大鼠肝内胆管上皮细胞的处理方法与培养操作步骤！ 一、产品信息平台编号：Bio-133622规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶细胞信息：SD细胞名称：SD大鼠肝内胆管上皮细胞产品类别：大鼠细胞系生长特性：贴壁生长培养体系：DMEM（高糖）+10%FBS传代方法：1：2传代细胞形态：上皮细胞样冻存条件：无血清细胞冻存液细胞描述：本库的细胞仅用于科研工作，未经许可不得用于其他目的，使用者不得将本库细胞转让给第三者。用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、大鼠肝内胆管上皮细胞的特点和简介胆管，输送胆汁的管道。由肝分泌的胆汁，经肝左、右管、肝总管、胆囊管进入胆囊贮存，肝内胆管的部分包括：左、右肝管；左内叶、左外叶、右前叶、右后叶胆管；各肝段胆管；小叶间胆管；毛细胆管。常见的胆管病变如胆道闭塞、原发性硬化性胆管炎、胆管癌等，都是以胆管上皮为病变靶位，因此研究胆管上皮细胞的生物学特性和病理变化有重要意义。在这些病变过程中，肝内胆管上皮常暴露于常暴露于较高炎症因子中，会表现细胞损伤和继发性增值为特征的病理变化。 三、大鼠肝内胆管上皮细胞接受后处理方法1) 收到细胞后，请检查是否漏液 ，如果漏液，请拍照片发给我们。2) 请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。3) 弃去T25瓶中的培养基，添加 6ml本公司附带的完全培养基。4) 如果细胞密度达80%-90%请及时进行细胞传代，传代培养用6ml本公司附带的完全培养基。5) 接到细胞次日，请检查细胞是否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。 四、大鼠肝内胆管上皮细胞培养操作1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入 4mL 培养基混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。      1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。2.加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。  3.按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。4.将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；1、细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆脱落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。2、4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻存管做好标识。3、将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 五、大鼠肝内胆管上皮细胞培养注意事项1、收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。2、仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致。若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。3、用 75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落，将细胞置于培养箱内静置培养 4~6 小时,再取出观察。此时多数细胞均会贴壁，若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝染色测定细胞活力，如果证实细胞活力正常，请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养；如果染色结果显示细胞无活力，请拍下照片及时和我们联系，信息确认后我们为您再免费寄送一次。4、静置细胞贴壁后，请将细胞瓶内的培养基倒出，留 6~8mL 维持细胞正常培养，待细胞汇合度 80%左右时正常传代。5、请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件。6、建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和 Procell 技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。7、该细胞仅供科研使用。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   拜耳接合酵母——用于教学与研究及酿造酱油 拜耳接合酵母是Zygosaccharomyces属的微生物，原产地为中国。主要用途为分类；教学，具体用途为土壤微生物资源调查及分类学研究。 一、菌种简介平台编号：Bio-64396提供形式：冻干物拉丁属名：Zygosaccharomyces Bailii中文名称：拜耳接合酵母属名：Zygosaccharomyces种名加词：bailii来源历史：←四川省食品发酵工业研究设计院（2.638）收藏时间：2007.12.28原始编号：6411资源归类编码：15151115119模式菌株：非模式菌株主要用途：研究；教学；生产具体用途：酿造酱油。特征特性：化能异养；嗜温；趋酸；兼性厌氧。8Bx米曲汁培养3天菌落圆形、凸起、1-3mm，颜色乳白色、光滑、奶油状、全缘。细胞卵形、椭圆形、长形、单个或双个，2.60-4.26×3.69-15.53μm。无性繁殖方式为芽殖。    生物危害程度：四类致病对象：无培养基：5°Bé麦芽汁 1.0L，琼脂 15.0g，自然pH。培养温度：28-30℃资源保藏类型：培养物保存方法：真空冷冻干燥法实物状态：有实物共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享源数据主键：32184用途：研究；教学；生产；酿造酱油。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、形态特征 拜耳接合酵母，菌体在显微镜下观察呈杆状，G-，生活周期中无芽孢产生，为异养菌，好氧，生长不需要光照条件。尿素水解试验结果为－。  三、主要价值 拜耳接合酵母，主要用途为分类；教学，具体用途为土壤微生物资源调查及分类学研究。  四、微生物培养方法1、平板划线分离法:把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环圈在平板培养基表面,通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞,经培养后生长繁殖成单菌落。2、稀释涂布平板法将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养,在稀释度足够高的菌液里,聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞,从而能在培养基表面形成单个菌落。上述两种方法虽然都可以实现观察菌落特征的目的,但平板划线分离法不能对菌落计数,而稀释涂布平板法培养过程复杂,对平板的要求比较高,可参照以下步骤:a、制备平板培养基将氯化钠蔗糖琼脂培养基加热溶化并冷却至65℃,向氯化钠蔗糖琼脂培养基中加入克林霉素溶液3~5ml并混合均匀,然后取20ml混合均匀的培养基溶液倒入培养皿,轻轻摇动培养皿,使培养基溶液均匀分布在培养皿底部,待培养基溶液凝固后即得平板培养基。b、制备活性污泥混合液称取活性污泥土样15g,放入盛100ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶中,振摇15~20min混合均匀,用一支1ml无菌吸管从中吸取1ml土壤悬液加入盛有9ml无菌水的大试管中充分混匀,制成活性污泥混合液。c、培养基涂布从活性污泥混合液中吸取0.2ml,滴在平板培养基表面的中央位置,用无菌玻璃涂棒将活性污泥混合液沿同心圆方向轻轻地向外扩展,使之分布均匀。 五、保存方法1、传代保存法：培养基的浓度不宜过高,营养成分不宜过于丰富,尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种,则应在培养基中添加少量碳酸钙。2、液体石蜡覆盖保存法：该法较前一种方法保存菌种的时间更长,适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。3、悬液保存法：①蒸馏水保存法:适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌,将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。②糖液保存法:适用于酵母菌,如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗处保存,可长达10年。除此之外,也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。4、载体保存法：①土壤保存法;②砂土保存法;③硅胶保存法;④磁珠保存法;⑤麸皮保存法;⑥纸片(滤纸)保存法。5、常用的冷冻保存法：①低温冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃):低温冷冻保存时使用螺旋口试管较为方便,也可在棉塞试管外包裹塑料薄膜。保存时菌液加量不宜过多,有些可添加保护剂。此外,也可用φ5mm的玻璃珠来吸附菌液,然后把玻璃珠置于塑料容器内,再放入低温冰箱内进行保存的。②干冰保存法(-70℃左右):即将菌种管插入干冰内,再置于冰箱内进行冷冻保存。③液氮保存法(-196℃):是适用范围最广的微生物保存法。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                    甲基营养型芽胞杆菌的储存与培养及打管说明！ 甲基营养型芽胞杆菌是Bacillus属的微生物，原产地为中国。G+，菌体杆状，单个或“V”字型排列。菌落近圆形，表面光滑，边缘整齐，浅黄色。液体培养中度混浊，有沉落物。主要用途为研究，具体用途为产谷氨酸。 一、菌种简介平台编号：Bio-58279规格：冻干物拉丁属名：Bacillus Methylotrophicus中文名称：甲基营养型芽胞杆菌拉丁名称：Bacillus methylotrophicus模式菌株：否其它保藏中心编号：=AS 2.1203来源历史：←四川省食品发酵工业研究设计院（1.198）←无锡酶制剂厂←中科院微生物研究所收藏时间：2005/12/20原产国：中国特征特性：菌落不规则，奶油色或褐色，菌表起皱，3-6mm(30℃培养3天)。细胞杆状，单个或成对，很少成链；鞭毛侧生，G+，产芽胞，形成抗热内生孢子，微碱，有机化能，兼性厌氧；还原石蕊牛奶，迅速消化酪素而凝快少；无精氨酸双水解酶，溶血作用可变，不产生卵磷脂酶，产生多肽抗菌素。产脂肪酶。产去乙酰头孢菌素乙酰木聚糖酯酶(cephalosporin deacetylating acetyl xylan ester参考用途：生产脂肪酶。生物危害程度：四类致病对象：无培养基编号：CM0050培养基名称：营养肉汁加葡萄糖培养基(Nutrient Broth and Glucose Medium)CM0050:蛋白胨 30.0g，葡萄糖 1.0g，牛肉膏 5.0g，NaCl 5.0g，琼脂 15g，蒸馏水 1.0L，pH7.2。培养温度：30 ℃需氧类型：好氧用途：研究；生产；生产脂肪酶。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、储存条件冻干菌种和试管斜面请置于 2-8℃冷藏。西林瓶菌种请置于-20℃冷冻。甘油请置于-80℃ 三、培养条件1、培养基编号： 营养肉汁加葡萄糖培养基(Nutrient Broth and Glucose Medium)2、培养基成分：蛋白胨 30.0g，葡萄糖 1.0g，牛肉膏 5.0g，NaCl 5.0g，琼脂 15g，蒸馏水 1.0L，pH7.2。3、需氧类型：好氧4、培养温度：30℃ 四、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、试管斜面菌种请尽快转接，不建议长期存放。3、初次使用时请按照本说明书推荐条件进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系或更换新的菌种。 五、打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉檫试冻干管表面进行消毒，将管顶端于酒精灯外焰上均匀加热；立即滴 2-3 滴无菌水于加热部位，使管壁破裂；再用镊子或其他适宜工具敲下破裂处。2、菌株恢复培养：用无菌吸管吸取 0.5ml 左右液体培养基(固体培养基去掉琼脂即可)于冻干管中将冻干菌粉全部溶解。将溶解后的菌悬液转移至盛有 4~5mL 液体培养基的试管中混匀，可将残留在吸管中 1-2 滴菌悬液转接至固体培养基上。将液体试管和斜面试管于推荐条件下静置培养。以液体培养结果为准。3、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在 2-8℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，需要转接至 2-3 代恢复活力。4、复苏后的菌种在传 1-2 代后使用。5、暂不启开的安瓿管应于 4℃中保藏（特殊除外）。6、冻干管打开后需一次用完，不能留存。7、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。8、打管操作应在烧杯或托盘上方进行，用完冻干管应灭菌处理后丢弃。9、如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到后 2 个月内联系，逾期不予受理。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                  脂肪组织中分离巨噬细胞的实验步骤与注意事项！ 一、实验步骤 1、分离 用PBS清洗脂肪组织，并将组织放在冰上的培养皿中，用剪刀将组织切成小块（约3-5mm）。 将切碎的组织转移到含有7mL冰冷消化缓冲液的10mL圆底管中，此操作需一直保持在冰上。对于>1g的脂肪，将组织切碎并转移到含有10mL冰冷消化缓冲液的50mL锥形管中。 加入1mL（如脂肪组织重量>1g则可以增加至1.5mL）10× 胶原酶缓冲液，并加入消化缓冲液使得胶原酶的最终浓度为1mg/mL。 在37°C下孵育半小时，且使试管剧烈摇晃。每10分钟大力摇动试管，可获得更高的细胞产量。30分钟后，取10µL产物进行显微镜观察，此时，脂肪细胞应显示为大的单细胞，白细胞和其他基质细胞会小得多。如果白细胞仍附着在脂肪细胞上，则应继续消化；如果没有，请继续下一步。 消化后，将EDTA添加到10 mM的最终浓度，并在37°C下再孵育10分钟。 2、过滤 用 PBS预湿100 µm尼龙过滤器，然后放置在50mL锥形管上。使用移液管，将前述样本的细胞沉淀先转移到过滤器上过滤，然后再过滤含有脂肪细胞的上层。 加入10 ml FACS 缓冲液轻轻清洗过滤器两次。 3、离心 在4 °C下以500×g 离心10分钟以分离脂肪细胞和巨噬细胞。离心后，脂肪细胞在顶部形成白色层，而巨噬细胞等其它细胞在管底部形成红色或白色沉淀。 轻轻吸出并丢弃脂肪细胞和上清液。此时，含有巨噬细胞的团块很容易受到干扰，因此应格外小心。 4、获取巨噬细胞 通过轻弹试管将沉淀重悬于0.5 mL红细胞裂解液中。在室温下孵育5分钟，偶尔轻轻摇晃。 通过添加5 mL FACS缓冲液，中和红细胞裂解作用。 在4 °C下以500×g 离心10分钟。 在3—5 mL FACS缓冲液中重悬细胞沉淀并在冰上孵育。 5、巨噬细胞计数 将10 µL每个样品1:1与台盼蓝溶液混合。使用血细胞计数板仔细计数活细胞。根据计数得到的细胞数量，结合获得的样本总体积，可计算出每份脂肪组织巨噬细胞产量。典型的产量：瘦小鼠一般为1-3×1000000个细胞/g脂肪，肥胖小鼠一般为2-5×1000000个细胞/g脂肪。 二、注意事项 1、尽可能切碎组织，在消化过程中频繁手动摇动增加接触面积。 2、胶原酶消化脂肪组织时，碎组织大小、摇动强度和孵育时间是关键参数，应对其进行优化，以最大限度地提高从脂肪提取巨噬细胞的产量。 3、胶原酶的消化时间应根据每批胶原酶分别进行优化。增加胶原酶缓冲液中的孵育时间，尤其是超过1小时，会显著降低细胞产量并增加细胞死亡几率。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  NCI-H520人肺腺鳞癌贴壁细胞系的知识与应用！ 一、背景 NCI-H520人肺腺鳞癌贴壁细胞系是由Gazdar AF等在1982年建系而来，源于鳞状细胞肺癌组织；NCI-H520细胞p53 mRNA表达水平较正常肺组织低，但是没有大的结构DNA的异常。NCI-H520细胞角蛋白、波形蛋白阳性，神经丝三联蛋白阴性；NCI-H520细胞在软琼脂中可形成克隆。 二、NCI-H520人肺腺鳞癌贴壁细胞系细胞复苏、传代及冻存流程参考： 1、NCI-H520人肺腺鳞癌贴壁细胞系细胞复苏 1）配制NCI-H520人肺腺鳞癌贴壁细胞系完全培养基：基础培养基+胎牛血清+双抗（特殊培养基特殊配置）； 2）NCI-H520人肺腺鳞癌贴壁细胞系细胞复苏：取5ml完全培养基于15ml离心管中，37℃水浴锅预热，从液氮管（或者-80度冰箱）中快速取出冻存的细胞，放入37℃水浴锅中，摇晃使快速化冻（1min左右），然后将化冻的细胞和预热的培养基，移入超净工作台中，化冻的细胞加入到含预热培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min； 3）吸弃上清，得到细胞沉淀，用2ml完全培养基轻轻重悬细胞，加入到T25培养瓶中，做好标记，放入37℃，5%CO2饱和适度培养箱中培养（培养皿复苏效果更好）； 4）24h后，观察细胞贴壁情况（未贴壁的即为死细胞--针对贴壁细胞），吸弃旧培养基，加入新鲜的预热（室温或37℃）的完全培养基，继续培养。 2、NCI-H520人肺腺鳞癌贴壁细胞系细胞传代 1）待细胞生长到80%-90%汇合度时，吸弃旧的培养基，加入1ml无菌PBS润洗一次，以去除残余的培养基及血清（血清含有胰酶的抑制因子），然后加入1ml 0.25%胰酶，37℃培养箱中消化（1~2min左右，不同细胞消化时间不同），取出细胞，镜下观察细胞至细胞皱缩变圆； 2）加入1ml完全培养基（含FBS）终止消化，轻轻拍打，使细胞脱落下来成单个细胞悬液，收集细胞于15ml无菌离心管中，1000rpm，离心5min； 3）收集细胞沉淀，完全培养基重悬，一分为二（可根据细胞生长速度调整比例），分别加入到2个新的培养瓶中，做好标记，放入培养箱中培养。 3、NCI-H520人肺腺鳞癌贴壁细胞系细胞冻存 1）按照细胞传代方法，在超净工作台内消化收集细胞沉淀，取少量细胞用于计数； 2）用预冷的1ml冻存液（90%完全培养基+10%DMSO）或者无血清细胞冻存液重悬细胞，加入到1.2ml冻存管中，密度为1*106个/ml。 3）放入程序冻存盒，-80℃过夜后，转入液氮长期保存。 三、应用 NCI-H520人肺腺鳞癌贴壁细胞系可以用于左卡尼汀对多西他赛抑制NCI-H520细胞增殖作用影响的研究： 探究心脏保护剂左卡尼汀(L-carnitine,L-CNT)对化疗药物多西他赛(Docetaxel,DTX)抑制肺癌细胞NCI-H520增殖作用的影响,并初步探索L-CNT影响DTX抗肿瘤作用的机制。 方法： 1、实验药物浓度的确定采用MTT法分别测定不同浓度的L-CNT和DTX在24小时对NCI-H520细胞增殖活性的影响,根据MTT的结果确定实验所采用的L-CNT和DTX的作用浓度。其中L-CNT的浓度范围为2.5、10、40、80μg·mL-1,DTX的浓度范围为0.25、2.5、5、10、25、50、100、200μg·mL-1。 2、L-CNT对DTX抑制NCI-H520细胞增殖的影响将NCI-H520细胞分为四组进行实验,分别为对照组(Control)、L-CNT组、DTX组以及联合用药组(L-CNT+DTX)。采用MTT法检测NCI-H520细胞增殖情况,倒置显微镜观察各组细胞形态学变化。 3、L-CNT对DTX诱导NCI-H520细胞凋亡及细胞周期变化的影响采用Annexin V-FITC/PI双染法经流式细胞仪检测NCI-H520细胞凋亡情况,PI单染检测细胞周期。 4、L-CNT影响DTX在NCI-H20细胞中抗肿瘤作用的机制研究。采用Western blot法检测细胞周期相关蛋白p21、p53以及细胞凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达。 结果： 1、确定L-CNT和DTX的实验浓度MTT的实验结果显示,L-CNT在2.5-80μg·mL-1浓度范围内,对NCI-H520细胞的增殖无明显影响,各组间的细胞增殖率没有统计学差异。而DTX在0.25-200μg·mL-1浓度范围内,对NCI-H520细胞增殖的抑制表现出明显的浓度依赖性,且随浓度的增加,抑制作用增强。DTX在24h的IC50值为40μg·mL-1。结合临床患者L-CNT用药剂量,确定L-CNT和DTX的实验浓度分别为80μg·mL-1和40μg·mL-1,实验时间为24h。 2、L-CNT能够增强DTX对NCI-H520细胞增殖的抑制作用倒置显微镜下观察结果显示,Control组和L-CNT(80μg·mL-1)组的细胞间连接紧密,细胞轮廓清晰饱满,两组无明显差别,DTX(40μg·mL-1)组细胞出现皱缩、胞质空泡化,细胞间隙变大,L-CNT(80μg·mL-1)+DTX(40μg·mL-1)组细胞间隙进一步增加,细胞数量减少。MTT结果显示,Control组和L-CNT(80μg·mL-1)组的增殖率无明显变化。与DTX(40μg·mL-1)组相比,L-CNT(80μg·mL-1)+DTX(40μg·mL-1)组的增殖率由65.73±2.22%下降到54.4±1.67%(P 3、L-CNT通过调节细胞周期增强DTX对NCI-H520细胞增殖的抑制作用细胞凋亡的实验结果显示,在24h,与Control组相比,L-CNT(80μg·mL-1)组、DTX(40μg·mL-1)组和L-CNT(80μg·mL-1)+DTX(40μg·mL-1)组的凋亡率没有发生明显变化。细胞周期的实验结果显示,与Control组相比,L-CNT(80μg·mL-1)组细胞周期没有发生明显变化。DTX(40μg·mL-1)组细胞发生明显的G2/M期阻滞,G0/G1期细胞比例由70.23±4.5%降低至11.52±0.89%,G2/M期细胞由11.11±2.48%升高至54.91±2.38%,差异均具有统计学意义(P 4、L-CNT能够增高周期相关蛋白的表达与Control组相比,L-CNT(80μg·mL-1)组p21、p53、Bax和Bcl-2在蛋白水平的表达上均无明显差异;DTX(40μg·mL-1)组细胞的周期相关蛋白p21和p53在蛋白的表达水平上有显著升高,差异具有统计学意义(P 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                 肠道微生物影响记忆？揭秘菌群变化如何改变大脑 百欧博伟生物：我们每个人的体内和体表，生活着为数众多的小伙伴：病毒、细菌、真菌、寄生虫……这些微生物的细胞数量可能比你自身的细胞还要多。不难想象，它们与其代谢产物会对人体健康产生诸多影响。而近些年层出不穷的科学研究，揭示出人体微生物的影响之大，仍然时不时突破我们的想象。 顶尖学术期刊《自然》今日在线发表的一篇论文，再次刷新了我们对肠道菌群的认识。科学家通过小鼠研究发现，肠道菌群的变化会改变大脑神经元的功能和结构，进而影响动物的行为。同期刊发的评论给予这项工作很高评价，认为“代表了我们对肠-脑相互作用的理解有了一次飞跃”。 这项研究来自威尔·康奈尔医学院（Weill Cornell Medicine）。David Artis教授和同事用一项经典的动物实验考察了微生物群对大脑学习能力的影响。 他们让小鼠学习的是恐惧记忆的消除。具体来说，是训练小鼠先把一种声音与轻微的电击联系起来，形成条件反射，小鼠在听到声音后就会害怕地身体僵住。随后，当电击不再和声音同时出现，正常情况下，小鼠慢慢地就会消除对声音的恐惧。 然而，在给成年小鼠用了抗生素后，随着菌群被消除，小鼠还是会在听到声音提示后表现出恐惧反应。另一组生长在无菌环境、体内缺乏微生物群的小鼠，出现了类似的情况，先前对声音建立的恐惧难以消除。 这些行为变化归根结底来自于大脑，因此科学家们非常好奇，体内缺少了微生物为什么会对大脑有这样的作用？接下来，这支研究团队展开了深入而细致的探秘工作。 大脑内侧前额叶皮层（mPFC）是消除恐惧反应依赖的关键脑区，因此研究人员用显微成像的手段观察小鼠该部位的神经活动模式，比较普通小鼠和抗生素小鼠在神经连接结构上的差别。消除恐惧反应的过程中，神经连接的细微结构发生着动态变化，可是在清除体内微生物群后，这种连接强度的可塑性受到了影响。 不仅如此，这项研究还采用先进的单细胞RNA测序技术，识别整个mPFC各细胞类型中的基因表达变化。结果表明，缺少肠菌主要影响兴奋性神经元。 而在各类细胞中，小胶质细胞的基因表达变化尤其引人注目。它们是大脑中重要的先天免疫细胞，抗生素对微生物群的改变让小胶质细胞表达更多与未成熟状态有关的基因。 那么，肠道菌群是通过什么途径来影响大脑的神经元与小胶质细胞，这篇论文提供了一个答案。 研究人员在肠道代谢物中鉴定出四种化合物，它们在无菌小鼠体内的含量大大低于对照组，有可能是肠-脑相互作用的分子。 总结来看，这篇论文从多个角度验证了体内微生物群及其代谢产物对神经活动和大脑行为的影响。这些发现还为临床转化指出了方向。“几乎所有的神经精神疾病中都可以看到认知和突触可塑性的改变。”有专家指出，“这项研究为帮助这些人提供了新的策略，或许可以针对肠道菌群及其代谢产物进行治疗。” 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                  CRO实验室洁净室中细菌真菌的污染控制措施！ 百欧博伟生物：生物细胞研发实验室是现代科学研究的核心基地，为推动生命科学和医药领域的创新发展提供了坚实的支撑。在生物细胞研发领域的实验室环境中，微生物威胁一直是一项重要的问题。为了确保实验的准确性和可靠性，在实验室中对空间进行适当的消毒是非常关键的。 首先，要了解实验室中可能存在的常见微生物威胁，包括细菌、真菌和病毒等。根据不同的威胁类型，采取相应的消毒方法。 1、对于细菌的消毒，可以使用常见的消毒剂，例如乙醛、氯化物、乙酸等。根据实验室的需求和设备的特点，选择合适的消毒剂并按照正确的浓度和使用方法进行消毒处理。 特别提示，如遇到芽孢及孢子等高抗微生物，需要特别技术来杀灭，一般推荐杀孢子剂来解决。 Spores可以翻译成芽孢，也可以翻译成孢子。芽孢和孢子都是微生物的一种形态，但严格来说两种是完全不同的物质。芽孢是细菌的休眠体，具有极高的物理和化学抗性，在极端不利的条件下能存活数年。而孢子是指蕨类植物，藻类植物，苔藓植物，真菌等产生的繁殖器官，在微生物学上主要指真菌孢子。 所以Spores准确来说应叫“杀芽孢剂”而不是“杀孢子剂”，但由于真菌（霉菌）孢子也是制药车间需要严格控制的微生物体，长期下来，“杀孢子剂”就成为了约定俗成，也是目前制药实验室等行业内的常用名称。 杀孢子剂主要类型： 强氧化剂对微生物的杀灭效力最强，因为强氧化剂能够破坏或分解细胞壁，迅速扩散进入细胞内，氧化细胞内酶或RNA、DNA，从而菌原体死亡。过氧化氢和过氧乙酸是强氧化剂中的典型代表，也是构成杀孢子剂的主要成分。 杀孢子剂有两种： 主要产复合型过氧乙酸（过氧乙酸和过氧化氢复合） 欧盟：主要产过氧化氢银离子杀孢子剂（新一代杀孢子剂），典型代表德国奥克泰士。 杀孢子剂优缺点分析： 过氧乙酸+过氧化氢优点是时间较早，药剂对细菌芽孢等微生物具有高效杀灭作用；其缺点是过氧乙酸具有毒性和致癌效应，具有刺鼻性气味，对操作人员身体危害很大，且过氧乙酸腐蚀性没有得到严格控制，对设备表面的腐蚀性较大。 过氧化氢银离子：由过氧化氢和极其痕量的银离子组成的两相复合型物质，解决了过氧化氢不稳定的化学特性，对腐蚀性进行了严格控制，同时增加了杀菌效力，属于新一代生态型杀孢子剂。奥克泰士优点是无色无味，无毒无残留，能够高效杀灭包括细菌芽孢在内的所有类型微生物，且对人体无任何毒性危害，其腐蚀性得到严格控制，对金属等材料基本无腐蚀；其缺点是由于生产工艺要求高，目前仅有德国部分企业具有生产实力。 简单总结，两种类型的灭菌效果都很好，但过氧乙酸的腐蚀性相对较大，具有一定毒性和刺激性。过氧化氢银离子属于新一代杀孢子剂，基本无腐蚀，生态无毒，基本无刺激。 2、对于真菌的消毒，可以采用酒精、菌落计数器和紫外线消毒等方法。酒精能有效地杀灭真菌，并且使用方便，但需要注意使用时要遵循安全操作规程。菌落计数器可以通过紫外线灭菌功能对实验室仪器和物品进行消毒。紫外线消毒是一种无污染的方法，能够高效地杀灭真菌，但对于空间环境使用和日常维护比较好，紫外线的作用机制是通过对微生物的核酸及蛋白质等的破坏作用而使其灭活。适合于实验室空气、地面、操作台面灭菌。缺点：用紫外线杀菌不能边照射边进行实验操作，因为紫外线不仅对人体皮肤有伤害，而且对培养物及一些试剂等也会产生不良影响。 尤其是遇到霉菌，酵母菌污染，霉菌的抗性高，一般消毒方式无法杀灭，易滋生和传播，需要用高效消毒剂解决。 特别是在发生泼溅后，可以使用70%乙醇擦拭工作台面。但要注意的是酒精对细菌具有较好的杀灭作用，但对真菌的效力有限，可以使用奥克泰士杀孢子剂来解决酒精无法较好解决的酵母、霉菌、芽孢的污染问题。 3、对于病毒的消毒，常用的方法包括高温灭菌和化学消毒。高温灭菌是一种常见且有效的病毒消毒方法，将实验器具置于高温环境中，能够迅速杀灭绝大多数病毒。化学消毒方法包括使用含氯消毒剂、过氧化氢等，这些消毒剂具有广谱杀菌作用，能够有效地杀灭病毒。 此外，消毒不仅仅限于实验室空间，还包括实验器具和设备等。要确保实验器具和设备在使用前进行彻底的清洁和消毒。常见的清洁和消毒方法包括物理清洗、化学清洁和蒸汽消毒等。 在进行消毒操作时，需要注意以下几点：首先，要选择合适的消毒剂和方法，根据实验室的需求和威胁类型进行选择；其次，要根据消毒剂的使用说明，正确使用和储存消毒剂；此外，要遵循正确的操作规程，保护个人安全，并且定期进行实验室环境的检查和维护。 特别提示：在选择消毒方式和消毒产品时，考虑实验人员的健康，对仪器设备腐蚀性和残留都有所考虑，一种消毒方式是否灵活应用，完成整个实验室的消毒灭菌工作，目前都在用生态安全且方便的即用型杀孢子剂， 总而言之，在生物细胞研发实验室中，空间微生物威胁的消毒是确保实验质量的重要环节。选择适当的消毒方法和消毒剂，并按照正确的操作规程进行消毒处理，可以有效地减少微生物威胁，确保实验结果的准确性和可靠性。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                  ACCC 11091副地衣芽孢杆菌冻干管打管说明！ 地衣芽孢杆菌（学名：Bacillus licheniformis）是一种在土壤中常见的革兰氏阳性嗜热细菌。该细菌可调整菌群失调达到治疗目的，可促使机体产生抗菌活性物质、杀灭致病菌。能产生抗活性物质，并具有独特的生物夺氧作用机制，能抑制致病菌的生长繁殖。 一、菌种简介平台编号：Bio-52501规格：甘油/培养物拉丁属名：Bacillus Paralicheniformis中文名称：副地衣芽孢杆菌拉丁名称：Bacillus paralicheniformis来源历史：收藏时间：2020-09-16 00:00:00.0原始编号：50原产国：中国模式菌株：是主要用途：产杆菌肽生物安全级别：一级其它保藏中心编号：ACCC 11091=IFFI 10181=ATCC 11946=CECT 621=NCTC 11946培养基编号：2培养温度：30℃培养时间：24-48h需氧类型：好氧分离基物：**采集地：**保存方法：冷冻干燥管保藏用途：产杆菌肽注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、培养基*营养琼脂培养基（NA）*胰蛋白胨大豆琼脂培养基（TSA）*LB 培养基（以上三款培养基任选中一款） 三、保藏条件斜面菌种和安瓿瓶冻干菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶请置于-20°C 保存。甘油管请置于-80°C 保存;请勿长期置于室温。  四、注意事项1）冻干首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取 0.3ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支斜面或平板；或直接接种液体培养基，以不超过 5ml 为宜）；2）经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养；如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；二次接种量要多，固体斜面培养基水分要少才能让菌体长得比较明显，液体培养要静止培养；3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系；7）如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到后 2 个月内联系，逾期不予受理；8）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛；9）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作；10）甘油管使用：使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降；11）西林瓶开封：用 75%酒精棉擦拭西林瓶外部，在安全柜内使用尖嘴钳去除塑料盖及铝盖， 注意不要同时打开胶塞。缓慢开启胶塞，用 75%酒精棉消毒瓶口部分，使用无菌吸管注入 0.5ml 适宜的液体培养基复溶冻干粉末。 五、冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂（应避免过多水蒸气影响菌种的复苏），用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。2、用无菌吸管吸取 0.3ml（建议勿超过 0.5ml）适宜的液体培养基(不添加琼脂)，滴入管内，轻轻振荡，待安瓿管内的菌体溶解呈悬浮状，将溶解后的菌悬液转移至盛有 4~5mL 液体培养基的试管中混匀，可将残留在吸管中的 1-2 滴菌悬液转接至固体培养基上。将液体试管和斜面试管于推荐条件下静置培养，以液体培养结果为准。3、冻干管打开后需一次用完，不能留存。另外，安瓿管内大部分是用牛奶做保护剂，里面菌体为少数，复苏时要全部菌悬液接在新鲜培养基上，否则可能造成复苏不成功。4、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。5、打管操作应在烧杯或托盘上方进行，用完冻干管应灭菌处理后丢弃。6、菌种复苏时，请务必记录好菌种的编号和制备批号，如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到后 2 个月内联系，逾期不予受理。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                   大鼠腹腔巨噬细胞的应用及培养操作规程！ 一、背景 大鼠腹腔巨噬细胞是一种常用的细胞模型，在生物学和医学研究中广泛使用。这些细胞来自SD大鼠（出生2-3周），通常从其腹腔中提取并用于实验。 这些细胞具有巨噬细胞的特性，可以吞噬和消化细胞碎片和外来物质。它们在培养中通常贴壁生长，形态为巨噬细胞样。这种细胞系是非常受欢迎的实验工具，尤其是在研究免疫反应、炎症和细胞信号转导等方面。 这些细胞的生长需要特定的培养基，如DMEM高糖培养基，其中包含胎牛血清、巨噬细胞生长添加剂、青霉素和链霉素等。这些培养基的配方旨在提供最佳的生长条件，以支持大鼠腹腔巨噬细胞的生长和维持。 此外，这些细胞的污染检测结果为阴性，不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等有害物质。因此，这些细胞可以安全地在实验室中使用，不会引入额外的污染风险。 二、大鼠腹腔巨噬细胞操作规程 1、培养基及培养冻存条件准备: 1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO),90%;优质胎牛血清,10%。 2)大鼠腹腔巨噬细胞培养条件:气相:空气,95%;二氧化碳,5%。温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。 3)大鼠腹腔巨噬细胞冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。 2、大鼠腹腔巨噬细胞处理: 1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。*天换液并检查细胞密度。 2)大鼠腹腔巨噬细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。产品仅供科研使用 对于悬浮细胞,传代可参考以下方法: 收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 三、应用 大鼠腹腔巨噬细胞可以用于他汀类药物对大鼠腹腔巨噬细胞分泌MMP-1及TIMP-1的影响： 急性冠脉综合征(ACS)是一组严重威胁人类健康的疾病,包括不稳定性心绞痛、心肌梗死(有Q波及无Q波心肌梗死)及心源性猝死,他汀类药物在减少急性冠状动脉事件的发生率及冠心病的死亡率方面,取得了令人瞩目的成就,但他汀类药物抗动脉粥样硬化的作用机理尚不十分清楚,本实验通过观察阿托伐他汀(立普妥)、普伐他汀(美百乐镇)对大鼠腹腔巨噬细胞分泌MMP-1及TIMP-1的影响,以求阐明他汀类药物减少冠脉事件的机制。 方法：取雄性4—6月龄SD大鼠腹腔灌洗液,收集腹腔巨噬细胞,加入培养液中培养3天,然后在培养有大鼠腹腔巨噬细胞的培养基中先加入10ng/ml的IL-1β,促进MMP-1的分泌,24小时后加入不同浓度的阿托伐他汀、普伐他汀(1×10-4 mmol/L、1×10-5 mmol/L、1×10-6 mmol/L、1×10-7 mmol/L),继续孵育24小时后,采用ELISA法测培养上清液中的MMP-1及TIMP-1的浓度;另外,取10-5mmol/L浓度的阿托伐他汀加入培养有大鼠腹腔巨噬细胞的培养基中,分别在6小时、24小时、48小时测培养上清液中的MMP-1的浓度。 结果：随着药物浓度的增加(1×10-7 mmol/L、1×10-6 mmol/L、1×10-5 mmol/L、1×10-4 mmol/L),阿拖伐他汀对大鼠腹腔巨噬细胞分泌MMP-1的抑制作用逐渐增强(加药组MMP-1分泌较对照组分别减少17.36%、19.40%、26.54%、33.70%),与对照组有显著统计学差异,而不同浓度(1×10-7 mmol/L、1×10-6 mmol/L、1×10-5 mmol/L、1×10-4 mmol/L)的普伐他汀虽使大鼠腹腔巨噬细胞分泌MMP-1略有降低,与对照组比较分别减少2.55%、2.20%、2.54%、2.04%,但无统计学差异,且各组间也无统计学差异;两组他汀使大鼠腹腔巨噬细胞TIMP-1的分泌均略有降低(阿托伐他汀给药浓度分别为1×10-7 mmol/L、1×10-6 mmol/L、1×10-5 mmol/L、1×10-4 mmol/L,与对照组比较使TIMP-1的分泌分别减少4.12%、3.60%、4.12%、2.06%,普伐他汀给药浓度分别为1×10-7 mmol/L、1×10-6 mmol/L、1×10-5 mmol/L、1×10-4 mmol/L,与对照组比较使TIMP-1的分泌分别减少4.12%、4.12%、3.82%、2.57%。)但与对照组比较,均无统计学意义;随着药物作用时间的延长(6小时、24小时、48小时),阿托伐他汀(1×10-5 mmol/L)对大鼠腹腔巨噬细胞分泌MMP-1的抑制作用逐渐增强(加药组MMP-1分泌较对照组分别减少11.96%、26.54%、32.77%),与对照组有显著统计学差异。 结论：阿托伐他汀(立普托)呈时间剂量依赖性抑制白介素-1β介导的大鼠腹腔巨噬细胞分泌MMP-1,进而抑制纤维帽中胶原的分解,稳定斑块,而阿托伐他汀对TIMP-1的分泌影响不显著;普伐他汀(美百乐镇)对白介素-1β介导的大鼠腹腔巨噬细胞分泌MMP-1、TIMP-1的分泌影响均不显著,且与对照组比较无统计学差异。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                    从土壤到餐桌：粪肠球菌的多重农业应用！ 粪肠球菌在农业领域具有广泛的应用，从土壤改良到植物健康的促进。下面将详细介绍粪肠球菌在农业方面的应用。 1、有机肥料生产 粪肠球菌可以用于有机肥料的生产。它们能够分解有机物质，将其转化为植物所需的营养元素，如氮、磷和钾，并改善土壤结构和水分保持能力。这有助于提高土壤质量，增加作物产量和品质。 2、生物防治 粪肠球菌被广泛应用于生物防治的方法。它们产生抑制性物质，可以抵御多种植物病原菌和害虫。通过使用粪肠球菌作为生物农药，可以减少对化学农药的依赖，降低环境污染和对生态系统的负面影响。 3、植物生长促进 粪肠球菌能够与植物根系形成共生关系，促进植物生长。它们分泌生长激素和有益代谢产物，通过增加植物的养分吸收和提高抗逆性来促进植物生长。这有助于提高作物产量和耐受力。 4、土壤修复 粪肠球菌对于修复受污染或退化的土壤具有潜力。它们可以分解有机污染物，如农药和重金属，从而改善土壤品质。此外，粪肠球菌还能够减少土壤侵蚀和水土流失，提高土壤可持续性。 5、植物营养素利用效率 粪肠球菌通过根际环境的调节，能够提高植物对土壤中养分的利用效率。它们可以溶解磷酸盐和锌等微量元素，使其更容易被植物吸收。这有助于减少化学肥料的使用，降低农业对环境的负面影响。 6、秸秆分解 粪肠球菌在秸秆分解和堆肥过程中起着重要作用。它们可以分解秸秆中的纤维素和半纤维素，释放出有机质和养分，并加速堆肥过程。这有助于减少秸秆的积累和环境污染问题，同时产生有机肥料。 7、干旱和盐碱地改良 粪肠球菌被发现对干旱和盐碱地的改良具有潜力。它们在这些恶劣条件下生长并表现出耐受性，可以帮助植物在这些环境中生存和生长。通过引入适应性强的粪肠球菌菌株，可以提高干旱和盐碱地的可耕性。 8、农产品保鲜 粪肠球菌在农产品保鲜过程中被广泛应用。它们可以通过发酵作用产生有机酸和其他抑菌物质，抑制食品中有害菌的繁殖。将粪肠球菌应用于食品的保鲜处理，可以延长食品的保鲜期，减少食品损失。 9、绿肥种植 将粪肠球菌应用于绿肥种植中，可以促进土壤有机质的积累和提高土壤质量。粪肠球菌可以将大气中的氮气转化为可供作物利用的形式，并且通过根系共生作用，提供有机酸和其他激素，促进植物生长。 综上所述，粪肠球菌在农业领域具有广泛的应用。它们在有机肥料生产、生物防治、植物生长促进、土壤修复、植物营养素利用效率、秸秆分解、干旱和盐碱地改良等方面发挥着重要的作用。随着对粪肠球菌应用的深入研究和技术的不断发展，我们可以期待更多创新的农业应用。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                    C6/36（蚊子细胞）的复苏与冻存实验操作步骤！ 一、细胞简介平台编号：Bio-73445规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶细胞信息：C6/36细胞名称：C6/36（蚊子细胞） 种属：蚊子 年龄（性别）：幼虫 生长特性：贴壁 生长培养基：MEM＋10% FBS＋1% P/S培养条件：气相：空气，95%；CO2，5% 温度：28℃用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、产品特点特点：细胞代数为4-5代左右包装：内层无菌自封袋；专用防压泡沫盒；外层防压保温气泡袋；说明书细胞来源：ATCC、sciencell、ICLC货期：1-2周运输方式：快递运输售后：收到细胞后7天，如发现细胞有质量问题（如污染，死亡，快递运输等原因）时，应出具书面质量问题报告并及时传真或E-mail致销售人员，我们将尽快为您解决。形态：上皮细胞样 三、细胞的冻存和复苏实验方法原理细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融，实验证明这样可以最大限度的保存细胞活力。目前细胞冻存多采用甘油或二甲基亚砜作保护剂，这两种物质能提高细胞膜对水的通透性，加上缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外，减少细胞内冰晶的形成，从而减少由于冰晶形成造成的细胞损伤。复苏细胞应采用快速融化的方法，这样可以保证细胞外结晶在很短的时间内即融化，避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造成损伤。 四、操作流程（一）材料准备1、仪器：净化工作台、 离心机、恒温水浴箱、冰箱（4℃、-20℃、-70℃）、倒置相差显微镜、培养箱、液氮冰箱。2、玻璃器皿：吸管（弯头、直头）、 培养瓶、玻璃瓶（250ml、100ml）、废液缸。3、塑料器皿： 吸头、枪头、胶塞、移液管（10ml）、15ml离心管、冻存管（1～2ml）。4、其他物品：微量加样枪、红血球计数板、记号笔、医用橡皮膏、移液枪。5、试剂：D-Hanks液、小牛血清、培养液、双抗（青霉素、链霉素）、胰蛋白酶（0.08%）、1NHCl、7.4%NaHCO3、DMSO（分析纯）或无色新鲜甘油。（二）蚊子细胞C6/36系细胞冻存1、配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的冻存培养液。2、取对数生长期的细胞，用胰蛋白酶把单层生长的细胞消化下来，悬浮生长的细胞则直接将细胞移至15ml离心管中。3、离心1 000 rpm，5 min。4、去除胰蛋白酶及旧的培养液，加入适量配制好的冻存培养液，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，计数，调节冻存液中细胞的最终密度为5×106/ml～1×107/ml。5、将细胞分装入冻存管中，每管1～1.5 ml。6、在冻存管上标明细胞的名称，冻存时间及操作者。7、冻存：标准的冻存程序为降温速率-1～-2℃/ min；当温度达-25℃以下时，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃时，则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱2 h ，然后放入-70℃冰箱中过夜，取出冻存管，移入液氮容器内。（三）细胞复苏1、从液氮容器中取出冻存管，直接浸入37℃温水中，并不时摇动令其尽快融化。2、从37℃水浴中取出冻存管，打开盖子，用吸管吸出细胞悬液，加到离心管并滴加10倍以上培养液，混匀。3、离心， 1 000 rpm，5 min。4、弃去上清液，加入含10%小牛血清培养液重悬细胞，计数，调整细胞密度，接种培养瓶，37℃培养箱静置培养。5、次日更换一次培养液，继续培养。 五、适用范围1、从增殖期到形成致密的单层细胞以前的培养细胞都可以用于冻存，但最好为对数生长期细胞。在冻存前一天最好换一次培养液。2、将冻存管放入液氮容器或从中取出时，要做好防护工作，以免冻伤。3、冻存和复苏最好用新配制的培养液。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

               格特隐球菌性脑膜炎的临床特征和实验室检查研究进展！ 隐球菌病（cryptococcosis）是一种人和动物的全身性真菌病，由新型隐球菌（Cryptococcus neoformans，C.neoformans）和格特隐球菌（Cryptococcus gattii，C.gattii）感染引起。隐球菌可感染几乎所有的器官和组织，且对中枢神经系统有很强的倾向性，与其特异性毒力因素有关：如促进穿透血脑屏障的特异性金属蛋白酶、脲酶、透明质酸水平增加和提高神经免疫调节的漆酶活性，以及在缺乏营养的大脑环境中促进生存的机制，如自噬和高亲和力糖转运蛋白。因此， 隐球菌感染的患者常表现为脑膜炎。格特隐球菌一直被认为是一种澳大利亚的地方性病原体，20世纪90年始逐渐出现在加拿大和美国，引起学者们的重视。格特隐球菌性脑膜炎的临床表现、实验室检查、治疗和预后与隐球菌性脑膜炎不同。文中将综述格特隐球菌性脑膜炎的临床特征、实验室检查的研究进展。 1、格特隐球菌性脑膜炎的临床特征 1.1 流行病学美国大多数实验室未将隐球菌鉴定到物种水平，且为自愿报告。因此，格特隐球菌病的流行病学调查非常不完整。加拿大温哥华市每年的格特隐球菌病发病率为8.5-37例/100万居民，但澳大利亚发生率每年仅为0.94例/100万居民。这一现象与温哥华市要求强制上报格特隐球菌感染有关。格特隐球菌引起的隐球菌病在全球的发病率（20%）明显低于新型隐球菌（80%）。非洲地区很少报道格特隐球菌感染，人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）阳性的隐球菌病患者中有2.2%-12.3%是由格特隐球菌引起的。 格特隐球菌主要分布于热带和亚热带夏季湿热的地区，如澳大利亚北部和南美洲。研究发现，免疫功能正常的格特隐球菌病患者可出现在温带夏季温暖干燥的地区，如：加拿大、美国和中国。而且利用传统和分子学检测方法在热带和温带地区的土壤、树木和鸟粪等自然环境中发现了格特隐球菌。温带地区出现格特隐球菌感染的可能原因包括：气候变化、旅行人数的增加和人为活动等，但确切的机制仍然未知。感染格特隐球菌的患者中，男性多于女性，成人多于儿童。这可能与成年男性更多的暴露于自然环境有关。 以往认为格特隐球菌主要感染免疫功能正常的个体。然而， 报告显示这些免疫功能正常的感染者往往有一些潜在的疾病，可能与免疫抑制有关，全球也报告了HIV阳性患者感染格特隐球菌性脑膜炎的。 1.2 发病机制格特隐球菌通过呼吸进入人体，潜伏在肺内淋巴结，经血液传播而发展为肺和中枢神经系统感染。格特隐球菌通过两种途径进入中枢神经系统，其一为跨细胞途径：格特隐球菌经血液进入大脑，通过其荚膜上的透明质酸与脑微血管内皮细胞表面的CD44受体结合，进入内皮细胞。通过改变内皮细胞渗透性进入血管周围间隙，再通过脲酶、漆酶、磷脂酶B1和丝氨酸蛋白酶参与促进其迁移。其二为细胞旁途径：格特隐球菌是一种兼性胞内病原体，能够在吞噬细胞酸性环境中存活和增殖，并将其作为“特洛伊木马”形式进入血管周围间隙，被吞噬细胞释放的隐球菌，分泌金属蛋白酶突破星形细胞之间的紧密连接进入脑实质。 1.3 临床表现格特隐球菌性脑膜炎是一种亚急性脑膜炎，临床表现为头痛和精神状态改变，以及发热、恶心和呕吐等共性症状。格特隐球菌容易产生隐球菌瘤，对治疗反应较慢、潜伏期较长，容易产生严重的中枢神经系统炎症、高颅压和神经系统后遗症。 典型表现为头痛、呕吐和颈强直，还可能出现脑神经受累、视觉和听力下降或丧失、小脑功能异常、部分肢体无力、癫发作和精神状态异常（性格改变、意识不清和昏迷）。 50%-60%的格特隐球菌性脑膜炎患者可出现颅内压升高（压力＞200mmH2O，1mmH2O=0.0098kPa）。尽管颅内压升高不是死亡的危险因素，但可预测12个月后的神经后遗症和（或）死亡（P＜0.05）。 颅内压升高由脑实质炎症、间质水肿和脑脊液吸收减少引起。脑脊液流出减少可能是因为菌体及其荚膜在蛛网膜颗粒处引起炎症反应，影响蛛网膜绒毛细胞对脑脊液的吸收所致。 格特隐球菌性脑膜炎患者在诊断或治疗期间容易出现炎症后遗症，如脑积水，可能与格特隐球菌诱导的促炎细胞因子分泌水平更高有关。眼部并发症也较明显，特别是颅内压升高时，常出现视乳头水肿。此外，视力模糊、视野缺损、眼外肌麻痹、瞳孔调节功能受损、脉络膜炎、视网膜出血、眼内炎、视神经萎缩等均有见报道。 接受抗真菌治疗的隐球菌性脑膜炎患者在接受抗逆转录病毒治疗前症状缓解，在接受抗逆转录病毒治疗后症状加重或复发，称为免疫重建炎症综合征（immune reconstitution inflammatory syndrome，IRIS），偶见于怀孕和免疫功能受损的格特隐球菌性脑膜炎患者。免疫功能正常HIV阴性的格特隐球菌性脑膜炎患者，甚至会出现更严重的中枢神经系统症状，表现为IRIS样综合征或无菌性蛛网膜炎。 2、实验室检查 2.1 检测格特隐球菌的意义 新型隐球菌主要易感染HIV阳性和器官移植的患者，全球范围内发病率较高，而格特隐球菌性脑膜炎较少见，易被误诊或漏诊。因此，格特隐球菌的鉴定诊断很重要。 宿主的免疫状态无明显区别时，格特隐球菌性脑膜炎患者有更严重的临床表现。需要接受更长时间的抗真菌药物治疗或手术治疗，积极降低颅内压和早期使用地塞米松治疗。格特隐球菌性脑膜炎病死率更高，早期诊断对于格特隐球菌性脑膜炎的治疗和预后至关重要。 分子检测技术在真菌学领域的应用，对格特隐球菌和新型隐球菌的遗传多样性和基因型的流行病学提供了更详细的认识。研究发现，不同分子型的格特隐球菌毒力不同，临床表现和对药物的敏感性也不同，因此分子学检测对诊断十分重要。 2.2 隐球菌的一般检测方法目前隐球菌的常用检测方法主要用于检测新型隐球菌，分为真菌学、生理生化和分子学鉴定。真菌学鉴定主要包括：脑脊液墨汁染色、阿利新兰染色、脑脊液细胞学迈-格-姬（MGG）染色和脑脊液隐球菌培养。生理生化实验多采用商品化试剂， 目前常用的API-20C Aux可在72h内检测出新型隐球菌。分子学方法检测隐球菌荚膜抗原有：乳胶凝集实验、酶联免疫吸附法及侧流免疫层析法等。其中，侧流免疫层析法简单、快速，敏感度和特异度均较高，可应用于临床的快速筛查。这些方法可检查隐球菌，但进一步鉴别新型隐球菌和格特隐球菌还需使用其他检测方法。 2.3 格特隐球菌的鉴别方法 2.3.1 真菌学方法L型刀豆氨酸-甘氨酸-溴麝香草酚蓝（L-canavanine-glycine-bromothymol blue，CGB）培养基可在27℃的环境下，40-44h检测（大多数分离株在24h时无生长）格特隐球菌。 如果菌落周围培养基变为蓝色，结果为阳性；保持黄绿色，结果为阴性，敏感度和特异度分别为93%和100%。 2.3.2 分子生物学方法分子生物学方法不仅可以鉴别格特隐球菌，还可以确定其分子型，包括：多重PCR检测，随机扩增多态性DNA、PCR指纹图谱分析、限制性片段长度多态性分析、扩增片段长度多态性分析和多位点序列分析。多重PCR检测临床样本的敏感度和特异度为94.8%和98.5%，目前尚无其他分子学检测方法敏感度和特异度的报道。 3、诊断与鉴别诊断 3.1 诊断格特隐球菌性脑膜炎是一种亚急性脑膜炎，临床表现为头痛、发热、恶心、呕吐和精神状态改变，缺乏特异性。 影像学检查除隐球菌瘤外，无其他特异性表现。因此，对于任何伴有中枢神经系统感染相关症状和体征的患者，无论其是否有免疫功能缺陷，均应考虑格特隐球菌性脑膜炎的可能，进一步行腰椎穿刺脑脊液检查。 首先使用脑脊液染色、荚膜抗原检测等常用检测方法确定隐球菌，然后使用L型刀豆氨酸-甘氨酸-溴麝香草酚蓝培养鉴别格特隐球菌，还可以使用分子生物学及宏基因组二代测序等方法进一步确定分子型。 3.2 鉴别诊断隐球菌属有30多个种型，常见的致病种型仅有新型隐球菌和格特隐球菌， 因为新型隐球菌和格特隐球菌能够在37℃下生存，并且存在其他致病因素，如产生黑色素和保护性荚膜。格特隐球菌性脑膜炎的流行病学、临床表现、实验室检查、治疗和预后与隐球菌性脑膜炎均不同，可根据这些特征鉴别。 4、治疗及预后 4.1 治疗抗真菌药物治疗的一线治疗方案自1997年以来没有明显变化，分为3步：诱导期（两性霉素B和氟胞嘧啶，×2周）、巩固期（氟康唑400-800mg/d，×8周）和维持期（氟康唑200mg/d，×1年）。多项研究表明， 两性霉素B与氟胞嘧啶联合应用对格特隐球菌的清除最为迅速，两药联合应用较单用两性霉素B更有利于预后。 目前， 格特隐球菌性脑膜炎的治疗建议与新型隐球菌性脑膜炎相似，诱导期首选两性霉素B（0.7-1.0mg/kg/d）与氟胞嘧啶（100mg/kg/d）联合应用，随后改用氟康唑400-800mg/d，也可选用伊曲康唑200mg/d，伏立康唑4mg/kg（12h 1次）。但格特隐球菌性脑膜炎患者需要延长两性霉素B和氟胞嘧啶的疗程，因为预后与两药联合使用的疗程有关，治疗的诱导期需要更长，平均为6周。格特隐球菌对抗真菌药物的敏感度与新型隐球菌不同，格特隐球菌VG II基因型对氟康唑的敏感度较低，对伏立康唑和泊沙康唑的敏感度持续存在，提示在巩固期应使用伏立康唑替代氟康唑。 氟康唑和伊曲康唑对格特隐球菌VG II基因型的最低有效浓度分别为32μg/mL和0.5μg/mL，显著高于新型隐球菌VN I基因型（分别为8μg/mL和0.25μg/mL）。一项国际共识研究发现，氟康唑对不同分子型的格特隐球菌的最低有效浓度不同：VG I、VG IIa和VG III为8mg/L；VG IV为16mg/L；VG II为328mg/L。尽管缺乏随机试验，越来越多的临床经验以及流行病学和微生物学数据支持在治疗的持续阶段使用广谱咪唑类药物。 抗真菌药物治疗的同时需要更积极处理并发症。颅内压升高与不良预后有关，因此预防颅内压升高引起的继发性脑损伤是治疗的一个焦点，需要在抗真菌药物治疗的同时进行脑脊液引流降低颅内压。常用方法包括：反复腰穿引流、置管持续外引流（分为侧脑室引流和腰大池置管引流）、Ommaya囊植入引流术和脑室-腹腔分流术。颅内压升高的患者，尤其是症状持续或恶化时，即便脑脊液菌量增加、抗体滴度增高，也应尽早使用激素。而且接受激素治疗患者的视力下降和失明的发生率有所降低。 4.2 预后免疫功能正常的隐球菌性脑膜炎患者中，格特隐球菌的预后比新型隐球菌差。加拿大不列颠哥伦比亚省在1999至2007年，共有218例（平均每年每百万人中有5.8例）感染格特隐球菌，19例死于中枢神经系统疾病（病死率8.7%）。美国太平洋西北部在2004至2011年，约有100例感染格特隐球菌患者，病死率为33%。感染格特隐球菌免疫功能正常的患者通常在数周或数个月内表现为较轻的亚急性感染，可与其他感染性或非感染性疾病相混淆。诊断不及时可能导致预后不良。格特隐球菌还可引起症状较重的脑膜炎，导致患者的预后较差。格特隐球菌的不同基因型也与预后相关，VG I基因型的预后比VG II基因型差，而VG IIb基因型预后比VG IIa基因型差。 5、结论 与新型隐球菌性脑膜炎比较，中国格特隐球菌性脑膜炎发病率较低，但近年来随着格特隐球菌检测方法的应用，发病率不断增高，临床对其认识尚不足。大部分医院缺乏隐球菌分型检测设备，无法快速获得分型诊断以指导临床诊疗。因此，重视了解格特隐球菌性脑膜炎的临床特征、实验室检测、诊断和治疗极有必要。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

              毛霉的生物学特征与培养方法及临床表现与实验室检查！ 一、菌种简介 毛霉菌丝分枝很多，无假根，在孢子囊梗的顶端生孢子囊，内生无性的孢子囊孢子。有性生殖形成接合孢子。腐生于食物、粪堆、土壤和潮湿的衣物上。毛霉有分解纤维和蛋白质的作用，不少种类能将淀粉分解为糖，发酵工业上即利用其糖化作用制造酒精等。酒曲中常有毛霉存在。 二、生物学特征 毛霉目真菌能进行有性繁殖产生接合孢子和无性繁殖产生孢子囊孢子，菌丝较宽，常无分隔，有的菌丝在培养基表面横向生长，称为匍匐菌丝（stolon），其产生的假根（rhizoid）伸入培养基内，孢子囊梗直接由菌丝长出，顶端形成孢子囊，内生孢子囊孢子。孢子囊内有球形或近球形的囊轴（columella），囊轴基部与孢囊梗相连处成囊托（apophysis）。  毛霉目真菌在沙氏培养基上生长迅速，菌落表面棉絮状或羊毛状，初为白色逐渐变为灰黑色、灰褐色或其他颜色，顶端有黑色小点，取菌丝乳酸酚棉蓝染色，镜检可观察到菌丝、孢囊梗、孢子囊、孢子等。  三、培养方法 1、沙氏琼脂培养基上，25-30℃培养生长良好，大多数菌种37℃生长不良，通常4 d可发育成熟。菌落开始为白色绒毛状继续培养，可呈浅灰色、深灰色或褐色棉絮状，其间缀有灰色、黑色的孢子囊颗粒；菌丝向上生长可触及培养皿盖板。菌落反面无色或浅黄色。  2、马铃薯葡萄糖培养基上，毛霉生长同沙氏琼脂培养基上相似，只是菌落生长速度较慢，菌丝纹路较清晰，孢子囊颗粒较明显。  四、镜下结构 菌丝无隔或极少分隔，有分枝，一般无假根及匍匐菌丝，个别菌种罕见假根。孢子囊较大、球形、顶生内含孢子量多，囊壁易消融。囊轴形态多样，无色、灰色、灰褐色或橘红色等；无囊托，囊领可有可无。孢子囊孢子球形、椭圆形或不规则形，壁薄光滑。孢囊梗单生、不成束，单轴分枝或假单轴样分枝。厚璧孢子顶生或侧生，光滑无色。  五、分离与鉴别 毛霉属霉菌是无假根的匍匐菌丝，菌丝细胞无隔分枝。以孢子囊孢子和接合孢子繁殖。孢子囊梗由菌丝体生出，多单生不分枝，少分枝。孢子囊梗的分枝有两种类型：一种为单轴式的总状分枝，另一种为轴状分枝，孢子囊球状，孢子梗伸入孢子囊，伸入孢子囊的部分称中轴，其形状有球形、卵圆形、梨形等，光滑无色或浅蓝色。毛霉菌菌落絮状，初为白色或灰白色，后变为灰褐色，菌丛高度可由几毫米至十几厘米不等。毛霉菌的鉴别主要是依据其菌丝形态结构、菌落特征、孢子梗形态等。  毛霉属有多种毛霉，现选几种常见代表简单介绍如下： 1、高大毛霉 孢子梗直立不分枝，菌丝不分枝，菌丝高达3-12cm，菌落初为白色，渐变为浅淡蓝色。  2、总状毛霉 毛霉中分布最广的一种，孢子梗总状分枝，菌丝灰白，直立稍短。常为制造豆豉的菌种。  3、鲁氏毛霉 鲁氏毛霉孢子梗为假轴状分枝，菌丝在不同培养基上可略带有不同颜色，如在马铃薯一葡萄糖一琼脂培养基上菌落略呈黄色，在米饭上略带红色。鲁氏毛霉多为酿造业的曲种菌，也可用于腐乳的制造。  六、毛霉病 毛霉病（mucormycosis）是由毛霉主要有总状毛霉、伞状梨头霉、分枝梨头霉、少根根霉及米根霉等引起的深部真菌病。多数呈急剧发展，少数为慢性感染。毛霉病以侵犯血管壁及血管腔，引起炎症及血栓为特征，又称藻菌病（phycomycosis）。可累及鼻、脑、肺、胃、肠道、皮肤甚至播散性感染。临床上可分为肺型、脑型、胃肠型及皮肤型等。  七、流行病学 毛霉广泛存在于自然界中，为土壤、植物、面包、水果、粮食等的常见腐生菌和空气中的气生菌，为一类条件致病菌。感染途径多数为吸入空气中的孢子，所以肺和鼻窦成为最常见也是最早感染的部位。免疫功能降低是致病的诱发因素。  八、临床表现 鼻脑毛霉病是最常见的类型，但有时也可发生原发性皮肤、肺或胃肠道病变，经血流播散到其他部位也可发生鼻脑感染通常是暴发性的，并且常致死。菌丝侵犯血管可引起鼻中隔、腭和眼眶或鼻窦周围骨骼的进行性组织坏死。临床表现为疼痛、发热、眼眶蜂窝织炎、眼突岀、脓性鼻涕和黏膜坏死。坏死的进行性扩展可累及大脑，而引起筛状窦栓塞体征、惊厥、失语或偏瘫。糖尿病酮症酸中毒的患者最易受感染。  九、实验室检查 1、真菌直接镜检，镜下可见宽大菌丝，几乎不分隔。 2、真菌培养，可见有特征性的孢子囊和孢子囊孢子。因毛霉是广泛存在于自然界中的气生菌，所以鼻、腭分泌物和痰、粪等单纯培养阳性多无临床意义。  3、组织病理检査，多表现为化脓性炎症反应伴脓肿形成和化脓性坏死，坏死组织中有菌丝。  十、治疗要点 1、早期诊断和早期治疗至关重要，积极治疗原发病，手术切除病灶是重要的治疗手段。  2、两性霉素B是唯一有效的药物。肾功能不全者可改用两性霉素B脂质体，新一代三唑类药物泊沙康唑比伏立康唑、氟康唑更为有效。  3、肺毛霉病可考虑肺叶切除，而鼻脑毛霉病需辅以外科清创术。  北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                细胞转染技术的原理与特点及操作步骤与注意事项！ 一、概念及应用 随着分子生物学和细胞生物学研究的不断发展，细胞转染已经成为研究真核细胞基因功能的常规工具。常用于研究基因功能、基因表达调控、突变分析和蛋白质生产等生物学试验中，其应用非常广泛。 细胞转染是指将外源遗传物质（DNA或RNA）导入真核细胞的技术。细胞转染技术可分为两大类，一类是瞬时转染，一类是稳定转染。 1、瞬时转染：外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中，因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数，产生高水平的表达，但持续时间只有几天（数天内大部分外源性 DNA 会在核酸酶作用下降解或被细胞分裂稀释，一周后便无法再检出）。使用超螺旋质粒 DNA 进行瞬时转染的效率最高，因为其能被细胞更高效地摄取。 2、稳定转染：外源性DNA可以整合至细胞基因组中，或者作为游离型质粒存在，并可传递至转染细胞的子代。但通常只有单个或几个拷贝的外源性DNA整合至稳定转染基因组中，因此稳定转染基因的表达水平一般低于瞬时转染基因的表达水平。由于外源性DNA稳定整合至基因组的概率很低，因此通常在用于转染的DNA构建体中纳入可筛选标记物（如对各种筛选药物产生抗性的基因，或是可对待转染细胞系有缺陷的必需基因进行补偿的基因），然后在短暂的恢复期后对细胞施加适当的筛选压力。 二、转染方式 1、化学方法：利用载体分子包被核酸使其呈现中性电荷或正电荷，如阳离子脂质体转染法、磷酸钙共沉淀法等。 2、生物方法：利用基因工程病毒转染非病毒基因到细胞中，如病毒感染。（此方法将在下一节详细介绍） 3、物理方法：在细胞膜表面产生一个瞬时的孔从而导入DNA，如电穿孔法。 三、常见的转染方法的原理、特点及步骤 以下简单介绍目前实验室最为常用的两种方法。 1、脂质体转染法：阳离子脂质体表面带正电荷，能与核酸的磷酸根通过静电作用，将DNA分子包裹入内，形成DNA-脂质体复合物，也能被表面带负电的细胞膜吸附，再通过融合或细胞内吞进入细胞。脂质体转染适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养细胞中，是目前实验室最方便的转染方法之一，其转染率较高，优于磷酸钙法。由于脂质体对细胞有一定的毒性，所以转染时间一般不超过24小时。 （1）特点：脂质体转染法的优点是能够高效转染许多细胞系，适用于高通量筛选，并能够递送任何大小的 DNA 以及 RNA 和蛋白。此外，该方法既可应用于稳定表达，也可应用于瞬时表达，与其他化学方法不同的是，其可用于将 DNA 和 RNA 向动物和人体内转移；缺点是转染效率依赖于细胞类型和培养条件，因此，需要对每种细胞类型的转染条件和转染试剂进行优化。 （2）实验步骤：将DNA，RNA，siRNA或寡核苷酸和转染试剂分别在不同的管中稀释→将两者混合形成混合物→将形成的混合物加入细胞中，脂质体的正电荷有助于帮助复合物粘附到细胞膜上→复合物经细胞内吞作用进入细胞→检测基因表达或沉默情况。 2、电穿孔法：利用电脉冲可逆地击穿细胞膜形成瞬时的膜上小孔，同时细胞膜上电势升高，驱使带电荷的分子（如 DNA）以类似于电泳的方式经临时微孔穿过细胞膜进入胞内。当遇到某些脂质体转染效率很低或几乎无法转入时建议用电穿孔法转染。一般情况下，高电场强度会杀死50%-70% 的细胞。为确保转染成功，针对实验条件优化电转参数是极为重要的。电场强度、脉冲形状、脉冲施加次数、缓冲液组分等因素都会影响转染效率。 （1）特点：与其他转染方法相比，电转染具有诸多优势，其中主要优势包括：适用于所有细胞类型的瞬时和稳定转染；在确定最佳电转染条件的情况下，能够在短时间内转染大量细胞。电转的主要缺点在于高电压脉冲可引起大量细胞死亡，仅部分细胞膜可以成功修复，因此相比化学转染方法，电转染需要使用更多数量的细胞。 （2）实验步骤：利用电转缓冲液重悬细胞→对含有核酸，缓冲液，细胞的混合物给予合适的电脉冲→电脉冲在细胞膜上形成电势差，诱导产生暂时的孔使核酸进入细胞→将细胞返回到生长培养基中，使其慢慢恢复→检测基因表达或沉默情况。 四、影响转染效率的因素及注意事项 转染效率受到多种因素影响，主要因素有以下几种： 1、转染试剂： 不同细胞系转染效率通常不同，因此在转染实验前需要根据细胞特性选择合适的转染试剂。可以通过已发表文献和转染试剂提供的已成功转染的细胞株来进行选择。 2、细胞状态： 转染前细胞活力和总体健康状况是转染产生变异性的重要来源。一般建议在转染前至少24小时进行传代培养，以确保细胞在传代后处于转染的最佳生理条件，细胞活力大于 90%。最适合转染的细胞是复苏经过几次传代后达到指数生长期的细胞，细胞生长旺盛，最容易转染。为确保转染的重复性，一般选择低细胞代次（ 3、汇合度： 转染时过高或者过低的细胞密度会导致转染效率降低，乃至表达水平偏低。因此要根据具体的细胞类型、应用和转染技术，来优化确定相应的最佳密度。如使用阳离子脂质体转染时，贴壁细胞一般达到 70%-90% 的汇合度，悬浮细胞达到 5 × 105 至 2 × 106 个细胞/mL 的密度，即可获得良好的结果。但不同的转染试剂，针对不同细胞系要求转染时的最适细胞密度各不相同，因此使用新的细胞系或者新的转染试剂时，应进行实验优化并建立一个稳定方法，包括适当的接种量和培养时间等等。不同实验目的也会影响转染时的铺板密度，比如研究细胞周期相关基因等表达周期长的基因，就需要较低的铺板密度，所以需要选择能够在较低铺板密度下进行转染的试剂。 4、培养基： 不同的细胞或细胞类型都有非常特定的培养基、血清、补充剂要求，选择最适合细胞类型的培养基和转染方法在转染实验中起着非常重要的作用。一些细胞系和原代细胞可能需要特殊的包被材料（如多聚赖氨酸、胶原蛋白、纤连蛋白等）以附着于培养板并获得最佳的转染结果。 可参考已发表文献或细胞来源处获得获得针对特定细胞类型的合适培养基和转染方法，如果没有相关信息，则需要根据经验或筛选实验确定。 5、血清： 一般培养基中存在血清可增强 DNA 转染。但使用阳离子脂质体转染时，一些血清蛋白会干扰复合物的形成，因此应在无血清条件下制备DNA-脂质体复合物。当使用 RNA 转染细胞时，建议在无血清条件下转染，以避免潜在的RNase污染。 6、抗生素： 一般用于瞬时转染的培养基中可含抗生素。不过，由于阳离子脂质体试剂可增加细胞通透性，因此也可能增加递送到细胞内的抗生素量，从而导致细胞毒性以及较低的转染效率。因此不建议在转染培养基中加入抗生素。可在转染前铺板细胞时，使用无抗生素的培养基。 对于稳定转染，不应在选择性培养基中使用青霉素和链霉素，因为这些抗生素是 Gibco Geneticin 选择性抗生素的竞争性抑制剂。在构建稳定的细胞系时，在转染程序后预留 48-72 小时供细胞表达抗性基因，之后再加入选择性抗生素。 7、转染分子类型： 质粒 DNA 是最常用的转染载体。质粒 DNA 的拓扑结构（线性或超螺旋）和大小会影响转染的效率，超螺旋质粒 DNA 瞬时转染的效率最高。在稳定转染中，相对于超螺旋 DNA，虽然使用线性 DNA 会导致细胞的 DNA 摄取量较低，但 DNA 整合到宿主基因组中的效果更优。虽然寡核苷酸、RNA、siRNA 和蛋白质等其他大分子也可以转染到细胞中，但在使用这些大分子时，需要优化转染条件。 五、总结 没有一种方法适用于所有类型的细胞和实验应用，不同的方法在转染效率、细胞毒性、对正常生理的影响、基因表达水平等方面均存在广泛的差异。因此应根据具体的细胞类型和实验需求来选择转染方法，理想的方法应具有高转染效率、低细胞毒性、对正常生理的影响尽可能小、易于使用和高重复性。同时，应根据该方法进行各种转染条件的优化，以建立一个稳定的实验方案。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                硫泉富盐菌的生态和生活方式及在科研中的应用！ 百欧博伟生物：微生物的世界中隐藏着令人惊叹的多样性和适应性，硫泉富盐菌（Sulfur Spring Halophiles）就是其中之一。这些微生物居住在极端环境中，如高盐度的硫泉，以其独特的特性和生存策略吸引着科学家们的关注。在本文中，我们将深入了解硫泉富盐菌的生态、生活方式和在科研中的应用。 一、硫泉富盐菌是什么？ 硫泉富盐菌是一类生活在极端高盐度环境中的微生物，它们属于古细菌领域（Archaea）。这些微生物通常生存在高温、高盐度、低氧或其他极端条件下的环境中，如硫泉、盐湖、咸水湖泊等。它们以其对极端环境的适应能力和独特的生化特性而著称。 二、特性与生活方式 1、高盐适应性： 硫泉富盐菌生活在高盐度的环境中，其细胞壁和细胞膜具有独特的结构，以防止水分流失，从而适应高渗透压环境。 2、光合作用： 一些硫泉富盐菌可以进行光合作用，利用阳光合成能量，类似于植物的光合作用。这使得它们能够在极端条件下生存，同时贡献了生态系统的碳循环。 3、色素和抗氧化物质： 硫泉富盐菌通常富含各种颜色的色素，这些色素在阳光下吸收光能，并帮助微生物进行光合作用。此外，它们也合成抗氧化物质，有助于对抗极端条件下产生的氧化应激。 三、在科研中的应用 硫泉富盐菌在科研领域中具有广泛的应用潜力，包括以下方面： 1、生态学研究： 硫泉富盐菌生活在极端环境中，研究它们有助于我们了解生命在极端条件下的适应能力。这对于地球生态系统的理解和未来的行星探索具有重要意义。 2、生物技术和生物能源： 一些硫泉富盐菌可以生产有用的生物化合物，如生物燃料、酶和抗氧化物质。这些微生物的生化特性可以用于生物技术应用，例如生物能源生产。 3、医学研究：了解硫泉富盐菌在高盐度和高温度条件下的生存策略可以为医学研究提供有关人体内极端环境中微生物感染和生存的见解。 四、总结 硫泉富盐菌代表了微生物世界中的极端适应者，它们在极端条件下生存，具有独特的生态和生化特性。科学家们的研究正在揭示这些微生物的奥秘，并探索其在生态学、生物技术和医学研究领域的潜在应用。了解这些微生物有助于我们更好地理解地球上多样性生命的惊人之处，以及它们如何帮助维持生态平衡和解锁生物技术的潜力。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                申克氏孢子丝菌的培养特点与染色反应及诊断与治疗！ 一、菌种简介 申克氏孢子丝菌（学名：Sporothrix schenckii）是一种全球常见的温感二形性真菌，也是Sporothrix属的唯一物种。申克氏孢子丝菌是引起孢子丝菌病的唯一病原菌。广泛分布于自然界，自土壤、腐木及植物表面可分离出本菌。申克氏孢子丝菌通过损伤的皮肤或粘膜感染人，可引起皮肤、皮下发生慢性结节性或溃疡性为特点的孢子丝菌病。也可侵犯肺、胃肠道、骨及中枢神经系统。病原菌通过血流播散，引起全身皮肤出现结节、脓肿。  二、形态和染色反应  申克氏孢子丝菌是一种二形的真菌，在组织中和在37℃培养时生长成酵母形态，但在30℃培养时则生长成丝状真菌。在30℃培养时，它能形成纤细、有横隔的分支菌丝，在短的支持菌丝上或直接在主菌丝的边上长出卵圆形的台轴分生孢子(sympodu—loconidia)。在脓汁中很难用显微镜找到此菌。在组织中有特征性的形态是类似长形酵母的细胞，有时候被描绘为“雪茄形”，长2-10/μm，宽1-3μm。  三、培养特点  此菌在所有常用的实验室培养基上都能生长，但在固体培养基上的生长比在液体中更为丰盛。麦芽糖能促进生长。在马铃薯葡萄糖琼脂上的生长也良好，特征性的棕黑色色素也看得最清楚。 在马铃薯斜面上于30℃培养时，第二天便出现带白色的丝状小菌落，以后逐渐增大和变黑，直到最后几乎成了黑色为止。菌落的表面呈羊毛状，这是因为有好气的短菌丝的缘故。年老的培养物的表面有皱纹和卷曲。 在mycobiotic琼脂上的生长与马铃薯上的生长相似，但菌落保持白色，而且粘附得很紧，因为菌丝体能深入到培养基里去。明胶缓慢地被液化，生长大多靠近表面，但沿穿刺线出现刺样的生长，表面生长可能有点变黑。Loeffler氏血清培养基在菌落下面稍凹陷，但不出现全面的液化。  四、流行病学和发病学  申克氏孢子丝菌是死的植物材料例如沼泽泥炭藓上常见的腐生菌，因此大多数病人是林业工作者、花匠和摆弄在地下潮湿条件下存放的撑木的矿工们。分生孢子在土壤中也常见。此菌通过皮肤伤口而侵入，通常的侵入部位是手、脚和头部。马和狗比别的动物受感染得更多。病变开始时是一个带红色小结节，可能淌出稀薄的浆液脓性液体。然后感染经淋巴管道而扩散。沿着这些管道形成了小结节，结节溃破出表面，排出淡黄色的粘稠脓汁。淋巴结也肿大。腿的皮下组织可能因淋巴液的积聚而增厚，淋巴管道中的病变限制了淋巴液返回到全身淋巴循环去。病变散播到别的组织去，在马是罕见的，但有时候可见于狗。 此菌在病变中为数稀少，通常可在巨噬细胞里面找到它。它是多形的，长出许多的芽。  五、免疫性  对抗感染的应答，既有体液的也有细胞介导的。在感染过程中，对抗酵母型的凝集素上升了。大约50%的有补体结合抗体。抗体效价的迅速上升表示预后良好。老的液体培养物的滤液(孢子丝菌素——sporolrichin)可使病畜产生特异性的迟发型过敏反应。  六、诊断  使用萤光抗体技术和PAS染色方法，能最清楚地在组织和脓汁中看到申克氏孢子丝菌的微小、球形和雪茄状的酵母体。这些方法是快速的，但是必须有标本在脑心浸剂或mycobiotic琼脂斜面上于37℃和30℃或室温培养的培养物的支持。典型菌落大约在一周后可以见到——起先是白色和光洁的， 以后变成棕色。酵母型是在37℃培养时产生的，这使申克氏孢子丝菌与由其他孢子丝菌引起的感染区别开，后者偶然也曾在人的皮下组织中引起病变。 诊断也可以通过用组织浸渍物或渗出物腹腔内接种小鼠来加以证实。小鼠在接种后一周产生腹膜炎，在腹腔渗出液中有大量的雪茄状，多形、正在出芽的酵母型。  七、化学疗法  建议用静脉注射或口服碘化钾来治疗病马，但常发生治疗失败。也曾建议用灰黄霉素来治疗病马。两性霉素B对人的治疗有效。  北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                根霉的形态特征与主要用途及发生条件与防治方法！ 根霉菌属菌物界，真菌门，接合菌亚门，接合菌纲，毛霉目，毛霉科，根霉属，常见根霉为黑根霉。根霉的菌丝无隔膜、有分枝和假根，营养菌丝体上产生匍匐枝，匍匐枝的节间形成特有的假根，从假根处向上丛生直立、不分枝的孢囊梗，顶端膨大形成圆形的孢子囊，囊内产生孢囊孢子。 一、知识简介 根霉 (Rhizopus)孢子囊内囊轴明显，球形或近球形，囊轴基部与梗相连处有囊托。根霉的孢子可以在固体培养基内保存，能长期保持生活力。黑根霉也称匐枝根霉，分布广泛，常出现于生霉的食品上，瓜果蔬菜等在运输和贮藏中的腐烂及甘薯的软腐都与其有关。黑根霉(ATCC6227b)是发酵工业上常使用的微生物菌种。黑根霉的最适生长温度约为28℃，超过32℃不再生长。 图《根霉》为孢子囊、2为孢囊孢子、3为匍匐枝、4为假根。此外有性生殖时还可以产生接合孢子囊，无性生殖时产生芽孢子。 二、形态特征 米根霉在分类上属于接合菌亚门(Zygomycota)，接合菌纲(Zygomycetes)，毛霉目(Mucorales)，毛霉科(Mucoraceae)，根霉属(Rhizopus)。菌落疏松或稠密，最初呈白色，后变为灰褐色或黑褐色。菌丝匍匐爬行，无色。假根发达，分枝呈指状或根状，呈褐色。孢囊梗直立或稍弯曲，2-4株成束，与假根对生，有时膨大或分枝，呈褐色，长210-2500μm，直径5-18μm，囊轴呈球形或近球形或卵圆形，呈淡褐色，直径30-200μm。囊托呈楔型。孢子囊呈球形或近球形，老后呈黑色，直径60-250μm。孢囊抱子呈椭圆形、球形或其他形，呈黄灰色，直径5-8μm。有厚垣饱子，其形状、大小不一致，未见接合抱子。该菌于37-40℃能生长。 三、生长速度 生长速度快，4天内成熟。致病菌种37℃生长良好。放线菌酮抑制其生长。 四、菌落形态 “棉花糖”状菌落密集生长，快速覆盖琼脂表面：菌落初始为白色，后逐渐变成灰色或黄棕色。背面呈白色至浅灰色或棕色。 五、镜下形态 菌丝宽大(直径6~15μm)，无或偶见分隔。菌丝之间有许多匍匐菌丝，将无分枝的长孢囊梗连接。在匍匐菌丝和孢囊梗连接处产生根样菌丝(假根)。孢囊梗长(可达3mm)，末端连接黑色的圆形孢子囊(直径40~275μm)孢子囊内有一个囊轴和多个卵圆形、无色或棕色的孢囊孢子(直径4~9μm)。囊领随孢子囊壁分解消失。有时可见大量厚壁孢子。根霉属可通过匍匐菌丝、假根和孢囊梗通常不分枝的特点与毛霉属相区别。可通过假根与孢囊梗的相对位置、孢子囊的大小和形状与横梗霉属(犁头霉属)鉴别。 六、用途 根霉在自然界分布很广，用途广泛，其淀粉酶活性很强，是酿造工业中常用糖化菌。我国最早利用根霉糖化淀粉（即阿明诺法）生产酒精。根霉能生产延胡索酸、乳酸等有机酸，还能产生芳香性的酯类物质。根霉亦是转化甾族化合物的重要菌类。与生物技术关系密切的根霉主要有黑根霉、华根霉和米根霉。 七、发生与防治 1、为害症状 根霉污染培养基无明显菌丝生长，只有平贴基物表面匍匐生长的菌丝，后期在基物表面0.1~0.2厘米高处形成许多网球形的小颗粒体。形成初期呈灰白色或黄白色，成熟后变为黑色，明显特征是黑色颗粒状霉层。 2、发生条件 根霉生活在各种有机物上，适应性强。孢囊孢子从孢子囊散发后在空气中飘浮，沉降到有机物表面，在一定温湿度条件下萌发生长。由于根霉没有气生菌丝，因此污染培养料后扩散速度慢，侵染范围小。 3、预防及防治 (1)选用新鲜、干燥无霉变的原料。 (2)接种前用3%来苏尔水溶液喷雾消毒，然后用4~6克/立方米的气雾消毒盒密闭熏蒸4～6小时。 (3)发生根霉污染及时将污染菌袋拿出发菌棚，并将培养料倒出，再添加部分新培养料拌料、装袋，常压灭菌10小时以上。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                 具有耐凝胶多糖和水解作用的：解凝乳类芽孢杆菌 解凝乳类芽孢杆菌是Paenibacillus属的微生物，原产地为中国。主要用途为研究，具体用途为多糖水解酶系（包括淀粉酶，纤维素酶和木聚糖酶）有进一步研究价值。  一、菌种简介平台编号：Bio-02899提供形式：冻干物拉丁属名：Paenibacillus Curdlanolyticus中文译名：解凝乳类芽孢杆菌拉丁学名：Paenibacillus curdlanolyticus原始编号：NBRC 15724菌株来源：←IFO保藏人：周宇光直接来源国家：日本保藏时间：9/2/2003其他保藏编号：=ATCC 51898 =CIP 104575 =DSM 10247 =JCM 12163 =KCTC 3759 =LMG 18050 =NRRL B-23243生物危害：四类模式菌株：模式菌株菌株用途：模式菌株；Resistant curdlan；hydrolysis培养温度：30℃培养基：0002    其他培养条件分离源：土壤采集地点：Kobe采集国家：日本用途：模式菌株；耐凝胶多糖；水解作用注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、储存条件冻干菌种和试管斜面请置于 6-10℃冷藏。  三、培养条件营养肉汁琼脂蛋白胨 10 克 NaCl 5 克蒸馏水 1000ml 牛肉提取物 3 克琼脂 15 克 pH=7.0 四、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、菌种恢复培养前，建议将收到的菌种安瓿保存在 6-10°C 的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，如在说明建议的培养时间还未长起来，请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间，直至菌种培养完成，有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长，一般来说菌种培养稳定后才能用于您的后续实验。3、初次使用时请严格按照本说明书推荐条件和操作步骤进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、恢复培养厌氧菌时，在操作过程中应严格控制厌氧条件：制作培养基时，应使用厌氧螺口试管，并利用高纯氮气去除试管和培养基中的氧气，使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、与菌种相关的其它信息请参阅微生物菌种查询网网站(www.biobw.org）。 五、冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂（应避免过多水蒸气影响菌种的复苏），用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。2、用无菌吸管吸取 0.3ml（建议勿超过 0.5ml）适宜的液体培养基(不添加琼脂)，滴入管内，轻轻振荡，待安瓿管内的菌体溶解呈悬浮状，在用无菌吸管吸取全部菌悬液接在 1-2 支建议的培养基试管中（不超过 2 支，中国微生物菌种查询网提供的培养基配方中有琼脂，请务必做成试管斜面，配方中没有琼脂，试管中液体培养基不超过 5ml），并在建议的条件下静止培养。冻干管打开后需一次用完，不能留存。另外，安瓿管内大部分是用牛奶做保护剂，里面菌体为少数，复苏时要全部菌悬液接在新鲜培养基上，否则可能造成复苏不成功。4、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。5、打管操作应在烧杯或托盘上方进行，用完冻干管应灭菌处理后丢弃。6、菌种复苏时，请务必记录好菌种的编号和制备批号，如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌钟后 2 个月内联系，逾期不予受理。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                    人宫颈癌细胞的知识与应用及培养操作规程！ 一、背景 人宫颈癌细胞是第一个来自人体组织经连续培养获得的非整倍体上皮样细胞系，它由Gey GO等在1951年从31岁女性黑人的宫颈癌组织建立。经原始组织切片重新观察，Jones等将其诊断为腺癌。已知该细胞系含有人乳头状瘤病毒HPV18序列，需在2级生物安全防护台操作。该细胞角蛋白阳性，p53表达量较低，但表达正常水平的pRB（视网膜母细胞瘤抑制因子）。 二、人宫颈癌细胞接收后的处理 1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染。 2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。 3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。 4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代。 三、人宫颈癌细胞的培养步骤 1、培养基及培养冻存条件准备： 1）准备MEM（推荐iCell-0012）培养基；优质胎牛血清，10%；双抗1%。 2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。 3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。 2、细胞处理： 1）冻存细胞的复苏： 将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。 2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 对于贴壁细胞传代可以参考以下方法： 1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 2.加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。 3.轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。 3）细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。 1.细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10^6~1×107个活细胞/ml. 2.1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞，按每1ml冻存液含1×10^6~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。 3.将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。 四、应用 人宫颈癌细胞可以用于淫羊藿素诱导人宫颈癌细胞凋亡及其机制的研究： 对淫羊藿素抑制宫颈腺癌细胞株HeLa和鳞状上皮细胞癌细胞株SiHa的效果以及ROS在其抗癌活性中的作用进行了探讨。 首先,MTT实验显示淫羊藿素处理48小时后,HeLa和SiHa两种癌细胞的生长均受到显著抑制(IC50分别为12.5和17μM),而非恶性的CCD?1095Sk成纤维细胞和HEK293人胚肾上皮细胞则只受到轻微影响,说明淫羊藿素对癌细胞有选择性毒性。其次,淫羊藿素处理HeLa和SiHa细胞3小时后,细胞内ROS水平即已显著升高,而用N-乙酰半胱氨酸(NAC)阻断ROS升高后,淫羊藿素的抑制作用即基本消失,说明淫羊藿素引起的ROS升高是其对HeLa和SiHa细胞选择性毒性的基础。接下来的碱性彗星电泳实验表明淫羊藿素处理12小时后,HeLa和SiHa细胞内DNA断裂数量显著上升,加入OGG1 DNA糖苷酶后DNA断裂数进一步升高,而NAC处理阻止了淫羊藿素所致DNA断裂的上升,说明淫羊藿素处理所致ROS升高引起了显著的DNA氧化损伤,由此导致了大量DNA链断裂。 免疫荧光染色发现淫羊藿素处理6小时后γH2AX和53BP1阳性细胞数均显著增多,用NAC处理后显著减少,进一步证明淫羊藿素处理引起了大量DNA损伤并激发了DNA损伤反应(DDR)。Western blot检测发现CDC25C-pS216随淫羊藿素处理浓度的加大而升高,而CDK1-pT14水平下降。流式细胞术检测发现淫羊藿素处理HeLa和SiHa细胞24小时后,发生了G2/M期细胞周期阻滞,NAC处理阻断了CDC25C和CDK1蛋白的变化以及G2/M期周期阻滞,显示DNA损伤反应激活了G2/M细胞周期检验点且与淫羊藿素所致ROS有关。 Western blot检测同时显示活化的caspase 3和caspase 9以及Bax蛋白随淫羊藿素处理浓度的加大而升高,而Bcl-2和XIAP蛋白下降;流式细胞术和线粒体膜电位检测发现淫羊藿素处理HeLa和SiHa细胞后,凋亡细胞比例呈时间依赖性增加,而NAC处理降低了凋亡蛋白的变化以及凋亡细胞数的上升,显示ROS所致DNA损伤反应同时激活了细胞凋亡。此外,qRT-PCR和Western blot检测结果表明淫羊藿素处理前后HPV E6和E7基因的转录和蛋白水平均无明显改变,提示淫羊藿素对HeLa和SiHa的细胞毒性与HPV病毒基因的表达无关。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                    细菌的特殊结构及其染色方法与注意事项！ 一、荚膜 某些细菌生活在一定的营养条件下时，会在细胞壁表面形成一层松散的粘液状物质，称为荚膜，一般由多糖和多肽组成。荚膜能够保护细胞免遭干燥影响，同时也是细胞外的碳源和能源的储备物质。当环境缺乏营养时，可被细胞利用。从临床方面来讲荚膜可以保护病原菌免遭宿主吞噬细胞的吞噬，增强其致病能力。如具有荚膜的S 型肺炎球对人体毒力强，能引起肺炎，但如果细胞失去荚膜(即成为R型菌株)后，致病力就下降。 因荚膜是由细菌细胞壁外的一层粘液性多糖类物质组成，其对染料的亲和力较弱，因此不容易着色，通常采用负染色法进行染色，让菌体和背景着色，而荚膜不着色，从而使菌体周围呈现透明圈。 荚膜染色方法： 第一步：需要制作适当厚度的细菌涂片，涂片时可多挑些菌体与水充分混合，并将粘稠的菌液尽量涂开，但涂布的面积不宜过大，在空气中自然干燥，不要加热固定。 第二步：滴加适量的结晶紫染色液于载玻片上，完全覆盖菌体，静置染色5-7分钟。 第三步：用20%硫酸铜水溶液冲洗涂片，冲洗要适度，2-3遍即可。 第四步：用吸水纸吸干多余的水分，并立刻滴加1-2滴香柏油，以免形成CuSO4结晶。 第五步：使用显微镜镜检观察。 二、鞭毛 鞭毛是生长在细菌菌体表面的细长、弯曲的，具有运动功能的蛋白质附属物。鞭毛的数目大约有一至数十条，长度约为15-20μｍ，直径为0.01-0.02μｍ。鞭毛是细菌的运动器官，观察细菌鞭毛对于细菌鉴定有十分重要的意义。依据鞭毛的有无、位置和数量，细菌分为无鞭毛菌、单端极鞭毛菌、单端双鞭毛菌、单端丛鞭毛菌、周鞭毛菌、侧鞭毛菌等。 一般情况下，因鞭毛较细，在光学显微镜下不易观察，通常需使用电镜进行观察，但通过特殊染色方法使染料沉积在鞭毛上使其加粗，就可克服上述困难。 鞭毛染色方法： 第一步：挑选活力较强的幼龄细菌进行涂片，挑取菌的时候尽量不要带有培养基，涂片的玻片必须清洗干净，染色前可用洗衣粉洗净并在酒精中浸泡24h，用前擦拭干净后使用。 第二步：将菌落轻点在玻片上，倾斜玻片让菌液自然留下，不要用接种环涂抹或用力过猛，以免破坏鞭毛。 第三步：静置待其自然干燥。 第四步：滴加鞭毛染色液 2-3滴，在室温中染色10分钟。 第五步：直接用蒸馏水缓慢冲洗染液，不要先倾去染液后再水洗，以免污染背景不易观察，冲洗时要将染液的颜色冲洗干净否则也会影响观察。 第六步：使用显微镜镜检观察。镜检时先从边缘开始逐渐向中间镜检，因为边缘处菌量小，易观察到单菌落，中心处菌易重叠，不易观察。 三、芽孢 芽胞是芽胞杆菌休眠期的一种特殊形态。芽胞的形态包括芽胞形状、芽胞位置和胞子囊膨大，芽胞形态分为圆柱形、椭圆形、球形，芽胞位置分为端生、近端生、中生或近中生。具有非常强劲的抗热、抗化学药物、抗辐射性能。根据芽胞的形态学可以对芽胞杆菌属和梭菌属进行初步鉴定。 芽孢壁厚、透性低，着色、脱色均较困难。因此，用着色力强的染色剂(如孔雀石绿)在加热条件下进行染色时，染料不仅可以进入菌体，而且也可以进入芽孢，进入菌体的染料可经水洗脱色，而进入芽孢的染色的染料则难以透出，若再用复染液(如沙黄水溶液)染色后，芽孢仍然保留初染剂的颜色，而菌体被染成复染剂的颜色，即菌体和芽孢分别染成红色和绿色易于区分。 芽孢染色方法： 第一步：常规涂片，待干燥后，通过火焰上方3次，进行固定。 第二步：滴加3-4滴孔雀石绿水溶液于涂片上。 第三步：用木夹夹住载玻片在火焰上持续加热6-8s，使染液冒蒸汽但不沸腾。 第四步：待玻片冷却后，倾去染液，水洗至不再褪色为止。 第五步：用番红溶液复染1min，水洗至水为无色。 第六步：待其干燥后，使用显微镜镜检观察。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                   雨生红球藻的知识与地位及起源与应用领域！ 红球藻是一种淡水单胞绿藻，隶属绿藻门、团藻目、红球藻科、红球藻属。该藻能大量累积虾青素而呈现红色，故名红球藻，又称雨生红球藻。红球藻是目前科学界发现的继螺旋藻、小球藻之后，富含营养价值和药用价值的藻类食品。 一、红球藻简介 红球藻是目前科学界发现的继螺旋藻、小球藻之后，富含营养价值和药用价值的藻类食品。该藻能大量累积虾青素而呈现红色，故名红球藻，又称雨生红球藻。上世纪九十年代末期，由于红球藻孢子富含虾青素而一度成为继螺旋藻、小球藻之后的另一种高价值的经济微藻。 雨生红球藻是一种主要生长在淡水中的单细胞绿藻，在海洋中分布很少，但海水中的盐度有利于藻体中虾青素的累积。雨生红球藻是公认的在自然界中生产天然虾青素的最理想来源，虾青素作为目前发现的一种最高效的纯天然抗氧化剂，在清除自由基、抗衰老、抗肿瘤和免疫调节等方面显示出良好的生物活性，被广泛应用于功能性食品、医药以及化妆品领域，世界上现已有多家公司生产雨生红球藻粉及其功能制品。目前，国内外对该藻成分的研究多集中于虾青素的研究和应用方面，而对其多糖的相关研究尚未见报道。 二、红球藻地位 红球藻在分类学上属于绿藻门、绿藻纲、团藻目、红球藻科、红球藻属。 三、红球藻起源 十九世纪法国探险家前往加拿大新斯科舍省探险时，来到了布雷顿角岛上的布拉多尔湖。布拉多尔湖属于寒带天然咸水湖，含盐量极高，在如此恶劣的条件下，空中鸟无踪，小鱼绝迹任何生物都无法生存。但是让探险科学家们惊奇的是，在这样一个生物绝迹的湖中居然存活着一种红色的小虫子。到底是什么神奇力量让这种小虫子在如此恶劣的条件下得以存活呢？这引起了探险科学家的兴趣。 随后，科学家们对这种神奇的红色小虫子进行深入研究，发现它们的奇迹是红色的体征，经过化验，红色的体液确认是一种人体不能自行合成的天然抗氧化物质虾青素。正是红色的虾青素保护了这种小虫子，使其白天抗拒辐射、高盐碱，夜晚抗冰冻、耐严寒而得以生存下来。科学家们开展了使人类获得红色小虫神奇力量的科学努力。 20世纪初，科学家们终于又发现了红色虾青素这一个更好的来源——雨生红球藻。这种神奇的藻类的生命历程与红色小虫有惊人的相似。红球藻是虾青素含量最高的微藻，也是所有已知的虾青素合成生物体积累量最高的物种。这种神奇的藻类含有天然强抗氧化剂，是自然界迄今为止发现的最强的抗氧化剂，其抗氧化功效是天然ß-胡萝卜素的10倍、天然维生素E的550倍。掌握了红球藻的科研权，为人类改写时间函数创造了可能，保持年轻、延续尊贵再也不是白日梦。一场红球藻研发的科研攻关战在世界打响了，全世界生命科学的顶尖科学家从此开始了100年探索。 当前，雨生红球藻被公认为自然界中生产天然虾青素的最好生物，因此，利用这种微藻提取虾青素无疑具有广阔的发展前景，已成为近年来国际上天然虾青素生产的研究热点。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                    嗜肺军团菌的培养方法与注意事项及打管说明！ 嗜肺军团菌不抗酸，无孢子，无荚膜，类似于杆菌。不能分解明胶、糖类或是尿素，同时，不可参加酵解反应。嗜肺军团菌无色，也非自身荧光。氧化酶与过氧化氢酶测试阳性。β-内酰胺酶阳性。 一、菌种简介平台编号：Bio-67798规格：冻干物拉丁属名：Legionella Pneumophila菌株名称：嗜肺军团菌其他编号：ATCC 33152 =BCRC 17854 =CCUG 9568=DSM 7513 =NCTC 11192 培养基编号：137 培养温度：37 培养时间：48-96 小时分离源：人类的肺 培养基信息 培养基编号：137 名称：BCYE琼脂(军团菌琼脂) 备注：(军团菌琼脂)用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、培养基BCYE 培养基（建议买市场有现成的培养基）。  三、保藏条件冻干菌种应在 2-8°C 保存。安瓿冻干和培养物应在 2-8°C 保存。西林瓶请置于-20°C 保存，甘油管请置于-80°C 保存。 四、注意事项1）冻干粉首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取 0.3ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支平板建议不超过 2 个平板）；2）经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。7）如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到后 2 个月内联系，逾期不予受理；8）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。9）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。10）甘油管使用：使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。 五、冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂（应避免过多水蒸气影响菌种的复苏），用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。2、用无菌吸管吸取 0.3ml（建议勿超过 0.5ml）适宜的液体培养基(不添加琼脂)，滴入管内，轻轻振荡，待安瓿管内的菌体溶解呈悬浮状，将溶解后的菌悬液转移至盛有 4~5mL 液体培养基的试管中混匀，可将残留在吸管中的 1-2 滴菌悬液转接至固体培养基上。将液体试管和斜面试管于推荐条件下静置培养，以液体培养结果为准。3、冻干管打开后需一次用完，不能留存。另外，安瓿管内大部分是用牛奶做保护剂，里面菌体为少数，复苏时要全部菌悬液接在新鲜培养基上，否则可能造成复苏不成功。4、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。5、打管操作应在烧杯或托盘上方进行，用完冻干管应灭菌处理后丢弃。6、菌种复苏时，请务必记录好菌种的编号和制备批号，如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到后 2 个月内联系，逾期不予受理。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                     兔支气管上皮细胞的应用研究及培养操作步骤！ 一、背景 兔支气管上皮细胞采用链霉蛋白酶-中性蛋白酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。 兔气管上皮细胞分离自气管组织；气管(Trachea)，呼吸器官的一部分；为后壁略平的圆筒型管状。上端平第六颈椎下缘，与环状软骨相连；向下至第四、五胸椎体(相当胸骨角平面)交界处，分左、右主支气管，分叉处称为气管杈。 气管主要由14-16个半环状软骨构成，有弹性，软骨为“C”字形的软骨环，缺口向后，各软骨环以韧带连接起来，环后方缺口处由平滑肌和致密结缔组织连接，保持了持续张开状态。管腔衬以粘膜，表面覆盖纤毛上皮，粘膜分泌的粘液可粘附吸入空气中的灰尘颗粒，纤毛不断向咽部摆动将粘液与灰尘排出，以净化吸入的气体。 气管上皮是气道与外界环境接触的第一道防线，不仅是各种病原体、炎症介质作用的靶细胞，还作为效应细胞合成、释放多种炎性介质和细胞因子从而参与气道炎症及免疫反应。体外培养的原代气管上皮细胞因与体内组织在形态结构和功能活动上存在很大的相似性，因此，在基础及临床研究中极为重要。 二、兔支气管上皮细胞培养步骤 1、兔支气管上皮细胞培养基及培养冻存条件准备： 1)准备：DMEM+10%FBS+1%P/S 2)培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。 3)冻存液：50%basal medium+40%FBS+10%DMSO。 2、兔支气管上皮细胞处理： 1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入250px皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 对于贴壁细胞，传代可参考以下方法： 1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。 4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 注：第一次传代推荐传代比例为1:2，以后传代比例可根据客户需要自己决定。 3）兔支气管上皮细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 三、应用 兔支气管上皮细胞可以用于兔支气管败血波氏杆菌的分离鉴定及某些生物学特性研究： 从Bb的分离和鉴定、菌相免疫学和粘附特性四个方面进行了系统的研究。 结果如下： 1、兔支气管败血波氏杆菌的分离与鉴定：通过对江苏南京地区4家实验兔场和山东淄博1家商品兔场有鼻炎症状的患兔鼻腔分泌物进行兔支气管败血波氏杆菌的分离鉴定，了解支气管败血波氏杆菌在兔群中的感染情况，并对该菌的某些生物学特性进行研究。共采集有明显鼻炎症状的194份患兔鼻腔分泌物，分离出56株支气管败血波氏杆菌，分离率为17.87％～39.39％，平均分离率28.86％，结果显示支气管败血波氏杆菌是引起家兔鼻炎的重要病原菌，分离率较高，该病的发生与季节具有一定的相关性，分离菌具有特定的生长特性、形态特性、生化反应特性和对抗生素的敏感特性。 2、支气管败血波氏杆菌人工感染动物模型的建立：对鉴定后的19株支气管败血波氏杆菌进行了ICR小鼠毒性比较研究，并以此为基础进行了分离菌对兔致病性差异研究；用BJL0504菌株(Ⅰ相菌)以不同攻毒途径对30～40日龄兔进行致病作用比较研究；用冻干保存的3株强毒力菌株以静脉注射途径攻毒家兔，根据致病性筛选毒力稳定的菌株作为疫苗候选株。ICR小鼠毒性试验表明，19株分离菌中11株为超强毒，3株为强毒，3株低毒，2株弱毒，分离菌中BJL0504对小鼠和兔均为高致病性，但BALM0503对小鼠为低致病性，对兔为高致病性，其他分离菌对小鼠和兔的致病性也不完全相同；通过肺内和静脉注射感染的兔死亡率较高，发病症状和剖检症状也比滴鼻感染明显；冻干保存15个月后BJL0504分离菌对兔依然有较高致病性，其他两株冻干菌致病性也没有变化，BJL0504分离菌可以作为疫苗候选株。 3、支气管败血波氏杆菌不同相小鼠免疫保护试验：为了研究不同相的支气管败血波氏杆菌的免疫保护情况，首先对分离菌的培养特性与相变特点以及不同相的致病性进行了研究，接着对该菌Ⅰ相菌和Ⅲ相菌进行灭活并免疫ICR小鼠，观察免疫产生期和攻毒保护效果。试验表明，Bb-F1～F6代菌动力试验阳性，F7～F12代菌则为阴性，其余生化试验结果F1～F12代菌完全相同；根据细菌溶血情况确定F1和F9分别为Ⅰ相菌和Ⅲ相菌。小鼠攻毒保护试验表明，经Bb-Ⅰ相菌和Ⅲ相菌灭活苗免疫小鼠后，均能产生完全攻毒保护作用。 4、支气管败血波氏杆菌粘附特性研究：用HEP-2细胞(人喉上皮细胞癌细胞系)作为体外模型，比较研究了支气管败血波氏杆菌Ⅰ相菌和Ⅲ相菌的体外粘附特性和粘附动力学。结果表明，强毒力分离菌BJL0504菌株Ⅰ相菌在体外可以粘附HEP-2细胞，而其传代Ⅲ相菌在体外不能粘附该细胞，与该菌Ⅰ相菌和Ⅲ相菌的致病性具有相关性。粘附动力学试验显示随着作用时间的延长，Bb-Ⅰ相菌在体外粘附HEP-2细胞的数目也随之增加，并在165 min时达到高峰。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   嗜冷黄杆菌PCR试剂盒的知识与应用及相关研究！ 一、背景 嗜冷黄杆菌PCR试剂盒是一种常用的分子生物学工具，它可以帮助科研人员快速、准确地检测和鉴定嗜冷黄杆菌。 通过使用针对嗜冷黄杆菌的PCR试剂盒，研究人员可以特异性地扩增嗜冷黄杆菌的DNA片段，从而实现对该物种的准确检测。这种检测方法具有较高的灵敏度和特异性，可以检测出痕量嗜冷黄杆菌的存在，同时避免其他微生物的干扰。 二、嗜冷黄杆菌PCR试剂盒操作步骤 （一）稀释标准曲线样品（以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。 1、标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。 2、用带芯枪头分别加入45μL荧光PCR专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同）。 3、在7号管中加入5μL阳性对照（浓度为1×10E8拷贝/μL，试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。 4、换枪头，在6号管中加入5μL1×10E7拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。 5、换枪头，在5号管中加入5μL1×10E6拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E5拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。 6、重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。 （二）样品DNA的制备 7、用自选方法纯化样品的DNA，本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。 8、如果有N个样品，则需要进行N+2个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。 （三）设置qPCR反应（20μL体系，在样品制备室进行） 9、如果做定量分析并且只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照（用水做模板），6个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做1次重复，则标记N+4个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照（用水做模板），1个用于PCR阳性对照（用第一步稀释得到的标准曲线系列稀释液的第4号做模板）。下面只以定量分析为例描述操作步骤。 10、在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复）： （四）数据处理 11、如果把嗜冷黄杆菌PCR试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值，再推算出其浓度。 12、如果把嗜冷黄杆菌PCR试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照Ct必须大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于或等于30。对待测样品，如果其Ct大于或等于40则为阴性，如果小于或等于35则为阳性。如果在35-40之间，则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于40则为阴性，如果小于40，则为阳性 三、应用 嗜冷黄杆菌PCR试剂盒可以用于虹鳟源嗜冷黄杆菌的生物学特性及其致病性研究： 实验从患病虹鳟溃烂肌肉处分离到2株细菌,命名为CH06和CH07株,并对分离菌株的理化特性、分类地位、致病性和耐药性开展了深入研究,以期为该病的防控提供参考。 结果表明,CH06和CH07株在胰蛋白酵母提取物(tryptone yeast extract salts,TYES)琼脂平板上呈煎蛋状外观,产黄色素,氧化酶和过氧化氢酶阳性,能水解明胶和酪蛋白,不能水解淀粉,不能利用果糖、半乳糖和七叶苷等。16S r RNA比对结果显示,CH06和CH07株与嗜冷黄杆菌模式株NBRC 15942的同源性分别为99.35%和99.42%。 本研究还探索了嗜冷黄杆菌肌肉注射感染虹鳟(Oncorhynchus mykiss)后病原菌在鱼组织内的动态分布情况,以期为BCWD的防控提供理论支撑。以1.0×108CFU/m L浓度的嗜冷黄杆菌CH06株菌液肌肉注射感染实验虹鳟,感染后12 h、24h、96 h观察虹鳟临床症状及组织病变,并利用嗜冷黄杆菌PCR试剂盒检测各组织病原载量。 患病鱼的临床病征表现为体色发黑,游动缓慢或不动,食欲不振,尾柄部注射处肌肉溃烂,鳃苍白,脾脏肿大,伴有腹水。组织病理观察显示,嗜冷黄杆菌感染后实验鱼注射处肌纤维断裂、溶解;脾窦扩张,其内充满红细胞;肾脏组织含铁血黄素增加,出现大量空泡变性,肾小管上皮细胞变性、坏死,肾间质炎性细胞浸润。嗜冷黄杆菌PCR试剂盒检测结果表明,肌肉注射感染12 h后即可在脾脏、肝脏、肾脏、肠道、鳃、脑和尾鳍中检出嗜冷黄杆菌,鳃病原载量最高为(1.62±0.28)×103copy/μL。 感染后24 h,脾脏、脑中病原载量较12 h时上升最多,其他组织病原载量与感染12 h时水平一致,脾脏病原载量为(1.26±0.37)×104copy/μL,显著高于其他组织(P 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                 甲醇芽孢杆菌凝乳酶对马苏里拉干酪加工特性的影响！ 百欧博伟生物：干酪是以乳为原料，加入适量发酵剂和凝乳酶，经凝乳并分离乳清而制得的乳制品，除了含有丰富的蛋白质、脂肪等有机成分外，还具有降低血清胆固醇、预防心血管疾病、维持肠道菌群的平衡和稳定、防止腹泻和便泌等生理功能。微生物凝乳酶在干酪中应用前景广阔，普遍具有高凝乳活性和高蛋白水解活性。本实验室前期通过甲醇芽孢杆菌（Bacillus methanolicus）获得了凝乳酶，经测定其凝乳活力为5.97×105 SU/g、蛋白水解活力为9.47×103 U/g，与商品酶（凝乳活力3.60×105 SU/g、蛋白水解活力1.21×103 U/g）有较大差异。为了探究该凝乳酶是否具有代替商品酶或部分代替商品酶应用于马苏里拉干酪中的潜力。 来自北京工商大学北京食品营养与人类健康高精尖创新中心、食品添加剂与配料北京高校工程研究中心的李柳、郑喆、赵笑和杨贞耐*等人前期预实验以商品酶作为对照，比较了不同组别（甲醇芽孢杆菌凝乳酶质量分数分别为10%、20%、30%）混合凝乳酶的凝乳活力和蛋白水解活力，最终选择蛋白水解活力相对较低的质量分数10%甲醇芽孢杆菌凝乳酶、商品凝乳酶混合酶（凝乳活力4.34×105 SU/g、蛋白水解活力3.42×103 U/g）制作马苏里拉干酪，并对不同组别干酪成熟过程中的理化特性、蛋白水解、质构、风味特性和感官指标进行测定。 一、干酪理化特性的比较 实验组干酪的水分质量分数和得率显著高于对照组（P＜0.05）。甲醇芽孢杆菌凝乳酶水解作用强。 二、干酪pH值变化的比较 在整个成熟过程中，干酪样品的pH值均呈现先下降后上升的趋势，其原因可能是成熟前期干酪中微生物和残存凝乳酶会分解乳糖生成乳酸，分解脂肪生成脂肪酸，从而导致干酪pH值的下降；随着成熟时间的延长，干酪处于较低pH值的体系中，不利于微生物的分解代谢，且乳糖会随着干酪成熟逐渐消耗殆尽，残余的乳酸会和蛋白水解出的NH3发生中和，使得pH值小幅上升。在成熟的第14天，甲醇芽孢杆菌凝乳酶干酪的pH值下降达到最小值，说明残余凝乳酶活力对干酪成熟期间的pH值产生影响，但三者pH值变化均在4.6～5.3范围内。 三、干酪中乳酸乳球菌数量变化的比较 在干酪成熟初期，牛乳中大量乳糖被乳酸乳球菌分解用于生长繁殖，乳酸乳球菌数量增加。随着乳糖含量的减少，乳酸乳球菌逐渐死亡或自溶，其死亡后释放出的各种酶类能够降解蛋白质、脂肪等大分子有机物，赋予干酪良好的品质和风味。尽管干酪中乳酸乳球菌数量均达到了8.80～9.68（lg（CFU/g）），但在成熟后期，甲醇芽孢杆菌凝乳酶干酪中的乳酸乳球菌数量要稍低于混合酶干酪和对照组干酪。整体来看，乳酸乳球菌在干酪成熟过程中能较好地存活，受凝乳酶的影响不大。 四、干酪水解特性的比较 1、pH4.6时可溶性蛋白的HPLC分析结果 甲醇芽孢杆菌凝乳酶干酪在成熟0 周就有明显的蛋白水解肽生成，这是由于甲醇芽孢杆菌凝乳酶的高蛋白水解活性发挥了作用；而干酪中的凝乳酶一般要求凝乳活力强，蛋白水解活力弱，否则会导致干酪得率下降和苦味肽的生成，影响其品质。对照组干酪在成熟前期几乎没有蛋白水解肽段的出现，随着干酪的逐渐成熟，少许肽段才被水解出来，说明商品酶蛋白水解活性低，干酪成熟时间也相应延长。混合酶干酪与其余两组相比表现出了适度的蛋白水解活性，水解出的肽还可形成风味物质。 2、干酪成熟过程中酪蛋白水解分析结果 与成熟前相比，甲醇芽孢杆菌凝乳酶干酪成熟4 周后αs1-酪蛋白条带变窄，β-酪蛋白和κ-酪蛋白条带消失，说明蛋白质降解程度较大；混合酶干酪中β-酪蛋白条带消失，αs1-酪蛋白和κ-酪蛋白条带变窄，说明蛋白质也发生了降解；而对照组各蛋白条带无明显变化。结果表明，实验组干酪中添加的甲醇芽孢杆菌凝乳酶导致其蛋白水解程度均高于对照组。蛋白质降解会生成肽类和氨基酸，过度的降解可能伴随有苦味肽的生成，影响干酪口感。 3、游离氨基酸的分析结果 实验组甲醇芽孢杆菌凝乳酶干酪中蛋白水解作用强，成熟4 周后甘氨酸、组氨酸、丝氨酸、苏氨酸、精氨酸和脯氨酸质量分数均高于对照组和混合酶干酪，且水解形成了特有的磷酸乙醇胺和氨基异丁酸。 五、干酪质构特性的比较 3 组干酪弹性随着干酪的成熟均表现出下降趋势。干酪成熟后期甲醇芽孢杆菌凝乳酶干酪的弹性最低，其原因可能是由于甲醇芽孢杆菌凝乳酶的蛋白水解作用，使其与对照组和混合酶干酪相比形成较软的质地，从而导致干酪的硬度下降、黏性增加。 六、干酪微观结构的比较 实验组甲醇芽孢杆菌凝乳酶干酪在成熟过程中的蛋白水解使得干酪结构完全降解，脂肪球聚集体积较大，孔洞由水分和脂肪球填充，失去了干酪应有的结构特性。混合酶干酪的微观结构随着成熟过程逐渐变得紧实，孔洞变小，说明混合酶的蛋白水解作用没有破坏干酪应有的微观结构。 七、干酪风味的比较 添加不同凝乳酶的马苏里拉干酪在成熟过程中共产生了32 种风味物质，包括烷烃类2 种、酸类6 种、酮类6 种、醛类4 种、醇类6 种、脂类3 种、其他化合物5 种，其中相对含量较高的是酸类、醇类和脂类化合物。甲醇芽孢杆菌凝乳酶干酪和混合酶干酪在成熟过程中比对照组干酪多生成了癸酸、十二烷、己酸乙酯等风味物质，且其他风味物质含量也普遍高于对照组，这与甲醇芽孢杆菌凝乳酶具有高蛋白水解活性的研究结果一致。甲醇芽孢杆菌凝乳酶蛋白水解活力高，使实验组干酪成熟后pH 4.6时可溶性蛋白水解程度、游离氨基酸种类和风味物质相对含量等与水解活性相关的指标均高于对照组，说明高水解活力促进了干酪风味的形成，成熟后实验组干酪的风味和口感要好于对照组，在不生成苦味肽和干酪结构保持完整的前提下，这是甲醇芽孢杆菌凝乳酶代替或部分代替商品酶制作干酪的优势。 八、干酪的感官评价结果 混合酶干酪各评定指标得分及总分与对照组相比差异不显著（P＞0.05），但甲醇芽孢杆菌凝乳酶干酪除风味与其他两组干酪无显著差异外，其余指标均有显著差异，且得分及总分均低于对照组。总体来看，甲醇芽孢杆菌凝乳酶能作为商品酶的部分代替品应用于马苏里拉干酪的生产。 九、结论 实验组干酪在成熟过程中pH值（4.6～5.3）、微生物数量（8.80～9.68（lg（CFU/g）））与对照组无显著差异（P＞0.05）；实验组干酪水分质量分数（混合酶干酪为（43.21±1.17）%、甲醇芽孢杆菌凝乳酶干酪为（46.15±0.94）%）均显著高于对照组（（41.08±1.04）%），得率（混合酶干酪为（9.27±0.17）%、甲醇芽孢杆菌凝乳酶干酪为（9.46±0.16）%）也显著高于对照组（（8.98±0.13）%）（P＜0.05）；且实验组干酪的蛋白水解特性（pH 4.6时可溶性蛋白、酪蛋白水解程度和游离氨基酸质量分数）以及风味物质种类和相对含量等指标也优于对照组干酪。但是实验组中甲醇芽孢杆菌凝乳酶干酪保形性相对欠佳，感官评定得分偏低，混合酶干酪与对照组质构及感官基本得分一致，因此甲醇芽孢杆菌凝乳酶可以作为商品酶的部分代替品应用于干酪的生产中。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                蛭弧菌的分布和分离及应用价值与应用中存在的问题！ 一、菌种简介 蛭弧菌是寄生于其他细菌（也可无寄主而生存）并能导致其裂解的一类细菌。它虽然比通常的细菌小，能通过细菌滤器，有类似噬菌体的作用，但它不是病毒，确确实实是一类能"吃掉"细菌的细菌。 二、形态特征 蛭弧菌有细菌的一切形态特征，单细胞，弧形或逗点状，有时呈螺旋状。革兰氏染色阴性。大小为0.3~0.6 pmX0.8~1.2μm。一般端生单鞭毛，有的在另一端生有一束纤毛。水生蛭弧菌的鞭毛还具有鞘膜，它是细胞壁的延伸物，并包围着鞭毛，使得它比其他细菌的鞭毛粗3~4倍，这是一个很显著的特点.细胞中蛋白质含量较高，占干重的60%~70%。DNA含量为5%，G+C含量为42~51mol%。有人认为，蛭弧菌DNA的80%来源于宿主细胞的DNA。 三、侵入对象 蛭弧菌与宿主细胞之间，常表现出一定的特异性。不过，有的特异性较差，能侵入多种细菌。例如不同的蛭弧菌菌株，能侵入各类不同的植物病原菌。 蛭弧菌在人的某些病原菌体中也已发现，藻类和某些农业致病真菌细胞中亦有它分布。这些蛭弧菌的溶菌作用，对于控制农业及人畜病原微生物，无疑是有价值的。虽然蛭弧菌可使一些细菌遭受毁灭性裂解，然而，它本身的命运同样遭受到另一类小生物的威胁。1970年首次发现了蛭弧菌噬菌体(bdellophage) ，它们对寄生或非寄生两种类型的蛭弧菌均有裂解作用。不过，专一性严格，只对一定的种株作用，并有自己的裂解过程。 当蛭弧菌直接附着于宿主细胞之前，或者在完成侵入宿主细胞周质以前，蛭弧菌噬菌体的尾部首先附着在蛭弧菌细胞上，然后该噬菌体将核酸注入蛭弧菌菌体中，于是完成了它的入侵过程，而噬菌体头部，完全以空壳保留在蛭弧菌细胞之外，被感染了噬菌体的蛭弧菌，其形态、大小不变，噬菌体却在细胞内大量复制。与此同时，蛭弧菌本身仍在宿主细菌的周质中，以二均分裂的方式繁殖，其结果，蛭弧菌的宿主细胞裂解，蛭弧菌噬菌体的子代也随之被释放出来。至于噬菌体如何通过蛭弧菌宿主释放于体外，实质性的机制还不清楚。 实验证明：在宿主细菌-蛭弧菌-蛭弧菌噬菌体之间，已构成了一种独特的"三位一体"的寄生系统。它们之间的相互作用，或许发生在自然生态系统之中，也可能是另一种情况，即蛭弧菌噬菌体的天然宿主是非寄生型蛭弧菌，或者以溶源状态天然存在，通过某种诱导因子的作用而得到发展。如果真是这样，无疑对其宿主是个威胁。 四、分布和分离 蛭弧菌广泛存在于自然界，土壤、河水、附近海洋水域及下水道污水中都有分布，干净的井水、泉水中找不到它们的存在。一般污水中含菌数105个/毫升，下水道污水中可含菌数万个/毫升，土壤中含菌数103-5个/克。怎样检查和分离蛭弧菌呢?多少需要借鉴细菌病毒研究中所使用的方法。即将蛭弧菌与敏感菌混合倒平板，在适宜条件下培养2-3天，平板上便会出现类似噬菌体的噬菌斑，并逐渐扩大，宿主细胞完全被溶解而形成透明区。从这些透明区中就可分离到蛭弧菌。利用这一特征，还可计算出蛭弧菌噬菌体的数目。同时可追踪增殖过程、寄生潜伏时间、新产生蛭弧菌的数量以及它们的活性等。例如蛭弧菌噬菌体杀死宿主细胞而不产生噬菌斑，遇到这种情部，用此法就较困难。如果要从土壤中分离蛭弧菌，应将少量样品先制成悬浮液，经滤膜过滤，以截留大的细菌，让小的蛭弧菌通过，取滤液进行分离。 蛭弧菌不仅宿主范围广泛，加之特殊的生活方式，使之具有生态学优势。其一，蛭弧菌进入到其他细菌的周质空间，可以确保营养需要，不依赖外界的来源。因此，即使在营养物质很少的地方，诸如海洋、江河、湖泊等生态系统中也能生长；其二，周质内的环境是一个无竞争的小生境。这对生长缓慢的蛭弧菌无疑是个很有利的条件；另外，周质空间被一个稳定的、坚强的细胞壁所包围，有似大分子不能通过，即使小分子也不易透过，这就为蛭弧菌提供了一个保护性环境。 五、应用价值 1、防治有害细菌 由于上述特性，使蛭弧菌具有很大的潜在应用价值，很可能成为生物防治有害细菌的一种有力武器，首先，它有可能用于净化水体和清除工、农、医等方面的有害细菌。在农业上，有人将水生蛭弧菌跟引起水稻白叶枯病的黄杆菌混合在一起，加入农田灌溉水中，由于蛭弧菌以黄杆菌为"食料"，使灌溉水中该致病菌大大减少。对大豆痘病、柑桔溃疡病、棉花凋萎病的致病菌也具较强的侵染力，因而它可能成为人类与农业致病进行斗争的有力武器。在医学上，有的蛭弧菌对伤寒杆菌、副伤寒杆菌、痢疾杆菌等人畜致病菌也有很强的裂解作用。例如，有人用蛭弧菌有效地防治了由弗氏志贺氏菌引起的兔角质结膜炎和肠道疾病。蛭弧菌的防治作用，或者防止感染，或者明显地减少疾病的持续时间和严重程度。当用蛭弧菌和志贺氏菌混合接种时，在肠中的志贺氏菌的数量大幅度减少。然而，给动物强行喂养蛭弧菌则未获得成功效果；第二，这类细菌大量存在于污水中，对大肠杆菌和沙门氏菌属的细菌均有广泛的寄生性，因此，有人以蛭弧菌作为水域污染程度的一项最终指标(一般是以大肠杆菌的含菌数/毫升作为水源污染的指标)。 值得注意的是：它对一些有益的细菌如固氮菌等亦有裂解作用。在理论研究中，蛭弧菌同样具有十分重要的意义。特别是宿主细菌-蛭弧菌-蛭弧菌噬菌体这个"三位一体"的寄生系统，更引人注目。因为这一系统充满了"你死我活"的矛盾和斗争，优胜者得对生存和发展，失败者遭致危害和毁灭。人们可以通过这一系统，从正反两个方面去研究的利用"生命之战"的拮抗体系为人类服务。例如，蛭弧菌对宿主细胞周质空间的高度适应力的致死力，不论对致病的有害细菌还是非致病的有益细菌都是相等的。 2、在水产养殖中的应用 当今，人们对健康的水产品的需求量日益增长,但是我国的水产养殖业片面地追求降低饲料系数、提高产量追求经济利益,从而无节制地使用抗生素、化学药物来防治病害,使养殖环境不断遗到破坏,出现水体富营养化、重金属污染、药物残留超标等现象,加之自然环境的日益恶化，导致水生动物疾病频发,我国水产业每年因病害造成的经济损失约为140亿元,其中细菌性疾病尤为严重,约占水产养殖病害的46%。蛭弧菌以其天然、无污染、无残留的特点在水产养殖业中具有广阔的发展前景,有望成为抗生素的替代品，减轻抗生素滥用带来的各种困扰,减少抗生素滥用带来的巨大经济损失.蛭弧菌已经成为水生动物健康、生态、高效养殖的新工具。 （1）改善养殖水质 随着我国水资源污染加重,河流、湖泊等养殖水源遭到破坏,养殖水质面临严重的问题。在养殖过程中,水生动物排泄物以及剩余饵料不断积累，一旦水体中有机物增加的速度大于水体自净的速度,就会使溶解氧下降,氨氮、亚硝酸态氮上升，致病微生物大量繁殖,导致疾病频发、水生动物生长发育异常,造成巨大经济损失。蛭弧菌制剂发酵过程中产生的代谢产物可分解、转化水中的亚硝酸盐,改善养殖水体水质,减少蛋白态氮向氨和胺转化,从而减轻水中氨和有机质污染。 曲疆奇等研究表明,蛭孤菌微生态制剂可有效利用养殖水体中的含氯化合物,使养殖水体中的氨氮、亚硝酸态氮快速降解,有效改善养殖水质。张梁等在草鱼养殖池加入蛭弧菌后发现,水体主要水化指标具有明显改善,试验组的平均化学耗氧量、氨氮、硫化物显著低于对照组,溶解氧显著高于对照组，池水细菌总数及病原菌的数量也随着蛭弧菌浓度的增加呈几何级数减少。陈家长等研究发现,蛭弧菌和光合细菌联合使用对中华绒整蟹养殖水质有改善作用，细菌总数由6.3X106cfu/L降至2.6X103cfu/L,试验组池塘的氨氮、硫化物含量以及化学需氧量均明显下降。 （2）预防水生动物细菌性疾病 抗生素的长期使用容易使病原菌产生耐药性，利用蛭弧菌对病原菌独持的寄生和裂解特性，可有效清除养殖水体及水生动物体内的病原菌减少病原菌数量,使其无法达到致病密度，以达到防治病害、提高成活率的效果。因此,蛭弧菌具有取代抗生素的潜力,成为控制水生动物疾病的新手段。蛭弧菌作为水体自净的生物因子,可有效清除河水中的大肠杆菌、沙门氏菌和不凝集弧菌,清除率均在90%以上。张吕平等研究证实,蛭弧菌对凡纳滨对虾养殖水体中弧菌的杀灭效果显著优于二氯异氰尿酸和季铵盐络合碘消毒剂,可有效预防凡纳滨对虾弧菌病的发生。 （3）治疗水生动物细菌性疾病 水产养殖业频频遭到细菌性疾病的侵袭,甚至引发了大规模的死亡,限制了水产养殖业的健康发展。水生动物细菌性疾病的病原菌以气单胞菌属、假单胞菌属、弧菌属为主,这3个属细菌均为革兰氏阴性菌,能被蛭弧菌裂解，且裂解率高达70%以上。生产上可利用蛭弧菌对革兰氏阴性菌的裂解特性治疗水生动物细菌性疾病。秦生巨利用蛭弧菌制剂治疗由弧菌引起的大菱鲆出血病,结果证明连续使用复合蛭弧菌制剂3d,267尾严重出血的大菱鲆的治愈率为98.7%.效果显著。陈丽芸等使用蛭弧菌治疗由假单胞菌属,弧菌属中的某些菌种为主要病原菌引起的大菱鲆红嘴病,低密度组(103pfu/mL)7d基本达到治愈红嘴病的效果,高密度组(107pfu/mL)能在5d内治愈全部患病大菱鲆,蛭弧菌密度越高，红嘴病痊愈越快。黄立斌等试验证实,蛭弧菌能够明显降低鲫鱼感染嗜水气单胞菌的发病率和死亡率，使用蛭弧菌的试验组鲫鱼存活率达30%以上，而对照组全部死亡。蛭弧菌不如抗生素效应快,其制剂4~6h才能效应,但作用效果能持续15d以上,这一点显著优于抗生素及其他化学药物。但是当发生爆发性强.发病急的细菌性疾病时，蛭弧菌的效应时间较长，难以达到治疗的效果。所以使用蛭弧菌应以预防为主，并在细菌性疾病发病初期使用。  （4）提高水生动物免疫活性 免疫系统是机体的防御系统，其防御功能的高低，直接影响到机体的抗病能力和生产能力。尤其是虾类、贝类等低等无脊椎动物，其免疫系统进化程度低，仅由少量免疫器官、免疫细胞和免疫因子组成,缺乏特异性免疫应答。蛭弧菌进入水生动物肠道后，在聚糖酶、肽酶等酶的作用下释放细胞壁中的肽聚糖或者其它免疫物质,从而发挥免疫增强剂的功能，刺激溶菌酶活性,增强与鱼类免疫功能相关酶活性。  （5）用于水产品保质 水产品是人类重要的蛋白源，然而在种类繁多的水产品中存在多种危害人体的病原菌,如大肠杆菌、霍乱弧菌、副溶血弧菌、沙门氏菌等,这些细菌是引起食物中毒的主要原因。因此,水产品保质是水产加工业发展过程中非常重要的一个环节，也是关系到水产品品质和经济效益的重要问题。蛭弧菌能够通过裂解引起水产品变质的病原菌,达到水产品长期保鲜的目的。  六、应用中存在的问题 虽然蛭弧菌在改良水质、疾病防控、水产品保质等方面具有良好的应用效果,但蛭弧菌在水产养殖应用中依然存在诸多问题，这些问题也制约了蛭弧菌的广泛使用。 其中主要存在的问题包括： (1)国内外关于蛭弧菌的研究主要集中于应用,而忽略了基础理论研究的重要性，例如,蛭弧菌吸附于宿主菌表面的识别位点以及不可逆结合的具体反应仍然有待研究,蛭弧菌裂解机理的研究还需完善。 (2)水产用蛭弧菌制剂的剂型较为单一,而单一的高密度蛭弧菌在水体中的作用时间较短,需要频繁加入才能维持控菌效果,而且生产上使用的绝大多菌种为通用菌种,对适用对象及范围缺乏针对性。 (3)尚未建立一种简易的蛭弧菌筛选方法，使用的蛭弧菌制剂效率较低,并且会因为抗生素等药物的使用而失活。今后应该加强关于蛭弧菌筛选方法的研究,以获得针对不同养殖品种、不同生长时期、不同环境条件的耐药性较强的蛭弧菌菌株，并使其作用更专一。 (4)蛭弧菌增殖速度较慢,不同蛭弧菌的宿主菌裂解谱存在差异性,如何使其增殖速度更快、裂解谱更广也是一个有待解决的问题。因此,高效增殖方法以及扩增蛭弧菌的裂解谱研究甚为迫切。 (5)蛭弧菌在生产应用中发挥作用的有效剂量还缺乏研究,在水产养殖中蛭弧菌的使用量也多是基于经验,尚无科学依据。 (6)实验室条件下多运用液氮超低温法、冷冻真空干燥法保藏蛭弧菌,关于蛭弧菌持效稳定、适合生产应用的保藏方法的研究甚少。 (7)许多细菌都有天然的转化能力,频繁的使用蛭弧菌可以提高其与病原菌发生有害基因水平转移的可能性,使蛭弧菌转变成新的有害菌,产生新的问题，因此蛭弧菌使用的安全性方面值得注意。 (8)研究主要强调了蛭弧菌的实验室条件下的应用效果,这些试验不能支撑蛭弧菌在不同养殖品种、不同水质条件的实际生产中的科学应用。因此,蛭弧菌制剂的应用技术研究有待加强。 蛭弧菌制剂产品仍不够成熟，上述存在问题制约着蛭弧菌在水产养殖业的发展。因此，解决这些问题并选育出高效广谱、适应能力强、耐药性强、增殖快的菌种将是今后对蛭弧菌研究的重点。 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                   动物双歧杆菌动物亚种的培养方法与注意事项！ 动物双歧杆菌动物亚种是Bifidobacterium属的微生物，原产地为中国。主要用途为研究；生产，具体用途为乳制品发酵，乳饮料。 一、菌种简介平台编号：Bio-52494规格：冻干物拉丁属名：Bifidobacterium Animalis Subsp. Animalis中文名称：动物双歧杆菌动物亚种拉丁名称：Bifidobacterium animalis subsp. animalis来源历史：收藏时间：2020-09-16 00:00:00.0原始编号：ABT-B原产国：中国模式菌株：否主要用途：乳制品发酵；食品饮料生物安全级别：一级其它保藏中心编号：CGMCC 1.1852培养基编号： 62培养温度：37℃培养时间：24-48h需氧类型：专性厌氧分离基物：**采集地：**保存方法： 冷冻干燥管保藏用途：乳制品发酵；食品饮料注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、形态特征 动物双歧杆菌动物亚种，呈短、弯曲棒杆有时呈双歧棒状，G+，不运动，无芽胞。严格厌氧，化能异养型。利用蔗糖、乳糖、麦芽糖、淀粉产酸，牛奶弱水解。生长需求多种维生素。氧化酶、接触酶阴性。硝酸盐还原、明胶液化阴性。 三、培养基  四、保藏条件斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存,活化好的菌种要放厌氧环境下保存。  五、注意事项1) 首次活化，用尽量少的复水液溶解，接种在 5ml 的液体培养基中，静止培养，如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；二次接种量要多，固体斜面培养基水分要少才能让菌体长得比较明显，液体培养要静止培养；2) 经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系；7）如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌种后 2 个月内联系，逾期不予受理；8）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛；9）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作；10）甘油管使用：使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                 牛原代脂肪干细胞的运输和保存及使用方法！ 一、产品信息平台编号：Bio-135721规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶细胞名称：牛原代脂肪干细胞用途：原代细胞注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞详述根据不同来源及分化阶段，干细胞可分为胚胎干细胞和成体干细胞胚胎干细胞具有分化为多种不同组织的能力，但在伦理上存在争议。成体干细胞因其来源广泛、增殖能力强等特点，现已成为组织工程学研究的首选种子细胞。其中，脂肪干细胞作为组织工程修复的种子细胞，因其具有来源丰富、取材容易、增殖能力强等优点，正受到越来越多的关注。脂肪干细胞形态类似成纤维细胞，具有较强的增殖能力。在一定的诱导条件下，可分化为脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞、心肌细胞、上皮细胞等，具有多向分化潜能。 三、细胞特性1)组织来源于实验动物的正常脂肪组织。2)细胞鉴定：CD44免疫荧光染色为阳性。3)经鉴定细胞纯度高于90%。4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。5)细胞生长方式：长梭形细胞，不规则细胞，贴壁培养。 四、产品的运输和保存视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。 五、产品使用1)本产品仅能用于科研2)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核3)本产品未通过用于活体诊断的审核 六、注意事项1、收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。2、收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。3、由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。4、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。5、客户在细胞培养过程中，有任何技术问题可以拨打技术售后服务电话，我们随时给予解答。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                     糙梗青霉的培养方法与实验内容及注意事项！ 糙梗青霉，菌落在CA上25℃培养12天，直径2命一22mm，中心有脐状突起，具放射状沟纹或有几道同心环纹；质地绒状F分生抱子结构较多或大量产生，分生抱子面蓝绿色，近于豆绿色（pea green R. Pl. XL VII ）或深蓝灰绿色（deep bluish gray-green, R.Pl. XLII）；菌丝体黄色；少量黄色的惨出液；反面黄褐色至红褐色：可榕性色素 缺乏。 一、产品信息平台编号：Bio-65964提供形式：冻干物拉丁属名：Penicillium Scabrosum中文名称：糙梗青霉属名：Penicillium种名加词：scabrosum其它中心编号：=AS 3.7979=CBS 683.89  =FRR 2950=IBT 3736  =IMI 285533来源历史：←中科院微生物研究所←荷兰CBS收藏时间：2006.9.19资源归类编码：15151913115模式菌株：模式菌株主要用途：分类；研究   生物危害程度：四类致病对象：无分离基物：玉米须培养基：麦芽膏 20.0g，琼脂 20.0g，自来水 1.0L，自然pH。培养温度：25℃资源保藏类型：培养物保存方法：真空冷冻干燥法实物状态：有实物共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享源数据主键：40691用途：分类；研究；注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、知识简介糙梗青霉，菌落在CA上25℃培养12天，直径2命一22mm，中心有脐状突起，具放射状沟纹或有几道同心环纹；质地绒状F分生抱子结构较多或大量产生，分生抱子面蓝绿色，近于豆绿色（pea green R. Pl. XL VII ）或深蓝灰绿色（deep bluish gray-green, R.Pl. XLII）；菌丝体黄色；少量黄色的惨出液；反面黄褐色至红褐色：可榕性色素 缺乏。菌落在CYA上25℃培养7天，直径16-20mm，中心有脐状突起，具少量放射状 沟纹或近于平坦；质地绒状；分生抱子结构大量产生，分生抱子面暗蓝绿色，近于石板。糙梗青霉 Penicilliurn scabrosum Frisvad, Samson &. Stelk分生孢子结构和分生孢子（Cl2493)橄榄色（slate olive, R. Pl. XLVII）俄罗斯绿色（ Russian green, R. Pl. XLII）；菌丝体白色至淡黄色；渗出液少量至大量，黄色，F 反面黄褐色或带红褐色s 可潜性色素类似较浪的反面颜色。菌落在 WA上 25℃培养 7 天， 直径 19-23mm，有大量或少量放射状皱纹；质地绒状或兼轻微絮状；分生抱子结构大量产生，分生抱子面类似在CYA上的颜色；在中心有黄色的絮状菌丝体；无渗出液；反面黄褐色或金黄褐色；可溶性色素缺乏。菌落在 G25N 上 25℃培养 7 天，直径 8-lOmm，有少量放射状皱纹或平坦；质地绒状；分生孢子结构较少，分生抱子面蓝绿色，近于鼠掬拿绿色（Gnaphalium green, R. Pl. XL VII) ；惨出液缺乏；反面黄色；可溶性色素缺乏。在CYA上 5℃培养 7 天：菌落直径 6-8mm，少量放射状皱纹；质地绒状；分生于包子结构少且尚未形成，菌落面白色。在CYA上 37℃培养 7 天：不生长。分生孢子梗发生于基质，孢梗茎 180←350 (-400）× 3. 5-4. 0 (-4, 5) µm, 壁显著租糙；帚状枝双轮生，有少量三轮生者；副枝若存在，通常只有一个， 13-28(-32）×3. 2-4. Oµm，叉开，壁粗糙；梗基每轮通常 4-6 个， 10-15 (-18）× 3. 0-3. 6µm，通常平滑，仅生长在 WA上才显粗糙，彼此较紧密；瓶梗每轮 4-8 个或更多，8. 。一10（一12）× 2. 2-2. 8µm，瓶状，梗颈短；分生孢子呈现球形或近球形者的直径是 2. 7-3. 2µm，椭圆形或近椭圆形者，3, 0-3, 5×2. 0-3. Oµm，壁稍粗糙或粗糙；分生孢子链较疏松，近于圆柱状。主模式：IMI 285533 (Frisvad et al. , 1990b; Pitt &. Samson, 1993）。本种的帚状枝主要是双轮生，但也有三轮生者，抱梗茎和副枝的壁通常显著粗糙；分生抱子既有球形又有椭圆形者，其壁通常粗糙等特征较突出。分布：除本种的定名人列出的 154 株分离物外，尚未见到其他报道。我国有辽宁沈阳市（C13244, Cl3245）；山东泰山（C12493），甘肃天水市（Cl2348）。基物：土壤。 三、培养方法1、平板划线分离法:把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环圈在平板培养基表面,通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞,经培养后生长繁殖成单菌落。2、稀释涂布平板法将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养,在稀释度足够高的菌液里,聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞,从而能在培养基表面形成单个菌落。上述两种方法虽然都可以实现观察菌落特征的目的,但平板划线分离法不能对菌落计数,而稀释涂布平板法培养过程复杂,对平板的要求比较高,可参照以下步骤:a、制备平板培养基将氯化钠蔗糖琼脂培养基加热溶化并冷却至65℃,向氯化钠蔗糖琼脂培养基中加入克林霉素溶液3~5ml并混合均匀,然后取20ml混合均匀的培养基溶液倒入培养皿,轻轻摇动培养皿,使培养基溶液均匀分布在培养皿底部,待培养基溶液凝固后即得平板培养基。b、制备活性污泥混合液称取活性污泥土样15g,放入盛100ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶中,振摇15~20min混合均匀,用一支1ml无菌吸管从中吸取1ml土壤悬液加入盛有9ml无菌水的大试管中充分混匀,制成活性污泥混合液。c、培养基涂布从活性污泥混合液中吸取0.2ml,滴在平板培养基表面的中央位置,用无菌玻璃涂棒将活性污泥混合液沿同心圆方向轻轻地向外扩展,使之分布均匀。 四、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 五、使用范围（1）合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚，组成成分精确，重复性强，而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏（Czapek）培养基等。 （2）天然培养基。由天然物质制成，如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤，前者用于培养霉菌，后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定，也难以确定，但配制方便，营养丰富，培养效果好，所以常被采用。 （3）半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类，或在合成培养基的基础上添加某些天然成分，如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。  六、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、试管斜面菌种请尽快转接，不建议长期存放。3、初次使用时请按照本说明书推荐条件进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系或更换新的菌种。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  抗癌利剑——松木层孔菌的化学成分与药理作用！ 松木层孔菌（Phellinus pini ）为多孔菌科针层孔菌属大型真菌，别名松针层孔菌、松白腐菌。分布于黑龙江、吉林、内蒙古、河北、山西、宁夏、甘肃、新疆、四川、云南等地，全年生于松、云杉、冷杉、铁杉及落叶松等的树干上。对多种针叶树有危害，腐朽力强，可引起木质部形成白色腐朽。 松木层孔菌子实体较大，马蹄形、贝壳形、吊钟形，有的扁平，木质。菌盖直径3~20cm，半圆形，表面初期深咖啡色，有绒毛，以后渐变黑褐色，毛脱落有明显的同心环棱，稍开裂、边缘锐，有金黄色绒毛，其下侧无子实层。菌肉咖啡色。菌管同色，多层，管孔面同色，多角形至迷路状，管壁厚，每毫米1~3个。子实层中有褐色刚毛，孢子淡褐色，光滑，近球形，椭圆形，4.5-6μm×4.5-5μm。 松木层孔菌的化学成分与药理作用 一、化学成分 从针层孔菌属真菌中分离得到的化学成分主要有甾醇、萜类、多糖和脂肪酸等。该种主要活性成分是多糖类，其中多糖可以和蛋白质形成具有抗肿瘤作用的物质。深层发酵液能提取有多种胞外多糖。甾醇类、黄酮类有麦角甾醇单体、黄酮和二氢黄酮衍生物；有多种三萜类化合物、酶类、吡喃酮色素、生物碱还有神经酰胺类物质。 二、药理作用 1、抗肿瘤作用 国内外学者相继做了大量的研究，已经证实层孔菌具有抗癌功能。松木层孔菌对于多种癌症的治疗有一定的作用，能明显提高患者的细胞免疫力功能。具体作用如下：有效抑制癌细胞，防止复发转移；提高免疫力；恢复血小板和血细胞、红细胞的正常；迅速降低转氨酶；产生肿瘤坏死因子；增强放化疗效和减轻放化疗的毒副作用；镇痛作用减少并发症及耐药性，可作为肿瘤化疗中的治疗药、保肝药、免疫制剂来使用。 2、免疫调节作用 松木层孔菌主要是刺激免疫细胞的增殖，增强细胞因子的表达，刺激机体产生大量的抗体。 3、治疗肝炎作用 据文献记载，松木层孔菌能明显减少肝细胞变坏和坏死，维护肝组织正常结构，促进肝功能恢复。 4、抗炎作用 松木层孔菌能抑制小鼠耳肿胀，有抗炎作用，且存在剂量依赖关系。 5、降血糖作用 试验证明松木层孔菌胞外多糖能使糖尿病小鼠的血糖、总胆固醇、甘油三酯降低。 6、抗氧化作用 松木层孔菌子实体乙醇或乙酸乙酯提取物，能表现出显著的抗氧化活性。 松木层孔菌的相关研究  中国科学家王稳航、刘安军等对松针层孔菌的药理作用进行了比较系统的研究，结果显示：松木层孔菌三种多糖均不同程度地提高了小鼠血清、心、肝、脑、脾中SOD、GSH-Px活力,降低了MDA生成量，而对TOAC值影响较小；同时，三种多糖均显著提高了小鼠体内血清NO生成量。结论：三种多糖的抗氧化机制可能与其它抗氧化剂不同，其对小鼠体内氧化压力和抗氧水平呈双重增加效果，可能是由于多糖作为免疫物质引起机体的免疫反应造成的。从Phellinuspini子实体中提取分离到一种水溶性多糖组分PS1，“能提高正常和免疫低下小鼠的巨噬细胞吞噬能力。此外，PS1能显著促进脾细胞体外增殖能力（P 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！