耐铀解支链淀粉芽胞杆菌的培养方法与实验内容！

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耐铀解支链淀粉芽胞杆菌是Pullulanibacillus属的微生物，原产地为葡萄牙。主要用途为研究。

一、菌种简介

平台编号：Bio-57010

提供形式：冻干物

拉丁属名：Pullulanibacillus Uraniitolerans

中文名称：耐铀解支链淀粉芽胞杆菌

拉丁名称：Pullulanibacillus uraniitolerans

其它保藏中心编号：=DSM 19429=LGM 24205

来源历史：←DSMZ←M. da Costa, Univ. Coimbra, Portugal←S. Pereira；UG-2

收藏时间：2013/8/4

原始编号：UG-2

原产国：葡萄牙

资源归类编码：15131300000

模式菌株：模式菌株

主要用途：研究

特征特性：耐酸。Genebank登录号;AM931441

生物危害程度：四类

培养基编号：CM0437

培养基名称：脂环酸芽孢杆菌培养基（Alicyclobacillus medium）

培养基成分：A溶液：CaCl2 2H2O 0.25g，MgSO4 7H2O 0.5g，(NH4)2SO4 0.2g，KH2PO4 3.0g，酵母膏 2.0g，葡萄糖 5.0g，蒸馏水 0.5（固体培养基）/1.0(液体培养基)L，pH4.0。B溶液：ZnSO4 7H2O 0.1g，MnCl2 4H2O 0.03g，H3BO3 0.3g，CoCl2 6H2O 0.2g，CuCl2 2H2O 0.01g，NiCl2 6H2O 0.02g，Na2MoO4 2H2O 0.03g，蒸馏水 1.0L。C溶液：琼脂15.0g，蒸馏水 0.5L。[注] 以上溶液单独灭菌，A与1ml B溶液混合制成液体培养基，A，1ml B溶液，C混合制成固体培养基。

培养温度：35℃

需氧类型：好氧

分离基物：铀矿排出物

保存方法：-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法

共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享

用途：研究；

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

二、产品特点

1、菌种功能明确、品种稳定、应用效果显著；

2、本品芽孢含量高，稳定性好、耐高温和挤压；

3、繁殖能力快、定植能力强、易存活、耐受低pH值环境；

4、复活迅速，可在短期内成为优势种群；

5、本品安全高效、无抗药性、不污染环境；

6、对多数抗生素不敏感，可与低浓度抗革兰氏阴性菌抗生素同时使用。

三、培养方法

1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。

2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。

3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。

4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。

5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。

6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。

四、实验内容

1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查

2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物

3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查

4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌

五、保藏方法

1、传代培养保藏法

又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等（后者作保藏厌氧细菌用），培养后于4-6℃冰箱内保存。

2、液体石蜡覆盖保藏法

是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间，它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡，一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。

3、载体保藏法

是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。

4、寄主保藏法

用于目尚不能在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次氏体、螺旋体等，它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代，此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。

5、冷冻保藏法

可分低温冰箱（-20-30℃，-50-80℃）、干冰酒精快速冻结（约-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。

6、冷冻干燥保藏法

先使微生物在低温度（-70℃左右）下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分（真空干燥）。有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液，以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。

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