大鼠腹腔巨噬细胞的应用及培养操作规程！

                   大鼠腹腔巨噬细胞的应用及培养操作规程！

一、背景

大鼠腹腔巨噬细胞是一种常用的细胞模型，在生物学和医学研究中广泛使用。这些细胞来自SD大鼠（出生2-3周），通常从其腹腔中提取并用于实验。

这些细胞具有巨噬细胞的特性，可以吞噬和消化细胞碎片和外来物质。它们在培养中通常贴壁生长，形态为巨噬细胞样。这种细胞系是非常受欢迎的实验工具，尤其是在研究免疫反应、炎症和细胞信号转导等方面。

这些细胞的生长需要特定的培养基，如DMEM高糖培养基，其中包含胎牛血清、巨噬细胞生长添加剂、青霉素和链霉素等。这些培养基的配方旨在提供最佳的生长条件，以支持大鼠腹腔巨噬细胞的生长和维持。

此外，这些细胞的污染检测结果为阴性，不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等有害物质。因此，这些细胞可以安全地在实验室中使用，不会引入额外的污染风险。

二、大鼠腹腔巨噬细胞操作规程

1、培养基及培养冻存条件准备:

1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO),90%;优质胎牛血清,10%。

2)大鼠腹腔巨噬细胞培养条件:气相:空气,95%;二氧化碳,5%。温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。

3)大鼠腹腔巨噬细胞冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。

2、大鼠腹腔巨噬细胞处理:

1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。*天换液并检查细胞密度。

2)大鼠腹腔巨噬细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。产品仅供科研使用

对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:

收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

三、应用

大鼠腹腔巨噬细胞可以用于他汀类药物对大鼠腹腔巨噬细胞分泌MMP-1及TIMP-1的影响：

急性冠脉综合征(ACS)是一组严重威胁人类健康的疾病,包括不稳定性心绞痛、心肌梗死(有Q波及无Q波心肌梗死)及心源性猝死,他汀类药物在减少急性冠状动脉事件的发生率及冠心病的死亡率方面,取得了令人瞩目的成就,但他汀类药物抗动脉粥样硬化的作用机理尚不十分清楚,本实验通过观察阿托伐他汀(立普妥)、普伐他汀(美百乐镇)对大鼠腹腔巨噬细胞分泌MMP-1及TIMP-1的影响,以求阐明他汀类药物减少冠脉事件的机制。

方法：取雄性4—6月龄SD大鼠腹腔灌洗液,收集腹腔巨噬细胞,加入培养液中培养3天,然后在培养有大鼠腹腔巨噬细胞的培养基中先加入10ng/ml的IL-1β,促进MMP-1的分泌,24小时后加入不同浓度的阿托伐他汀、普伐他汀(1×10-4 mmol/L、1×10-5 mmol/L、1×10-6 mmol/L、1×10-7 mmol/L),继续孵育24小时后,采用ELISA法测培养上清液中的MMP-1及TIMP-1的浓度;另外,取10-5mmol/L浓度的阿托伐他汀加入培养有大鼠腹腔巨噬细胞的培养基中,分别在6小时、24小时、48小时测培养上清液中的MMP-1的浓度。

结果：随着药物浓度的增加(1×10-7 mmol/L、1×10-6 mmol/L、1×10-5 mmol/L、1×10-4 mmol/L),阿拖伐他汀对大鼠腹腔巨噬细胞分泌MMP-1的抑制作用逐渐增强(加药组MMP-1分泌较对照组分别减少17.36%、19.40%、26.54%、33.70%),与对照组有显著统计学差异,而不同浓度(1×10-7 mmol/L、1×10-6 mmol/L、1×10-5 mmol/L、1×10-4 mmol/L)的普伐他汀虽使大鼠腹腔巨噬细胞分泌MMP-1略有降低,与对照组比较分别减少2.55%、2.20%、2.54%、2.04%,但无统计学差异,且各组间也无统计学差异;两组他汀使大鼠腹腔巨噬细胞TIMP-1的分泌均略有降低(阿托伐他汀给药浓度分别为1×10-7 mmol/L、1×10-6 mmol/L、1×10-5 mmol/L、1×10-4 mmol/L,与对照组比较使TIMP-1的分泌分别减少4.12%、3.60%、4.12%、2.06%,普伐他汀给药浓度分别为1×10-7 mmol/L、1×10-6 mmol/L、1×10-5 mmol/L、1×10-4 mmol/L,与对照组比较使TIMP-1的分泌分别减少4.12%、4.12%、3.82%、2.57%。)但与对照组比较,均无统计学意义;随着药物作用时间的延长(6小时、24小时、48小时),阿托伐他汀(1×10-5 mmol/L)对大鼠腹腔巨噬细胞分泌MMP-1的抑制作用逐渐增强(加药组MMP-1分泌较对照组分别减少11.96%、26.54%、32.77%),与对照组有显著统计学差异。

结论：阿托伐他汀(立普托)呈时间剂量依赖性抑制白介素-1β介导的大鼠腹腔巨噬细胞分泌MMP-1,进而抑制纤维帽中胶原的分解,稳定斑块,而阿托伐他汀对TIMP-1的分泌影响不显著;普伐他汀(美百乐镇)对白介素-1β介导的大鼠腹腔巨噬细胞分泌MMP-1、TIMP-1的分泌影响均不显著,且与对照组比较无统计学差异。

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