13，该突变体能够产生高活性的角蛋白酶，该角蛋白酶可以在30℃下6天完全降解整只鸡的羽毛，且对皮肤不造成任何损伤。8、沙福芽孢杆菌有着丰富的多样性，其中不乏具有潜在开发价值的菌株，基于现状，开发具有新功能的沙福芽孢杆菌具有非常重要的应用价值和现实意义。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                     宋氏志贺氏菌——用于分析检测与质量控制  宋氏志贺氏菌，G-杆菌，无动力，发酵葡萄糖产酸不产气，不产H2S；发酵甘露醇、不发酵水杨苷、肌醇、侧金盏花醇；吲哚阴性，鸟氨酸脱羧酶阳性。主要用于分析检测与质量控制。 一、菌种简介平台编号：Bio-60036提供形式：冻干物拉丁属名：Shigella Sonnei中文名称：宋氏志贺氏菌属名：Shigella种名加词：sonnei其它中心编号：=ATCC 25931来源历史：←中国检验检疫科学研究院（11305）←内蒙古出入境检验检疫局收藏时间：2008.1.5资源归类编码：15131122115模式菌株：非模式菌株主要用途：研究；分析检测具体用途：研究、质量控制特征特性：G-杆菌，无动力，发酵葡萄糖产酸不产气，不产H2S；发酵甘露醇、不发酵水杨苷、肌醇、侧金盏花醇；吲哚阴性，鸟氨酸脱羧酶阳性。兼性厌氧，最适pH7.4~7.6。    生物危害程度：三类致病对象：人畜共患致病名称：肠炎传播途径：经口、消化道培养基：蛋白胨 5.0g，牛肉浸取物 3.0g，NaCl 5.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH7.0。[注] 培养芽孢杆菌时加入5mg MnSO4·H2O，则有利于产生芽孢。培养温度：37℃资源保藏类型：培养物保存方法：真空冷冻干燥法实物状态：有实物共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享源数据主键：21679用途：研究；分析检测；研究、质量控制注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、培养基营养肉汁琼脂培养基蛋白胨 10.0g 牛肉提取物 3.0g NACL 5.0g 琼脂 15.0g蒸馏水 1.0L PH 7.0 三、保藏条件斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存。  四、使用范围(1)合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚,酿酒酵母菌组成成分精确,重复性强,而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏(Czapek)培养基等。 (2)天然培养基。由天然物质制成,如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤,前者用于培养霉菌,后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定,也难以确定,但配制方便,营养丰富,培养效果好,所以常被采用。 (3)半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类,或在合成培养基的基础上添加某些天然成分,如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。 五、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、菌种恢复培养前，建议将收到的菌种安瓿保存在 6-10°C 的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，如在说明建议的培养时间还未长起来，请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间，直至菌种培养完成，有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长，一般来说菌种培养稳定后才能用于您的后续实验。3、初次使用时请严格按照本说明书推荐条件和操作步骤进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、恢复培养厌氧菌时，在操作过程中应严格控制厌氧条件：制作培养基时，应使用厌氧螺口试管，并利用高纯氮气去除试管和培养基中的氧气，使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、与菌种相关的其它信息请参阅微生物菌种查询网网站。 六、冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂（应避免过多水蒸气影响菌种的复苏），用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。2、用无菌吸管吸取 0.3ml（建议勿超过 0.5ml）适宜的液体培养基(不添加琼脂)，滴入管内，轻轻振荡，待安瓿管内的菌体溶解呈悬浮状，在用无菌吸管吸取全部菌悬液接在 1-2 支建议的培养基试管中（不超过 2 支，单位所提供的培养基配方中有琼脂，请务必做成试管斜面，配方中没有琼脂，试管中液体培养基不超过 5ml），并在建议的条件下静止培养。3、冻干管打开后需一次用完，不能留存。另外，安瓿管内大部分是用牛奶做保护剂，里面菌体为少数，复苏时要全部菌悬液接在新鲜培养基上，否则可能造成复苏不成功。4、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。5、打管操作应在烧杯或托盘上方进行，用完冻干管应灭菌处理后丢弃。6、菌种复苏时，请务必记录好菌种的编号和制备批号，否则不予售后。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                 人食管鳞癌细胞的背景与应用及培养操作步骤！ 一、背景 人食管鳞癌细胞从一位49岁，已经接受过放疗的日本女性患者的颈部食管中分离建立的低分化食管鳞癌。癌组织已侵袭至相邻组织。文献报道细胞携带有增多的癌基因C-ERB-B(8倍)和CYCLIN D1(4倍)并且细胞在裸鼠中能够成瘤。 人食管鳞癌细胞系集落不规则没有显著角质化的侵染性鳞状细胞癌。单层培养的细胞间可以观察到带状连接，也注意到有细胞质张力丝。1970年发现支原体污染并去除。肿瘤坏死因子（TNF）α抑制ME-180的生长。这株细胞含有人乳头瘤病毒（HPV）DNA，与HPV-39的同源性高于HPV-18。 二、人食管鳞癌细胞培养操作 1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 2.加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。 4.将细胞悬液按1：2比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为类； 1.细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入1ml含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 2.4 min 1000rpm离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存1ml细胞悬液，注意冻存管做好标识。 3.将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 三、应用 人食管鳞癌细胞可以用于ZNF382抑制人食管鳞癌细胞生长与转移的功能与机制研究： 研究ZNF382在人食管鳞癌中的表观遗传学调控及抑制人食管鳞癌细胞生长与转移的功能与分子机制研究。 方法和结果：实时荧光定量PCR检测15对人食管鳞癌组织和癌旁组织中ZNF382的差异性表达,结果显示ZNF382在人食管鳞癌组织中的表达水平显著低于癌旁组织(p MSP分别检测ZNF382在114例人食管鳞癌组织与3例正常食管上皮组织中的甲基化状态,发现87%的食管鳞癌组织发生了启动子区的甲基化,而在正常食管上皮组织中甲基化发生率只有33%。同时TCGA在线数据库分析183例食管鳞癌患者ZNF382表达水平差异与食管鳞癌患者5年总生存的相关性,发现ZNF382表达水平较高的患者,其5年总生存期较长。 进而通过一系列生物学功能实验分别在食管鳞癌细胞中外源性过表达ZNF382及敲低内源性ZNF382表达后,观察其对食管鳞癌细胞增殖,凋亡以及转移的作用。最后为进一步明确ZNF382在食管鳞癌中发挥细胞功能的具体分子机制,送检了RNA-sequence测序并结合GEO数据库的CHIP-Seq测序结果,联合生物信息学分析,RT-PCR验证,Western blot及双荧光素酶报告实验得出结论,ZNF382作为19q13.12的新抑癌基因通过直接结合到DVL2和FZD1基因的启动子区抑制Wnt/β-catenin信号通路活性从而在人食管鳞癌细胞中发挥抑癌功能。 结论：ZNF382是位于19q13.12的新抑癌基因,直接结合到FZD1和DVL2基因的启动子区抑制Wnt/β-catenin通路活性从而在人食管鳞癌细胞中发挥抑癌作用。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                  野油菜黄单孢菌的特点与优势及微生物培养方法！ 野油菜黄单孢菌是Xanthomonas属的微生物，原产地为中国。主要用途为研究；生产，具体用途为发酵生产胞外多糖黄原胶，可广泛应用于多种工业中。 一、菌种简介平台编号：Bio-58447提供形式：冻干物拉丁属名：Xanthomonas Campestris中文名称：野油菜黄单孢菌属名：Xanthomonas种名加词：campestris其它中心编号：NRRL B-1459来源历史：←上海市工业微生物研究所(B227) ←美国NRRL收藏时间：2005.12.30资源归类编码：15131127101模式菌株：非模式菌株主要用途：研究；生产特征特性：产黄原胶。    生物危害程度：四类致病对象：无培养基：5°Bé麦芽汁 1.0L，琼脂 15.0g，自然pH。培养温度：28℃资源保藏类型：培养物保存方法：真空冷冻干燥法实物状态：有实物共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享源数据主键：20183用途：研究；生产；注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、形态特征野油菜黄单孢菌，G染色阴性，直杆， 0.20.6×0.61.8μm，极生单鞭毛，在含糖的琼脂培养基上菌落黄色、光滑、粘性，其色素为溴化芳基多烯。氧化酶阴性、接触酶阳性，好氧可利用葡萄糖、甘露糖、半乳糖、海藻糖、果糖、纤维二糖等产酸，可利用乙酸钠、柠檬酸、苹果酸等有机酸，可水解明胶、淀。  三、产品特点1、菌种功能明确、品种稳定、应用;2、产品仅限用于科研本品芽孢含量高,稳定性好、耐高温和挤压;3、繁殖能力快、定植能力强、易存活、耐受低pH值环境;4、复活迅速,可在短期内成为优势种群;5、本品安全高效、无抗药性、不污染环境;6、对多数抗生素不敏感,可与低浓度抗革兰氏阴性菌抗生素同时使用。 四、产品优势1、产品质量稳定,是为科研和 提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。2、国内首创封闭管包装,冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法,保证菌种的复苏质量。3、严格的质检程序,确保产品质量的稳定性。4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业,疾控中心、质检局、出入境、药检局等等,得到广泛好评。 五、菌种培养方法1、孢子制备⑴ 放线菌孢子的制备一般采用琼脂斜面培养基,培养基中含有一些适合产孢子的营养成分,如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。碳源和氮源不要太丰富(碳源约为1%,氮源不超过0.5%),碳源丰富容易造成生理酸性的营养环境,不利于放线菌孢子的形成,氮源丰富则有利于菌丝繁殖而不利于孢子形成。一般情况下,干燥和限制营养可直接或间接诱导孢子形成。放线菌斜面的培养温度大多数为28 ℃,少数为37 ℃,培养时间为5~14天。⑵ 产品仅限用于科研霉菌孢子的制备霉菌的孢子培养,一般以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基。这是由于这些农产品中的营养成分较适合霉菌的孢子繁殖,而且这类培养基的表面积较大,可获得大量的孢子。霉菌的培养一般为25~28 ℃,培养时间为4~14天。2、种子制备⑴ 摇瓶种子制备摇瓶种子进罐,常采用母瓶、子瓶两级培养,有时母瓶种子也可以直接进罐。种子培养基要求比较丰富和完全,并易被菌体分解利用,氮源丰富有利于菌丝生长。原则上各种营养成分不宜过浓,子瓶培养基浓度比母瓶略高,更接近种子罐的培养基配方。⑵ 种子罐种子制备种子罐种子制备的工艺过程,因菌种不同而异,一般可分为一级种子、二级种子和三级种子的制备。孢子(或摇瓶菌丝)被接入到体积较小的种子罐中,经培养后形成大量的菌丝,这样的种子称为一级种子,把一级种子转入发酵罐内发酵,称为二级发酵。如果将一级种子接入体积较大的种子罐内,经过培养形成更多的菌丝,这样制备的种子称为二级种子,将二级种子转入发酵罐内发酵,称为三级发酵。同样道理,使用三级种子的发酵,称为四级发酵。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                   大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞的处理方法与培养步骤！  一、产品信息平台编号：Bio-131253规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶细胞信息：PC-12低分化+GFP细胞名称：大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞介绍该细胞系由发表该细胞文章的第一作者命名，这个细胞又叫Lieming Xu-2，这是一个永生化的细胞。该细胞通过慢病毒转染的方式携带GFP基因。 三、细胞特性1）来源：肝2）形态：星状细胞，贴壁生长3）含量：>1x106  细胞数4）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装5) 用途：仅供科研使用。 四、细胞筛选该细胞为稳定转染GFP的细胞，随细胞传代次数的增加，其GFP荧光强度会逐渐减弱。若实验要求需要维持荧光强度，可以加入嘌呤霉素进行再次筛选。建议收到细胞后至少传3代，冻存留种后再进行筛选。初次进行细胞筛选时，建议加入终浓度为1ug/ml嘌呤霉素的完全培养基维持培养，若无细胞漂浮或者漂浮较少，即可更换为含2ug/ml嘌呤霉素的完全培养基继续筛选，以此类推，至最高药物浓度为5ug/ml。若筛选过程中，漂浮细胞大于60%，则停止筛选，换成正常培养基培养，至细胞密度约80%，可继续加入同浓度嘌呤霉素进行筛选。当加入5ug/ml嘌呤霉素时细胞正常增殖，可停止筛选，用不含药完全培养基正常培养。 五、细胞的运输和保存干冰运输及复苏好存活细胞（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。 六、细胞接收后的处理方法1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代。 七、细胞培养步骤1、培养基及培养冻存条件准备1）准备1640 培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。2、细胞处理：1）冻存细胞的复苏：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。 对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。 3、轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。 下面T25瓶为例；1、细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml.2、1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞，按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。3、将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   纸葡萄穗霉的使用范围与培养方法及打管说明！ 纸葡萄穗霉是Stachybotrys属的微生物，原产地为中国。无性型真菌，孢梗上轮生小梗，暗色分生孢子。主要用途为研究，具体用途为分解纤维素。  一、菌种简介平台编号：Bio-09004提供形式：冻干物拉丁属名：Stachybotrys Chartarum中文译名：纸葡萄穗霉拉丁学名：Stachybotrys chartarum原始编号：c8832菌株来源：←中国科学院微生物研究所保藏人：孔华忠直接来源国家：中国保藏时间：4/13/1999生物危害：四类模式菌株：非模式菌株培养温度：27℃培养基：0014    分离源：土壤采集地点：四川省九寨沟采集国家：中国用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）储存条件：冻干菌种和试管斜面请置于 6-10℃冷藏。  二、培养条件PDA 培养基马铃薯浸取液 1.0 L 葡萄糖 20.0 g琼脂 15.0 g 自然 PH马铃薯洗净去皮，取 200 克切成小块 , 加水 1000 毫升煮沸 30 分钟后，补足水分。在滤液中加入 15 克琼脂，煮沸溶解后加葡萄糖 20 克 ,补足水分（1000 毫升），把培养基的 PH 值调到 7.2-7.4，溶化后分装 ,灭菌 30 分钟，备用。  三、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯 菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在 上延续使用半年左右。6、如果有些菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。 四、使用范围(1)合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚,组成成分精确,重复性强,而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏(Czapek)培养基等。 (2)天然培养基。由天然物质制成,如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤,前者用于培养霉菌,后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定,也难以确定,但配制方便,营养丰富,培养效果好,所以常被采用。 (3)半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类,或在合成培养基的基础上添加某些天然成分,如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。 五、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、菌种恢复培养前，建议将收到的菌种安瓿保存在 6-10°C 的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，如在说明建议的培养时间还未长起来，请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间，直至菌种培养完成，有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长，一般来说菌种培养稳定后才能用于您的后续实验。3、初次使用时请严格按照本说明书推荐条件和操作步骤进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、恢复培养厌氧菌时，在操作过程中应严格控制厌氧条件：制作培养基时，应使用厌氧螺口试管，并利用高纯氮气去除试管和培养基中的氧气，使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、与菌种相关的其它信息请参阅微生物菌种查询网网站(www.biobw.org）。 六、冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂（应避免过多水蒸气影响菌种的复苏），用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。2、用无菌吸管吸取 0.3ml（建议勿超过 0.5ml）适宜的液体培养基(不添加琼脂)，滴入管内，轻轻振荡，待安瓿管内的菌体溶解呈悬浮状，在用无菌吸管吸取全部菌悬液接在 1-2 支建议的培养基试管中（不超过 2 支，中国微生物菌种查询网提供的培养基配方中有琼脂，请务必做成试管斜面，配方中没有琼脂，试管中液体培养基不超过 5ml），并在建议的条件下静止培养。3、冻干管打开后需一次用完，不能留存。另外，安瓿管内大部分是用牛奶做保护剂，里面菌体为少数，复苏时要全部菌悬液接在新鲜培养基上，否则可能造成复苏不成功。4、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。5、打管操作应在烧杯或托盘上方进行，用完冻干管应灭菌处理后丢弃。6、菌种复苏时，请务必记录好菌种的编号和制备批号，否则不予售后。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                   小鼠胰岛Β细胞的背景与应用及处理方法！ 一、背景 小鼠胰岛Β细胞来源于转基因小鼠中生长的一个胰腺肿瘤(胰岛素瘤)。这种小鼠携带了大鼠胰岛素II基因启动子调控的SV40早期基因的假基因结构。细胞包含丰富的胰岛素和小量的胰高血糖素及生长抑素。 二、小鼠胰岛Β细胞处理 1）冻存小鼠胰岛Β细胞的复苏： 将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。 2）小鼠胰岛Β细胞传代：如果细胞密度达70%-90%，即可进行传代培养。 该细胞为悬浮和轻微的贴壁细胞，传代可以参考以下方法： 1.收集：将培养瓶中的悬浮的细胞收集到离心管中。用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。由于细胞贴壁不牢PBS润洗后细胞会脱落所以PBS也要回收到离心管中。 2.加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53mMEDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。 3.将收集到的悬浮细胞、pbs清洗液中的细胞和消化下来的贴壁细胞以1000rpml离心5min，弃去上清，补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。 3）小鼠胰岛Β细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。 三、应用 小鼠胰岛Β细胞可以用于基于小鼠胰岛β细胞系MIN6构建两种常用胰岛体外模型的比较研究： 基于小鼠胰岛β细胞系Min6细胞构建无支架的细胞球和封装于海藻酸凝胶中的分散细胞二种不同的三维(three-dimensional,3D)细胞培养体系。与传统的二维(two-dimensional,2D)贴壁细胞相比,比较这三种培养方式下胰岛素分泌功能的差异并对其存在的机制进行初步的研究。 方法： (1)采用Solid-works设计出深度、直径可调的模具,利用3D打印技术制备出模具,并构建琼脂糖微孔矩阵培养3D Min6细胞球; (2)采用海藻酸钠封装MIN6细胞构建3D细胞微囊,采用Calcein AM/PI死活染色检测不同浓度的海藻酸钠水凝胶以及解交联剂对MIN6细胞微囊存活的影响; (3)采用Cell Titer-Glo(?)3D化学发光法评估MIN6细胞在不同浓度的海藻酸钠水凝胶以及2D,3D培养下的增殖差异; (4)扫描电子显微镜观察细胞球和海藻酸钠微囊的表面特征。 (5)实验分组:2D组、细胞球组、细胞微囊组; (6)Western blot、IF、RT-q PCR分别检测Min6细胞胰岛功能相关蛋白GLUT2、PDX1、Insulin(INS)和基因GLUT2、PDX1、INS2、NKX2.2的表达差异; (7)酶联免疫吸附实验ELISA检测葡萄糖刺激Min6细胞下的胰岛素分泌差异; (8)Western Blot检测三种培养方式下胰岛素分泌相关信号通路PI3K/AKT/FoxO1的表达变化; (9)Western Blot检测不同浓度的海藻酸钠封装的细胞胰岛素分泌相关信号通路PI3K/AKT/FoxO1的表达变化。 结果： (1)琼脂糖表面可形成整齐排列的微孔矩阵,MIN6细胞在微孔内可聚集形成大小均一,紧密的细胞球。 (2)死活染色与增殖结果显示,1%(w/v)海藻酸钠水凝胶装封适合MIN6细胞生长。 (3)增殖检测结果显示,二种3D培养均能有效促进MIN6细胞的增殖。 (4)扫描电镜结果显示,细胞球之间细胞互相融合、紧密聚集成微组织,细胞在水凝胶基质上形成单层簇状或多细胞簇状在局部生长。 (5)免疫荧光结果显示,GLUT2,PDX1,INS的信号强度,细胞球组最明显,水凝胶组和2D组差异不明显。 (6)ELISA结果显示高糖或低糖刺激下,与2D相比,3D培养促进胰岛素分泌量更高(P (7)RT-q PCR结果显示,3D培养有利于促进GLUT2、PDX1、INS2和NKX2.2基因的表达,其中水凝胶组对基因表达的上调作用最大(P (8)Western blot结果显示,MIN6细胞在不同培养条件下,GLUT2的表达无显著性差异,PDX1,INS表达趋势和RT-q PCR一致。 (9)Western blot结果显示,PI3K,p-AKT/AKT,p-FoxO1/FoxO1和PDX1蛋白的表达水平,水凝胶组明显高于其他两组(P （10不同浓度水凝胶封装MIN6细胞,Western blot结果显示,PI3K的表达,0.5%和1%(w/v)差异不明显,2%(w/v)的显著降低(P 结论： 成功构建了细胞球和适合海藻酸盐水凝胶封装细胞培养的二种三维培养方式；与传统的2D贴壁培养相比,三维培养条件下细胞增殖和胰岛相关基因和蛋白的表达显著增强,并促进胰岛素分泌。其中,封装于海藻酸钠凝胶中的细胞比细胞球高表达。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                    大鼠肠神经胶质细胞的运输与保存及使用方法！ 一、细胞简介平台编号：Bio-132312规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶细胞名称：大鼠肠神经胶质细胞用途：原代细胞注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞详述肠神经系统胶质细胞类似中枢神经系统的星形胶质细胞，肠神经系统以网络结构广泛分布于浆膜下层、纵肌层、肌间层、环肌层、深肌层、粘膜肌层和粘膜层。肠神经胶质主要位于肠肌间丛和粘膜下丛神经节，与神经节交织成团并与节间神经束相互连接。肠神经胶质不但对神经系统起支持作用，还在调控神经元生长、发育、神经回路功能和细胞凋亡过程中起重要作用。 三、细胞特性1)组织来源于实验动物的正常肠组织。2)细胞鉴定：GFAP免疫荧光染色为阳性。3)经鉴定细胞纯度高于90%。4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。5)细胞生长方式：不规则细胞，贴壁培养。 四、产品的运输和保存视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。 五、产品使用1)本产品仅能用于科研2)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核3)本产品未通过用于活体诊断的审核 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                   微生物在食品中的主要应用方式有哪些？ 百欧博伟生物：微生物用于食品制造是人类利用微生物最早、最重要的一方面，这在我国已有了数千年的历史。人类在长期的实践中积累了丰富的经验，利用微生物已经制造了种类繁多、营养丰富、风味独特的许多食品。 哪些微生物在帮助我们制造食物？ 应用于食品制造的微生物非常广泛，包括细菌和真菌。微生物在食品中的应用主要通过以下三种方式：一是微生物菌体的应用，如食用菌、酸奶、酸泡菜，单细胞蛋白质等；二是微生物代谢产物的应用，如酒类、食醋、氨基酸、有机酸、维生素等；三是微生物酶的应用，如豆腐乳、酱油等。我们列举几种常见的食品作一下介绍。 一、微生物菌体的应用 食品中微生物菌体的应用，我们最常见的莫过于食用菌了。食用菌俗称“蘑菇”，常见的有平菇、木耳、猴头菇、香菇、金针菇等。食用菌肉质肥厚，味道鲜美，富含碳水化合物、蛋白质、氨基酸、维生素、矿物质等营养成分，为人们所喜爱。 研究发现，食用菌同时还具有诸多医疗保健作用，如调节人体机体平衡，增强免疫力，抗疲劳；降低胆固醇、降低血压、血糖和血脂；抑制肿瘤、减轻癌症症状；抗病毒、抗菌消炎，对肝脏有一定保护作用；止咳祛痰、健胃消化、通便利尿及抗衰老等。 据估测，自然界的菌物有150 万种以上，其中大型真菌至少有 140 000 种。中国是世界四大文明古国之一，也是认识和利用食用菌最早的国家，经历几千年对食用菌形态、生境、习性的仔细观察，人类开始了食用菌的驯化栽培，截止2004 年，已有200 种食用菌可以试验性培养，100 种可以人工栽培或培养。 这里也给大家介绍一种食用菌新品种——羊肚菌。近年来，通过科研工作者的不断探索，终于揭开了羊肚菌的神秘面纱，实现了羊肚菌的人工种植。 羊肚菌俗称羊肚菜，是世界性美味食用菌和药用菌，被誉为“菌中王子”。由于其菌盖有不规则凹陷且多有褶皱，形似羊肚而得名，具有增强免疫功能、抗疲劳、抗衰老、抗肿瘤、抗诱变、降血脂等多种功效，深受人们喜爱且在国际市场十分走俏。 随着生活水平的不断提高，人们对健康饮食越发重视，对食用菌的需求也日益旺盛。 二、食品中微生物代谢产物的应用 食品中微生物代谢产物的应用，最典型的就是我们每家每户都要用到的食醋。食醋是细菌的发酵制品，食醋的生产历史非常悠久，起源于我国，距今已有2500多年历史。全国各地生产的食醋品种较多，著名的有山西陈醋、镇江香醋、四川保宁醋、东北白醋、广东糖醋、江浙玫瑰米醋、福建红曲醋等，产品风味各异，行销国内外市场，颇受欢迎。 食醋是以淀粉质、糖质、酒质等为原料，经过醋酸菌发酵而酿制成的富含醋酸、氨基酸、糖分、酯类等物质的一种营养丰富、价廉物美的酸味调味品，是酸、咸、甜、鲜四味的调和。 用于食醋生产的细菌有纹膜醋酸杆菌、许氏醋酸杆菌、恶臭醋酸杆菌混浊变种（AS1.41）、巴氏醋酸杆菌巴氏亚种（沪酿1.01）等。醋酸菌属G-好氧杆菌，适宜生长于30℃左右，最适pH值为弱酸性，故在充分供氧条件下，可以大量生长繁殖使原料中乙醇转化为醋酸和少量其它有机酸和有香味的酯类（乙酸乙酯）等物质（选择优良菌种非常重要）。 食醋酿造是一个非常复杂的过程，涉及许多工艺和工序，也有很多微生物参与其中。微生物参与的过程主要有： 1、淀粉的液化、糖化 微生物使淀粉液化、糖化的微生物很多，而适合酿醋的主要是黑曲霉、米曲霉、黄曲霉等。 2、酒精发酵 生产上一般采用囊菌亚门酵母属中的酵母，但不同的酵母菌株，其发酵能力也不同，产生的滋味和香气也不同。 3、醋酸发酵 醋酸菌是醋酸发酵的主要菌种。主要有纹膜醋酸杆菌、许氏醋酸杆菌、恶臭醋酸杆菌混浊变种（AS1.41）、巴氏醋酸杆菌巴氏亚种（沪酿1.01）等。 通过微生物的发酵作用，以及后期的配兑包装，最终形成我们吃的各种各样美味爽口的食醋。 三、食品中微生物酶的应用 食品中微生物酶的应用，我们来讲讲厨房必备的酱油。酱油是一种由蛋白质原料和淀粉质原料经多种微生物酿制而成的一种咸味调味品，是咸、甜、鲜、苦、酸五味的调和。 酱油不仅含有人体生理需要的各种营养物质，还含有多种调味成分，如食盐的咸味、氨基酸钠盐的鲜味，糖及其它的糖醇物质的甜味、有机酸类物质的酸味，酪氨酸等爽口的苦味，所以是咸、甜、鲜、苦、酸五味的调和，此外还含有特殊的香味及天然瑰丽的棕红色素，因而是一种色、香、味俱佳的调味品。 目前世界上普遍食用的酱油有三类：一种是欧洲型的蛋白质水解液，即用无机酸来水解蛋白质，然后用碱中和，再经过滤加入酱色和调味料而制成，这种方法生产酱油速度快，产量高，但产品质量差；第二种是亚洲型的鱼露，即用小鱼小虾酿制而成，尤以日本的鱼露较为出名，我国江浙一带也生产此类酱油；第三种就是中国型的以豆、麦为原料酿制而成的酱油，且均以我国的酱油质量最优，风味最佳。 酱油酿造是多种微生物发酵的结果，酱油酿造是一个长期且复杂的过程，酱油酿造过程中的微生物包括霉菌、酵母、细菌，其中最主要的是霉菌中的米曲霉。 酱油酿造中的微生物发酵主要包括以下几个方面： 1、蛋白质的水解作用 原料中的蛋白质经蛋白酶的作用逐步降解为胨、肽及氨基酸类。有些氨基酸是呈味的调味成分，如谷氨酸和天冬氨酸具有鲜味；甘氨酸、丙氨酸和色氨酸具有甜味；酪氨酸呈苦味。 2、淀粉的水解作用 制曲后的曲醅中，还含有尚未彻底水解的淀粉，在发酵过程中，继续被淀粉酶分解成葡萄糖、糊精及麦芽糖等。 淀粉水解后生成的单糖类，除了葡萄糖外，还含有果糖及五碳糖。果糖主要来源于豆饼中的蔗糖水解；五碳糖主要来源于麸皮的多缩戊糖。这些糖类对酱油的色、香、味、体的形成有着重要的作用。 3、酒精发酵作用 酒精具有清爽香气，可被氧化成有机酸类，也是酯类的基础物质，对酱油的香气的形成有重要作用。 4、有机酸发酵作用 适量的有机酸存在可增加酱油的风味，当酸总量在1.5g/100ml左右时，酱油风味调和，大部分是乳酸、醋酸和丙酮酸。 酱油从专业角度来说有特级到三级，市场上看到大部分都是三级的酱油。判断酱油的优劣，首先，就是确保是酿造酱油，这个酱油是酿造还是配制的，对酱油的品质来说很重要；第二个就是配料有没有添加剂、防腐剂、助鲜剂，原料是不是转基因的等等。 酱油的鲜味取决于氨基酸态氮含量的高低，一般来说氨基酸态氮越高，酱油的等级就越高，也就是说品质越好。按照我国酿造酱油的标准，氨基酸态氮>0.8克/100ml为特级；>0.7/100ml为一级；>0.55/100ml为二级；>0.4/100ml为三级。但是，并不是说氨基酸态氮越高，酱油就越好。因为配兑酱油的氨基酸态氮也很高，很多鲜味剂也能使氨基酸指标变高。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                   产阿拉伯糖醇汉逊酵母的实验内容与操作方法！ 产阿拉伯糖醇汉逊酵母是Hansenula属的微生物，原产地为中国。在麦芽汁琼脂培养基上生长，菌落白色，表面平滑。无性繁殖为出芽式，孢子圆形、卵形或椭圆形。主要用途为研究；教学，具体用途为模式菌株 耐高渗透压、生产甘油及阿拉伯糖醇。 一、菌种简介平台编号：Bio-18257提供形式：冻干物英文名称：Hansenula arabitolgenes中文名称：产阿拉伯糖醇汉逊酵母属名：Hansenula种名加词：arabitolgenes其它保藏中心编号：=AS 2.887来源历史：←中科院微生物所原产国：中国资源归类编码：15151113110模式菌株：模式菌株主要用途：a:5:{i:0;s:4:分类;i:1;s:4:研究;i:2;s:4:教学;i:3;s:8:分析检测;i:4;s:4:生产;}特征特性：在麦芽汁琼脂培养基上生长，菌落白色，表面平滑。无性繁殖为出芽式，孢子圆形、卵形或椭圆形。具体用途：模式菌株,耐高渗透压、生产甘油及阿拉伯糖醇生物危害程度：四类致病对象：无培养基编号1：13资源保藏类型：a:1:{i:0;s:6:培养物;}保存方法：a:3:{i:0;s:14:真空冷冻干燥法;i:1;s:8:矿物油法;i:2;s:10:定期移植法;}共享方式：a:4:{i:0;s:10:公益性共享;i:1;s:16:资源纯交易性共享;i:2;s:12:合作研究共享;i:3;s:14:资源交换性共享;}用途：模式菌株,耐高渗透压、生产甘油及阿拉伯糖醇注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 三、综合微生物的培养方法，包括以下步骤（1）前期准备：（A）灭菌处理；（B）制备Biolite水；（C）检查设备和材料；（2）按比例配制培养材料；（3）导入曝气，进行繁殖培养；（4）取液观察；（a）取液；（b）稀释菌液；（c）平板培养；（5）分离并检测；（6）取液储存；通过该综合微生物培养方法简单可操作性强，培养的综合微生物均在3代以内，菌类稳定不发生突变，且繁殖快速。 四、仪器设备与器具1、恒温培养箱：36±1℃。2、1000ml三角烧瓶、1ml、10ml移液管。3、接种针。4、显微镜。5、超净工作台。6、玻片、酒精灯、洗耳球、试管架。7、天平：感量0.01g。8、灭菌釜。9、培养皿（直径为90mm）、试管，经121℃、30分钟灭菌。10、试管夹、酒精灯、秒表、载玻片 五、保藏方法1、传代培养保藏法又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等（后者作保藏厌氧细菌用），培养后于4-6℃冰箱内保存。2、液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间，它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡，一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。3、载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。4、寄主保藏法用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次氏体、螺旋体等，它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代，此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。5、冷冻保藏法可分低温冰箱（-20-30℃，-50-80℃）、干冰酒精快速冻结（约-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。6、冷冻干燥保藏法先使微生物在极低温度（-70℃左右）下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分（真空干燥）。有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液，以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

               DAMI人巨核细胞白血病细胞的处理方法与培养步骤！ 一、产品信息平台编号：Bio-73273规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶细胞信息：DAMI细胞名称：人巨核细胞白血病细胞用途：(STR鉴定正确)注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞介绍             从一个巨核细胞白血病患者的血液建立了一株新的人类巨核细胞(Dami)。 此细胞悬浮生长为主，倍增时间24-30小时。至少89%的细胞可与血小板糖蛋白(GP) lb and Ilb/llla及血型糖蛋白单克隆抗体反应。不与抗淋巴腺、单核细胞、粒性白细胞、巨噬细胞抗原的抗体反应。Dami细胞为研究巨核细胞生化及分化提供了极好的模型。 三、细胞特性1）来源：巨核细胞白血病2）形态：巨核细胞，悬浮为主、少量贴壁3）含量：>1x106  细胞数4）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装5）用途：仅供科研使用。 四、细胞的运输和保存干冰运输及复苏好存活细胞（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。 五、细胞接收后的处理方法1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。3）半贴细胞和贴壁不牢（悬浮）细胞：T25瓶置于37℃培养箱中约2-3h，显微镜下观察细胞的情况，若细胞密度在60%以下，客户需收集T25瓶中的悬浮细胞离心后用完全培养基重悬后打回到原培养瓶中继续培养，若细胞生长70%-90%对细胞进行传代，传代时需要收集培养基中悬浮的细胞离心后回收。4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代。 六、细胞培养步骤1、培养基及培养冻存条件准备1）准备RPMI-1640培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%注：细胞生长以悬浮为主、会有少量贴壁现象。2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。2、细胞处理：1）冻存细胞的复苏：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达70%-90%，即可进行传代培养。3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。 该细胞为悬浮和轻微的贴壁细胞，传代可以参考以下方法：1、收集：将培养瓶中的悬浮的细胞收集到离心管中。用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。由于细胞贴壁不牢PBS润洗后细胞会脱落所以PBS也要回收到离心管中。2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。3、将收集到的悬浮细胞、pbs清洗液中的细胞和消化下来的贴壁细胞以1000rpml离心5min，弃去上清，补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。 下面T25瓶为例；1、细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml.2、1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。3、将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

               杰丁塞伯林德纳氏酵母：发酵水解液酵母和产色氨酸 杰丁塞伯林德纳氏酵母是Cyberlindnera属的微生物，原产地为苏联。主要用途为研究；生产，具体用途为利用纤维素水解液生产饲料酵母。 一、菌种简介平台编号：Bio-65012规格：冻干物拉丁属名：Cyberlindnera Jadinii中文名称：杰丁塞伯林德纳氏酵母拉丁名称：Cyberlindnera jadinii来源历史：←甘肃省科学院生物研究所(50308)收藏时间：2008/11/21原始编号：TR1原产国：中国资源归类编码：15151113000模式菌株：非模式菌株主要用途：研究；教学；生产特征特性：细胞球形至圆筒型，芽殖；划线培养物暗奶油状，光滑；发酵葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、半乳糖；不同化乳糖、棉子糖；不分解脂肪。具体用途：发酵水解液酵母; 产色氨酸。生物危害程度：四类培养基编号：CM0077培养基名称：5 °Bé麦芽汁琼脂培养基成分：5°Bé麦芽汁 1.0L，琼脂 15.0g，自然pH。培养温度：25-28℃需氧类型：好氧保存方法：真空冷冻干燥法共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享提供形式：冻干物用途：研究；教学；生产；发酵水解液酵母; 产色氨酸。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、使用范围(1)合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚,酿酒酵母菌组成成分精确,重复性强,而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏(Czapek)培养基等。 (2)天然培养基。由天然物质制成,如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤,前者用于培养霉菌,后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定,也难以确定,但配制方便,营养丰富,培养效果好,所以常被采用。 (3)半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类,或在合成培养基的基础上添加某些天然成分,如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。 三、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯 菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在 上延续使用半年左右。6、如果有些菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。 四、注意事项1）冻干粉首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取 0.3ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支平板或者斜面，若接种液体培养基，则试管液体不超过 5ml 为宜）；2）经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降或不活，请在收到后 2 个月内和微生物菌种查询网联系，逾期不予受理；7）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。8）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。9）甘油管使用：使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

               THLE-2人肝永生化贴壁细胞系的应用及相关研究！ 一、背景 THLE-2人肝永生化贴壁细胞系是正常肝细胞用SV40大T抗原转染得到。将含有SV40 T抗原的Bgl I-Hpa I片段的逆转录病毒载体导入兼嗜性包装细胞株PA317中生产病毒。THLE-2 and THLE-3表达正常成人肝上皮细胞特征性的表型。当注射到无胸腺裸鼠中时，它们不成瘤，具有接近二倍体的核型，不表达甲胎蛋白。 二、THLE-2细胞人肝永生化细胞培养操作 1）复苏THLE-2人肝永生化贴壁细胞系细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2）THLE-2人肝永生化贴壁细胞系细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 2.加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。 4.将细胞悬液按1：2比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 3）THLE-2人肝永生化贴壁细胞系细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为类； 1.细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入1ml含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 2.4 min 1000rpm离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存1ml细胞悬液，注意冻存管做好标识。 3.将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 三、应用 THLE-2人肝永生化贴壁细胞系可以用于三氯乙烯诱导人肝细胞恶性转化的效应及机制研究： 三氯乙烯(Trichloroethylene,TCE)是一种生产环境中常见的有机污染物,属于人类Ⅰ类致癌物。 以人永生化肝细胞为模型,研究TCE诱导细胞恶性转化效应及其潜在机制,并根据筛选的靶分子设计合成新型姜黄素衍生物B5,进一步探讨B5对恶性转化的逆转效果,有望为TCE职业暴露预防与控制提供理论基础。 研究方法人永生化THLE-2暴露于5 mMTCE培养30代,获得THLE-2-TCE细胞。细胞水平研究细胞形态学、生长动力学、增殖迁移能力和基因组差异;动物水平观察THLE-2-TCE异种移植于BALB/c裸鼠后的成瘤潜力、新生物组织病理学和分子生物学(cytokeratin和Ki-67)。 随后通过氧化应激抑制剂N-乙酰半胱氨酸(N-Acetyl-L-cysteine,NAC)来探讨氧化应激的生成及其对细胞恶性转化过程的调控作用;在此基础上,结合Label free定量结果,采用通路蛋白抑制剂和si-RNA慢病毒干扰等技术探究TCE诱导细胞恶性转化的可能分子机制。最后,根据筛选的分子机制靶点(AKT、NFκB),利用孪药设计的化学方法合成新型姜黄素衍生物B5,通过分子对接和分子动力学模拟,综合评估B5逆转细胞恶性转化的效应并再次验证所筛选的靶分子机制。 研究结果(1)THLE-2-TCE细胞恶性转化相关生物学表征: (1)形态学表征:THLE-2-TCE细胞部分重叠生长,细胞大小不一,呈长梭形且有长长的突起,可见多核巨细胞,细胞形态异化明显。 (2)生物功能表征:THLE-2-TCE细胞倍增时间(49.92±0.49 h)较对照组(75.06±1.71 h)明显缩短;克隆增殖能力增强;细胞24 h平均迁移率(76.67%)、穿膜细胞数目(525.00±13.04个)明显高于对照组(20.83%和114.00±6.78个),以上差异具有统计学意义(P (3)生物表型改变:Label free蛋白定量结果显示THLE-2-TCE细胞基因组不稳定。细胞增殖分化、迁移侵袭和抗凋亡正相关蛋白(IGF2R、EIF4EBP1、FAM195B、ZNF185、BCAT1等)表达显著升高;原癌基因(AKAP8、BCL2L1、AXL、JUND、AKT2等)高表达,而抑癌基因(BCAR1、SAMD9、BCAR3、NFXL1、UIMC1等)表达显著降低。差异蛋白功能主要富集在物质间(如蛋白质、核酸、生物酶和杂环化合物等)的结合反应;氧化磷酸化、细胞存活和细胞周期等信号网络的共性通路,如TGFβ1/SMAD、MAPK、PI3K/AKT/m TOR和NFκB等通路异常活化。综合以上分析结果,表明THLE-2-TCE细胞具有恶性转化相关生物学活性。 (4)裸鼠成瘤实验:传代对照THLE-2细胞没有形成新生物,THLE-2-TCE细胞新生物形成率为40.00%,终点体积为406.17±76.98 mm3,HE染色显示细胞形态不规则,核深染,且异型较明显,但不及Hep G2阳性对照组显著。cytokeratin染色阳性,系上皮细胞来源。Ki-67阳性细胞比例较高,细胞增殖能力强。THLE-2-TCE细胞裸鼠荷瘤模型的建立,表明该细胞具有一定的体内成瘤潜能。 (2)THLE-2-TCE细胞恶性转化潜在分子机制: (1)TCE染毒过程中,THLE-2细胞内ROS、gp91 phox mRNA转录和蛋白水平均升高。MDA、SOD水平增加。KEAP1表达持续降低,而Nrf2和HO-1表达上调,表明抗氧化系统被激活。NAC预处理的细胞迁移率(32.33±6.13%)、侵袭数(352.00±41.41个)和克隆形成率(230.67±12.04%),分别低于TCE诱导组(47.67±6.13%)、(644.00±39.23个)和(484.00±16.57%)。裸鼠成瘤实验中,NAC预处理组成瘤率为20.00%,低于TCE诱导组(40.00%),且新生物生长速率、终点体积(173.54±26.39 mm3)和Ki-67阳性细胞数都不及TCE诱导组。 (2)蛋白质定量和KEGG分析发现THLE-2-TCE细胞TGFβ、AKT、NFκB等分子显著上调。NFκB si RNA细胞克隆形成、侵袭和迁移能力降低,增殖蛋白cyclin D1表达增加。此外,AKT抑制剂MK-2206和TGFβR抑制剂LY364947处理后,THLE-2-TCE细胞内AKT和NFκB的表达明显下调。TGFβ1刺激后THLE-2细胞内AKT和NFκB表达呈浓度依赖性上调。NAC预处理抑制TGFβ/AKT/NFκB通路活化。 以上结果表明ROS可能通过调控TGFβ/AKT/NFκB信号轴参与TCE诱导的恶性转化。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                生产环境和产品接触面的采样要求与检验方法！ 一、目的 检测生产车间操作人员手部、与食品有直接接触面的机械设备的微生物指标，生产区域环境当中病原微生物的监控，达到规定标准，以控制食品成品的质量。 二、参照标准 中华人民共和国国家标准《一次性使用卫生用品卫生标准》GB 15979－2002、《HACCP原理与实施》、出入境检验检疫局2004年《出入食品微生物检验培训教材》中《出入食品生产厂卫生细菌检验方法》、日本东京冷冻食品检验方法。 三、采样与检测方法 3.1工作台（机械器具）表面与工人手表面采样与测试方法： 3.1.1样品采集： (1)取样频率： a)车间转换不同卫生要求的产品时，在加工前进行擦拭检验，以便了解车间卫生清扫消毒情况。 b)全厂统一放长假后，车间生产前，进行全面擦拭检验。 c)产品检验结果超内控标准时，应及时对车间可疑处进行擦拭，如有检验不合格点，整改后再进行擦拭检验。 d)实验新产品，按客户规定擦拭频率擦拭检验。 e)对工作表面消毒产生怀疑时，进行擦拭检验。 f)正常生产状态的擦拭，每周一次。 (2)采样方法：  a)工作台（机械器具）：用浸有灭菌生理盐水的棉签在被检物体表面（取与食品直接接触或有一定影响的表面）取25cm2的面积，在其内涂抹10次，然后剪去手接触部分棉棒，将棉签放入含10mL灭菌生理盐水的采样管内送检。 b) 工人手：被检人五指并拢，用浸湿生理盐水的棉签在右手指曲面，从指尖到指端来回涂擦10次，然后剪去手接触部分棉棒，将棉签放入含10mL灭菌生理盐水的采样管内送检。 (3)采样注意事项：擦拭时棉签要随时转动，保证擦拭的准确性。对每个擦拭点应详细记录所在分场的具体位置、擦拭时间及所擦拭环节的消毒时间。 3.1.2 菌落总数之大肠菌群的检测培养: 样液稀释：将放有棉棒的试管充分振摇。此液为1：10稀释液。如污染严重，可十倍递增稀释，吸取1mL1：10样液加9mL无菌生理盐水中，混匀，此液为1：100稀释液。 3.1.2.1 菌落总数：（按GB 4789.2的规定进行） （1）以无菌操作，选择1～2个稀释度各取1mL样液分别注入到无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿（平行样），将已融化冷至46℃左右的平板计数琼脂培养基倾入平皿，每皿约15~20mL，充分混合。 （2）待琼脂凝固后，将平皿翻转，置36℃±1℃培养48h后计数。 （3）结果报告：报告每25c㎡食品接触面中或每只手的菌落数。 3.1.2.2大肠菌群：（按GB 4789.3的规定进行） （1）平板法： a)以无菌操作，选择1～2个稀释度各取1mL样液分别注入到无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿（平行样），将VRBA培养基倾入平皿，每皿约15~20mL，充分混合。待琼脂凝固后,再覆盖一层培养基，约3-5mL。 b)待琼脂凝固后，将平皿翻转，置36℃±1℃培养24h后计数。 c)证实实验：从VRBA平板上挑取典型和可疑菌落接种BGLB进行证实实验。 d)结果计算：经最后证实为大肠菌群阳性的试管比例乘以平板上出现的典型和可疑菌落个数乘以稀释倍数得出。 e）结果报告：报告每25c㎡食品接触面中或每只手的菌落数。 （2）MPN法： a)以无菌操作，选择3个稀释度各取1mL样液分别接种到LST肉汤培养基中，每个稀释度接种三管。 b)置LST肉汤管于36℃±1℃培养48±2h。记录所有LST肉汤管的产气管数。 c)选择产气浑浊的发酵管接种BGLB进行复发酵实验。 d）结果报告：按BGLB肉汤管产气管数，查MPN表报告每25c㎡食品接触面中或每只手的大肠菌群值。 3.1.2.3 金黄色葡萄球菌检测（按GB 4789.10的规定进行） （1）定性检测 a)取1mL稀释液注入灭菌的平皿内，倾注15-20mL的B-P培养基，（或是吸取0.1稀释液，用L棒涂布于表面干燥的B-P琼脂平板），放进36±1℃的恒温箱内培养48±2小时。 b)从每个平板上至少挑取1个可疑金黄色葡萄球菌的菌落作血浆凝固酶实验。 c)结果报告：B-P琼脂平板的可疑菌落作血浆凝固酶实验为阳性，即报告手（工器具）上有金黄色葡萄球菌存在。 （2）定量检测 a)以无菌操作，选择3个稀释度各取1mL样液分别接种到含10﹪氯化钠胰蛋白胨大豆肉汤培养基中，每个稀释度接种三管。 b)置肉汤管于36±1℃的恒温箱内培养48小时。划线接种于表面干燥的B-P琼脂平板，置36℃±1℃ 培养45～48小时。 c)从B-P琼脂平板上，挑取典型或可疑金黄色葡萄球菌菌落接种肉汤培养基，36℃±1℃培养20～24小时。 d)取肉汤培养物做血浆凝固酶试验，记录试验结果。 e)报告结果：根据凝固酶试验结果，查MPN表报告每25c㎡食品接触面中或每只手的金黄色葡萄球菌值。 关于培养基的选择 一次性卫生用品生产企业使用营养琼脂培养基检测涂抹点的菌落总数，使用乳糖胆盐培养基检测采样点的大肠菌群。针对检测目的不同食品企业可以选择不同的培养基，比如检测消毒处理后或生产过程中受污染的程度，可以选择平板计数琼脂检测菌落总数；检测大肠菌群可以选择乳糖胆盐培养基。 关于采样点的选择 选择食品接触面，食品接触面是指生产过程中与所生产的食品直接接触的设备、工具器具、人、水、空气、包材等；或直接接触的门把手、电源开关等。 3.2工厂环境中病原体的检测计划与方法： 检测计划：为了保证食品安全，工厂应该对生产环境中的病原微生物进行检测和评估，检测项目包括李斯特菌，沙门氏菌等病原体微生物，化验室应该按照一定的计划对生产场所环境中的病原体进行检测，其中包括地面、下水道、排水沟、墙壁、天花板、设备框架、运输的支架，冷藏装置、速冻机、传送带、设备的螺丝、维修工具等部位。当某个点检测到病员微生物时，应该对环境中的相似点加大检测频率；在把所有的预定点检测完后，应该对环境中的病原微生物的存在状况进行全面评估，在下一次环境检测循环过程中加强检测容易出现病原体的环境点，达到持续改进的目的。检测频率: 每月两次,每次每个区域至少选取5个检测点,分别进行检测。 3.2.1 环境李斯特菌的检测方法（环境李斯特菌的测试片） 3.2.1.1 用涂抹棒，海绵或者其他采样设备收集环境样本。 3.2.1.2 将收集的样本添加10毫升灭菌的缓冲蛋白胨水，将样本与缓冲蛋白胨混合1分钟，将样品置于室温（20-30℃）1小时，最久不超过1.5小时，以修复损伤的李斯特菌。 3.2.1.3 将测试片放在平坦处，掀起上层膜。 3.2.1.4 用移液器垂直滴加3毫升样品到下层膜中央，将上层膜缓慢盖下，以免产生气泡。 3.2.1.5 轻轻将塑料压板放在位于接种区上层膜上，不要压，扭转或者滑动压板。提起压板等至少十分钟，以使胶体凝固。 3.2.1.6 将测试片透明面朝上，可叠放至十片，在37℃±1℃培养26-30小时，可以用标准菌落记数器或者其他光学放大器判读，不要记数圆形轮廓上的菌落，因为他们不受选择性培养基的影响。 3.2.1.7 对于定性检测，根据紫红色菌落是否存在，结果记为检出或者未检出。 3.2.2 环境中沙门氏菌的检测方法 3.2.2.1采样地点: 选取采样点时因尽量选取微生物容易滋生的地方。 3.2.2.2 操作步骤3.2.2.2.1采样应在生产开始后进行，用已浸润过的棉拭在选定的被测表面旋转涂抹约100c㎡的面积，然后将棉拭放回涂抹试管并盖紧。         3.3.2.2.2 将样品带回实验室，每5个点混合成一个样品, 登记编号,按照GB 4789.4标准及时检测，若有阳性结果出现，应逐步对所混合的每个点分别检测。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                  香料克罗诺杆菌的特点与优势及培养与保存方法！ 香料克罗诺杆菌是Cronobacter属的微生物，原产地为斯洛伐克。微观形态：菌体呈短棒杆状，近球，单个或成对排列，革兰氏阴性。主要用途为分类；研究，具体用途为分类学研究。 一、菌种简介平台编号：Bio-135172规格：冻干物拉丁属名：Cronobacter Condimenti中文名称：香料克罗诺杆菌拉丁名称：Cronobacter condimenti模式菌株：是其它保藏中心编号：=DSM 27966=CECT 7863=LMG 26250来源历史：←DSMZ收藏时间：2016/12/15原始编号：1330原产国：斯洛伐克特征特性：微观形态：菌体呈短棒杆状，近球，单个或成对排列，革兰氏阴性。16S rRNA基因序列号：FN539031。参考用途：分类学研究。生物危害程度：三类致病对象：人分离基物：卤肉采集地：斯洛伐克培养基：0002 营养肉汤琼脂（Nutrient Agar）培养温度：37 ℃需氧类型：好氧用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、产品特点1、菌种功能明确、品种稳定、应用;2、产品仅限用于科研本品芽孢含量高,稳定性好、耐高温和挤压;3、繁殖能力快、定植能力强、易存活、耐受低pH值环境;4、复活迅速,可在短期内成为优势种群;5、本品安全高效、无抗药性、不污染环境;6、对多数抗生素不敏感,可与低浓度抗革兰氏阴性菌抗生素同时使用。 三、产品优势1、产品质量稳定,是为科研和 提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。2、国内首创封闭管包装,冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法,保证菌种的复苏质量。3、严格的质检程序,确保产品质量的稳定性。4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业,疾控中心、质检局、出入境、药检局等等,得到广泛好评。 四、微生物培养方法1、平板划线分离法:把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环圈在平板培养基表面,通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞,经培养后生长繁殖成单菌落。2、稀释涂布平板法将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养,在稀释度足够高的菌液里,聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞,从而能在培养基表面形成单个菌落。上述两种方法虽然都可以实现观察菌落特征的目的,但平板划线分离法不能对菌落计数,而稀释涂布平板法培养过程复杂,对平板的要求比较高,可参照以下步骤：a、制备平板培养基将氯化钠蔗糖琼脂培养基加热溶化并冷却至65℃,向氯化钠蔗糖琼脂培养基中加入克林霉素溶液3~5ml并混合均匀,然后取20ml混合均匀的培养基溶液倒入培养皿,轻轻摇动培养皿,使培养基溶液均匀分布在培养皿底部,待培养基溶液凝固后即得平板培养基。b、制备活性污泥混合液称取活性污泥土样15g,放入盛100ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶中,振摇15~20min混合均匀,用一支1ml无菌吸管从中吸取1ml土壤悬液加入盛有9ml无菌水的大试管中充分混匀,制成活性污泥混合液。c、培养基涂布从活性污泥混合液中吸取0.2ml,滴在平板培养基表面的中央位置,用无菌玻璃涂棒将活性污泥混合液沿同心圆方向轻轻地向外扩展,使之分布均匀。 五、保存方法1、传代保存法：培养基的浓度不宜过高,营养成分不宜过于丰富,尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种,则应在培养基中添加少量碳酸钙。2、液体石蜡覆盖保存法：该法较前一种方法保存菌种的时间更长,适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。3、悬液保存法：①蒸馏水保存法：适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌,将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。②糖液保存法：适用于酵母菌,如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗处保存,可长达10年。除此之外,也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。4、载体保存法：①土壤保存法;②砂土保存法;③硅胶保存法;④磁珠保存法;⑤麸皮保存法;⑥纸片(滤纸)保存法。5、常用的冷冻保存法：①低温冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃):低温冷冻保存时使用螺旋口试管较为方便,也可在棉塞试管外包裹塑料薄膜。保存时菌液加量不宜过多,有些可添加保护剂。此外,也可用φ5mm的玻璃珠来吸附菌液,然后把玻璃珠置于塑料容器内,再放入低温冰箱内进行保存的。②干冰保存法(-70℃左右):即将菌种管插入干冰内,再置于冰箱内进行冷冻保存。③液氮保存法(-196℃):是适用范围最广的微生物保存法。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                  小鼠肾脏巨噬细胞的实验室分离方法与质量检测！ 一、产品信息平台编号：Bio-73065规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶细胞信息：原代细胞产品名称：小鼠肾脏巨噬细胞组织来源：肾组织产品规格：5×105cells/T25细胞培养瓶用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞简介小鼠肾脏巨噬细胞分离自肾组织；肾脏是机体的重要器官，它的基本功能是生成尿液，借以清除体内代谢产物及某些废物、毒物，同时经重吸收功能保留水份及其他有用物质，如葡萄糖、蛋白质、氨基酸、钠离子、钾离子、碳酸氢钠等，以调节水、电解质平衡及维护酸碱平衡。肾脏同时还有内分泌功能，生成肾素、促红细胞生成素、活性维生素D3、前列腺素、激肽等，又为机体部分内分泌激素的降解场所和肾外激素的靶器官。肾脏的这些功能，保证了机体内环境的稳定，使新陈代谢得以正常进行。巨噬细胞属免疫细胞，有多种功能，是研究细胞吞噬、细胞免疫和分子免疫学的重要对象。巨噬细胞较易获得，便于培养，并可进行纯化。巨噬细胞属不繁殖细胞群，在条件适宜下可生活2-3周，多用做原代培养，难以长期生存。巨噬细胞(Macrophages)是一种位于组织内的白血球，源自单核细胞，而单核细胞又来源于骨髓中的前体细胞。巨噬细胞和单核细胞皆为吞噬细胞，在脊椎动物体内参与非特异性防卫(先天性免疫)和特异性防卫(细胞免疫)。它们的主要功能是以固定细胞或游离细胞的形式对细胞残片及病原体进行噬菌作用(即吞噬以及消化)，并激活淋巴球或其他免疫细胞，令其对病原体作出反应。 三、方法简介实验室分离的小鼠肾脏巨噬细胞采用酶消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。 四、质量检测实验室分离的小鼠肾脏巨噬细胞经CD68免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。 五、培养信息培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等 换液频率 每2-3天换液一次 生长特性 贴壁 细胞形态 巨噬细胞样 传代特性 属于终末分化细胞；属于不增殖细胞群 消化液 利多卡因（12mM） 培养条件 气相：空气，95%；CO2，5% 小鼠肾脏巨噬细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。 六、传代操作流程1、尽量吸干净T25瓶原培养基；2、加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s，吸走润洗的PBS；3、T25瓶加1ml左右胰酶，轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层；4、将培养瓶放入37度培养箱消化；5、消化到细胞间隙变大，但未完全脱落时加2-3ml完全培养基终止胰酶消化；6、混匀细胞，900rpm离心3-5min，弃上清；7、加新的完全培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里；8、补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养； 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   哥伦比亚培养基的成分与检验原理及使用方法！ 菌种简介平台编号：Bio-56110规格：250g相关信息：/菌株名称：哥伦比亚培养基规格：250g用途：用于多种微生物的增菌培养注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 成分(g/L) 胰酪蛋白胨        12.0 蛋白胨            5.0 酵母浸粉          3.0 牛肉浸粉          3.0 可溶性淀粉        1.0 氯化钠            5.0 pH值7.3 ± 0.2    25℃  检验原理 胰酪蛋白胨、蛋白胨、牛肉浸粉、酵母浸粉和可溶性淀粉提供碳氮源、维生素和生长因子，氯化钠维持均衡的渗透压。  用法 称取本品 29.0g,加热溶解于1000ml 蒸馏水中,121℃高压灭菌 15 分钟,备用。注：培养基中含少量淀粉，若灭菌前未加热煮沸溶解，灭菌后冷却可能出现少量白色沉淀。 不同细菌在哥伦比亚培养基上的生长特征：  哥伦比亚培养基微生物灵敏度试验：按标签用法制备培养基，接种以下质控菌株，放置37℃需氧培养18-24小时。  北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                   脑心浸液琼脂（BHI）的配制方法与实验原理！ 脑心浸液琼脂，适用于对营养苛求细菌的分离培养。 一、菌种简介平台编号：Bio-54630规格：250g相关信息：BHI英文名称：Brain Heart Infusion Agar菌株名称：脑心浸液琼脂规格：250g用途：用于营养苛求细菌的增菌培养注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、成分(g/L)牛脑浸粉           4.0牛心浸粉           4.0蛋白胨             5.0酪蛋白胨           16.0氯化钠             5.0葡萄糖             2.0磷酸氢二钠         2.5琼脂               13.5pH值7.4 ± 0.2     25℃ 三、原理牛脑浸粉、牛心浸粉、蛋白胨、酪蛋白胨提供氮源、维生素和生长因子；葡萄糖可为多种细菌提供能源；氯化钠维持均衡的渗透压；磷酸氢二钠为缓冲剂，琼脂为凝固剂。 四、用法称取本品 52.0g,加热搅拌溶解于 1000ml 蒸馏水中,121℃高压灭菌 15 分钟,备用。 五、脑心浸液琼脂微生物灵敏度试验：按标签用法制备培养基，接种以下质控菌株，放置36±1℃需氧培养18-24小时。注：回收率计算时，用TSA琼脂做对照培养基。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   请收好这份夏季食源性疾病食品安全风险提示！ 百欧博伟生物：夏日炎炎，吃西瓜、冰淇淋、小龙虾、烤串，喝冰啤、冰饮，成了非常享受的事情。但享受美食的同时，食品安全隐患也随之而来。特别是汛期过后，高温闷热的天气容易使食物腐败变质，雨水多、湿度大非常适宜肠道致病菌和霉菌的生长繁殖，夏季是公认的肠道疾病和食物中毒的高发期、多发期。那么有哪些情况需要重点关注呢？我们一起来看一看吧！ 一、食源性疾病高发的重点食品 夏季温度和湿度较高，微生物更容易滋生和繁殖，使得生产和加工环境的微生物控制更难，其中即食果蔬、肉制品、乳制品、蛋及蛋制品、生食水产及水产制品、桶装水为高污染风险品种。从近几年抽检数据来看，桶装水中铜绿假单胞菌的不合格率7～10月较高；冷冻饮品中微生物项目的不合格率4～8月较高；米粉制品中菌落总数和大肠菌群的不合格率7～8月较高；熟肉制品中微生物项目的不合格率4～9月较高；乳制品中酵母、霉菌、大肠菌群等微生物项目的不合格率6～10月较高。消费者在选择凉菜、熟食卤味、凉面、沙拉、三明治、冷饮等冷食类食物时需特别关注。 二、食源性疾病高发的致病菌 夏季需重点关注的致病菌有沙门氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌及致泻大肠埃希氏菌。 1、沙门氏菌广泛分布在自然界，如土壤、食品、粪便、水中，且生存能力强，存活时间长。沙门氏菌在20℃以上可以大量繁殖，最佳生长温度为37℃，因此夏季7～8月为沙门氏菌高感染期。感染沙门氏菌的主要症状是发热、恶心、呕吐、腹泻等，严重时可能出现出血、穿孔的情况。沙门氏菌主要污染的食品有肉、蛋、奶及其制品。沙门氏菌不耐热，在65℃下加热15～20min即可杀死，在100℃下立即死亡，低温也不适宜沙门氏菌的生长，因此低温储存食品，食用前将食物充分加热可有效预防沙门氏菌。 2、单核细胞增生李斯特氏菌是一种条件致病菌，对健康成年人危害性不高，但可通过被污染的冷冻食品、牛奶、蔬菜等对易感人群如孕妇和老人进行感染。感染后出现腹泻、发烧、头痛及肌肉疼痛等症状，严重时会出现败血病和脑膜炎。单增李斯特菌生存能力强，在1～4℃的低温环境中也能生产繁殖，在−20℃的环境下也可存活一年。因此，定期对冰箱彻底消毒、减少冰箱滋生细菌；避免生食未经消毒的海鲜及肉类、避免摄入未经消毒的奶及其制品可有效预防该食源性疾病。 3、致泻大肠埃希氏菌是一类特殊血清型能引起人体以腹泻症状为主的大肠埃希氏菌，在我国引起感染性腹泻的发病率居所有传染病之首。最佳生存温度为36℃，所以可以寄居肠道从而引发血性腹泻。其所致疾病有发热、腹痛、腹泻、脓血便等。未煮熟的牛排、生水及其他未经消毒杀菌的果蔬类是其重要的传染途径。避免生食食物、将食物烧熟煮透是预防该类致病菌的关键。 需要提醒广大消费者，在家讲卫生，饭前便后、接触生鲜肉蛋后勤洗手，生熟厨具需分开，并注意阻隔并扑灭苍蝇蚊虫等，防止致病菌通过蚊虫传播。 三、食源性疾病高发的进食场所 夏季到来，朋友相约，共同观赏体育赛事，共享美好时光，进食场所就要注意选择，容易出现食源性疾病的进食场所包括家庭餐饮、街头食品及外卖餐饮。在家烹饪时，一方面，冷食类再加工过程中生熟要分开；另一方面，若患有痢疾、伤寒、病毒性肝炎、化脓性和渗出性皮肤病等疾病不建议进行冷食制作；再者，食物需煮熟煮透，储存温度和时间需控制得当，在室温下储存食物2小时以上，微生物可能大量繁殖，导致食源性疾病，建议按需加工食物，若确实存在剩菜剩饭，应及时分类冷藏保存，再次食用时务必彻底加热。在外就餐或外卖餐饮尽量选择证照齐全、冷藏冷冻有保障的经营场所或售卖商家，可优先选择实施“明厨亮灶”或餐饮服务量化等级高的服务单位，尽量少选择街边食物，若发现食物有明显的腐败变质、异味，或含有异物应停止食用，也可拨打消费投诉热线12315。 四、食源性疾病高发的特殊人群 1、婴幼儿及儿童 从年龄分布来看，0～14岁年龄段包括婴幼儿及儿童，食源性疾病发病最多。一方面本身免疫力低下，容易受到外界致病菌的影响，另一方面该年龄段的人群自律性较差、自身卫生意识不够，需要家长、学校的引导。同时，这一特点也提示托幼单位、学校是食源性疾病高风险业态，需要监管部门重点关注。 2、60岁以上的老人 60岁以上的老人也是易感染人群，免疫力逐渐下降，身体功能出现不同程度的衰退，使得老年人患病的可能性增加，但不应过度担心。老年人应尽量合理膳食、均衡营养，选购新鲜食材，不购买不新鲜的果蔬、水产品，未经检疫检验的肉类等，保持心情愉悦，每日足量饮水，适当运动。 3、孕妇及其他需特殊关注人群 某些致病菌对胎儿发育不利，如单增李斯特氏菌，妊娠期感染会导致死胎、早产、新生儿也易感染。怀孕期间应尽量食用经蒸煮后熟透的食物，避免食用生食海鲜及肉类。 接受器官移植、化疗等大型手术的术后康复人群及肿瘤患者由于身体尚未康复，较普通人更易受到食源性病菌感染。应杜绝食用变质食物，注意餐前个人卫生。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                 绳索状芽孢杆菌的使用范围与培养方法及注意事项！ 绳索状芽孢杆菌是Bacillus属的微生物，原产地为中国。菌落圆形凸起，不透明混浊，表面光滑湿润，边缘整齐。菌体小短杆，0.5*0.8um，无芽孢，有荚膜；长链状。有自生固氮能力。主要用途为研究；教学，具体用途为分类、研究，具有生产生物肥料潜力。 一、菌种简介平台编号：Bio-15280提供形式：冻干物英文名称：Bacillus funiculus中文名称：绳索状芽孢杆菌属名：Bacillus种名加词：funiculus来源历史：←中国农业科学院农业资源与农业区划研究所收藏时间：2006-12-15原始编号：GD-35-2-1-2原产国：中国资源归类编码：15131311101模式菌株：非模式菌株主要用途：a:3:{i:0;s:4:分类;i:1;s:4:研究;i:2;s:4:其他;}特征特性：菌落较小，圆形扁平，乳白，不透明，边缘整齐。生长速度较快，菌苔较薄。有自生固氮能力。具体用途：分类、研究，具有生产生物肥料潜力。生物危害程度：四类致病对象：无分离基物：土壤采集地：山东蓬莱培养基编号1：0002资源保藏类型：a:1:{i:0;s:6:培养物;}保存方法：a:3:{i:0;s:15:-80℃冰箱冻结法;i:1;s:14:真空冷冻干燥法;i:2;s:8:矿物油法;}共享方式：a:1:{i:0;s:10:公益性共享;}用途：分类、研究，具有生产生物肥料潜力。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、使用范围(1)合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚,酿酒酵母菌组成成分精确,重复性强,而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏(Czapek)培养基等。 (2)天然培养基。由天然物质制成,如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤,前者用于培养霉菌,后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定,也难以确定,但配制方便,营养丰富,培养效果好,所以常被采用。 (3)半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类,或在合成培养基的基础上添加某些天然成分,如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。 三、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯 菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在 上延续使用半年左右。6、如果有些菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。 四、注意事项1）冻干粉首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取 0.3ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支平板或者斜面，若接种液体培养基，则试管液体不超过 5ml 为宜）；2）经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降或不活，请在收到后 2 个月内和微生物菌种查询网联系，逾期不予受理；7）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。8）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。9）甘油管使用：使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                   小鼠骨髓瘤贴壁细胞系的培养操作步骤及应用！  一、背景 SP20-AG14小鼠骨髓瘤贴壁细胞系是由绵羊红细胞免疫的BA LB/c小鼠脾细胞和P3X 63A g8骨髓瘤细胞融合得到的。Sp2/0-A g14细胞不分泌免疫球蛋白，对20μg/ml的8-氮鸟嘌呤有抗性，对H A T比较敏感；Sp2/0-A g14细胞可以作为细胞融合时的B细胞组分用于制备杂交瘤；鼠痘病毒阴性。 二、细胞培养操作步骤 1、SP20-AG14小鼠骨髓瘤贴壁细胞系培养基及培养冻存条件准备： 1）准备DMEM（推荐iCell-0001）培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。 2）注意：圆形，悬浮生长，不要用力吹打(生长时会沉到瓶底） 3）SP20-AG14小鼠骨髓瘤贴壁细胞系培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。 4）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。 2、SP20-AG14小鼠骨髓瘤贴壁细胞系细胞处理： 1）冻存细胞的复苏： 将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。 2）SP20-AG14小鼠骨髓瘤贴壁细胞系细胞传代：如果细胞密度达70%-90%，即可进行传代培养。 该细胞轻微贴壁和悬浮培养的细胞，传代可以参考以下方法： 1.收集：将培养瓶中的悬浮的细胞收集到离心管中。用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。由于细胞贴壁不牢PBS润洗后细胞会脱落所以PBS也要回收到离心管中。 2.加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。 3.将收集到的悬浮细胞、pbs清洗液中的细胞和消化下来的贴壁细胞以1000rpml离心5min，弃去上清，补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。 3）SP20-AG14小鼠骨髓瘤贴壁细胞系细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。 三、应用 SP20-AG14小鼠骨髓瘤贴壁细胞系可以用于鸭圆环病毒Cap蛋白单克隆抗体及免疫胶体金试纸条的研制： 以Cap蛋白为研究对象,制备单克隆抗体,研发快速检测DuCV的胶体金免疫试纸条,实现DuCV的快速诊断与防治。 本研究中去除DuCV Cap的N端核定位序列(Nuclear localization signals,NLS),即去除Cap基因的5′端1-108 bp区域,保留剩余的109-774 bp区域,N端引入His标签,以便于抗原的纯化,最后将核酸序列克隆到大肠杆菌表达质粒p ET-28a中,质粒命名为p ET-28a-Cap,并转化到大肠杆菌BL21菌株中使Cap蛋白能够高效的表达。 最终得以确定其最佳诱导表达条件为在终浓度0.1 m M IPTG诱导剂中37℃诱导3 h,重组Cap蛋白主要以包涵体形式得到表达。使用弗氏佐剂制备的重组DuCV Cap蛋白免疫2只Balb/c雌性小鼠,ELISA检测2只小鼠的血清抗体效价均在1:20480,满足细胞融合的要求,分离提取免疫小鼠脾脏细胞和sp2/0细胞进行细胞融合,ELISA方法筛选能够分泌抗DuCV Cap蛋白的特异性抗体的阳性孔并进行亚克隆,最终获得了能够稳定分泌抗DuCV Cap蛋白的一株杂交瘤细胞株6A1。 Western bolt结果显示,6A1株单克隆抗体可以和重组DuCV Cap蛋白以及天然DuCV Cap蛋白能发生特异性的结合。对单抗6A1的Ig G类型鉴定结果表明6A1的Ig G类型为Ig G1亚类和Kappa轻链。将6A1杂交瘤细胞株注射到雌性Balb/c小鼠的腹腔用以大量制备单克隆抗体,间接ELISA检测结果表明注射杂交瘤细胞株小鼠腹水的抗体效价可达1:102400。 同时,用弗氏佐剂制备的重组DuCV Cap蛋白疫苗对2只健康新西兰兔进行免疫,制备抗DuCV Cap蛋白多克隆抗体,经3次免疫7天后使用间接ELISA方法检测兔血清的抗体效价,结果显示两只兔血清的抗体效价均达到了1:163840,经Western blot鉴定,该兔多抗对重组DuCV Cap蛋白以及天然DuCV Cap蛋白均能发生特异性的结合。 经过Protein A+G对小鼠腹水和兔血清进行抗体纯化,获得了高纯度的鼠抗DuCV Cap蛋白的单克隆抗体和兔抗多克隆抗体。进而以纯化的兔抗DuCV Cap蛋白多克隆抗体作为T线(2 mg/m L),纯化的鼠6A1单克隆抗体(64μg/m L,p H 8.0)作为胶体金标记抗体,以羊抗鼠Ig G(1 mg/m L)作为C线,组装胶体金检测试纸条。该DuCV抗原胶体金免疫层析试纸条在检测MDPV、GPV、DPV、NDV、AIV、DHV、FAd V和DRV中均不发生交叉反应,试纸条特异性良好,检测抗原的敏感度可达15.6μg/m L。 在39份的疑似感染鸭样品的检测中,分别用本次研究制备的胶体金试纸条与传统的PCR两种方法进行检测,检测结果符合率可达94.9%,检测结果准确度较高,同时经多次测试都表明试纸条有较好的重复性和稳定性,能够在10 min内完成对样品的快速检测。 总之,本次研究制备的基于DuCV Cap蛋白单克隆抗体的胶体金抗原检测试纸条可以实现快速、特异地检测临床样本中的DuCV,可用于DuCV的基层诊断和筛查工作。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                    乳糖培养基的实验原理与质量控制及使用方法！ 一、背景 乳糖培养基用于多管发酵法测定食品、纯净水和一次性使用卫生用品中大肠菌群的确证试验(GB/T4789.3-2003，GB/T4789.28-2003中4.10和GB15979-2002)。 二、乳糖培养基原理 蛋白胨提供碳源和氮源满足细菌生长的需求;乳糖是大肠菌群可发酵的糖类;溴甲酚紫是pH指示剂，酸性呈黄色，碱性呈紫色。 三、乳糖培养基使用方法 1、称取乳糖发酵培养基(乳糖复发酵培养基)30g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装于带有小倒管的试管中，每管9mL(检测药品时每管3ml)，115℃高压灭菌15min。 2、从平板上挑取可疑菌落接种乳糖发酵管，(食品)置36±1℃培养24±2h;(药品)置30～35℃培养24～48h。 3、观察结果。凡乳糖发酵管产气、革兰氏染色阴性的无芽孢杆菌，即为大肠菌群阳性，(食品)查MPN表报告每克(mL)样品中大肠菌群的MPN值。 四、乳糖培养基质量控制 本品加热溶解后呈紫色，下列菌株接种后置36±1℃培养24h或者30～35℃培养24～48h，结果如下：乳糖发酵培养基。 五、应用 乳糖培养基可以用于产β-葡聚糖酶的重组大肠杆菌BL21（DE3）-pET28a（+）-bgl的诱导表达及发酵： β-1,3-1,4-葡聚糖酶能够有效地降解植物和微生物细胞壁来源的β-葡聚糖,通过添加外源β-葡聚糖酶可有效解决啤酒酿造中麦汁过滤困难,啤酒的非生物稳定性降低等问题,在饲料工业中也可提高禽畜对麦类饲料养分的吸收效率。 目前啤酒工业及饲料加工业中使用的β-葡聚糖酶制剂,主要是利用真菌或芽孢杆菌经传统通风发酵而生产。近年来,将外源β-葡聚糖酶基因通过合适的质粒载体克隆到大肠杆菌中进行表达得到了广泛的研究和应用。 本研究室自行构建了重组大肠杆菌E.coli BL21(DE3)-pET28a(+)-bgl,该菌克隆了源自一株淀粉液化芽胞杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)的高产β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因,在乳糖或IPTG的诱导下可实现重组葡聚糖酶的表达。本文针对影响重组菌表达效果的因素(如菌体的生长状态、诱导剂的最优作用条件、培养基的组成等)对诱导表达条件进行了优化,并初步进行了7升规模的放大发酵实验。 所得的主要结论如下： 1、在25 mL起始pH为7.0的LB培养基中,接入10%(以0.35的OD值为分值)处于对数中期的二级种子液,37℃、200 r/min振荡培养至菌液OD值为1.0左右时加入诱导剂,此时β-葡聚糖酶相对酶活最高。 2、采用正交实验的方法优化了在LB培养基中诱导剂的作用条件,得到的最佳诱导参数为:IPTG浓度0.0336 mmol/L,乳糖浓度10 mmol/L,诱导温度24℃,诱导时间6 h。发酵清液酶活达到336.33 U/mL,较优化前提高44.3%,该酶活是原始菌的4.85倍。 3、利用Plackett-Burman design实验设计方法对初始培养基中各组分进行了主效应分析,其中的甘油、酵母粉、氯化钠为主效应因子。采用Box-Benhken实验设计,以及MATLAB7.0的响应面回归(RSREG)和NESS数据处理软件对实验结果进行分析,得到了三个主效应因子的最佳浓度及最佳培养基组成(g/L):甘油18.9,酵母粉45.6,NaCl5.3,胰蛋白胨5.0,KH2PO42.8,K2HPO4.3H2O  4、8。最优浓度下酶活预测最大值为2053.1U/mL,菌种在优化后的培养基中发酵12 h,酶活最高达到了2311.81 U/mL,超过预测值,与优化前相比,酶活提高了23.04%。4.7升规模放大发酵13 h,发酵清液中的酶活最高为4189.58 U/mL,与三角瓶发酵最优结果相比提高了81.23%,该酶活是原始菌在最优条件下的酶活(853.33 U/mL)的4.91倍。 以上结果不仅为重组菌的进一步放大发酵提供了可靠的参考依据,也预示了该重组菌有着较好的工业化应用前景。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                  小鼠结肠平滑肌细胞的背景与应用及作用研究！ 一、背景 小鼠结肠平滑肌细胞分离自结肠组织；结肠在右髂窝内续于盲肠，在第3骶椎平面连接直肠。结肠分升结肠、横结肠、降结肠和乙状结肠4部分，大部分固定于腹后壁，结肠的排列酷似英文字母“M”，将小肠包围在内。结肠横切面由内到外依次为：黏膜(上皮层、固有层、黏膜肌层)，黏膜下层(疏松结缔组织)，肌层(内环形、外纵行两层平滑肌)，外膜(纤维膜或浆膜)。结肠平滑肌细胞主要分布于黏膜肌层和肌层的内环形、外纵行平滑肌；结肠运动少而缓慢，对刺激的反应也较迟缓。结肠平滑肌在食物消化与吸收、肠道运动和物质分泌、诱发全身炎症反应以及细胞内信号转导途径等研究中起着重要的作用。 结肠平滑肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展，细胞形态大小不一，呈梭形、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形、居中；2周后细胞汇合，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏；细胞密度低时，常交织成网状；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快，4-6天即可汇合，并保持上述形态学特征和生长特点。 结肠平滑肌运动活性受到神经递质、胃肠激素和药物等因素的调节。随着现代胃肠动力学研究的进展，对胃肠运动的研究已从器官、组织水平发展到细胞、分子水平，要求在胃肠道单个平滑肌细胞标本上来完成各种电生理、药理和分子生物学等实验。体外培养细胞，由于影响因素单一，是研究细胞功能以及相应的细胞信号转导机制的基础。 二、小鼠结肠平滑肌细胞培养操作 1）复苏小鼠结肠平滑肌细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2）小鼠结肠平滑肌细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 2.加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。 4.将细胞悬液按1：2比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 3）小鼠结肠平滑肌细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为类； 1、细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入1ml含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 2、4 min 1000rpm离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存1ml细胞悬液，注意冻存管做好标识。 3.、将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 三、应用 小鼠结肠平滑肌细胞可以用于脑源性神经营养因子对小鼠结肠平滑肌细胞的重构作用： 通过引入BDNF基因敲除(BDNF+/-)小鼠,观察BDNF+/-小鼠结肠SMC超微结构的改变及结肠组织平滑肌α-肌动蛋白(smooth muscle a-actin,α-SMA)表达水平的变化,并应用BDNF和TrkB受体阻滞剂(K252a)体外干预C57bl/6小鼠结肠SMC,检测SMC形态及α-SMA、相关信号通路蛋白、细胞内钙离子浓度的变化,研究BDNF是否可以直接引起小鼠结肠平滑肌细胞的重构,进而影响肠道动力。 方法： 1、实验选用健康野生型C57B1/6(BDNF+/+)小鼠和BDNF基因敲除(BDNF+/-)小鼠：电镜检测BDNF+/+小鼠和BDNF+/-小鼠结肠平滑肌细胞超微结构的差异；利用Western blotting方法检测BDNF+/-小鼠和BDNF+/+小鼠α-SMA表达水平的差异。 2、培养原代小鼠结肠平滑肌细胞：细胞免疫荧光鉴定原代结肠SMC是否有TrkB受体的表达；BDNF及K252a分别干预结肠平滑肌细胞,根据干预不同,分为三组①对照组②BDNF组K252a组,三组细胞均于干预24小时后进行后续实验；细胞免疫荧光检测BDNF及K252a干预后结肠平滑肌细胞形态的改变；Western blotting检测干预后SMC中α-SMA,TrkB-PLC-Ca2+信号通路蛋白表达量的变化；钙离子成像检测BDNF和K252a干预下SMC中细胞内钙离子浓度的瞬时改变。 3、统计学处理：采用SPSS 17.0软件,计量资料以x±s表示。BDNF+/-小鼠和BDNF+/+小鼠结肠组织α-SMA表达水平、干预前后细胞内钙离子相对荧光强度值的比较采用独立样本t检验；BDNF和K252a干预SMC,对照组、BDNF组及BDNF+K252a组细胞核大小、细胞密度、α-SMA表达水平、TrkB信号通路蛋白表达水平总体采用单因素方差分析,若总体差异有统计学意义,以Bonferroni法进行组间两两比较。P 结果： 1、与BDNF+/+小鼠相比,BDNF+/-小鼠结肠平滑肌细胞细胞间隙增宽,充填了大量的胶原纤维；平滑肌细胞的边界呈多个球状突起；胞体内肌丝的密度减少； 2、与BDNF+/+小鼠相比,BDNF+/-小鼠结肠α-SMA表达水平明显降低； 3、小鼠原代结肠SMC表达TrkB受体； 4、在BDNF作用下,免疫荧光结果显示SMC细胞核体积增大,细胞密度增加,骨架蛋白荧光强度增强,BDNF+K252a干预组细胞的形态改变相反； 5、BDNF组SMC中α-SMA蛋白表达水平明显高于对照组和BDNF+K252a组; 6、BDNF组结肠平滑肌细胞中TrkB-PLC-Ca2+信号通路蛋白表达水平明显升高,且在BDNF干预下SMC内钙离子浓度明显升高,K252a可阻断以上变化。 结论： 1、BDNF+/-小鼠与BDNF+/+小鼠相比,结肠平滑肌细胞的超微结构和功能均发生了改变。 2、小鼠原代结肠平滑肌细胞表达TrkB受体,且BDNF干预SMC后,小鼠结肠SMC的形态和功能均发生了改变,K252a可以阻断以上变化。 3、BDNF可能通过TrkB-PLC-Ca2+信号通路引起小鼠结肠平滑肌细胞的重构,进而影响肠道动力。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                         菜豆链格孢特点与优势及微生物培养方法！ 菜豆链格孢是链孢霉目黑霉科的真菌生物。分生孢子具横隔膜6～12个，纵、斜隔膜0～6个，主要用于教学，研究。 一、菌种简介平台编号：Bio-23305规格：培养物拉丁属名：Alternaria Brassicae中文名称：菜豆链格孢拉丁属名：Alternaria种名加词：brassicae (Berk.) Sacc.收藏时间*：2006-12-15来源历史：山东莱阳农学院转原产国：中国资源归类编码：15151912101模式菌株：非模式菌株主要用途：研究；教学特征特性：分生孢子具横隔膜6～12个，纵、斜隔膜0～6个，孢身64.0～158.0×19.5～38.0（～43.5）µm，喙23.0～93.0×6.0～8.0µm生物危害程度：四类寄主中文名称：菜豆致病对象：植物分离基物：病叶病斑采集地区：山东采集具体地点：莱阳农学院东门梨园菜豆地培养基信息：培养基编号: 14 培养基名称: PDA培养温度：26-29资源保护类型：培养物保藏方法：定期移植法共享方式：资源交换性共享提供形式：斜面培养物实物状态：有实物用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、产品特点1、菌种功能明确、品种稳定、应用;2、产品仅限用于科研本品芽孢含量高,稳定性好、耐高温和挤压;3、繁殖能力快、定植能力强、易存活、耐受低pH值环境;4、复活迅速,可在短期内成为优势种群;5、本品安全高效、无抗药性、不污染环境;6、对多数抗生素不敏感,可与低浓度抗革兰氏阴性菌抗生素同时使用。 三、产品优势1、产品质量稳定,是为科研和 提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。2、国内首创封闭管包装,冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法,保证菌种的复苏质量。3、严格的质检程序,确保产品质量的稳定性。4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业,疾控中心、质检局、出入境、药检局等等,得到广泛好评。 四、微生物菌种培养1、孢子制备⑴ 放线菌孢子的制备一般采用琼脂斜面培养基,培养基中含有一些适合产孢子的营养成分,如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。碳源和氮源不要太丰富(碳源约为1%,氮源不超过0.5%),碳源丰富容易造成生理酸性的营养环境,不利于放线菌孢子的形成,氮源丰富则有利于菌丝繁殖而不利于孢子形成。一般情况下,干燥和限制营养可直接或间接诱导孢子形成。放线菌斜面的培养温度大多数为28 ℃,少数为37 ℃,培养时间为5~14天。⑵ 产品仅限用于科研霉菌孢子的制备霉菌的孢子培养,一般以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基。这是由于这些农产品中的营养成分较适合霉菌的孢子繁殖,而且这类培养基的表面积较大,可获得大量的孢子。霉菌的培养一般为25~28 ℃,培养时间为4~14天。2、种子制备⑴ 摇瓶种子制备摇瓶种子进罐,常采用母瓶、子瓶两级培养,有时母瓶种子也可以直接进罐。种子培养基要求比较丰富和完全,并易被菌体分解利用,氮源丰富有利于菌丝生长。原则上各种营养成分不宜过浓,子瓶培养基浓度比母瓶略高,更接近种子罐的培养基配方。⑵ 种子罐种子制备种子罐种子制备的工艺过程,因菌种不同而异,一般可分为一级种子、二级种子和三级种子的制备。孢子(或摇瓶菌丝)被接入到体积较小的种子罐中,经培养后形成大量的菌丝,这样的种子称为一级种子,把一级种子转入发酵罐内发酵,称为二级发酵。如果将一级种子接入体积较大的种子罐内,经过培养形成更多的菌丝,这样制备的种子称为二级种子,将二级种子转入发酵罐内发酵,称为三级发酵。同样道理,使用三级种子的发酵,称为四级发酵。 五、保藏方法1、传代培养保藏法又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等（后者作保藏厌氧细菌用），培养后于4-6℃冰箱内保存。2、液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间，它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡，一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。3、载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。4、寄主保藏法用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次氏体、螺旋体等，它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代，此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。5、冷冻保藏法可分低温冰箱（-20-30℃，-50-80℃）、干冰酒精快速冻结（约-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。6、冷冻干燥保藏法先使微生物在极低温度（-70℃左右）下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分（真空干燥）。有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液，以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                 原代细胞人胰腺上皮细胞的质量检测与培养方法！ 一、产品信息平台编号：Bio-73485规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶细胞信息：原代细胞产品名称：人胰腺上皮细胞组织来源：胰腺组织培养条件：原代细胞取组织现分产品规格：5×105cells/T25细胞培养瓶用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞简介人胰腺上皮细胞分离自胰腺组织；胰腺分为外分泌腺和内分泌腺两部分。外分泌腺由腺泡和腺管组成，腺泡分泌胰液，腺管是胰液排出的通道。胰液中含有碳酸氢钠、胰蛋白酶原、脂肪酶、淀粉酶等。胰液通过胰腺管排入十二指肠，有消化蛋白质、脂肪和糖的作用。内分泌腺由大小不同的细胞团──胰岛所组成，胰岛主要由4种细胞组成：α细胞、β细胞、γ细胞及PP细胞。α细胞分泌胰高血糖素，升高血糖；β细胞分泌胰岛素，降低血糖；γ细胞分泌生长抑素，以旁分泌的方式抑制α、β细胞的分泌；PP细胞分泌胰多肽，抑制胃肠运动、胰液分泌和胆囊收缩。胰腺干细胞在发育上被认为分离自内胚层胰腺上皮，在随后的胰腺发育过程中，胰腺干细胞分化为胰岛细胞(α、β、δ、PP细胞)、导管上皮细胞以及腺泡细胞。胰腺组织中还存在大量的间充质来源的细胞，包括成纤维细胞、血管内皮细胞、血管平滑肌细胞以及星形细胞，其中以成纤维细胞占主要部分。要离体分离培养获得胰腺上皮细胞就要排除间充质来源的细胞，尤其是成纤维细胞。目前常用的去除成纤维细胞方法有机械刮除法、胰蛋白酶消化以及胶原酶消化法等，胰腺上皮细胞的病变与急慢性胰腺炎的发生具有重大意义。 三、方法简介实验室分离的人胰腺上皮细胞采用胶原酶分次消化法并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。 四、质量检测实验室分离的人胰腺上皮细胞经Cytokeratin-19免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。 五、培养信息包被条件鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）培养基含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等换液频率每2-3天换液一次生长特性贴壁细胞形态上皮细胞样传代特性可传2-3代消化液0.25%胰蛋白酶培养条件气相：空气，95%；CO2，5%人胰腺上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                     西方许旺酵母西方变种的特点与优势及培养！ 许旺酵母属是Schwanniomyces属的微生物，原产地为中国。在YM固体培养基中25 ℃培养3天后，细胞呈圆形及卵圆形，细胞大小为3～8×3～10 μm。无性繁殖方式为多边芽殖。在YM平板上培养，菌落为圆形、凸起、乳白色。主要用途为研究。 一、菌种简介平台编号：Bio-06225提供形式：冻干物拉丁属名：Schwanniomyces Occidentalis Var. Occidentalis中文译名：西方许旺酵母西方变种拉丁学名：Schwanniomyces occidentalis var. occidentalis原始编号：BCRC 20332菌株来源：←食品工业发展研究所菌种保存及研究中心(台湾)直接来源国家：中国保藏时间：10/19/1990其他保藏编号：=ATCC 26077 =CBS 2863 =IFO 1840 =JCM 8124 =NRRL Y-2477生物危害：四类模式菌株：非模式菌株菌株用途：能利用木薯生淀粉培养温度：25℃培养基：0013    用途：能利用木薯生淀粉注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、产品特点1、菌种功能明确、品种稳定、应用;2、产品仅限用于科研本品芽孢含量高,稳定性好、耐高温和挤压;3、繁殖能力快、定植能力强、易存活、耐受低pH值环境;4、复活迅速,可在短期内成为优势种群;5、本品安全高效、无抗药性、不污染环境;6、对多数抗生素不敏感,可与低浓度抗革兰氏阴性菌抗生素同时使用。 三、产品优势1、产品质量稳定,是为科研和 提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。2、国内首创封闭管包装,冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法,保证菌种的复苏质量。3、严格的质检程序,确保产品质量的稳定性。4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业,疾控中心、质检局、出入境、药检局等等,得到广泛好评。 四、微生物菌种培养方法1、孢子制备⑴ 放线菌孢子的制备一般采用琼脂斜面培养基,培养基中含有一些适合产孢子的营养成分,如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。碳源和氮源不要太丰富(碳源约为1%,氮源不超过0.5%),碳源丰富容易造成生理酸性的营养环境,不利于放线菌孢子的形成,氮源丰富则有利于菌丝繁殖而不利于孢子形成。一般情况下,干燥和限制营养可直接或间接诱导孢子形成。放线菌斜面的培养温度大多数为28 ℃,少数为37 ℃,培养时间为5~14天。⑵ 产品仅限用于科研霉菌孢子的制备霉菌的孢子培养,一般以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基。这是由于这些农产品中的营养成分较适合霉菌的孢子繁殖,而且这类培养基的表面积较大,可获得大量的孢子。霉菌的培养一般为25~28 ℃,培养时间为4~14天。2、种子制备⑴ 摇瓶种子制备摇瓶种子进罐,常采用母瓶、子瓶两级培养,有时母瓶种子也可以直接进罐。种子培养基要求比较丰富和完全,并易被菌体分解利用,氮源丰富有利于菌丝生长。原则上各种营养成分不宜过浓,子瓶培养基浓度比母瓶略高,更接近种子罐的培养基配方。⑵ 种子罐种子制备种子罐种子制备的工艺过程,因菌种不同而异,一般可分为一级种子、二级种子和三级种子的制备。孢子(或摇瓶菌丝)被接入到体积较小的种子罐中,经培养后形成大量的菌丝,这样的种子称为一级种子,把一级种子转入发酵罐内发酵,称为二级发酵。如果将一级种子接入体积较大的种子罐内,经过培养形成更多的菌丝,这样制备的种子称为二级种子,将二级种子转入发酵罐内发酵,称为三级发酵。同样道理,使用三级种子的发酵,称为四级发酵。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！