ATCC 27761 灵巧粪球菌的培养方法与注意事项！ 一、菌种简介平台编号：Bio-103847规格：Freeze-Dried拉丁属名：Coprococcus Catus菌株名称：灵巧粪球菌用途：ATCC原装进口注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、详细描述Coprococcus catus Holdeman and Moore 拉丁名(ATCC? 27761?) 统一编号Strain Designations 别名 VPI C6-61 [NCTC 11835]Isolation 分离基物 Feces, humanBiosafety Level 生物安全等级 1Biosafety classification is based on U.S. Public Health Service Guidelines, it is the responsibility of the customer to ensure that their facilities comply with biosafety regulations for their own country.Product Format 提供形式 freeze-driedStorage Conditions 保藏条件Frozen: -80°C or colderFreeze-Dried: 2°C to 8°CLive Culture: See Propagation SectionPreceptrol? noType Strain 模式菌种 yesComments 注释 This strain grows best when using Anaerobe Systems PY with Glucose broth (AS-822) and Anaerobe Systems Brucella blood agar (AS-111 or AS-141)Medium 培养基 ATCC? Medium 260: Trypticase soy agar/broth with defibrinated sheep bloodGrowth Conditions 生长条件Temperature 培养温度: 37°CAtmosphere 需氧情况: Anaerobic gas mixture, 80% N2-10% CO2-10% H2Name of Depositor 寄存者 LV HoldemanIsolation 分离基物 Feces, humanReferences 参考文献 Holdeman LV, Moore WE. New genus, Coprococcus, twelve new species, and emended descriptions of four previously described species of bacteria from human feces. Int. J. Syst. Bacteriol. 24: 260-277, 1974.Skerman VB, et al. Approved lists of bacterial names. Int J Syst Bacteriol 30: 225-420, 1980. 三、产品特点1、菌种功能明确、品种稳定、应用;2、产品仅限用于科研本品芽孢含量高,稳定性好、耐高温和挤压;3、繁殖能力快、定植能力强、易存活、耐受低pH值环境;4、复活迅速,可在短期内成为优势种群;5、本品安全高效、无抗药性、不污染环境;6、对多数抗生素不敏感,可与低浓度抗革兰氏阴性菌抗生素同时使用。 四、产品优势1、产品质量稳定,是为科研和提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。2、国内首创封闭管包装,冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法,保证菌种的复苏质量。3、严格的质检程序,确保产品质量的稳定性。4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业,疾控中心、质检局、出入境、药检局等等,得到广泛好评。 五、微生物菌种培养方法1、孢子制备⑴ 放线菌孢子的制备一般采用琼脂斜面培养基,培养基中含有一些适合产孢子的营养成分,如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。碳源和氮源不要太丰富(碳源约为1%,氮源不超过0.5%),碳源丰富容易造成生理酸性的营养环境,不利于放线菌孢子的形成,氮源丰富则有利于菌丝繁殖而不利于孢子形成。一般情况下,干燥和限制营养可直接或间接诱导孢子形成。放线菌斜面的培养温度大多数为28 ℃,少数为37 ℃,培养时间为5~14天。⑵ 产品仅限用于科研霉菌孢子的制备霉菌的孢子培养,一般以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基。这是由于这些农产品中的营养成分较适合霉菌的孢子繁殖,而且这类培养基的表面积较大,可获得大量的孢子。霉菌的培养一般为25~28 ℃,培养时间为4~14天。2、种子制备⑴ 摇瓶种子制备摇瓶种子进罐,常采用母瓶、子瓶两级培养,有时母瓶种子也可以直接进罐。种子培养基要求比较丰富和完全,并易被菌体分解利用,氮源丰富有利于菌丝生长。原则上各种营养成分不宜过浓,子瓶培养基浓度比母瓶略高,更接近种子罐的培养基配方。⑵ 种子罐种子制备种子罐种子制备的工艺过程,因菌种不同而异,一般可分为一级种子、二级种子和三级种子的制备。孢子(或摇瓶菌丝)被接入到体积较小的种子罐中,经培养后形成大量的菌丝,这样的种子称为一级种子,把一级种子转入发酵罐内发酵,称为二级发酵。如果将一级种子接入体积较大的种子罐内,经过培养形成更多的菌丝,这样制备的种子称为二级种子,将二级种子转入发酵罐内发酵,称为三级发酵。同样道理,使用三级种子的发酵,称为四级发酵。 六、注意事项1）冻干粉首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取 0.3ml-0.5ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支平板，操作完毕后尽快置于厌氧环境下恒温培养；若需接种液体培养基，制作培养液时，应使用厌氧螺口试管，并利用高纯氮气去除试管和培养液中的氧气）；2）经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间；若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。7）如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌钟后 2 个月内联系，逾期不予受理；8）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。9）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。10）甘油管使用：使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。 微生物菌种查询网作为中国微生物菌种中心引航者，单位代为引进美国ATCC微生物菌种保藏中心，德国DSMZ菌种保藏中心，荷兰CBS菌种保藏中心，日本JCM微生物菌种保藏中心，包括其中的ATCC微生物细菌与噬菌体（18382）；细胞系和杂交瘤（4997）；真菌和酵母（58183）；原代细胞（146）；原生动物和藻类（2428）；干细胞（102）；载体，克隆与分子（18006）；病毒（3594）；核酸 - DNA / RNA（1350），引进进口微生物菌种货期短，质量保证，UPS国际快递运输。

                   运动发酵单胞菌运动亚种的特点与优势及培养方法！ 运动发酵单胞菌运动亚种是Zymomonas属的微生物，原产地为美国。G-，细胞具有圆端的短杆状，丛生鞭毛运动，单个或成对排列。主要用途为研究，具体用途为用于细菌发酵酒精的研究。 一、菌种简介平台编号：Bio-66722提供形式：冻干物拉丁属名：Zymomonas Mobilis Subsp. Mobilis中文名称：运动发酵单胞菌运动亚种属名：Zymomonas种名加词：mobilis subsp. mobilis其它中心编号：ATCC 31821来源历史：←北京工商大学化工学院(31821)收藏时间：2008.10.31原始编号：WAY资源归类编码：15131139101模式菌株：非模式菌株主要用途：研究具体用途：用于细菌发酵酒精的研究特征特性：G-，细胞具有圆端的短杆状，丛生鞭毛运动，单个或成对排列。利用葡萄糖、蔗糖或果糖产乙醇和CO2，利用山梨醇，不发酵麦芽糖、阿拉伯糖、鼠李糖、木糖。不还原硝酸盐，不液化明胶，接触酶阳性。    生物危害程度：四类致病对象：无培养基：葡萄糖 100.0g，酵母膏 5.0g，(NH4)2SO4 1.0g，KH2PO4 1.0g，MgSO4?7H2O 0.5g，琼脂 20.0g，蒸馏水 1.0L, pH7.0。培养温度：30℃资源保藏类型：培养物保存方法：真空冷冻干燥法实物状态：有实物共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享用途：研究；用于细菌发酵酒精的研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、产品特点1、菌种功能明确、品种稳定、应用;2、产品仅限用于科研本品芽孢含量高,稳定性好、耐高温和挤压;3、繁殖能力快、定植能力强、易存活、耐受低pH值环境;4、复活迅速,可在短期内成为优势种群;5、本品安全高效、无抗药性、不污染环境;6、对多数抗生素不敏感,可与低浓度抗革兰氏阴性菌抗生素同时使用。 三、产品优势1、产品质量稳定,是为科研和提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。2、国内首创封闭管包装,冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法,保证菌种的复苏质量。3、严格的质检程序,确保产品质量的稳定性。4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业,疾控中心、质检局、出入境、药检局等等,得到广泛好评。 四、菌种的培养1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯 菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在 上延续使用半年左右。6、如果有些菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。 五、保藏方法1、传代培养保藏法又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等(后者作保藏厌氧细菌用),培养后于4-6℃冰箱内保存。2、液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法,能够适当延长保藏时间,它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡,一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡,另一方面可阻止氧气进入,以减弱代谢作用。3、载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体,如土壤、沙子、硅胶、滤纸上,而后进行干燥的保藏法,例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。4、寄主保藏法用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物,如病毒、立克次氏体、螺旋体等,它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代,此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。5、冷冻保藏法可分低温冰箱(-20-30℃,-50-80℃)、干冰酒精快速冻结(约-70℃)和液氮(-196℃)等保藏法。6、冷冻干燥保藏法先使微生物在极低温度(-70℃左右)下快速冷冻,然后在减压下利用升华现象除去水分(真空干燥)。有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液,以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                   盘基网柄菌的知识背景与形态特征及发展前景！ 盘基网柄菌(Dictyostelium discoideum)是一种简单的真核微生物，在发育不同阶段有着特征差异较大的外观，通常称它为“细胞粘质霉”，属于黏菌（cellular slime mood），是研究真核生物细胞发育、运动和信号传导，医学病理模式，药理的方便的模式生物。 一、产品信息平台编号：Bio-74673规格：Frozen拉丁属名：Dictyostelium Fasciculoideum菌株名称：盘基网柄菌用途：ATCC原装进口注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、详细描述Dictyostelium fasciculoideum Vadell et al. 拉丁名(ATCC? MYA-3806?) 菌株编号Strain Designations 菌株别名 : Puelo 2 /Product Format 提供形式 : frozenStrain Designations 菌株别名 Puelo 2Biosafety Level 生物安全等级 1Biosafety classification is based on U.S. Public Health Service Guidelines, it is the responsibility of the customer to ensure that their facilities comply with biosafety regulations for their own country.Product Format 提供形式 frozenStorage Conditions Frozen 保藏方法 : -80℃ or colderFreeze-Dried 冻干物 : 2℃ to 8℃Live Culture 活菌 : See Propagation SectionType Strain 模式菌株 yesPreceptrol? noComments 注释 part of Eumycetozoan ProjectMedium 培养基 ATCC? Medium 919: Non-nutrient agarGrowth Conditions 生长条件Temperature 培养温度 : 20.0-25.0℃Grown in two-member culture with Escherichia coli ATCC 23437Name of Depositor J Cavender Special Collection eumycetozoanChain of Custody 来源国家 ATCC Isolation 分离源 soil litter, Nothofagus dombeyii forest, Los Hitos,Lago Puelo National Park, Chubut Province, Argentina GeographicalIsolation 分离源 Lago Pualo National ParkReferences Vadell EM, et al.New species of dictyostelids from Patagonia and Tierra del Fuego, Argentina. Mycologia 103: 101-117, 2011. 三、知识背景盘基网柄菌是一种土生变形虫，属于变形虫门、下生菌门。 D. discoideum 通常被称为粘液霉菌，是一种真核生物，它从单细胞变形虫的集合转变为多细胞蛞蝓，然后在其生命周期内转变为子实体。 其独特的无性生命周期包括四个阶段：营养期、聚集期、迁徙期和顶峰期。 D. discoideum 的生命周期相对较短，可以及时查看所有阶段。参与生命周期的细胞经历运动、化学信号和发育，适用于人类癌症研究。其生命周期的简单性使 D. discoideum 成为研究其他生物体中遗传、细胞和生化过程的有价值的模型生物体。但它的种系发生关系尚不清楚。细胞粘质霉盘基菌与多核粘质霉如绒泡菌无亲缘关系，与酵母或丝状真菌也无关。一些动物学教科书将网柄菌划为“社会阿米巴（social amoebae）”（聚黏菌）一类。然而，它与根足亚纲类的亲缘关系也不明显。 四、形态特征盘基网柄菌生活在含丰富有机物的土壤中。当潮湿时，子实体接种的孢子释放单倍体细胞（黏变形体），这些细胞呈现阿米巴原虫的外形和生活方式。它们生活在水膜中，吃细菌，通过二分分裂方式繁殖（营养期，vegetative phase）。只有当食物供给已经耗尽或食物暴露，有干掉的危险时，成百上千的黏菌就向周围发送信号——环腺苷酸小分子cAMP。收到信号的黏菌，也向其周围发送同样的信号。在一片互相收发的信号背景中，自发形成一个聚集中心。大量黏菌聚集后，形成一个多细胞组成的集群（aggregation），集群成熟后顶部凸起形成假原生质团（pseudoplasmodium）。假原生质团被包在一种粘质的、非细胞片物质中，能象一个真正的蛞蝓那样移动。它迁移到一个明亮的地方变成孢堆原（sorogen），孢堆原由一个基板和一个支持球形新孢子聚集于顶端的茎组成。基板有附属结构。前柄细胞形成由纤维素组成的壁，最后死亡。与之相反的是，前孢子细胞存活并形成孢子，它们是生殖细胞，其形成和释放都是为了执行无性繁殖的功能。从大量黏菌以自己为中心向四面发送cAMP信号，最初形成均匀的随机背景，后来突然自发产生一个聚集中心。这是一种以自发对称破缺为特征的非平衡相变，是自组织行为的典型事例。人们对此进行过许多实验和理论研究。 在无性繁殖的生命周期中，网柄菌从单细胞状态到多细胞状态发生了一个非同寻常的转换：大量单个阿米巴集合成一个社会群体，使能适应不利的环境条件。因此，网柄菌是一种由原来独立的单细胞阿米巴形成的“部分时间是多细胞的生物体”。网柄菌在非正常条件下也会产生奇妙的有性生殖：通过吞噬相邻的阿米巴，两个细胞融合并扩大成一个巨型细胞，这个巨型细胞被包裹在囊内，尔后经过减数分裂和有丝分裂产生新的单倍体阿米巴虫。 五、生命周期和繁殖当孢子从成熟的子实体（子实体）释放时，D. discoideum 的生命周期开始。粘变形虫在温暖潮湿的条件下从孢子中孵化出来。在它们的营养阶段，粘变形虫在以细菌为食时通过有丝分裂分裂。细菌分泌叶酸，吸引粘变形虫。当细菌供应耗尽时，粘变形虫进入聚集阶段。在聚集过程中，饥饿会启动蛋白质化合物的产生，例如糖蛋白和腺苷酸环化酶。糖蛋白允许细胞间粘附，腺苷酸环化酶产生环状 AMP。环状 AMP 由变形虫分泌以将邻近细胞吸引到中心位置。当它们向信号移动时，它们会相互碰撞并通过使用糖蛋白粘附分子粘在一起。一旦变形虫形成紧密的聚集体并且细长的细胞堆翻倒平躺在地上，迁移阶段就开始了。变形虫作为活动的假疟原虫一起工作，也被称为鼻涕虫。海参长约 2-4 毫米，由多达 100,000 个细胞组成，能够通过在海参移动的前细胞中产生纤维素鞘来移动。当它以仅向前的方向朝向光、热和湿度等引诱剂移动时，该鞘的一部分会留下一条粘糊糊的痕迹。环状 AMP 和一种称为分化诱导因子的物质有助于形成不同的细胞类型。蛞蝓分化为前柄和前孢子细胞，分别移动到前端和后端。一旦蛞蝓找到了合适的环境，它的前端就会形成子实体的茎，后端就会形成子实体的孢子。最近才发现的前部样细胞也散布在蛞蝓的整个后部区域。这些前部样细胞形成子实体的最底部和孢子帽。 鼻涕虫落到一处后，尾端展开，前端扬起，形成所谓的墨西哥帽，进入高潮阶段。 六、发展前景盘基网柄菌作为异源重组糖蛋白表达载体的研究受到了学术界的重视,已经有多种具有生物活性的复杂糖蛋白成功地得到了表达。通过对表达产物的研究发现,盘基网柄菌具有各种翻译后加工机制,例如磷酸化、酰基化及形成GPI(糖基磷脂酰基醇)锚点等,具有类似于高等动物的糖基化修饰能力。与哺乳动物细胞表达载体相比较,盘基网柄菌具有培养成本低廉、细胞生长迅速及易于大规模培养的优势。盘基网柄菌有可能发展成为一种有重要应用前景的糖蛋白表达载体系统。 微生物菌种查询网可以定制制备常用4代定量微生物菌种（生孢梭菌，大肠埃希氏菌，白色念珠菌，铜绿假单胞菌，黑曲霉等）不同浓度如10E3，10E5,10E6浓度。为了满足更广用户的不同需求，单位代理引进国际知名质控菌种产品生产厂家：法国梅里埃MBL，BIOBALL定量产品，赛默飞REMEL科技定性定量商业产品。精准接种量，即用型使用方便快捷，产品种类齐全并且提供产品COA分析证书。PS：Remel质控微生物；BIOBALL质控微生物；Microbiologis（MBL）质粒微生物，点击有链接详细介绍。欢迎您的咨询！

                   产氨短杆菌的培养方法与实验内容及使用范围！ 产氨短杆菌是Brevibacterium属的微生物，原产地为中国。非运动性，不形成孢子，革兰氏染色阳性。主要用途为研究；教学，具体用途为产L-谷氨酸。 一、菌种简介平台编号：Bio-51786规格：冻干物拉丁属名：Brevibacterium Ammoniagenes菌株名称：产氨短杆菌其他编号：AS1.846培养基编号：2培养温度：30℃培养时间：18-24 小时用途：产肌苷酸注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）保藏条件：斜面菌种和安瓿瓶冻干菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶请置于-20°C 保存。甘油管请置于-80°C 保存;请勿长期置于室温。 二、培养基*营养琼脂培养基（NA）*胰蛋白胨大豆琼脂培养基（TSA）*LB 培养基（以上培养基三选一即可） 三、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯 菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在 上延续使用半年左右。6、如果有些菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。 四、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 五、使用范围(1)合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚,组成成分精确,重复性强,而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏(Czapek)培养基等。 (2)天然培养基。由天然物质制成,如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤,前者用于培养霉菌,后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定,也难以确定,但配制方便,营养丰富,培养效果好,所以常被采用。 (3)半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类,或在合成培养基的基础上添加某些天然成分,如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。 六、注意事项1）冻干首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取 0.3ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支斜面或平板；或直接接种液体培养基，以不超过 5ml 为宜）；2）经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养；如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；二次接种量要多，固体斜面培养基水分要少才能让菌体长得比较明显，液体培养要静止培养；3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系；7）如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌种后 2 个月内联系，逾期不予受理；8）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛；9）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作；10）甘油管使用：使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降；11）西林瓶开封：用 75%酒精棉擦拭西林瓶外部，在安全柜内使用尖嘴钳去除塑料盖及铝盖， 注意不要同时打开胶塞。缓慢开启胶塞，用 75%酒精棉消毒瓶口部分，使用无菌吸管注入 0.5ml 适宜的液体培养基复溶冻干粉末。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                    赭曲霉——用于研究和生产及酿造烧酒 一、菌种简介赭曲霉（Aspergillus ochraceus）是一种丝状真菌，在玉米、花生、棉籽、大米、坚果、水果等农产品中广泛分布。赭曲霉产孢能力很强，其孢子散落在空气中能够诱导儿童哮喘和人类肺病。其次级代谢产物OTA广泛分布在农产品中，污染谷物和葡萄、饲料、饮料、豆类等;此外，在一些动物副产品，如牛奶和动物肾脏、肝脏、血液中也有发现，并且会随食物链最终进入人体，严重危害人体健康。OTA能够导致动物和人类的肝脏、肾脏损伤，并有致畸、致突变、致癌和免疫抑制作用，还可能与巴尔干地方性肾病和泌尿系统肿瘤有关，被国际癌症研究机构列为2B类人类潜在致癌物。 二、产品信息平台编号：Bio-58768提供形式：冻干物拉丁属名：Aspergillus Ochraceus中文名称：赭曲霉属名：Aspergillus种名加词：ochraceus来源历史：←上海工业试验所←金培松分离收藏时间：1953.00.00资源归类编码：15151913102模式菌株：非模式菌株主要用途：研究；生产具体用途：酿造烧酒。特征特性：CYA培养基，于25℃培养7天。菌落直径4.5cm；菌丝体白色，菌落淡黄色至淡黄褐色；菌落丝绒状，有放射状沟纹；无渗出液；菌落反面黄褐色。分生孢子头球形；分生孢梗茎壁粗糙；顶囊半球形，直径20-40μm，表面全面可育；产孢结构双层，梗基8-12×2-4μm，瓶梗3-6×2-2.5μm；分生孢子球形，直径2.0—3.5μm，壁稍粗糙。产中性蛋白酶，无色素，无曲酸，无黄曲霉毒素。    生物危害程度：四类致病对象：无培养基：5°Bé麦芽汁 1.0L，琼脂 15.0g，自然pH。培养温度：28-30℃资源保藏类型：培养物保存方法：真空冷冻干燥法实物状态：有实物共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享源数据主键：2050用途：研究；生产；酿造烧酒。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 三、生物特性 赭曲霉是一种产毒菌，其分离培养常用察氏培养基；在谷物培养基中，以碎小麦为基质的产毒效果最好。生长条件一般产毒霉菌在25～28℃，高湿度、阴暗静置条件下培养1～2周产毒效果较好。 四、赭曲霉毒素 赭曲霉毒素是真菌毒素之一, 是由赭曲霉及青霉菌等产毒菌株侵染粮食、食品、饲料及其他农副产品后所产生的一种有毒代谢产物。赭曲霉毒素广泛存在于各种食物中，谷物及其副产品、可可、咖啡、肉类、乳汁、干果、调味品、酒类等中。赭曲霉毒素对人类及动物健康造成了很大的威胁, 它可以导致受试动物的肾萎缩、胎儿畸形、流产及死亡, 并具有高度的致癌性,国际癌症研究机构在1993年将赭曲霉毒素 A（OchratoxinA， OTA）定为人类可能的致癌物。因此赭曲霉毒素受到了全世界的广泛关注。赭曲霉毒素是 L-β-苯基丙氨酸与异香豆素的联合,有 A、B、C、D 4 种化合物, 此外还有赭曲霉毒素 A 的一些代谢产物，如 4-R-羟化赭曲霉毒素、4-S-羟化赭曲霉毒素、10-羟化赭曲霉毒素、以及赭曲霉毒素 B 的代谢产物赭曲霉毒素β等，都是结构类似的化合物。这些物质在化学结构上只有细微差异，但在毒理学方面却差别很大。其中赭曲霉毒素 A 分布最普遍，毒性最强，并且最容易检出。 五、微生物菌种培养方法1、孢子制备⑴ 放线菌孢子的制备一般采用琼脂斜面培养基,培养基中含有一些适合产孢子的营养成分,如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。碳源和氮源不要太丰富(碳源约为1%,氮源不超过0.5%),碳源丰富容易造成生理酸性的营养环境,不利于放线菌孢子的形成,氮源丰富则有利于菌丝繁殖而不利于孢子形成。一般情况下,干燥和限制营养可直接或间接诱导孢子形成。放线菌斜面的培养温度大多数为28 ℃,少数为37 ℃,培养时间为5~14天。⑵ 产品仅限用于科研霉菌孢子的制备霉菌的孢子培养,一般以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基。这是由于这些农产品中的营养成分较适合霉菌的孢子繁殖,而且这类培养基的表面积较大,可获得大量的孢子。霉菌的培养一般为25~28 ℃,培养时间为4~14天。2、种子制备⑴ 摇瓶种子制备摇瓶种子进罐,常采用母瓶、子瓶两级培养,有时母瓶种子也可以直接进罐。种子培养基要求比较丰富和完全,并易被菌体分解利用,氮源丰富有利于菌丝生长。原则上各种营养成分不宜过浓,子瓶培养基浓度比母瓶略高,更接近种子罐的培养基配方。⑵ 种子罐种子制备种子罐种子制备的工艺过程,因菌种不同而异,一般可分为一级种子、二级种子和三级种子的制备。孢子(或摇瓶菌丝)被接入到体积较小的种子罐中,经培养后形成大量的菌丝,这样的种子称为一级种子,把一级种子转入发酵罐内发酵,称为二级发酵。如果将一级种子接入体积较大的种子罐内,经过培养形成更多的菌丝,这样制备的种子称为二级种子,将二级种子转入发酵罐内发酵,称为三级发酵。同样道理,使用三级种子的发酵,称为四级发酵。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                     人胆管癌细胞的复苏与传代及冻存操作说明！ 一、背景 人胆管癌细胞是从源于肝内胆管树的中分化腺癌患者的恶性腹水细胞中建立的。 二、人胆管癌细胞接收后的处理 1）收到细胞后，活细胞首先观察培养瓶是否完好，培养液是否漏液，培养基是否浑浊；冻存细胞是否干冰已挥发完，冻存管盖是否脱落，破碎。 2）人胆管癌细胞处理： ①复苏的细胞：如果是T-25培养瓶活细胞，收到后请用75%的酒精对培养瓶表面进行消毒处理，然后转入培养箱中静置2~3h后再进行后续处理。 ②冻存细胞：如果是干冰运输的冻存细胞，收到后请立即转入液氮存储或者短暂（24h）放置-80度冰箱保存，或者直接进行细胞复苏。 三、人胆管癌细胞复苏、传代及冻存流程参考 1、人胆管癌细胞复苏 1）配制人胆管癌细胞完全培养基：基础培养基+胎牛血清+双抗（特殊培养基特殊配置）； 2）人胆管癌细胞复苏：取5ml完全培养基于15ml离心管中，37℃水浴锅预热，从液氮管（或者-80度冰箱）中快速取出冻存的细胞，放入37℃水浴锅中，摇晃使快速化冻（1min左右），然后将化冻的细胞和预热的培养基，移入超净工作台中，化冻的细胞加入到含预热培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min； 3）吸弃上清，得到细胞沉淀，用2ml完全培养基轻轻重悬细胞，加入到T25培养瓶中，做好标记，放入37℃，5%CO2饱和适度培养箱中培养（培养皿复苏效果更好）； 4）24h后，观察细胞贴壁情况（未贴壁的即为死细胞--针对贴壁细胞），吸弃旧培养基，加入新鲜的预热（室温或37℃）的完全培养基，继续培养。 2、人胆管癌细胞传代 1）待细胞生长到80%-90%汇合度时，吸弃旧的培养基，加入1ml无菌PBS润洗一次，以去除残余的培养基及血清（血清含有胰酶的抑制因子），然后加入1ml 0.25%胰酶，37℃培养箱中消化（1~2min左右，不同细胞消化时间不同），取出细胞，镜下观察细胞至细胞皱缩变圆； 2）加入1ml完全培养基（含FBS）终止消化，轻轻拍打，使细胞脱落下来成单个细胞悬液，收集细胞于15ml无菌离心管中，1000rpm，离心5min； 3）收集细胞沉淀，完全培养基重悬，一分为二（可根据细胞生长速度调整比例），分别加入到2个新的培养瓶中，做好标记，放入培养箱中培养。 3、人胆管癌细胞冻存 1）按照细胞传代方法，在超净工作台内消化收集细胞沉淀，取少量细胞用于计数； 2）用预冷的1ml冻存液（90%完全培养基+10%DMSO）或者无血清细胞冻存液重悬细胞，加入到1.2ml冻存管中，密度为1*106个/ml。 3）放入程序冻存盒，-80℃过夜后，转入液氮长期保存。 四、应用 人胆管癌细胞可以用于miR-92a-3p靶向肾母细胞瘤过表达基因调节人胆管癌细胞迁移、侵袭能力的分子机制研究： 通过对已发表的胆管癌公共数据集进行生物信息学分析,最终筛选出在m RNA和蛋白水平表达都显著上调的肾母细胞瘤过表达基因(Nephroblastoma overexpressed gene,NOV)并深入分析其功能,进一步设计实验,验证其在胆管癌细胞增殖、迁移和侵袭中的作用以及分子机制的研究。 NOV(又名CCN3)是CCN家族6个成员之一。基于CCN家族在肿瘤生物进程中扮演的重要角色,我们对其家族6个成员在10种泛癌数据集中进行了生物信息学分析,结果表明NOV在不同肿瘤病人中具有差异表达多样性,其中在胆管癌、卵巢癌、胰腺癌中显著上调,在其他7种肿瘤中显著下调。 胆管癌中,NOV是CCN家族6个成员中上调表达最显著的分子。NOV已被证明可以调节多种人类癌症中的多种病理生理过程,但其在胆管癌中的高表达和生物学功能仍然未知。本研究旨在探讨NOV对胆管癌细胞增殖、迁移及侵袭的调控作用。首先我们通过荧光定量PCR(q-PCR)和蛋白免疫印迹(Western Blot)实验验证NOV在两种CCA细胞HCCC9810(以下简称9810)和RBE中是否和生物信息学预测(NOV在CCA中高表达)一致,然后连接NOV基因于pc DNA3.0载体中使其在9810和RBE细胞中有效过表达,并将该实验分为阴性对照组(pc DNA3.0)和过表达组(NOV);应用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术将靶向NOV的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染至9810和RBE细胞中,有效沉默NOV的表达,并将该实验分为阴性对照组(si-NC)和沉默组(si-NOV-1,si-NOV-2)。 依次分别进行如下实验:在9810和RBE细胞中通过q-PCR和Western Blot分别检测细胞中NOV的m RNA和蛋白表达情况;通过CCK-8细胞增殖实验和细胞集落形成实验观察NOV对9810和RBE细胞增殖能力的影响;利用细胞划痕和Transwell小室进行迁移实验来检测NOV对9810和RBE细胞迁移能力的影响;利用Transwell小室微孔膜上室面均匀涂上基质胶进行细胞侵袭实验,以此来观察NOV对9810和RBE细胞侵袭能力的影响;利用Western Blot技术检测细胞中上皮标志物蛋白E-cadherin和间质标志物蛋白Vimentin,N-cadherin,Snail和MMP9的表达水平;利用Western Blot技术探究NOV下游调控分子;利用生物信息学预测以及双荧光素酶报告系统分析,探究micro RNA调控NOV在CCA细胞中的上调机制。 结果显示,NOV在9810和RBE中的表达显著高于正常人胆管上皮细胞HIBEC(P0.05)。 此外,过表达NOV的9810和RBE细胞中上皮标志物E-cadherin表达显著下调,而间质标志物Vimentin,N-cadherin,Snail,MMP9表达显著上调;相反的,沉默NOV的9810和RBE细胞中上皮标志物E-cadherin表达显著上调,而间质标志物Vimentin,N-cadherin,Snail,MMP9表达显著下调,说明NOV可以促进胆管癌细胞9810和RBE的上皮-间质转化(Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT)进程。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  ATCC 14190 龋齿罗氏菌的特性与培养及注意事项！ 龋齿罗氏菌属于放线菌，胞壁主要组分：丙氨酸、赖氨酸、谷氨酸，果糖、半乳糖、葡萄糖、核醇。 DNA内G+C含量为 65.4—69.7%。 此菌需要有机氮才能生长。在营养琼脂上生长贫乏；在脑心浸液琼脂和胰示胨 (trypticase)大豆琼脂上形成乳脂白色菌落。 一、菌种简介平台编号：Bio-086983规格：Freeze-Dried拉丁属名：Rothia Dentocariosa菌株名称：龋齿罗氏菌用途：ATCC原装进口注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、详细描述Rothia dentocariosa (Onishi) Georg and Brown 拉丁名(ATCC? 14190?) 统一编号Strain Designations 别名 24.6AIsolation 分离基物 Oral cavity - humanBiosafety Level 生物安全等级 1Biosafety classification is based on U.S. Public Health Service Guidelines, it is the responsibility of the customer to ensure that their facilities comply with biosafety regulations for their own country.Product Format 提供形式 freeze-driedPreceptrol? noType Strain 模式菌种 noMedium 培养基 ATCC? Medium 44: Brain Heart Infusion Agar/BrothGrowth Conditions 生长条件Temperature 培养温度: 37.0°CName of Depositor 寄存者 GD RothIsolation 分离基物 Oral cavity - humanReferencesOral Surg. Oral Med. Oral Pathol. 9: 1172-1184, 1956.Roth GD. Proteolytic organisms of the carious lesion. Oral Surg. Oral Med. Oral Pathol. 10: 1105-1117, 1957.human carious teeth 三、菌株特性 不能在萨氏葡萄糖琼脂上生长，有别于诺卡氏菌；后者有时产生气丝和孢子，在蔗糖硝酸盐琼脂或营养琼脂上生长。氧化而不发酵糖类。此菌与放线菌属也比较近似，但后者嫌气，触酶阴性、不能液化明胶、胨化牛奶。  四、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。 五、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 六、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、菌种恢复培养前，建议将收到的菌种安瓿保存在 6-10°C 的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，如在说明建议的培养时间还未长起来，请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间，直至菌种培养完成，有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长，一般来说菌种培养稳定后才能用于您的后续实验。3、初次使用时请严格按照本说明书推荐条件和操作步骤进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、恢复培养厌氧菌时，在操作过程中应严格控制厌氧条件：制作培养基时，应使用厌氧螺口试管，并利用高纯氮气去除试管和培养基中的氧气，使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。 微生物菌种查询网作为中国微生物菌种中心引航者，单位代为引进美国ATCC微生物菌种保藏中心，德国DSMZ菌种保藏中心，荷兰CBS菌种保藏中心，日本JCM微生物菌种保藏中心，包括其中的ATCC微生物细菌与噬菌体（18382）；细胞系和杂交瘤（4997）；真菌和酵母（58183）；原代细胞（146）；原生动物和藻类（2428）；干细胞（102）；载体，克隆与分子（18006）；病毒（3594）；核酸 - DNA / RNA（1350），引进进口微生物菌种货期短，质量保证，UPS国际快递运输。

                    微生物培养基配制纯化水的应用范围与质量标准！ 一、微生物培养基纯化水系统挑战 （一）微生物状况的影响 微生物培养基是一个医药产业极为重要和广泛的生产物资，也是一些生物药品的生产、实验室运行的基础性物资，细胞培养、微生物培养都要用到培养基。据目前了解，行业内培养基有两种形式，一种是直接采购即用型培养基，另外一种是采购培养基干粉料然后实验室自行用纯化水配置。 1、液体培养基(liquid nutrient medium) 2、流体培养基(semi-liquid medium) 3、半固体培养基(half-solid medium) 4、固体培养基(solid medium) ①纯化水系统微生物问题 如微生物腐蚀 ②纯化水菌落总数超标 ③纯化水设备生物膜难题等 技术工程师分析： 因为超纯水设备的使用时间较长，或者进水水质不合格，都会对管道以及一些设备及部件造成损坏，可能会导致管道的内测附有污染物，这些污染物就会影响出水水质，所以超纯水设备的管道要及时清洗消毒。尤其是超纯水系统的存储（水罐）和外输单元（管道）一旦被微生物污染，将会对整个纯水系统造成严重的二次污染。 原因之一是反渗透膜污染 原因之二纯化水设备管道污染，导致经过反渗透膜杀菌系统等处理后达标的纯化水经过管道输送导致水质受到二次污染。 因此，在纯化水系统设计时掌握微生物变化规律，可以合理确认消毒和杀菌周期。 （二）生物膜清除方案 纯化水分配系统将纯化设备产水输送至用水点的系统，因此一旦它存在污染的情况，会影响产品质量、降低生产效率等各种问题。 特别是生物膜： 生物膜是水系统常见的一种微生物污染类型。 一般清洗和消毒方式无法理想解决生物膜，而奥克泰士却可以很好的解决生物膜问题。 二、纯化水的定义、应用范围与质量标准 1、培养基生产企业 对于培养基生产企业来说，不仅生产环境，生产设备，工艺流程等微生物控制至关重要，配制用的纯化水系统是预制培养基的关键物料，纯化水的微生物状况对培养基的生产及应用有较大的影响。企业如何获得符合微生物学要求的用水呢？ 2、纯化水的定义、应用范围与质量标准 纯化水设备主要应用于生物制剂、医药制剂、医用大输液、渗透析等的生产用水。在《中华人民共和国药典（2010年版）》附录中可找到相应的描述。《中国药典》纯化水质量标准，菌落总数 纯化水定义：纯化水为饮用水经蒸馏法、离子交换法、反渗透法或其他适宜的方法制得的制药用水。其不含任何添加剂，质量应符合纯化水标准的规定。为了生产活动的正常进行，都需要严格控制水处理系统的微生物污染。 3、纯化水系统关键控制点 纯化水系统主要包含预处理系统、制水系统、存储与分配系统等；若想确保最终纯化水的质量稳定可靠，设计阶段非常关键，其决定着产出的水质是否能够符合标准要求。制水系统通常分为：企业在选择制水系统时，应从系统的产水水质稳定性和设备经济性两个方面来作重点考量。 三、微生物及生物膜会引起哪些问题？ 1、纯水中的微生物会污染分析系统； 2、系统中的温度环境会促进细菌生长； 3、一旦形成顽固的生物膜，很难清除干净； 4、微生物及代谢物会产生各种离子和酶，其带来的各种干扰和影响无法控制； 5、生物膜活性及迁徙能力会导致持续污染。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                 SV40T转化人脐静脉内皮细胞的使用与实验方法！ 一、细胞简介HUVEC-T1是SV40T转化人脐静脉内皮细胞，它具有人体内皮细胞的生物学特性，是心血管研究的可靠模型，可以用于心血管疾病的发病机制、新的治疗方法，以及新型预防措施的研究。形态呈现为典型的鹅卵石样排列，已证明在体外可传至40代。HUVEC-T1内皮标记vWF、CD31、CD34均阳性，可结合凝集素，电镜下可见紧密连接和W-P小体，Matrigle上可形成管型。不同代数的HUVEC-T1细胞核型正常稳定（P12、P13、P19、P38），裸鼠体内接种不成瘤（P9和P33）。 二、产品信息平台编号：Bio-108932规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶细胞信息：PUMC-HUVEC-T1细胞名称：PUMC-HUVEC-T1（SV40T转化人脐静脉内皮细胞） 种属：人 生长特性：贴壁 细胞形态：上皮细胞样 背景描述：PUMC-HUVEC-T1形态呈现为典型的鹅卵石样排列，已证明在体外可传至40代。PUMC-HUVEC-T1内皮标记vWF、CD31、CD34均阳性，可结合凝集素，电镜下可见紧密连接和W-P小体，Matrigle上可形成管型。不同代数的HUVEC-T1细胞核型正常稳定（P12、P13、P19、P38），裸鼠体内接种不成瘤（P9和P33）。 生长培养基：DMEM＋0.01mg/mL Insulin＋1% NEAA+10% FBS(164210)＋1% P/S推荐换液频率：2~3次/周 冻存条件：冻存液：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO温度：液氮 培养条件：气相：空气，95%；CO2，5% 用途：(STR鉴定正确)注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 三、使用方法1、悬浮细胞,2000rpm离心5min收集细胞;对于贴壁细胞,要用不含EDTA的胰酶消化细胞,胰酶消化时间不宜过长或过短(过长细胞膜破碎,造成假阳性,过短,细胞黏连影响检测)*是在轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时,吸除胰酶消化液,加入细胞培养液终止消化,2000rpm离心5min收集细胞。2、4℃预冷PBS,洗涤细胞2次(2000rpm x 5min),收集细胞2~5×105 。3、离心弃上清,加入500μL结合缓冲液,轻轻吹打重悬细胞。4、加入5μL Annexin V-FITC,轻轻吹打混匀,加入5μL PI 轻轻吹打混匀,室温避光孵育5-15min。(PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高,时间允许,可以在检测前5分钟加入PI)5、流式细胞仪检测或荧光显微镜观察。*在1h内检测。 四、实验报告（一）分离与培养：1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,*将组织剪成1mm3左右大小;2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;（二）免疫荧光鉴定：1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;6、用PBS冲洗3次,每次10min,*在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  努比卤地无氧芽孢杆菌：产耐温半乳甘露聚糖酶 努比卤地无氧芽孢杆菌是Anoxybacillus属的微生物，原产地为中国。主要用途为研究；生产，具体用途为生产半纤维素酶，可作用于半乳—甘露聚糖。  一、菌种简介平台编号：Bio-56497提供形式：冻干物拉丁属名：Anoxybacillus Rupiensis中文名称：努比卤地无氧芽孢杆菌属名：Anoxybacillus种名加词：rupiensis来源历史：←天津工业微生物研究所收藏时间：1979.00.00资源归类编码：15131311000模式菌株：非模式菌株主要用途：研究；生产具体用途：产耐温半乳甘露聚糖酶，淀粉酶。特征特性：G+，菌体杆状，单个或链状排列，芽孢中生或端生，无荚膜，不运动。菌落圆形，表面光滑，边缘整齐，淡黄色。液体培养混浊，无沉落物，无气味。明胶液化，不产色素。发酵葡萄糖，不发酵乳糖。V.P阴性，水解淀粉，接触酶阴性，好氧。牛奶反应微弱胨化，利用硝酸盐生长，温度生长范围50～65℃。    生物危害程度：四类致病对象：无分离基物：美国进口粉剂培养基：蛋白胨 5.0g，牛肉浸取物 3.0g，NaCl 5.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH7.0。[注] 培养芽孢杆菌时加入5mg MnSO4·H2O，则有利于产生芽孢。培养温度：60℃资源保藏类型：培养物保存方法：真空冷冻干燥法实物状态：有实物共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享源数据主键：10208用途：研究；生产；产耐温半乳甘露聚糖酶，淀粉酶。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、产品特点1、菌种功能明确、品种稳定、应用效果显著；2、本品芽孢含量高，稳定性好、耐高温和挤压；3、繁殖能力快、定植能力强、易存活、耐受低pH值环境；4、复活迅速，可在短期内成为优势种群；5、本品安全高效、无抗药性、不污染环境；6、对多数抗生素不敏感，可与低浓度抗革兰氏阴性菌抗生素同时使用。 三、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。 四、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 五、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、菌种恢复培养前，建议将收到的菌种安瓿保存在 6-10°C 的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，如在说明建议的培养时间还未长起来，请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间，直至菌种培养完成，有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长，一般来说菌种培养稳定后才能用于您的后续实验。3、初次使用时请严格按照本说明书推荐条件和操作步骤进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、恢复培养厌氧菌时，在操作过程中应严格控制厌氧条件：制作培养基时，应使用厌氧螺口试管，并利用高纯氮气去除试管和培养基中的氧气，使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、与菌种相关的其它信息请参阅微生物菌种查询网网站(www.biobw.org）。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                   人B淋巴细胞瘤细胞的培养操作规程及活性鉴定！ 一、背景 人B淋巴细胞瘤细胞该细胞来源于一位3岁的白人Burkitt淋巴瘤患者；EBV阴性；表达IL-4受体和低亲和性IgE受体（CD23）；每个细胞表面大约有1500个IL-4的结合位点；分泌IgM（lamdaL）；表达膜型和分泌型的免疫球蛋白。 B细胞淋巴瘤是B细胞发生的实体肿瘤，包括霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤。其分型众多，经典霍奇金淋巴瘤和结节性淋巴细胞为主型霍奇金淋巴瘤，现在被认为是起源于B细胞的肿瘤。弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、黏膜相关淋巴组织淋巴瘤（MALT）、小淋巴细胞淋巴瘤/慢性淋巴细胞白血病、套细胞淋巴瘤（MCL）5种B细胞非霍奇金淋巴瘤最为常见，占非霍奇金淋巴瘤的3/4。B细胞淋巴瘤的预后和治疗取决于淋巴瘤的具体类型以及分期分级。 二、人B淋巴细胞瘤细胞培养操作规程 1、人B淋巴细胞瘤细胞培养基及培养冻存条件准备： 1）准备RPMI-1640培养基（RPMI-1640，GIBCO）；北美胎牛血清（灭活），10%；双抗1%。 2）人B淋巴细胞瘤细胞培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。 3）人B淋巴细胞瘤细胞冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。 2、人B淋巴细胞瘤细胞处理： 1）复苏人B淋巴细胞瘤细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。 2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 对于悬浮细胞，传代可参考以下方法： 收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 3）人B淋巴细胞瘤细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM，常温条件下离心5分钟，少量保存上清液（防止细胞吸走），加入部分新鲜培养基，吹打均匀后，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO摇匀后进行冻存。 三、应用 人B淋巴细胞瘤细胞可以用于EBV体外转染人B淋巴细胞方法的优化及B淋巴母细胞样细胞系的体外建立： 探讨CpG基序和CD40激发型抗体(5C11)对EBV转化的作用,从而优化B-LCLs建系的方法,对于体外利用和研究B淋巴细胞株具有重要的理论价值和潜在的运用意义。 1、EBV体外转染人B细胞方法的优化 探讨体外建立健康人外周血的B淋巴母细胞样细胞系(LCLs)的优化方法及其影响因素。 方法：用EB病毒感染健康人外周血中分离的单个核细胞(PBMC),加入CD40激发型抗体(5C11)、CpG DNA免疫调节基序以诱导B淋巴细胞增殖,环胞菌素A(CysA)抑制T淋巴细胞的活性。光学显微镜下观察LCLs的形态特征,利用流式细胞术分析LCLs膜表面分子CD19的表达水平。 结果：PBMC经EBV感染3周后转化成永生化B淋巴母细胞系。转化后的B淋巴母细胞体积增大积聚成团,可进一步分裂增殖并长期传代培养。CD40激发型抗体(5C11)及CpG免疫调节基序联合运用,明显地提高了EBV转化效率,转化后的LCLs保持了成熟B淋巴细胞的生物学特征。 结论：CD40信号激发和CpG免疫调节基序联合运用有效地促进EBV对人B淋巴细胞的转化及体外建系。 2、人B淋巴母细胞系的体外建立及生物学活性鉴定 体外建立健康人外周血的B淋巴母细胞样细胞系(LCLs)并鉴定其生物学活性。 方法：光学显微镜下观察,并做Giemsa染色,观察LCLs的形态特征;提取LCLs的总RNA,检测EB病毒潜伏膜蛋白基因LMP1的存在;利用流式细胞术分析LCLs膜表面分子CD19、CD40的表达水平。 结果：PBMC经EBV感染3周后转化成永生化B淋巴母细胞系。转化后的B淋巴母细胞体积增大积聚成团,可进一步分裂增殖并长期传代培养。转化后的LCLs含有LMP1基因,并保持了成熟B淋巴细胞的生物学特征。 结论：用EBV体外转染方法成功建立B淋巴母细胞样细胞系,转化后的B淋巴母细胞能持续分裂,并保持了成熟B淋巴细胞的生物学特性。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                       乳酸菌在食品工业中的作用及应用有哪些？ 1、发酵乳制品加工 酸奶是利用乳酸菌发酵牛乳、羊乳等动物乳类制成的发酵乳制品，在世界范围内历史都非常悠久。由于动物乳中的乳糖和酪蛋白等营养物质经乳酸菌分解后，易于人体吸收且可以缓解亚洲人种普遍存在的乳糖不耐症，因此广受欢迎。  活性乳酸菌饮料是利用乳酸菌对乳类发酵进而调配制成的发酵乳饮料，它以清爽的口感、独特的风味和较高的营养保健功能得到广大消费者的青睐。其最大优势在于饮料中的乳酸菌是以活菌形式存在于产品中，从而有助于发挥乳酸菌在人体肠道中的生理功能。 奶油和干酪。乳酸菌发酵可用于生产稀奶油，发酵中产生的乳酸在某种程度上可以抑制腐败菌繁殖，提高奶油的稳定性；而另一作用则是产香，因此发酵法生产的酸奶油比甜奶油具有更浓的芳香味。干酪是在乳中加入适量的乳酸菌发酵剂，使乳中蛋白质凝固后，排除乳清，将凝块压制而成的产品。加入的乳酸菌发酵剂发酵产酸，可使干酪成熟，产生风味。  2、果蔬及谷物制品加工 泡菜加工：在泡菜生产加工过程中，乳酸菌利用蔬菜的养料发酵，可提高蔬菜制品的营养价值，改善蔬菜制品风味，防止败坏。  发酵豆乳制品：大豆制成豆浆，接种嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌或植物乳杆菌等发酵剂，38～42℃培养6～10h，可以制得无豆腥味、凝固状态良好、酸甜比合适的酸豆乳产品。  3、发酵肉制品加工 乳酸菌在肉制品中繁殖产酸，可将NO-2还原成NO，NO通过与肉中肌红蛋白结合可以赋予肉制品明亮的鲜红色。乳酸菌的产酸作用还可以抑制杂菌的生长繁殖，从而防止了肉色变绿和脂肪氧化。利用乳酸菌发酵肉制品，还可以延长发酵肉制品的货架期，降低发酵肉制品中亚硝酸盐含量，提高该类食品的食用安全性。  4、天然食品防腐剂 乳酸菌素是一类由乳酸菌在代谢过程中合成产生并分泌到胞外的抗菌多肽或蛋白，具有溶菌作用。因为乳酸菌被认为是世界公认安全的食品级微生物，其产生的抗菌物质可作为天然的食品防腐剂直接应用于食品工业。 5、调味品生产 酿造发酵酱油过程中适当地人工接种乳酸菌能使酱油香气浓，风味佳，质地好。在豆酱发酵中加入乳酸菌产生有机酸，能产生多种风味物质，而且豆酱发酵稳定，可以防止豆酱酸败。液体深层发酵制醋时，加入的乳酸菌可代谢产生有机酸、双乙酰及其衍生物等食醋中的主要风味物质。另外，乳酸菌还可与酵母菌一起用于啤酒、葡萄酒及奶酒的生产。 6、生产乳酸 乳酸不仅是一种优良的食品工业原料，更作为一种重要的有机酸在化工工业中有着广泛的用途。通过淀粉、粮食、纤维素、工农业及民用废物等可再生资源，利用乳酸菌等微生物发酵法大规模生产乳酸，因其原料来源广泛、生产成本低、产品光学纯度高、安全性高等优点而成为生产乳酸的重要方法。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                 知识分享：细菌的分布及外界因素对细菌的影响！ 一、细菌的分布微生物种类繁多，繁殖迅速，分布广泛，不论自然界的空气、土壤、水，生活中的食物、各种物体和器械表面，以及动物和人的皮肤粘膜、与外界相通的腔道中都广泛存在着数量极其庞大的各种微 生物 ，其中以细菌、放线菌最多。因此，了解微生物在自然界及正常人体的分布，对于在医疗实践及某些科学实验中树立无菌观念有着重要的意义。（一）空气中细菌的检查（设计性实验选题）（二）水中细菌的检查（设计性实验选题）（三）人体皮肤表面细菌的检查（设计性实验选题）【附录】细菌菌落的计数方法①选择生长均匀，无片状菌苔生长的平皿观察。一般先用肉眼观察，用记号笔在平板底上进行点数（以免遗漏），然后再持放大镜检查有无遗漏的微小菌落。②如菌落多而密集，可用分区法或菌落计数器计数。分区法是用记号笔在平皿底部通过圆心做垂直线，分为四区，再分别选择菌落密集和稀疏的两个区，再做平分线，使每一小区为平皿面积的1／8 或1／16，然后再分别挑选菌落稀疏和密集的两小区 进行计数，所得数乘以8或16，即为该平皿的菌落总数。③简易的菌落计数器是一块玻璃板上刻划有144 个面积为1平方厘米的正方形小格。将长有菌落的培养皿放上，计算10个小方格内的菌落数，如为30个，则平均1小方格为3个菌落。若培养皿直径是9厘米，则半径为4.5厘米，整个培养皿上的菌数是3个×3.1416×（4.5） 2 =191个菌落。 二、外界因素对细菌的影响微生物和外界环境有密切的关系，当外界环境适宜就能进行正常的新陈代谢生长繁殖；当外界环境条件发生巨大改变，可导致微生物的主要代谢活动发生障碍，生长停顿，甚至死亡。在医学上常用人工的方法造成对微生物不利的环境，来抑制或杀灭微生物，以达到消毒灭菌的目的。其方法大致可分为物理、化学和生物三大类。（一）物理因素对细菌的影响1、温度对细菌的影响2、紫外线杀菌试验（二）化学因素对细菌的影响化学消毒剂的杀菌作用（三）生物因素对细菌的影响噬菌体的特异性裂解细菌试验大肠杆菌、痢疾杆菌的肉汤培养物、痢疾杆菌噬菌体、普通肉汤、普通琼脂平板。【方法】（1）将琼脂平板划分成三等份，注明1、2、3。（2）分别以接种环取菌后，在1、3处涂布痢疾杆菌，2处涂布大肠杆菌。（3）分别沾取一接种环的痢疾杆菌噬菌体加于1、2处中央，（注意不要交叉污染），另取一接种环的肉汤放于3处中央。（4）置37℃孵育24小时后取出，观察噬菌斑出现的位置，并记录之。（四）细菌对抗生素的敏感性试验---纸片扩散法又称Bauer-Kirby法。是将干燥的浸有一定浓度抗菌药物的滤纸片放在已接种一定量某种细菌的琼脂平板上，经培养后，可在纸片周围出现无细菌生长区，称抑菌圈。测量抑菌圈的大小，即可判定该细菌对某种药物的敏感程度。体外药敏结果可作为病人治疗选用药物的参考。【材料】金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌18～24小时培养物、普通琼脂平板、小镊子；含有青霉素、庆大霉素、红霉素、复合磺胺、链霉素等抗生素的干燥滤纸片。【方法】（1）将金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌培养物密集均匀地涂布整个平板。（2）将含有抗生素药物的滤纸片用烧灼灭菌的镊子分别贴于平板表面，相互间应间隔一定距离。（3）37℃培养24小时后，观察结果。【结果】根据药物纸片周围抑菌圈直径的大小来判断该菌对各种药物的敏感程度。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                氧化葡糖杆菌的形态特征与注意事项及打管说明！ 氧化葡糖杆菌是Gluconobacter属的微生物，原产地为美国。菌落圆形、奶酪色，表面光滑不透明，边缘整齐，革兰氏阴性菌，短杆至卵圆形、运动慢。主要用途为分类；研究；教学。 一、菌种简介平台编号：Bio-03923提供形式：冻干物拉丁属名：Gluconobacter Oxydans中文译名：氧化葡糖杆菌拉丁学名：Gluconobacter oxydans原始编号：I-3菌株来源：←北京制药厂直接来源国家：中国保藏时间：12/22/1967生物危害：四类模式菌株：非模式菌株菌株用途：产维生素C培养温度：30℃培养基：0001    用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、形态特征菌落圆形、奶酪色，表面光滑不透明，边缘整齐，革兰氏阴性菌，短杆至卵圆形、运动慢。媒介酶试验阳性；氧化酶试验弱阳性；葡萄糖氧化发酵：呼吸型；乙醇氧化阳性；淀粉水解试验阴性；吲哚试验阴性；V-P试验阴性；硝酸盐还原试验阳性；硫化氢试验阴性；糖醇类发酵：不能发酵D-果糖、D-山梨醇、肌醇、蔗糖、D-半乳糖；明胶水解试验阴性。 三、培养基醋酸菌培养基葡萄糖 100.0g 酵母提取物 10.0g CaCO3 20.0g 琼脂 15.0g蒸馏水 1.0L PH 6.8 四、保藏条件斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存。  五、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、菌种恢复培养前，建议将收到的菌种安瓿保存在 6-10°C 的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，如在说明建议的培养时间还未长起来，请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间，直至菌种培养完成，有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长，一般来说菌种培养稳定后才能用于您的后续实验。3、初次使用时请严格按照本说明书推荐条件和操作步骤进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、恢复培养厌氧菌时，在操作过程中应严格控制厌氧条件：制作培养基时，应使用厌氧螺口试管，并利用高纯氮气去除试管和培养基中的氧气，使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、与菌种相关的其它信息请参阅微生物菌种查询网网站(www.biobw.org）。 六、冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂（应避免过多水蒸气影响菌种的复苏），用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。2、用无菌吸管吸取 0.3ml（建议勿超过 0.5ml）适宜的液体培养基(不添加琼脂)，滴入管内，轻轻振荡，待安瓿管内的菌体溶解呈悬浮状，在用无菌吸管吸取全部菌悬液接在 1-2 支建议的培养基试管中（不超过 2 支，单位所提供的培养基配方中有琼脂，请务必做成试管斜面，配方中没有琼脂，试管中液体培养基不超过 5ml），并在建议的条件下静止培养。3、冻干管打开后需一次用完，不能留存。另外，安瓿管内大部分是用牛奶做保护剂，里面菌体为少数，复苏时要全部菌悬液接在新鲜培养基上，否则可能造成复苏不成功。4、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。5、打管操作应在烧杯或托盘上方进行，用完冻干管应灭菌处理后丢弃。6、菌种复苏时，请务必记录好菌种的编号和制备批号，否则不予售后。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                人原位胰腺腺癌细胞的背景与应用及培养操作步骤！ 一、背景 人原位胰腺腺癌细胞是一种人类胰腺腺癌细胞系，是由一名50岁的男性患者的原位胰腺腺癌组织分离得到的。该细胞系于1975年由美国国立癌症研究所（NCI）的J. Fogh等人建立。 二、人原位胰腺腺癌细胞系的培养方法步骤 1、人原位胰腺腺癌细胞培养基配制 人原位胰腺腺癌细胞的培养基需要配制和准备好。常用的培养基包括DMEM（Dulbecco's Modified Eagle's Medium）和RPMI（Roswell Park Memorial Institute）1640培养基。在培养基中加入10%的胎牛血清（FBS）和1%的青霉素/链霉素（penicillin/streptomycin）混合抗生素，混合均匀后可以用于培养人原位胰腺腺癌细胞。 2、人原位胰腺腺癌细胞的解冻 人原位胰腺腺癌细胞可以从冷冻存储的细胞库中解冻。将冻存管放在37℃的水浴中，快速将管子中的细胞解冻。添加预先配置好的培养基到细胞中，轻轻混合细胞和培养基，将混合物转移至预先消毒的离心管中。将细胞离心10分钟，去除上清液，再次加入预先配置好的培养基，将细胞转移至预先消毒的培养皿中。 3、人原位胰腺腺癌细胞的培养 将培养皿放置在37℃的恒温培养箱中，保持5%的CO2气氛和适当的湿度。每隔1-2天更换一次新的培养基，以促进细胞的生长和增殖。注意不要在细胞培养期间将细胞暴露在空气中，以防细胞受到氧化损伤。 4、人原位胰腺腺癌细胞的传代 当细胞密度达到80-90%时，需要进行细胞的传代。将培养皿中的细胞用1X PBS洗涤一次，加入0.25%的胰蛋白酶（trypsin）溶液，将细胞在37℃的恒温箱中消化5-10分钟，将胰蛋白酶溶液去除，加入新的培养基，轻轻混合细胞和培养基，将混合物转移至新的培养皿中。注意在传代时不要过度消化细胞，以免影响细胞的生长和增殖。 5、人原位胰腺腺癌细胞的冻存 在细胞的生长和增殖期间，需要定期将细胞进行冻存。将人原位胰腺腺癌细胞中的培养基去除，加入10%的DMSO（dimethyl sulfoxide）和90%的FBS混合液，缓慢混合细胞和混合液，将混合物转移至预先消毒的冻存管中。将冻存管放置在-80℃的冰箱中，长期保存。 三、应用 人原位胰腺腺癌细胞可以用于Toll样受体7激活对胰腺癌细胞株（BxPC-3）增殖、迁移与凋亡的影响及机制研究： tlr7的激活对胰腺癌细胞株(bxpc-3)增殖、迁移与凋亡的影响及其机制研究。 方法：培养人原位胰腺腺癌bxpc-3细胞,通过实时荧光定量(real-time)pcr和westernblot分析,检测tlr7受体在mrna和蛋白水平上的表达。以不同剂量(0μg/ml、1.5μg/ml、3.0μg/ml、5.0μg/ml)的tlr7配体gardiquimod经不同的时间(1d、2d、3d、4d、5d)体外刺激bxpc-3细胞,mts及流式细胞术分析tlr7的激活对bxpc-3细胞增殖的影响。tlr7配体gardiquimod(3μg/ml)处理bxpc-3细胞(1-6d),划痕实验方法分析,检测其对bxpc-3细胞的迁移影响。 tlr7配体gardiquimod(3μg/ml)经不同的时间(1-5d),体外刺激bxpc-3细胞,流式细胞术分析其对bxpc-3细胞的凋亡影响。培养bxpc-3细胞,tlr7配体gardiquimod(3μg/ml)经不同的时间(0min、12min、30min、1h、3h、6h、12h、24h、48h),体外刺激bxpc-3细胞,作用12h后,通过westernblot的方法分析,从而探讨细胞周期蛋白cyclinb1、cycline、bcl-2及bax在gardiquimod对人胰腺癌BxPC-3细胞增殖、迁移及凋亡调控中的作用。 结果：Real-time PCR和Western blot分析证实,在人原位胰腺腺癌BxPC-3细胞中,mRNA及蛋白水平检查到TLR7表达,TLR7受体表达量低于人外周血单核细胞,表达相差20.12±7.254倍,差异有统计学意义(P 结论：TLR7受体在人原位胰腺腺癌Bx PC-3细胞存在表达;TLR7激动剂Gardiquimod能够抑制胰腺癌BxPC-3细胞的增殖、迁移和诱导细胞凋亡。Gardiquimod对胰腺癌BxPC-3细胞增殖抑制及细胞凋亡诱导可能依赖细胞周期蛋白cyclin B1、cyclin E、Bcl-2及Bax的调控。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  耐铀解支链淀粉芽胞杆菌的培养方法与实验内容！ 耐铀解支链淀粉芽胞杆菌是Pullulanibacillus属的微生物，原产地为葡萄牙。主要用途为研究。 一、菌种简介平台编号：Bio-57010提供形式：冻干物拉丁属名：Pullulanibacillus Uraniitolerans中文名称：耐铀解支链淀粉芽胞杆菌拉丁名称：Pullulanibacillus uraniitolerans其它保藏中心编号：=DSM 19429=LGM 24205来源历史：←DSMZ←M. da Costa, Univ. Coimbra, Portugal←S. Pereira；UG-2收藏时间：2013/8/4原始编号：UG-2原产国：葡萄牙资源归类编码：15131300000模式菌株：模式菌株主要用途：研究特征特性：耐酸。Genebank登录号;AM931441生物危害程度：四类培养基编号：CM0437培养基名称：脂环酸芽孢杆菌培养基（Alicyclobacillus medium）培养基成分：A溶液：CaCl2 2H2O 0.25g，MgSO4 7H2O 0.5g，(NH4)2SO4 0.2g，KH2PO4 3.0g，酵母膏 2.0g，葡萄糖 5.0g，蒸馏水 0.5（固体培养基）/1.0(液体培养基)L，pH4.0。B溶液：ZnSO4 7H2O 0.1g，MnCl2 4H2O 0.03g，H3BO3 0.3g，CoCl2 6H2O 0.2g，CuCl2 2H2O 0.01g，NiCl2 6H2O 0.02g，Na2MoO4 2H2O 0.03g，蒸馏水 1.0L。C溶液：琼脂15.0g，蒸馏水 0.5L。[注] 以上溶液单独灭菌，A与1ml B溶液混合制成液体培养基，A，1ml B溶液，C混合制成固体培养基。培养温度：35℃需氧类型：好氧分离基物：铀矿排出物保存方法：-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享用途：研究；注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、产品特点1、菌种功能明确、品种稳定、应用效果显著；2、本品芽孢含量高，稳定性好、耐高温和挤压；3、繁殖能力快、定植能力强、易存活、耐受低pH值环境；4、复活迅速，可在短期内成为优势种群；5、本品安全高效、无抗药性、不污染环境；6、对多数抗生素不敏感，可与低浓度抗革兰氏阴性菌抗生素同时使用。 三、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。 四、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 五、保藏方法1、传代培养保藏法又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等（后者作保藏厌氧细菌用），培养后于4-6℃冰箱内保存。2、液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间，它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡，一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。3、载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。4、寄主保藏法用于目尚不能在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次氏体、螺旋体等，它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代，此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。5、冷冻保藏法可分低温冰箱（-20-30℃，-50-80℃）、干冰酒精快速冻结（约-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。6、冷冻干燥保藏法先使微生物在低温度（-70℃左右）下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分（真空干燥）。有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液，以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                  耐久肠球菌PCR试剂盒的知识与工作原理及应用！ 一、背景 耐久肠球菌PCR试剂盒是一种用于检测耐久肠球菌的分子生物学试剂盒。耐久肠球菌PCR试剂盒使用染料法或探针法荧光定量PCR技术进行检测，具有更高的灵敏度和特异性。 耐久肠球菌PCR试剂盒可进行50次PCR检测，适用于无内毒素试管中的细菌内毒素检查。它具有以下特点：即开即用，只需提供DNA模板；引物经过精心优化，专一性强，只扩增耐久肠球菌，与其他微生物没有交叉反应；提供阳性对照等。 二、耐久肠球菌PCR试剂盒原理 实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限,实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度,并记录在电脑软件之中,通过对每个样品Ct值的计算,根据标准曲线获得定量结果。因此,实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的： 1)Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时,刚刚进入真正的指数扩增期(对数期),此时微小误差尚未放大,因此Ct值的重现性极好,即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增,得到的Ct值是恒定的。 2)Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系,可利用标准曲线对未知样品进行定量测定,因此,实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。 外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄今为止定量最准确,重现性的定量方法,已得到全世界的公认,广泛用于基因表达研究、转基因研究,药物考核、病原体检测等诸多领域。定量PCR除可以对样品的初始浓度进行准确定量外,还有其它多种丰富的应用。还包括基因表达调控情况的分析、等位基因的分析等。 三、应用 耐久肠球菌PCR试剂盒可以用于饲草青贮微生物菌群动态变化与乳酸菌的鉴定筛选： 以玉米、苜蓿和直穗鹅观草为材料,开展单独青贮和混合青贮发酵过程中微生物菌群特性的研究,主要结论如下: (1)乳酸菌、好氧细菌、大肠杆菌、酵母及霉菌存在于青贮原料、青贮发酵过程中和发酵完成后等所有时期,不同时期的数量有较大差异;青贮原料上附生的乳酸菌数量远少于有害微生物的数量;除玉米外,各原料表面附生乳酸菌数量均未达到105 cfu/g FM,且玉米上附生的乳酸菌数量远多于苜蓿和直穗鹅观草;同一茬次苜蓿不同品种间附生的乳酸菌数量无明显差异;不同茬次甘农3号苜蓿上附生的乳酸菌数量基本没有变化,但第二茬上的有害微生物显著增多;随着原料含水量的下降,苜蓿表面的乳酸菌逐渐增多,有害微生物的数量逐渐减少。 (2)发酵开始后,各种微生物较青贮原料上的起始菌落数均有较大增长;发酵过程中各种微生物的数量基本都存在缓慢变化、迅速增长、达到值后下降、最后稳定在较低水平的变化过程,受原料特性、发酵条件、添加剂等的影响,有的原料微生物数量在青贮过程中出现两次甚至三次升降变化;不同微生物开始迅速增殖、达到值的时间可能相同也可能不同,不同微生物数量的值也不相同;混贮原料特性、配比等也影响发酵过程中各类微生物的数量、值及达到值的时间;有的青贮在发酵完成后出现各种微生物数量激增的现象;发酵过程中,乳酸菌数量的值为109.50～1010.38 cfu/g FM,值出现在发酵15天或20天。 (3)发酵过程中,第二茬甘农3号苜蓿青贮中各类微生物的数量总体上多于茬,且达到峰值的时间较早,峰值较小;总体而言,苜蓿青贮中各类微生物的数量较高,直穗鹅观草次之,玉米较少;随着含水量的降低,苜蓿青贮中各类微生物的数量逐渐减少;添加糖蜜可以促进乳酸菌的繁殖;乳酸菌的数量在自然青贮发酵过程中不具优势,其数量与好氧细菌、酵母与霉菌等的数量相当;大肠杆菌的数量远少于其他各类微生物的数量。 (4)从青贮原料、青贮发酵初期和后期分离出54株乳酸菌,这些菌株分属于5个属的10个菌种,包括戊糖片球菌、植物乳杆菌、屎肠球菌、乳酸片球菌、希氏肠球菌、蒙氏肠球菌、融合魏斯氏菌、肠膜明串珠菌肠膜亚种、耐久肠球菌（使用耐久肠球菌PCR试剂盒鉴定）和弯曲乳杆菌,其中戊糖片球菌、植物乳杆菌和屎肠球菌较多。 (5)筛选出GI7、GI11、GI24、GI44、GI62等5株产酸速率较快的菌株,其中植物乳杆菌GI62产酸速率和生长速度较快,最适合用作青贮乳酸菌添加剂菌种;使用乳酸菌添加剂能够增加苜蓿青贮中乳酸菌的数量,降低pH值,处理组植物乳杆菌GI62+戊糖片球菌GI11+乳酸片球菌GI7效果。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                 ATCC 27758伴生粪球菌的特点与优势及培养方法！ 一、菌种简介平台编号：Bio-78919规格：Frozen拉丁属名：Coprococcus Comes菌株名称：伴生粪球菌用途：ATCC原装进口注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、详细描述Coprococcus comes Holdeman and Moore菌株拉丁名(ATCC® 27758™)菌株编号Permits and Restrictions View PermitsStrain Designations菌株别名 VPI CI-38Isolation分离源  Feces, humanBiosafety Level生物安全等级 1Biosafety classification is based on U.S. Public Health Service Guidelines, it is the responsibility of the customer to ensure that their facilities comply with biosafety regulations for their own country.Product Format提供形式 frozenStorage Conditions 保藏方法 Frozen: -80℃ or colderFreeze-Dried冻干物: 2℃ to 8℃Live Culture活菌: See Propagation SectionPreceptrol® noType Strain模式菌株 yesMedium 培养基ATCC® Medium 1102: Chopped meat carbohydrate mediumwith 0.1% cellobiose, 0.1% maltose, 0.1% starch, and 0.1% Tween 80Growth Conditions生长条件Temperature培养温度: 37℃Atmosphere需氧情况: Anaerobic gas mixture, 80% N2,10% CO2, 10% H2 Name of Depositor LV HoldemanChain of Custody来源国家 ATCC Isolation分离源  Feces, humanReferences参考文献  Holdeman LV, Moore WE. New genus, Coprococcus, twelve new species, and emended descriptions of four previously described species of bacteria from human feces. Int. J. Syst. Bacteriol. 24: 260-277, 1974. Skerman VB, et al. Approved lists of bacterial names. Int J Syst Bacteriol 30: 225-420, 1980. 三、产品特点1、菌种功能明确、品种稳定、应用;2、产品仅限用于科研本品芽孢含量高,稳定性好、耐高温和挤压;3、繁殖能力快、定植能力强、易存活、耐受低pH值环境;4、复活迅速,可在短期内成为优势种群;5、本品安全高效、无抗药性、不污染环境;6、对多数抗生素不敏感,可与低浓度抗革兰氏阴性菌抗生素同时使用。 四、产品优势1、产品质量稳定,是为科研和提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。2、国内首创封闭管包装,冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法,保证菌种的复苏质量。3、严格的质检程序,确保产品质量的稳定性。4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业,疾控中心、质检局、出入境、药检局等等,得到广泛好评。 五、微生物菌种培养方法1、孢子制备⑴ 放线菌孢子的制备一般采用琼脂斜面培养基,培养基中含有一些适合产孢子的营养成分,如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。碳源和氮源不要太丰富(碳源约为1%,氮源不超过0.5%),碳源丰富容易造成生理酸性的营养环境,不利于放线菌孢子的形成,氮源丰富则有利于菌丝繁殖而不利于孢子形成。一般情况下,干燥和限制营养可直接或间接诱导孢子形成。放线菌斜面的培养温度大多数为28 ℃,少数为37 ℃,培养时间为5~14天。⑵ 产品仅限用于科研霉菌孢子的制备霉菌的孢子培养,一般以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基。这是由于这些农产品中的营养成分较适合霉菌的孢子繁殖,而且这类培养基的表面积较大,可获得大量的孢子。霉菌的培养一般为25~28 ℃,培养时间为4~14天。2、种子制备⑴ 摇瓶种子制备摇瓶种子进罐,常采用母瓶、子瓶两级培养,有时母瓶种子也可以直接进罐。种子培养基要求比较丰富和完全,并易被菌体分解利用,氮源丰富有利于菌丝生长。原则上各种营养成分不宜过浓,子瓶培养基浓度比母瓶略高,更接近种子罐的培养基配方。⑵ 种子罐种子制备种子罐种子制备的工艺过程,因菌种不同而异,一般可分为一级种子、二级种子和三级种子的制备。孢子(或摇瓶菌丝)被接入到体积较小的种子罐中,经培养后形成大量的菌丝,这样的种子称为一级种子,把一级种子转入发酵罐内发酵,称为二级发酵。如果将一级种子接入体积较大的种子罐内,经过培养形成更多的菌丝,这样制备的种子称为二级种子,将二级种子转入发酵罐内发酵,称为三级发酵。同样道理,使用三级种子的发酵,称为四级发酵。 微生物菌种查询网作为中国微生物菌种中心引航者，单位代为引进美国ATCC微生物菌种保藏中心，德国DSMZ菌种保藏中心，荷兰CBS菌种保藏中心，日本JCM微生物菌种保藏中心，包括其中的ATCC微生物细菌与噬菌体（18382）；细胞系和杂交瘤（4997）；真菌和酵母（58183）；原代细胞（146）；原生动物和藻类（2428）；干细胞（102）；载体，克隆与分子（18006）；病毒（3594）；核酸 - DNA / RNA（1350），引进进口微生物菌种货期短，质量保证，UPS国际快递运输。

                小鼠逆转录病毒包装株的培养操作规程及相关研究！ 一、背景 小鼠逆转录病毒包装株是源于TK-NIH/3T3的逆转录病毒包装细胞。PT67 is a retrovirus packaging cell line derived from TK-NIH/3T3 cells.细胞产生可结合长臂猿白血病病毒受体Glvr-1或双嗜性逆转录病毒受体Ram-1的复制缺陷逆转录病毒载体颗粒。 二、细胞培养步骤 1、培养基及培养冻存条件准备： 1）准备DMEM（推荐iCell-0001）培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。 2）小鼠逆转录病毒包装株培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。 3）小鼠逆转录病毒包装株冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。 2、小鼠逆转录病毒包装株细胞处理： 1）冻存细胞的复苏： 将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。 2）小鼠逆转录病毒包装株细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 对于贴壁细胞传代可以参考以下方法： 1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 2.加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。 3.轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。 3）小鼠逆转录病毒包装株细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。 1.细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10^6~1×107个活细胞/ml. 2.1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞，按每1ml冻存液含1×10^6~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。 3.将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。 三、应用 小鼠逆转录病毒包装株可以用于逆转录病毒介导GW112基因在胃癌SGC-7901细胞中的表达研究： 利用荧光定量PCR技术,分析GW112基因在胃癌组织、癌旁组织以及正常胃粘膜组织中的表达差异。其次,利用逆转录病毒载体pLEGFP-N1系统,构建人GW112基因增强型表达载体pLEGFP-N1-GW112,并将其包转出逆转录病毒,构建GW112基因在胃癌细胞稳定过表达的细胞模型,为深入了解GW112在胃癌中的作用及抗凋亡机制,奠定基础。 本课题实验内容与结果包括以下几个方面： 1、分析比较GW112基因在胃癌组织、癌旁组织以及正常胃粘膜组织中的表达差异。收集23例胃癌组织、癌旁组织以及正常胃粘膜组织,抽提总RNA,设计合成GW112与β-actin的特异引物,利用实时定量PCR分析三者间GW112基因的表达差异。结果显示:与癌旁组织以及正常胃粘膜组织相比,GW112基因在胃癌组织明显上调(3-6倍);而癌旁组织以及正常胃粘膜组织相比无较大差异(1.3倍);研究显示GW112基因在胃癌组织属过表达,与国外研究基本一致。 2、建立GW112稳定过表达的SGC-7901细胞模型。构建pLEGFP-N1-GW112重组逆转录病毒载体,转染小鼠逆转录病毒包装株PT67包装细胞进行病毒包装。经G418筛选,建立稳定的产毒的小鼠逆转录病毒包装株PT67-GFP与小鼠逆转录病毒包装株PT67-GW112细胞。 收集病毒经纯化感染SGC-7901细胞,再次经过G418筛选稳定筛选,建立起SGC-7901-GFP对照细胞以及GW112稳定过表达的SGC-7901-GW112细胞株。实时定量PCR用于分析GW112基因的表达。 1)PCR扩增携带信号肽序列的GW112基因,扩增产物经限制酶消化克隆入逆转录病毒载体pLEGFP-N1的SalI与BamHI位点间,构建pLEGFP-N1-GW112重组逆转录病毒载体。酶切与测序结果分析显示重组质粒构建正确,且GW112基因与基因库中NM.006418序列一致。 2)pLEGFP-N1-GW112与pLEGFP-N1对照经脂质体Lipofectamine 2000.转染如PT67包装细胞,经G418筛选,获得稳定产毒株PT67-GFP及PT67-GW112。 3)裂解后产生的病毒感染SGC-7901细胞,再次经G418筛选,获得了SGC-7901-GFP与SGC-7901-GW112的稳定克隆。实时定量PCR检测稳定克隆间GW112基因表达水平。结果显示:逆转录病毒介导的GW112基因能稳定而持久的增强GW112基因在胃癌SGC-7901细胞中的表达。 研究GW112基因在胃癌细胞中功能的前期工作。通过构建稳定高表达GW112的人胃癌细胞SGC7901细胞株,对进一步研究GW112基因表达对胃癌细胞的生物学行为及表型的影响,探索其分子机制,为侵袭性胃癌的早期诊断及治疗奠定良好的基础。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

               副百日咳波氏杆菌PCR试剂盒的操作步骤与注意事项！ 一、背景 副百日咳波氏杆菌PCR试剂盒是一种用于检测特定基因（DNA）片断的试剂盒。 该试剂盒主要通过一对波氏杆菌引物介导，在体外对特定基因（DNA）片断进行快速酶促扩增。经过一定数量的热循环扩增后，扩增产物中所含特定基因数是原始模板数的（1+E）n（0 二、副百日咳波氏杆菌PCR试剂盒实验过程 （一）副百日咳波氏杆菌PCR试剂盒试剂准备 1、DNA模板 2、对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物） 3、10×PCR Buffer 4、2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5、Taq酶 （二）副百日咳波氏杆菌PCR试剂盒操作步骤 1、在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。 10×PCR buffer：5μl；dNTP mixl：4μl；引物1（10pM）：2μl；引物2（10PM）：2μl；Taq酶（2U/μl）：1μl；DNA模板（50ng-1μg/μl）：1μl；加ddH2O至：50μl，视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。 2、调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃40s→58℃30s→72℃60s，循环30-35次，最后在72℃保温7min。 3、结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。 4、PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。 （三）副百日咳波氏杆菌PCR试剂盒注意事项 1、PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。zui好设立一个专用的PCR实验室。 2、纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。 3、所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。 4、PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。 5、试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。 6、试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。 7、PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀 三、应用 副百日咳波氏杆菌PCR试剂盒可以用于犬支气管败血波氏杆菌的分离鉴定及fimN基因的克隆、表达和表达蛋白免疫原性分析： 犬窝咳是由犬支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb)犬腺病毒(CAV)、犬瘟热(CDV)和犬副流感病毒(CPiV)中的一种或几种病原混合感染引起的。本实验主要目的是了解犬支气管败血波氏杆菌在窝咳犬中的分布,分析比较Bb分离株的生物学特性,并同时比较三种病毒在窝咳犬中的检出。 从南京地区和北京地区采集了164份患有窝咳的犬鼻腔拭子进行Bb的分离鉴定,经培养性状、形态学检查、生理生化试验、血清学鉴定及副百日咳波氏杆菌PCR试剂盒鉴定,最终分离到16株Bb,分离率为9.8%,药敏试验结果显示16株细菌生物学特性和对抗生素敏感性基本相同。对16份Bb阳性病料样品进行犬腺病毒、犬瘟热、犬副流感病毒检测,结果表明窝咳犬由Bb引发的几率占10%,和三种病毒混合感染的情况者占81%。 对2006年11月至2008年1月在北京和南京地区分离的16株犬波氏杆菌和一株兔波氏杆菌参考株的fimN基因进行了全长克隆,用MegAlign(DNAStar)比较分析分离株与GenBank中收录的犬波氏杆菌参考株(登录号AF231910)的fimN核苷酸序列,绘制基因进化树。结果表明,16株支气管败血波氏杆菌的fimN基因序列同源性与犬波氏杆菌参考株序列的同源性在99%以上,和兔波氏杆菌参考株的序列同源性也在99%以上,表明南京和北京两地的犬源支气管败血波氏杆菌的fimN核苷酸序列基本无变化。 对克隆载体pMD18T-fimN进行双酶切,将得到的630bp片段以正确的阅读框架定向克隆于pET-32a(+)中,构建PETBb-fimN重组质粒表达载体,然后将重组质粒转化进宿主菌BL21中,在37℃1mM IPTG诱导下该片段获得良好的表达。 经SDS-PAGE鉴定其表达的融合蛋白质约39.4kDa,与预期值一致。免疫转印试验显示,体外表达的该重组蛋白可被兔支气管败血波氏杆菌NK0610株兔抗血清识别。表达蛋白纯化后免疫实验兔,通过琼脂扩散试验测血清抗体效价,结果显示血清的沉淀效价为1:40,表明该重组蛋白具备天然菌毛蛋白N基因的部分抗原表位,为研制CDV的亚单位疫苗提供了侯选材料。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                    对原核微生物转录组测序的知识与概述及应用！ 一、背景及概述 原核微生物转录组测序是指利用第二代高通量测序技术对原核生物的转录本（mRNA和非编码RNA）进行测序，全面快速地获取特定微生物在特定状态下的所有转录本的信息。通过转录组测序研究可以揭示微生物不同表现型形成的分子调控机制。 原核转录组测序是基于HiSeq平台，构建普通去rRNA文库或链特异性去rRNA文库，研究原核生物在某个时期或特定环境条件下转录出来的所有mRNA。其中，构建链特异性文库可以深入挖掘基因结构和sRNA信息，进一步为基因网络调控研究提供有力支撑。 二、应用 案例一：利用转录组测序阐明地中海拟无枝酸菌U32产生利福霉素的分子机制 地中海拟无枝酸菌（Amycolatopsis mediterranei U32）是一种能够在硝酸盐培养基中产生利福霉素的功能菌。为了深入揭示其分子机制，作者对其进行了转录组研究。 结果发现，U32菌株在硝酸盐培养条件下存在很多利福霉素生物合成相关的基因发生转录，当菌株在不含硝酸盐的培养基中生长时，这些基因的转录水平从对数生长期到稳定生长期早期急剧下降，推测可能是由于硝酸盐通过前体供应促进利福霉素生物合成酶途径进而刺激利福霉素的产生。 本研究通过转录组测序的手段阐明了地中海拟无枝酸菌的利福霉素生物合成途径。 案例二：利用链特异性转录组测序研究保加利亚乳酸杆菌 德氏乳杆菌保加利亚亚种 2038（Lb. bulgaricus 2038）是一种用作乳制品发酵剂的工业菌种。 研究人员利用RNA-seq探究菌株4种不同生长阶段的转录表达情况，结果发现，大多数通路中基因表达同生长阶段呈现出高度相关性。在此基础上，作者重建了碳水化合物运输和代谢途径，并对不同生长阶段的蛋白酶和氨基酸转运系统基因进行了聚类分析，揭示了该菌株具有高效的氮源利用系统。 研究还表明ncRNA在乳酸菌基因表达中具有潜在调控作用。此研究揭示了Lb. bulgaricus 2038 的作用机制，并为其在工业上的进一步应用奠定了基础。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                  出口食品微生物细菌超标怎么灭菌？快来看一看！ 百欧博伟生物：在全球化贸易的大背景下，食品安全问题一直是各国关注的焦点。尤其是对于出口食品，其质量标准更是严格。然而，由于生产、储存、运输等环节的复杂性，出口食品中的微生物细菌超标问题时有发生。如何有效解决这个问题，确保出口食品的质量和安全，成为了业界亟待解决的问题。而电子束辐照灭菌技术，就是这样一个快捷高效的解决方案。 一、电子束辐照灭菌技术的基本原理 电子束辐照灭菌技术是利用高能电子束对食品进行辐照，破坏微生物细胞内的生物活性物质，从而达到杀灭微生物的目的。这种技术具有速度快、效果好、无残留、无污染等优点，被誉为“冷灭菌”。 二、电子束辐照灭菌技术的优势 1、快捷高效：电子束辐照灭菌技术可以在几秒钟内完成灭菌过程，比传统的加热灭菌、化学灭菌等方法快得多。同时，由于电子束的能量高度集中，灭菌效果也更好。 2、无残留无污染：电子束辐照灭菌技术是一种物理方法，不会产生化学残留物，也不会改变食品的化学成分和口感，更不会造成环境污染。 3、适用范围广：电子束辐照灭菌技术不仅可以用于肉类、水产品、果蔬等食品的灭菌，还可以用于医疗器械、药品、化妆品等产品的灭菌。 三、电子束辐照灭菌技术在出口食品中的应用 对于出口食品，微生物细菌超标是一个严重的问题。传统的灭菌方法往往无法满足出口食品的高质量要求。而电子束辐照灭菌技术，可以快速有效地杀灭食品中的微生物，确保食品的质量和安全。 首先，电子束辐照灭菌技术可以在短时间内完成灭菌过程，大大提高了生产效率。其次，由于电子束辐照灭菌技术是一种物理方法，不会产生化学残留物，也不会改变食品的化学成分和口感，更不会造成环境污染，完全符合出口食品的高质量要求。最后，电子束辐照灭菌技术还可以用于包装材料、生产设备等的灭菌，从源头上防止微生物细菌的污染。 四、结论 总的来说，电子束辐照灭菌技术是解决出口食品微生物细菌超标问题的一个快捷高效的解决方案。它不仅可以提高生产效率，保证食品的质量和安全，还可以保护环境，实现可持续发展。因此，我们应该积极推广和应用电子束辐照灭菌技术，为出口食品的质量和安全保驾护航。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                 维斯假丝酵母的培养条件与注意事项及打管说明！ 维斯假丝酵母是Candida属的微生物，原产地为中国。MEA培养基，28℃，培养72 h，菌落奶油状，乳白色，表面具有皱褶，边缘不整齐；细胞椭圆形，芽殖，有假菌丝和真菌丝。主要用途为研究，具体用途为具有酯酶活性。线粒体基因组测序菌株。 一、菌种简介平台编号：Bio-104277规格：冻干物拉丁属名：Candida Viswanathii中文名称：维斯假丝酵母拉丁名称：Candida viswanathii其它保藏中心编号：=CGMCC 2.4479 =ATCC 22981 =CBS 4024来源历史：←CGMCC收藏时间：2018/12/11原始编号：JCM 9567原产国：中国资源归类编码：15151111103模式菌株：模式菌株主要用途：研究特征特性：MEA培养基，28℃，培养72 h，菌落奶油状，乳白色，表面具有皱褶，边缘不整齐；细胞椭圆形，芽殖，有假菌丝和真菌丝。具体用途：具有酯酶活性。线粒体基因组测序菌株。生物危害程度：四类培养基编号：CM0181培养基名称：酵母菌培养基(Yeast Culture Medium)培养基成分：酵母膏 3.0g，麦芽浸膏 3.0g，蛋白胨 5.0g，葡萄糖 10.0g，琼脂 20.0g，蒸馏水 1.0L。培养温度：25℃需氧类型：好氧分离基物：Cerebro-shrimp fluid采集地：印度保存方法：-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享提供形式：冻干物用途：具有酯酶活性。线粒体基因组测序菌株。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、储存条件冻干菌种和试管斜面请置于 2-8℃冷藏。西林瓶菌种请置于-20℃冷冻。 三、培养条件1、培养基编号：CM01812、培养基成分：酵母膏 3.0g，麦芽浸膏 3.0g，蛋白胨 5.0g，葡萄糖 10.0g，琼脂 20.0g，蒸馏水 1.0L。3、需氧类型：好氧4、培养温度：25℃ 四、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、试管斜面菌种请尽快转接，不建议长期存放。3、初次使用时请按照本说明书推荐条件进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系菌种。 五、冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉檫试冻干管表面进行消毒，将管顶端于酒精灯外焰上均匀加热；立即滴 2-3 滴无菌水于加热部位，使管壁破裂；再用镊子或其他适宜工具敲下破裂处。2、菌株恢复培养：用无菌吸管吸取 0.5ml 左右液体培养基(固体培养基去掉琼脂即可)于冻干管中将冻干菌粉全部溶解。将溶解后的菌悬液转移至盛有 4~5mL 液体培养基的试管中混匀，可将残留在吸管中 1-2 滴菌悬液转接至固体培养基上。将液体试管和斜面试管于推荐条件下静置培养。以液体培养结果为准。3、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在 2-8℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，需要转接至 2-3 代恢复活力。4、复苏后的菌种在传 1-2 代后使用。5、暂不启开的安瓿管应于 4℃中保藏（特殊除外）。6、冻干管打开后需一次用完，不能留存。7、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。8、打管操作应在烧杯或托盘上方进行，用完冻干管应灭菌处理后丢弃。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                    小鼠肺成纤维细胞永生化的运输和保存及使用！ 一、细胞简介小鼠肺成纤维细胞分离自肺组织；肺是机体的呼吸器官，位于胸腔，左右各一，覆盖于心之上。肺有分叶，左二右三，共五叶。肺经肺系(指气管、支气管等)与喉、鼻相连，故称喉为肺之门户，鼻为肺之外窍。成纤维细胞(Fibroblast)是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来；成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。 二、产品信息平台编号：Bio-105966规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶细胞信息：永生化细胞细胞名称：小鼠肺成纤维细胞永生化用途：（免疫荧光鉴定）注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 三、细胞详述成纤维细胞是肺间质中含量最丰富的细胞种类。这些成纤维细胞与普通的相似，但也有其特有的特征，例如具有很长的伪足和细胞间的间隙连接。肺成纤维细胞的主要功能为分泌肺泡隔基质中的III型胶原，弹性蛋白以及蛋白多糖，也在肺部受损时担任重要的修复和重建功能。肺部受伤后，在炎症部位的一定程度的成纤维细胞积聚是肺部复原的关键步骤，过多或者不足的成纤维细胞聚集都会导致肺功能异常。该细胞通过慢病毒转染的方式携带SV40基因。 四、细胞特性1)组织来源于实验动物的正常肺组织。2)细胞鉴定：纤维连接蛋白（Fibronectin）或波形蛋白（Vimentin）免疫荧光染色为阳性。3)经鉴定细胞纯度高于90%。4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。5)细胞生长方式：长梭状细胞，贴壁培养。 五、产品的运输和保存视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。 六、产品使用1)本产品仅能用于科研2)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核3)本产品未通过用于活体诊断的审核 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                      鲁氏毛霉的识别特征与保藏条件及注意事项！ 鲁氏毛霉是一种接合菌纲真菌。主要用于教学，研究。 一、菌种简介平台编号：Bio-11586规格：冻干物拉丁属名：Mucor Rouxii中文译名：鲁氏毛霉拉丁学名：Mucor rouxii原始编号：CBS 416.77菌株来源：←中国科学院微生物研究所←CBS保藏人：郑儒永直接来源国家：荷兰保藏时间：3/1/1998其他保藏编号：=ATCC 24905 =DSM 1191生物危害：四类模式菌株：非模式菌株培养温度：25℃培养基：014    分离源：酒曲发酵米用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、识别特征 此种菌最初是从我国小曲中分离出来的。在马铃薯培养基上菌落呈黄色,在米饭上略带红色,孢子囊褐色。鲁氏毛霉能产生蛋白酶,有分解大豆蛋白能力,也能用它制造腐乳。 三、培养基综合马铃薯培养基（PDA）20%马铃薯汁 1L 葡萄糖 20g MgSO4.7H2O 1.5g KH2PO4 3gVitanib B1 (硫胺素) Trace 微量约 8mg Agar (琼脂) 20g pH 自然20%马铃薯汁配制方法：马铃薯洗净去皮，取 200 克切成小块 , 加水 1000 毫升煮沸 20 分钟后滤去马铃薯块，将滤液补足 1000ml。  四、保藏条件安瓿冻干和培养物菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶请置于-20°C 保存，甘油管请置于-80°C保存;请勿长期置于室温。  五、注意事项1）冻干粉首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取 0.3ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支平板或者斜面，若接种液体培养基，则试管液体不超过 5ml 为宜）；2）经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。7）如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌种后 2 个月内联系，逾期不予受理；8）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。9）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。10）甘油管使用：使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                  绒猴EBV转化的白细胞的应用及培养操作规程！ 一、背景 绒猴EBV转化的白细胞源自暴露于人白血球中抽提的EB病毒的绒猴白血球；B95-8细胞是一个连续株，并能释放高滴度的转染EB病毒。此细胞提供EB病毒用于建立人的连续淋巴细胞株。 二、绒猴EBV转化的白细胞培养操作规程 1、培养基及培养冻存条件准备: 1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO),90%;优质胎牛血清,10%。 2)培养条件:气相:空气,95%;二氧化碳,5%。温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。 3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。 2、绒猴EBV转化的白细胞处理: 1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。 2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。 对于悬浮细胞,传代可参考以下方法: 方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 方法二:可选择半数换液方式,弃去半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 3)绒猴EBV转化的白细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM,常温条件下离心5分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,吹打均匀后,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO摇匀后进行冻存。 三、应用 绒猴EBV转化的白细胞可以用于锁核酸核酶抑制EBV-LMP1基因表达及其对B95-8细胞生物学影响初步研究： B95-8细胞系是一种由暴露于人白血球中抽提的EB病毒的绒猴白细胞转化而来的连续株细胞系。该细胞系可以用于产生EB病毒，以用于建立人的连续淋巴细胞株。 针对鼻咽癌EBV-LMP1的高效10～23型DZ167为基础，经LNA修饰设计合成LANzyme，以EBV-LMP1阳性的B95-8细胞为实验对象，比较DZ167和LNA167对LMP1表达的抑制作用，并观察其对B95-8细胞生物学的影响。 根据前期筛选的脱氧核酶DZ167为基础，设计合成锁核酸核酶LAN167，比较DZ167、LAN167对B95-8细胞靶基因EBV-LMP1的抑制效应。 方法：以B95-8为原型，EBV-LMP1基因为抑制靶点，设计合成脱氧核酶DZ167，对其5’端及3’端前2个结合臂分别进行硫代化修饰或引入2个LNA单体，并设计无催化活性中心的无序DNAzyme对照序列，所有序列5’端用FITC标记。经脂质体转染B95-8细胞，分为硫代修饰DZ167组（S-DZ167）、锁核酸核酶LNA167组、无序DZ167组。同时设立未转染空白对照组。转染后24h，荧光显微镜观察活细胞中荧光的分布情况，流式细胞仪测转染率。转染12h、24h、48h、72h及96h，采用Real-Time PCR评价S-DZ167、LNA167对LMP1稳定性及抑制时效关系。转染后48h采用Western blot方法检测LNA167、S-DZ167对EBV-LMP1蛋白表达的抑制情况。 结果：转染后24h，荧光显微镜观察各组均有绿色荧光表达，核酶主要分布于细胞浆、细胞膜。无序DZ167组、S-DZ167组、LNA167组转染效率分别为75.5%、76.7%及77.6%。 对LMP1稳定性及抑制时效关系评价结果示：与未转染组相比，LNA167组及S-DZ167组于转染后12h、24h、48h、72h对96h，LMP1均保持一定的抑制效应，抑制率分别为，23.73%，33.93%，44.89%，27.45%，12.24%；45.76%，51.79%，71.43%，54.90%，22.45%。转染12h，LNA167及S-DZ167就表现出对LMP1的抑制作用，以48h最明显，之后逐渐下降；转染72h后，LNA167组与S-DZ167组抑制率相比，差异有显著性（P＜0.05）；转染至96h，仍然表现出对LMP1mRNA一定抑制效应，与未转染组相比，LNA167组差异有显著性（P＜0.05），而S-DZ167组差异无显著性（P＞0.05），两组相比虽然差异无显著性（P＞0.05），但LNA167组对LMP1mRNA抑制程度仍高于S-DZ167组。 未转染组与无序DZ167相比差异均无显著性（P＞0.05）。Western blot检测结果显示：与未转染组比较，无序DZ167组对EBV-LMP1蛋白表达抑制率为5.89%，差异无显著性（P＞0.05）；LNA167、S-DZ167对EBV-LMP1蛋白抑制率分别为49%、75.02%，LNA167与S-DZ167能不同程度地抑制EBV-LMP1蛋白，但LNA167抑制效应明显高于S-DZ167，差异有显著性（P＜0.05）。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

              细胞培养基的生产和发酵过程细菌耐热菌污染控制策略！ 百欧博伟生物：培养基一个医药产业极为重要和广泛的生产物资，是一些生物药品的生产、实验室运行的基础性物资，细胞培养、微生物培养都要用到培养基。 一、微生物培养基的定义 培养基是指使用手动方法生产的混合营养产品，用于微生物培养、分离、鉴定、研究和保存。微生物的生长繁殖需要一定的营养物质和适宜的环境条件。在人类开发、生产和疾病防治过程中，为了控制和利用微生物，对天然或纯化的营养物质和适宜的渗透压、pH值等进行加工，生产出不同营养需求的营养基质，在人工条件下培养和使用微生物。这类人工培养的微生物（细菌、真菌、病毒等）具有多种用于各种目的的营养制剂，如微生物生长、繁殖或分离鉴定等，俗称微生物培养基。研究培养基成分、制备方法、储存条件、培养原理、质量控制和影响评估、原材料生产和应用等一系列主题的科学被称为培养基科学。 二、微生物培养基分类 微生物培养基按培养基成分可分为合成培养基、天然培养基和半合成培养基三类；按物理状态可分为固体培养基、液体培养基和半固体培养基；按微生物的种类分为细菌培养基、放线菌培养基、酵母菌培养基和霉菌培养基；按特殊用途分为基础培养基、加富培养基、选择性培养基和鉴别培养基。 培养基灭菌大多数用湿热灭菌。 讲解一下微生物培养基的灭菌方法： 1、干热灭菌法（即热空气灭菌法） 干热灭菌一般是利用电热烘箱作为干热灭菌器。前面所包装好的玻璃器皿，如带棉塞的三角瓶、试管、包装好的吸管、培养皿等，放入电热烘箱中。打开烘箱顶部的通气孔，接上电源加热，使箱内空气的温度达到160℃-170℃，关闭通气孔使箱内的温度保持在160℃左右并维持1.5-2h。时间一到，切断电源；待温度下降60℃-70℃以下，方可打开箱门取灭菌物品，否则骤冷后易使箱内玻璃仪器破损。 2、加压蒸汽灭菌法 利用高压灭菌器，使水的沸点在密闭的灭菌器内随压力升高而增高，来提高蒸汽的温度和灭菌的效率。在同一温度下湿热的杀菌效率比干热大，因为微生物细胞蛋白质在湿热情况下，易干凝固，同时湿热的穿透力强，当水蒸气与被灭菌的物品相接触后，便放出汽化潜热，逐步提高被灭菌物品的温度，直至与水蒸汽的温度相等，达到平衡为止，从而提高灭菌效率。 3、湿热灭菌 灭菌原理是直接用蒸汽灭菌，蒸汽在冷凝时能释放出大量潜热，蒸汽具有强大的穿透力，破坏菌体蛋白和核酸的化学键，使酶失活，微生物因代谢障碍而死亡。水煮常压灭菌：100℃。或饱和蒸汽灭菌：一般121℃，30分钟。适合培养基和发酵设备灭菌。尤其是对芽孢、霉菌等高抗性微生物的控制——湿热灭菌也不能保障100%的灭菌成功，灭菌后有可能还会存在芽孢等高抗性微生物的存留，容易导致内毒素污染。 4、紫外线灭菌 波长260-280nm之间的紫外线有很强的杀菌能力，一般紫外灯管能产生253.7nm的紫外光，杀死力强而稳定，但穿透力弱一般只适宜物体表面、空气灭菌。例如接种室、培养室、手术室、药厂包装室等空气灭菌。一般30w灯管、9m3空间，距地面2m每次打开紫外线照射0.5h，就使室内空气灭菌。若照射紫外线时，先喷洒石碳酸等化学消毒剂，可增强灭菌效果。 在进行微生物接种和分离等操作时，常须用紫外线来杀灭接种室（箱）空气、台面等处的微生物。 紫外线虽有较强的杀菌力，但穿透力较弱，即使一薄层玻璃或水层就能将大部分紫外线滤除，因此只适用于空气及表面杀菌。紫外线对眼粘膜及视神经有强烈的损伤作用，对皮肤有刺激作用，所以不能直接在紫外线灯开启下工作和用眼睛直视开启的紫外灯。 5、化学药剂消毒灭菌 微生物实验室中常用的化学杀菌剂有甲醛、高锰酸钾、酒精、碘酒、龙胆紫、石炭酸、新洁尔灭、煤酚皂溶液，它们有的是杀菌剂，有的是抑菌剂， 以上是微生物培养基的灭菌方法说明，如果你的培养基中所有的成分都可以耐高温，那就用压力蒸汽高温灭菌的方式；如果你的培养基中有些成分不耐高温，就可以用除菌过滤的方式除菌，用除菌滤器过滤培养基至已灭菌的培养器中。如果要求不高，部分试验用培养基，可以用煮沸的方式灭菌。 特别是在发酵过程中，培养基灭菌主要有以下几个原因：如不灭菌，会使生物反应的基质或产物，因杂菌的消耗而损失，造成生产能力的下降;杂菌也会产生代谢产物，这就使产物的提取更加困难，造成得率降低，产品质量下降;杂菌大量繁殖后，会改变反应液的pH值，使反应异常;有些杂菌会分解产物，使生产失败;如果发生噬菌体污染，生产菌细胞将被裂解，使生产失败。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                  疣孢漆斑菌的形态特征与菌株培养及打管说明！ 疣孢漆斑菌（Myrothecium verrucaria）属于真菌界非模式菌株。圆形扁平菌落，边缘整齐，黄色，光滑不透明，无迁移性。主要用于土壤微生物资源调查及分类学研究。 一、菌种简介平台编号：Bio-62584规格：冻干物拉丁属名：Myrothecium Verrucaria中文名称：疣孢漆斑菌属名：Myrothecium种名加词：verrucaria来源历史：←东北林业大学生命科学学院收藏时间：2013.12.20原始编号：NF-05资源归类编码：15151916104模式菌株：非模式菌株主要用途：研究具体用途：漆酶高产菌株特征特性：在PDA平板上，菌株NF-05菌丝初为白色绒毛状，菌落圆形，向四周扩散生长，培养5天长有分生孢子座，可见淡黄色至淡绿色分生孢子；培养10天时，分生孢子淡绿色至墨绿色，胶黏团块状；培养20天，菌落呈同心轮纹状覆盖整个平板，分生孢子团加深为黑色，干燥变硬，菌落背面淡褐色，发射状褶皱。菌株NF-05 ITS部分序列长度544 bp，GenBank登陆号HM347341。    生物危害程度：四类致病对象：无分离基物：土壤采集地：黑龙江省伊春市培养基：马铃薯提取液 1.0L，葡萄糖 20.0g，琼脂 15.0g，pH自然。[注] 马铃薯提取液：取去皮马铃薯200g，切成小块，加水1.0L煮沸30min，滤去马铃薯块，将滤液补足至1.0L。培养温度：28℃资源保藏类型：培养物保存方法：-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法实物状态：有实物共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享用途：研究；漆酶高产菌株注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、菌株描述非模式菌株。圆形扁平菌落，边缘整齐，黄色，光滑不透明，无迁移性。革兰氏阳性，菌丝与孢子都可以发育为菌丝体，基内菌丝生长良好，无气生菌丝，表面的基内菌丝断裂成短孢菌丝顶端的孢子链一般有一到二个孢子，肽聚糖的类型为A4，细胞壁的糖类为葡萄糖，甘露糖，半乳糖，主要的甲基萘醌为MK9，细胞含有磷脂酰甘油，磷脂酰肌醇。DNA的G+C含量为72mol%分类学及嗜盐微生物其它方面的研究 三、特征特性从中国土样中筛选到一株能产生胆红素氧化酶的微生物，培养后,分离纯化,最后经QAE—Sephadex A50柱层析,得到胆红素氧化酶比活为207.65 U/A 280nm,总产率为22.3%。纯酶紫外吸收峰为280 nm,凝胶电泳为单一色带。 四、储存条件冻干菌种和试管斜面请置于 2-8℃冷藏。西林瓶菌种请置于-20℃冷冻。甘油请置于-80℃ 五、培养条件1、培养基编号：PDA 培养基2、培养基成分：马铃薯浸提液 1000.0 mL；葡萄糖 20.0 g；琼脂 15.0 g；pH 自然马铃薯浸提液：取去皮马铃薯 200.0 g，切成小块，加水 1000.0 mL 煮沸 30 min，滤去马铃薯块，将滤液补足至 1000.0 mL。以上成分 121℃，灭菌 15 min。液体培养基不加琼脂。推荐使用成品培养基。3、需氧类型：好氧4、培养温度：28℃ 六、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、试管斜面菌种请尽快转接，不建议长期存放。3、初次使用时请按照本说明书推荐条件进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系或更换新的菌种。 七、打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉檫试冻干管表面进行消毒，将管顶端于酒精灯外焰上均匀加热；立即滴 2-3 滴无菌水于加热部位，使管壁破裂；再用镊子或其他适宜工具敲下破裂处。2、菌株恢复培养：用无菌吸管吸取 0.5ml 左右液体培养基(固体培养基去掉琼脂即可)于冻干管中将冻干菌粉全部溶解。将溶解后的菌悬液转移至盛有 4~5mL 液体培养基的试管中混匀，可将残留在吸管中 1-2 滴菌悬液转接至固体培养基上。将液体试管和斜面试管于推荐条件下静置培养。以液体培养结果为准。3、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在 2-8℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，需要转接至 2-3 代恢复活力。4、复苏后的菌种在传 1-2 代后使用。5、暂不启开的安瓿管应于 4℃中保藏（特殊除外）。6、冻干管打开后需一次用完，不能留存。7、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。8、打管操作应在烧杯或托盘上方进行，用完冻干管应灭菌处理后丢弃。9、如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到后 2 个月内联系，逾期不予受理。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                    大鼠肝星状细胞的实验室分离方法与质量检测！ 一、产品信息平台编号：Bio-51607规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶细胞信息：原代细胞产品名称：大鼠肝星状细胞组织来源：肝脏组织产品规格：5×105cells/T25细胞培养瓶用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞简介大鼠肝星形细胞分离自肝脏组织；肝脏是身体内以代谢功能为主的一个器官，并在身体里面起着去氧化、储存肝糖、分泌性蛋白质的合成等作用；肝脏也制造消化系统中之胆汁。肝脏是机体内脏里最大的器官，位于机体中的腹部位置，在右侧横隔膜之下，位于胆囊之前端且于右边肾脏的前方，胃的上方。肝脏是机体消化系统中最大的消化腺，为一红棕色的V字形器官。肝脏是尿素合成的主要器官，又是新陈代谢的重要器官。肝脏在机体位置和形态结构：肝脏位于右上腹，隐藏在右侧膈下和肋骨深面，大部分肝为肋弓所复盖，仅在腹上区、右肋弓间露出并直接接触腹前壁，肝上面则与膈及腹前壁相接。肝星形细胞(HSC)又名肝贮脂细胞、维生素A贮存细胞、窦周细胞、Ito细胞等，是肝脏细胞外基质的主要来源。HSC在激活后可进一步转化为肌成纤维细胞样细胞，各种可导致肝纤维化的因素均将HSC作为最终靶细胞。正常情况下，HSC处于静止状态，当肝脏发生炎症反应或受到机械刺激等损伤时，HSC的表型由静止型转变为激活型，激活的HSC可通过增生和分泌细胞外基质参与肝纤维化的形成及肝内结构的重建，此过程也是肝纤维化的中心环节。肝星形细胞分布于肝脏的Disse间隙内，是合成、分泌细胞外基质的主要来源，在肝纤维化的发生中处于最重要地位。肝星形细胞是肝脏特有的间充质细胞，约占肝脏细胞总数的8%-13%。作为肝脏合成细胞外基质的主要细胞群，肝星形细胞不仅能分泌蛋白多糖、糖蛋白等细胞外基质成分，合成一定量的胶原酶以维持正常的基底膜结构，还能通过其突起的收缩参与肝窦的微循环调节。此外，肝星形细胞能通过合成肝细胞生长因子、胰岛素样生长因子、表皮生长因子等促进肝细胞增殖和肝再生。 三、方法简介实验室分离的大鼠肝星形细胞采用混合酶灌流消化、低速离心、密度梯度离心制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。 四、质量检测实验室分离的大鼠肝星状细胞经α-SMA、Desmin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。 五、培养信息培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等 换液频率 每2-3天换液一次 生长特性 贴壁 细胞形态 成纤维细胞样 传代特性 可传5代左右；3代以内状态最佳 消化液 0.25%胰蛋白酶 培养条件 气相：空气，95%；CO2，5% 大鼠肝星状细胞体外培养周期有限；建议使用BIOBW配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

              贝莱斯芽孢杆菌的培养方法与实验内容及注意事项！ 贝莱斯芽孢杆菌是一类产芽孢的革兰氏阳性细菌，大部分芽孢杆菌具有抗菌谱广、生长迅速、易分离培养、抗逆性强和生物安全性高等优点，从而作为益生菌在农业、食品、工业、医学、冶金、林业、环保以及军事等方面被广泛研究。 一、菌种简介平台编号：Bio-115266规格：冻干物拉丁属名：Bacillus Velezensis中文名称：贝莱斯芽孢杆菌拉丁名称：Bacillus velezensis分离基物：康乃馨主要用途：分析检测，该菌株产胞外多糖，可以进行发酵剂开发曾用名：Bacillus amyloliquefaciens培养基编号：2原始编号：LPL061培养温度(℃)：30℃其他保藏中心编号：24192培养时间(天)：1-2天需氧类型：好氧生物安全级别：一级收藏时间：2020-01-14模式菌株：否用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一种）、原种（二种）和栽培种（三种）三。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备，其中(1)～(4)为孢子制备过程。4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。放线菌孢子的培养基大多是采用麸皮或豌豆浸出液及无机盐与琼脂制成的。将斜面孢子接入扩大的扁瓶孢子培养基中,于28～37℃培养5～14天。所获得的大量孢子可直接作为种子罐(6)的种子。6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶(5)液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐(7)的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。 三、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 四、保存方法1、传代保存法：培养基的浓度不宜过高,营养成分不宜过于丰富,尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种,则应在培养基中添加少量碳酸钙。2、液体石蜡覆盖保存法：该法较前一种方法保存菌种的时间更长,适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。3、悬液保存法：①蒸馏水保存法:适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌,将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。②糖液保存法:适用于酵母菌,如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗处保存,可长达10年。除此之外,也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。4、载体保存法：①土壤保存法;②砂土保存法;③硅胶保存法;④磁珠保存法;⑤麸皮保存法;⑥纸片(滤纸)保存法。5、常用的冷冻保存法：①低温冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃):低温冷冻保存时使用螺旋口试管较为方便,也可在棉塞试管外包裹塑料薄膜。保存时菌液加量不宜过多,有些可添加保护剂。此外,也可用φ5mm的玻璃珠来吸附菌液,然后把玻璃珠置于塑料容器内,再放入低温冰箱内进行保存的。②干冰保存法(-70℃左右):即将菌种管插入干冰内,再置于冰箱内进行冷冻保存。③液氮保存法(-196℃):是适用范围最广的微生物保存法。 五、注意事项1、菌种活化前,将冷冻管保存在低温、清洁、干燥的环境中,长时间室温下放置会导致菌种衰退；2、冷冻管开封、冻干粉复溶、菌株恢复培养等操作应在无菌条件下进行；3、一些菌种经过冷冻干燥保存后,延迟期较长,部分需连续两次继代培养才能正常生长；4、某些厌氧菌的培养,自开封到接种完成。均需以无氧气体充填,以保持厌氧状态;培养过程中亦要保持厌氧状态；5、如发现冷冻管盖松动、复溶液浑浊等异常情况,应停止使用对应产品。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！