如何为甲基化特异 pcr 设计引物基因序列查找一般的 pcr 所需序列可以在 ncbi gene 上，但是甲基化发挥作用主要在启动子区域，基因序列要包含第一外显子的上游碱基，所以查找基因序列可以用 ucsu 的 genome browser （http://genome.ucsc.edu/）。点击 genomes 选择对应的染色体标本输入基因名称选择基因转录本注意一个基因可能有多个转录本，在 refseq genes 里选择你要查找的序号。查看基因序列设置参数点击 submit 便出现了外显子大写的的基因序列，可 copy 到 word 里保存供以后参考。在线设计引物利用甲基化设计的网站 meth primer （http://www.urogene.org/cgi-bin/methprimer/methprimer.cgi1）粘贴基因序列。粘贴基因序列包含第一外显子和上游碱基的基因序列。设置条件查看结果网站给出的几个参考的引物相差不大，可以根据自己的需要重新设置条件来重新设计。另外可以根据一些设计引物的原则来筛选合适的引物。我也整理了一些关于引物设计的原则，供参考。网站给出的几个参考的引物相差不大，可以根据自己的需要重新设置条件来重新设计。另外可以根据一些设计引物的原则来筛选合适的引物。我也整理了一些关于引物设计的原则，供参考。参考原则确保目标序列中有非 cpg 的 c 的个数。如果你没有足够的 c 位于非 cpg 内，那么未转化的 dna 和甲基化的 dna 看上去会差不多，以 6～7 个 cpg 为理想。如果低于这个，那么特异性会降低。你会得到非特异性的扩增，因为它区分度不够。让产物短一点亚硫酸氢盐转化的过程会损伤模板 dna，因此尝试扩增较小的片段（小于 150 bp），将得到最佳的结果。如果你通过电泳来运行产物，那么确保你能够将 m 引物的产物与 u 引物的分开。遵守 pcr 的原则 pcr 引物设计的所有原则也适用于 msp。1）引物的退火温度要相当，如果可以的话，将 m 引物和 u 引物设计成相同的条件，这样可同时运行。2）引物之间不要形成二聚体，一般引物自身连续互补碱基不大于 3 bp。

产品及特点本试剂盒是从琼脂糖凝胶中回收dna片段的试剂盒。试剂盒采用可以高效、专一结合dna的硅胶膜和独特的溶胶体系。可从tae、tbe和superbuffer凝胶上回收50 bp－40 kb的dna片段，回收效率最高可达90%。其实验流程如下：             本产品特点是：1. 高效，回收效率高达90%。2. 快速，整个过程只需要十余分钟。3. 纯度高，本试剂盒回收的dna可直接用于酶切、连接、pcr等多种分子生物学实验。4. 用途广，本试剂盒能回收单链、双链及环状dna。5. 价格便宜，比国内绝大多数同种产品的价格便宜。6. 储存方便，试剂盒可以在室温放置数月，不影响其质量。使用及效果在含dna片段的琼脂凝胶块中或dna反应液中，加入加入3倍体积（约0.3-0.5ml）的通用溶胶液，65℃水溶5-10分钟，转移溶液到离心吸附柱中，离心半分钟，加入500-600 μl通用洗柱液，离心半分钟。重复洗涤步骤一次。离心半分钟甩干剩余液体。将离心柱置于新的离心管中，加30-50 μldna洗脱液，离心半分钟，即得样品于离心管中。          答客问q：为何用硅胶膜吸附柱法回收tbe胶中的dna效果不好？a：因为tbe中的硼酸会跟硅胶表面的-oh反应，而这些-oh又是吸附dna所必需的。详细解释请见技术资料----silica-dna结合原理及影响因素。

2017年5月博奥森（Bioss）抗体产品文献引用精选自我们公司推出当月高分文献收录整理之后，获得了许多高校研究人员的好评，肯定了我们的产品品质和在信息收集方面所做出的努力。那么我们这个月将继续推出高分文献收集，供大家了解和熟悉博奥森产品在较高水平文献方面被引用的抗体应用和影响因子。      下面列出了在2017.5.1-5.31期间，由Google Scholar收集并推送的有Bioss产品引用的文献。若您在当月已发表SCI文章，但未被我公司技术人员收集，也请致电我们，我们将赠予现金鼓励，金额标准请参考“好抗体，发文章，千元现金拿回家”活动页面。声明：由于SCI各期刊被Google收录的效率和频率不一样，很可能本月会收到一些较早时间发表的文章。此处文章整理，只为方便科研人员了解博奥森产品。1. [IF=22.387] Fletcher, Russell B., et al. "Deconstructing Olfactory Stem Cell Trajectories at Single-Cell Resolution." Cell Stem Cell (2017).bs-4690R | Tissue factor/CD142 Polyclonal antibody | FCMPubmed ID: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28506465Institution: Department of Molecular and Cell Biology & Helen Wills Neuroscience Institute, University of California, Berkeley, CA 94720, USA.2. [IF=12.328] Pandey, Aseem, et al. "Global Reprogramming of Host Kinase Signaling in Response to Fungal Infection." Cell Host & Microbe 21.5 (2017): 637-649.bs-4002R-PE | phospho-AMPK alpha-1 (Thr172) polyclonalantibody, PE Conjugated | FCMbs-3464R-PE | Phospho-ATG1(Ser556) polyclonalantibody, PE Conjugated | FCMPubmed ID: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28494245Institution: Department of Microbial Pathogenesis and Immunology, Texas A&M Health cience Center, College Station, Texas 77843, USA;3. [IF=12.104] Maekawa, T., et al. "Myeloproliferative leukemia protein activation directly induces fibrocyte differentiation to cause myelofibrosis." Leukemia (2017).bs-2544R-A647 | SLAMF7 Polyclonal Antibody, ALEXA FLUOR®647 Conjugated | FCMbs-10362R-A488 | TPOR Polyclonal Antibody, ALEXA FLUOR® 488 Conjugated | FCMPubmed ID:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28386106Institution: Division of Hematology, Department of Internal Medicine, National Defense Medical College, Tokorozawa, Japan.4. [IF=8.39] Wang, Raymond M., et al. "Humanized mouse model for assessing the human immune response to xenogeneic and allogeneic decellularized biomaterials." Biomaterials (2017).bs-0766R | CD4 Polyclonal Antibody | IHCbs-0648R | CD8 Polyclonal Antibody | IHCPubmed ID: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28334641Institution: Department of Bioengineering, Sanford Consortium of Regenerative Medicine, University of California San Diego, 2880 Torrey Pines Scenic Drive, La Jolla, CA 92037, USA.5. [IF=8.303] Guillaud, Laurent, Dimitar Dimitrov, and Tomoyuki Takahashi. "Presynaptic morphology and vesicular composition determine vesicle dynamics in mouse central synapses." eLife 6 (2017): e24845.bs-10042R-Cy3 | GluR1 Polyclonal Antibody,Cy3 Conjugated | IF(ICC)Pubmed ID: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28432787Institution: Cellular and Molecular Synaptic Function Unit, Okinawa Institute of Science and Technology - Graduate University, Onna, Japan .6. [IF=8.22] Xia, Wenlong, and Jianwei Jiao. "Histone variant H3.3 orchestrates neural stem cell differentiation in the developing brain." Cell Death & Differentiation (2017).bs-0295P |Rabbit IgG|CHIPPubmed ID: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28524856Institution: School of Life Sciences, University of Science and Technology of China, Hefei 230026, China.7. [IF=7.48] Wu, Qiong, et al. "Ultrasensitive magnetic field-assisted surface plasmon resonance immunoassay for human cardiac troponin I." Biosensors and Bioelectronics 96 (2017): 288-293.bs-0296P |Mouse IgG| ImmunoassayPubmed ID: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28505563Institution: College of Chemistry, Jilin University, Qianjin Street 2699, Changchun 130012, PR China.8. [IF=6.24] Chen, Xubo, et al. "The role of sodium hydrosulfide in attenuating the aging process via PI3K/AKT and CaMKKβ/AMPK pathways." Redox Biology (2017).bs-13017R | MDP1/DNA Polymerase gamma Polyclonal Antibody| WBPubmed ID: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28499253Institution: Department of Otorhinolaryngology, Union Hospital of Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430022, China.9. [IF=5.997] R?hr, Dominik, et al. "Sodium-dependent Vitamin C transporter 2 deficiency impairs myelination and remyelination after injury: Roles of collagen and demethylation." Glia (2017).bs-0337R | Myelin Protein Zero Polyclonal Antibody | WB,ICCPubmed ID:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28456003Institution: Department of Sleep Medicine and Neuromuscular Disorders, University Hospital Muenster, Muenster, Germany.10. [IF=5.91] Carpp, Lindsay N., et al. "Quantitative proteomic analysis of host-virus interactions reveals a role for Golgi brefeldin A resistance factor 1 (GBF1) in dengue infection." Molecular & Cellular Proteomics 13.11 (2014): 2836-2854.bs-8041R | HEATR2 Polyclonal Antibody | IPPubmed ID: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24855065Institution: From the?Seattle Biomedical Research Institute, 307 Westlake Avenue North, Suite 500, Seattle, Washington 98109;11. [IF=5.784] Du, Xiaoping, et al. "Antioxidants Reduce Neurodegeneration and Accumulation of Pathologic Tau Proteins in the Auditory System after Blast Exposure." Free Radical Biology and Medicine (2017).bs-1278R | 8-OHdG Polyclonal Antibody | IHC-PPubmed ID: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28438658Institution: Hough Ear Institute, Oklahoma City, OK, USA; Oklahoma Medical Research Foundation, Oklahoma City, OK, USA;12. [IF=5.586] Song, Shang, et al. "An intravascular bioartificial pancreas device (iBAP) with silicon nanopore membranes (SNM) for islet encapsulation under convective mass transport." Lab on a Chip 17.10 (2017): 1778-1792.bs-0561R-Cy3 | CD62p Polyclonal Antibody,Cy3 Conjugated | IF(ICC)Pubmed ID:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28426078Institution:Department of Bioengineering and Therapeutic Sciences, University of California - San Francisco, San Francisco, CA 94158, USA. shuvo.roy@ucsf.edu.13. [IF=5.569] Sakaguchi, Takashi, et al. "Regulation of ITGA3 by the dual-stranded microRNA-199 family as a potential prognostic marker in bladder cancer." British journal of cancer 116.8 (2017): 1077.bs-0061R | beta-Actin Polyclonal Antibody | WBPubmed ID:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28324890Institution: Department of Urology, Graduate School of Medical and Dental Sciences, Kagoshima University, 8-35-1 Sakuragaoka, Kagoshima 890-8520, Japan.14. [IF=5.42] Hu, Jianguo, et al. "Ubiquitin E3 ligase MARCH7 promotes ovarian tumor growth." Oncotarget 6.14 (2015): 12174.bs-9341R |MARCH7 Polyclonal Antibody | IHC-Pbs-1165R | beta catenin Polyclonal Antibody | WBPubmed ID:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/25895127Institution: Department of Obstetrics and Gynecology, Second Affiliated Hospital, Chongqing Medical University, Chongqing, China .15. [IF=5.38] Zhuang, Likun, et al. "MicroRNA-23b functions as an oncogene and activates AKT/GSK3β/β-catenin signaling by targeting ST7L in hepatocellular carcinoma." Cell Death & Disease 8.5 (2017): e2804.bs-0294M-FITC | Mouse Anti-Goat IgG, FITC Conjugated |IF(ICC)bs-0295G-Cy3 | Goat Anti-rabbit IgG, Cy3Conjugated |IF(ICC)Pubmed ID:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28518144Institution: Institute of Transplantation Science, The Affiliated Hospital of Qingdao University, Qingdao, China.16. [IF=5.26] Meng, Guoliang, et al. "Hydrogen sulfide pretreatment improves mitochondrial function in myocardial hypertrophy via a SIRT3 dependent manner." British Journal of Pharmacology (2017).bs-7535R | PGC1 alpha + beta Polyclonal Antibody |WBPubmed ID: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28503736Institution: Department of Pharmacology, School of Pharmacy, Nantong University, Nantong, China.17. [IF=5.23] Ma, Jie, et al. "CMD-05, a novel promising clinical anti-diabetic drug candidate, in vivo and vitro studies." Scientific Reports 7 (2017).bs-0358G-A594 | Goat Anti-Guinea pig IgG,ALEXA FLUOR® 594 Conjugated | IF(IHC-F)bs-0358G-FTIC | Goat Anti-Guinea pig IgG, FITC Conjugated | IF(IHC-F)Pubmed ID:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28406239Institution: Department of Pharmacology, Chongqing Medical University, the Key Laboratory of Biochemistry and Molecular Pharmacology, Chongqing 400016, China.18. [IF=5.16] Liu, Qian, et al. "Cyclophosphamide-induced HCN1 channel upregulation in interstitial Cajal-like cells leads to bladder hyperactivity in mice." Experimental & Molecular Medicine (2017) 49.bs-0294M-A488 | Mouse Anti-Goat IgG | IF(ICC)Pubmed ID:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28428632Institution: Department of Urology, Second Affiliated Hospital, Third Military Medical University, Chongqing, China .19. [IF=5.12] Bobi, Joaquim, et al. "Intracoronary Administration of Allogeneic Adipose Tissue–Derived Mesenchymal Stem Cells Improves Myocardial Perfusion But Not Left Ventricle Function, in a Translational Model of Acute Myocardial Infarction." Journal of the American Heart Association 6.5 (2017): e005771.bs-2527R | CD163 Polyclonal Antibody | IHC-PPubmed ID:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28468789Institution: August Pi i Sunyer Biomedical Research Institute (IDIBAPS), Institut de Malalties Cardiovasculars, Hospital Clínic de Barcelona, Universitat de Barcelona, Spain.20. [IF=5.02] Bai, J. W., et al. "The zinc-finger transcriptional factor Slug transcriptionally downregulates ERα by recruiting lysine-specific demethylase 1 in human breast cancer." Oncogenesis 6.5 (2017): e330.bs-1382R | SNAI2 polyclonal Antibody | IHC-PPubmed ID:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28481366Institution: The Breast Center, Cancer Hospital of Shantou University Medical College (SUMC), Shantou, China.注：以上为部分文献内容，更多详情请登录博奥森官网。

             天恩泽-当之无愧 pcr mix 之王！ 亲们，历时近半月的“谁是你心中的pcr mix之王？”调查，终于尘埃落定。本次调查由我来生物提供平台，页面总浏览次数高达103072次！浏览最高的五个城市       那么重点来了，最高票到底被谁拿走了呢？       快来看看我来君贴出的榜单吧！       没错，是天恩泽！天恩泽！天恩泽！天恩泽！重要的事情说三遍（自家的事情多加一遍，o(∩_∩)o哈哈哈~）。各位拥护者的热情程度完全超出了小编的的想象，小编也充分感受到了各位对天恩泽品牌的热爱，对，热爱！而我们也终于不负众望，以最高票数荣登王位！      话不多说，现在就由小编就来给大家介绍介绍我们天恩泽的王牌明星产品pcr mix吧！      天恩泽 pcr mix，品名：即用型 pcr 试剂盒 3.0 ，货号：90805-1，内含 taq dna 聚 合酶、dntps、mgcl2、反应缓冲液、pcr 增强剂、上样染料等所有 pcr 所需要的 成分, 用户只需加入模板和引物即可进行 pcr 反应, 具有广泛的用途。 本产品特点如下：1. 扩增效率和灵敏度更高。2. 方便，用户只需准备模板和引物既可以进行 pcr 实验。 3. 快捷，操作步骤已经最大限度地简化，能减少污染，降低实验误差。 4. 本产品 a 型含电泳染料,pcr 反应液可直接上样电泳，进一步简化了操作。 5. 产物可直接用于 t 载体克隆，不需要额外的加 a 反应。6. 染料单独提供，方便客户组合。      说到这，小编还要告诉大家一个小秘密哦，我们的pcr mix 可不只是在投票中收获好评，咱的质量和销量也是杠杠的哦，价格呢也是大大的亲民，目前火热促销中，只要6元/ml，各位亲亲们还不快来砸单！      更多详情请关注我们的官网www.tiandz.com，随时get更多促销信息哦！天恩泽独家产品和特色产品小贴士：1、超快核酸电泳液（含核酸染料，不需另加，核酸电泳只需5分钟）2、广谱植物rna提取试剂（成功提取过数百种植物rna，包括让国外著名产品折戟的各种棘手的多糖多醌植物，用户发表过200多篇学术文章）3、超敏病毒核酸纯化试剂盒（超国际著名q公司的同类产品）3、强力外源rnase清除剂（5分钟灭活100ug rnase）4、绿如蓝无毒核酸染料5、高性价比的pcr mix和荧光定量pcr mix6、免提pcr试剂7、一步式质粒dna提取试剂盒6、随机突变pcr（易错pcr）7、topo克隆试剂盒8、ribo-spia扩增试剂9、原位甲基化修饰试剂8、各种感受态细胞9、上百种分子生物学常用菌种现货10、上千种经过测序验证的质粒现货

抗小分子鼠单抗制备1. 抗体类：HSA (人血清白蛋白)抗体，HRP标记的抗HSA (人血清白蛋白)抗体，recProteinA(重组链霉球菌蛋白A)抗体，PE(藻红蛋白荧光素)抗体，FITC(异硫氰酸荧光素)抗体，抗Trastuzumab(曲妥珠，别名Herceptin(赫赛汀))抗体，Her2胞外域（ECD） 抗体 ，Cefalexin(头孢氨苄)抗体，CHO HCP(细胞宿主蛋白)抗体；ADC(抗体偶联药物)“弹头”分子抗体，分为：DM1（美登素）抗体，HRP标记的抗DM1（美登素）抗体，SMCC连接键 抗体，Tubulysin  抗体，HRP标记的抗Tubulysin 抗体， 抗MMAF(甲基奥瑞他汀F)等。 2. 抗原及蛋白类：HER2胞外域（ECD）、recProteinA(重组链霉球菌蛋白A)、HRP标记的DM1（美登素）、HRP标记的Tublysin，等。 3. 技术服务：特定抗原靶点的细胞分选，细胞表面特定抗原靶点数目的测定，蛋白在细胞水平内吞效率检测，小分子单克隆抗体制备等一整套流程服务（包括小分子半抗原的制备、免疫、小分子杂交瘤单抗的获取、抗体及小分子荧光素、生物素和HRP标记等）等。 

免疫组化实验技术对外服务一、免疫组化      免疫组化是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。 二、免疫组化的分类免疫组织化学技术按照标记物的种类可分为免疫荧光法、免疫酶法、免疫铁蛋白法、免疫金法及放射免疫自影法等。三、免疫组化主要步骤:1. 洗载玻片:将载玻片置于重铬酸钾和浓H2SO4混合液中,目的是为了是载玻片上的硅胶等除去,同时使一些肉眼看不见的凹凸不平的表面变平整,便于组织吸附,然后置于清水中清洗,除去残余的重铬酸钾和浓H2SO4(大约冲一个小时左右),再将载玻片浸泡于酒精之中, 然后放到架子上,置于37°C温箱中，将多聚赖氨酸涂布于玻片的表面，由于Lys带正电，而大多数的组织带负电荷，从而产生吸附作用。2. 包埋组织:先在铁模具中加入一些液态石蜡，先稍微冷却，然后再将待包埋的组织置于石蜡之中，并排列整齐，再将塑料模具盒盖上，最后加入少许液体石蜡，进行冷冻，使石蜡变成固态。   3. 切片:将包埋好的组织从模具上取下来，并置于石蜡切片机上，切片机通过调节上下左右来来使组织和切割方向一致，然后调节切片的厚度，一般为5μm,如果比较难切，则可以适当调整厚度，用毛笔将切割的载玻片向外拉，并用小镊子将包含有完整组织的载玻片置于40°C温水中。   4. 捞组织:当组织载玻片置于40°C温水中之前，要先将水浴中的气泡赶走，以免气泡受热上浮而贴到组织上，组织受热展开，最好是组织不起皱纹，用载玻片捞组织时，一般取载玻片的下1/3或者下1/2一般每种组织捞5-6张，其中2-3张是备用的，每张载玻片上通常捞两份组织，做对照使用，这样形成的误差就比较小了，而且捞载玻片的时候最好方向一致，以便观察，再将捞出来的载玻片置于架子上，放入37°C温箱中烘干。   5. 脱蜡:依次将载玻片放入二甲苯-二甲苯-100%酒精-100%酒精-95%酒精-90%酒精-80%酒精-70%酒精，起脱蜡作用的主要是二甲苯,依据的是相似相溶的原理.一般在每个试剂中放10min,天气热可以少放几分钟,相反,天气较冷的话,就要适当延长脱蜡时间,一般为12-15min.   6. 抗原修复:脱蜡后在清水中冲洗一段时间，加入3%H2O2浸泡10min，从而除去内源性的过氧化氢酶，然后倒掉H2O2，在清水中洗两次，再加入柠檬酸缓冲液，放入微波炉中蒸煮3min（中火），一般刚到沸腾即可，冷却至室温，然后再蒸煮一次，冷却至室温，蒸煮的目的是为了使抗原的位点暴露出来。   7. 血清封闭:冷却至室温后，将柠檬酸缓冲液倒掉，水洗2次，并将载玻片置于PBS中5min，洗2次，擦干组织周围的PBS液，马上加上血清，使一些非特异性的位点封闭起来，然后放入37°C温箱中半小时。血清稀释10倍（900μlPBS：100μl血清封闭液）。   8. 加一抗:将温箱中的载玻片取出，用吸水纸擦干载玻片反面和正面组织周围的血清，加一抗，如果做对照实验，就在对照的组织上加PBS。加完一抗后于4°C冰箱中保存过夜。   9. 加二抗:将载玻片从冰箱中取出，放入PBS中洗3次，每次5min，擦干组织周围的PBS后加上二抗,然后置于37°C温箱中半小时。   10. 加SABC:将片子从温箱中取出, 放入PBS中洗3次，每次5min，擦干组织周围的PBS后加上SABC, 然后置于37°C温箱中半小时。SABC稀释100倍（990μlPBS：10μlSABC）。   11. 加显色剂:将片子从温箱中取出, 放入PBS中洗3次，每次5min，擦干组织周围的PBS后加上显色剂。（显色剂的配置：在1ml水中加1滴显色剂A，摇匀，然后加1滴显色剂B，摇匀，再加1滴显色剂C，摇匀）   A：DAB        B：H2O2        C：磷酸缓冲液   12. 复染:将显色后的片子用清水冲洗一段时间后，浸泡于苏木精中染色，一般动物组织为半分钟，植物组织3-5min。   13. 脱水:将复染后的片子置于水中冲洗后，依次将载玻片放入70%酒精-80%酒精-90%酒精-95%酒精-100%酒精-100%酒精-二甲苯-二甲苯。每个试剂中放置2min，最后浸泡在二甲苯中，搬到通风柜中。   14. 封片:用中性树胶滴在组织旁边，再用盖玻片盖上，要先放平一侧，然后轻轻放下另一侧，以免产生气泡，封好片子后置于通风柜中晾干。 四、免疫组化的相关试剂一抗、二抗体 ，注意抗体的特异性、效价和交叉反应，最好用单抗。其他常用试剂有：1、0.01M(pH7.4)的磷酸盐缓冲生理盐水（PBS），稀释抗体和洗片子用；2、清洁液、纯水，洗玻片用3、多聚赖氨酸处理载玻片，防止脱片4、固定液：4%多聚甲醛或冷丙酮等；5、15%~30%蔗糖，组织脱水用；6、梯度酒精脱水、二甲苯透明、石蜡包埋，或者OCT包埋做冰冻切片；7、抗原修复液：枸橼酸缓冲液（pH6.0）；8、活化剂：EDTA或者Triton X-100；9、1%~10%牛血清清蛋白（BSA）封闭液；10、H2O2，灭活内源性过氧化物酶；11、显色液：根据你做的酶来选择，如果是HRP就用DAB，如果是AKP，就用NBT/BCIP，免疫荧光则不需要；12、50%缓冲甘油封片液。

ELISA固体样本处理方法固体样本处理方法：        固体样本处理原则：称取1g的固体样本，用9g的合适缓冲液溶解，分泌蛋白可以直接离心取上清检测，细胞内的蛋白，要先收集细胞，再用合适方法破碎，离心取上清测试。1、组织标本：切割标本后，称取1g组织，加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS，用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清。分装一份待检测，其余冷冻备用，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。对于植物组织，不好匀浆的话，就用液氮研磨，将植物组织放在研钵中，加入适量液氮，充分研磨。2、细胞内蛋白样本：许多待测蛋白不是分泌蛋白，而是存在于细胞内的蛋白，这个时候，要先收集细胞，洗涤干净，再破碎细胞，离心取上清。（1）培养的细胞A、动物细胞：用PH7.2-7.4的PBS稀释细胞悬液，使细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融（如果反复冻融，破碎效果不好，就采用超声波破碎），以使细胞破坏并放出细胞内成份。2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。B、植物细胞：用PH7.2-7.4的PBS稀释细胞悬液，使细胞浓度达到100万/ml左右，置于冰盒上，用超声破碎仪，设置破碎2s，冷却30s的方式，充分破碎细胞，以使细胞破坏并放出细胞内成份。2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。（2）组织的细胞切割标本后，称取1g组织，加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS，用手工或匀浆器将标本匀浆充分。2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），去除上清，再用pH7.2-7.4左右的PBS小心洗涤沉淀的细胞三遍。再用上述的细胞破碎方法破碎细胞。3、土壤：称取1g土壤，加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS，用手工将标本充分混匀。2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清。分装一份待检测，其余冷冻备用，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。如果是测分泌蛋白，直接取上清检测，测试细胞内蛋白，要破碎细胞。4、咽拭子：加入2g的pH7.2-7.4左右的PBS，溶解咽拭子头部，摇匀，用镊子取出咽拭子并挤干液体，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清。分装一份待检测，其余冷冻备用，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。如果是测分泌蛋白，直接取上清检测，测试细胞内蛋白，要破碎细胞。5. 植物标本的采集及保存 1、 称取0.1g（误差±3%以内）新鲜植物组织样本，在液氮中充分研磨；2、 加入1ml的提取液（80%甲醇）, 置于-20度过夜；3、 于4度，8000rpm，离心1小时，取上清；4、 上清液过C-18固相萃取柱。具体步骤是： 80%甲醇（1ml）平衡柱→上样→收集样品→移开样品后用100%甲醇（5ml）洗柱→100%乙醚（5ml）洗柱→100%甲醇（5ml）洗柱→循环。过柱后的样本真空干燥或氮气吹干，保存备用；5、 上样前加入pH7.4 PBS缓冲液（1ml定容）。混匀后室温放置30分钟，然后4度离心（8000rpm，15分钟），取上清并暂时保存于4度待用。样本收集注意事项1、不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。2、标本采集后尽快进行实验，若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。3、我们罗列的是通用的样本处理方法，无法涵盖各种样本，对于一些特殊样本，建议实验人员多参考已发表的文献，自行设计合理的样本处理方法。

elisa试剂盒免费代测服务“信裕生物”始终以"提供最好的质量给客户，为客户的利益服务"为理念。拓展顶尖的产品研发与经验丰富的技术团队，致力于创新产品的研发。目前，江莱生物实验室占地约800平米，内设国际先进实验仪器设备，能够完成elisa检测、pcr扩增、免疫学检测等各类生物学实验。江莱生物经过10年elisa试剂盒技术的积累与沉淀，不断创新突破，努力将中国生命科学研究提升到全新的高度！服务承诺：凡购买本公司目录任何一种酶联免疫检测试剂盒，您只需将需要检测的动物（human, rat, mouse, rabbit, monkey, pig……）种类和检测指标（白介素类、激素类）及标本数量（48t/96t）通知公司业务员即可。样本要求：在收集标本前都必须有一个完整的计划，必须清楚要检测的成份是否足够稳定。我们提倡新鲜标本尽早检测，对收集后当天就进行检测的标本，及时储存在4℃备用，如有特殊原因需要周期收集标本，请造模取材后，将标本及时分装后放在-20℃或-70℃条件下保存。因冰室与室温存在一定温差，蛋白极易降解，直接影响实验质量，所以避免反复冻融。代测放免标本的客户取材前须向我司销售人员索要说明书，具体操作注意事项请与我司技术人员沟通。液体类标本：标本必须为液体，不含沉淀。包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等。血清：室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。收集上清。如有沉淀形成，应再次离心。血浆：应根据试剂盒的要求选择edta、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，加入10%（v/v）抗凝剂(0.1m柠檬酸钠或1%heparin 或2.0%edta.na2)混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。如有沉淀形成，应再次离心。尿液、胸腹水、脑脊液：用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。如有沉淀形成，应再次离心。细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用pbs（ph7.0-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的pbs，缓冲液中可加入1μg/l蛋白酶抑制剂或50u/ml的aprotinin（抑肽酶）。用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清置于-20度或-70度保存，如有必要，可以将样品浓缩干燥。分装后一份待检测，其余冷冻备用。寄标本时需注明以下情况：1、标本编号；2、所测项目；3、是否做复孔；4、联系方式；5、实验后标本是否寄回。

常用的细胞培养方法、污染及污染处理细胞培养技术是生物工程中最基础最核心的技术,该文简述了常用的细胞培养方法、污染及污染处理供各单位借鉴。1.细胞培养的条件和要求1.1环境:体外细胞培养仅是对所需的细胞进行培养,但环境中有各种微生物,必须对所需细胞进行无杂菌隔离培养。1.2细胞培养中必须有足够的营养供应,而绝对不可有有害物质,细胞培养对水质要求很高,必须杜绝微生物污染及有害离子存在,一般采用蒸馏和离子交换相结合的方法,最后再通过除菌灭菌。营养物包括:N源、C源;无机盐、维生素、激素。细胞培养液的设计一直是细胞离体培养技术的关键。理想的细胞培养液可以同时解决细胞离体培养所需要的pH、渗透压、营养物、调节物质的全部需要。1.3保证有适量的氧气供应:在用培养瓶进行静置或旋转培养时,只要培养的液体量不超过总容量的30%,通过与液面的空气交换,可以保证细胞有足够的氧气。当用罐子深层培养时,则必须通气,一般采用含5%CO2的空气。1.4需随时清除细胞代谢中产生的有害产物。细胞在代谢过程中会产生大量代谢废物必须及时清除,如CO2、乳酸、氨、尿素、吲哚等。在小量培养时,当培养基中酚红指示剂显示黄色。

两种大鼠视网膜Müller细胞培养方法比较Müller细胞是脊椎动物视网膜胶质细胞中最重要的一种,它约占哺乳动物视网膜胶质细胞的90%,结构上贯穿视网膜全层,起支持骨架作用,功能上更是视网膜代谢的中心[1],对视网膜的正常发育及功能的维持起决定性作用。而且参与青光眼、糖尿病视网膜病变、增殖性玻璃体视网膜病变等病理过程[2]。近年研究显示,Müller细胞还具有潜在神经干细胞特性[3]。体外培养视网膜Müller细胞模型,可为视网膜细胞发育学、生理学、病理学等提供研究平台。本研究旨在比较酶消化法与组织块法培养大鼠视网膜Müller细胞的效果,为以后的实验研究提供合适的细胞培养方法。1材料与方法1.1实验动物及主要试剂出生3d的SD大鼠10只,雌雄不限(山东鲁抗医药股份有限公司提供),DMEM/F12培养基、D-Hanks液、2.5g/L胰蛋白酶、胎牛血清、磷酸盐缓冲液(PBS)(Hyclone公司),青霉素、链霉素、TritonX-100,40g/L多聚甲醛,兔抗鼠谷氨酰胺合成酶(GS)抗体(稀释度1∶100,Abcam公司),生物素标记的山羊抗兔IgG。

 尊敬的各位经销商伙伴、各位顾客朋友： 　　根据国家“端午节”放假规定，结合本公司实际情况，现特就2017年“端午节”放假安排通知如下： 　　5月28日至30日放假调休，共三天。5月27日(星期六)上班，补5月29日(星期一)的班。 　　放假期间，客服400热线暂停服务，放假期间我司暂无发货安排，如需备货请提前与我司业务员沟通，由此给您带来的不便敬请原谅!  　　                                                                特此通知                                                       上海信裕生物科技有限公司　　                                                           2017年5月26日

RNase清除剂的使用方法RNase清除剂分为固相和液相两种，是特殊的RNase灭活剂。它含有多种成分，能高效灭活玻璃、塑料表面的 RNase污染，可在5分钟内将固体表面的多达100μg的RNase彻底灭活。液相RNase清除剂使用：1.本品20X 液相RNase 清除剂，分装成小包装放-20℃长期保存。20X液相RNase 清除剂溶液的有效期为六个月。2.使用时在待处理的溶液或反应液中加入 1/20 体积的 RNaseRemoverII（如：100 uL 溶液中可加 5 uL RNaseRemoverII）。 如果用于溶解提取或纯化的 RNA 样品，需要先用超纯水将 RNaseRemoverII稀释 20 倍，然后直接用于溶解 RNA（注意：稀释后的RNaseRemoverII不能长期保存，只能现配现用）。3.60℃处理 20 分钟以使污染的 RNase 失活。4.冷却至室温即可使用，或置于-20℃长期保存。5.对 60℃处理敏感的酶(如 RNA 多聚酶)应在 60℃处冷却后再加入。 6.处理过的溶液随时可以再处理（60℃ 10-20 分钟），以去除任何可能发生的RNase 污染。7.如果溶液中有不能用60℃处理的样品，也可以用37℃处理 20 分钟，但最 多只能灭活 50 ng/mL 的 RNase 。固相RNase清除剂使用：水的处理：直接将固相RNase清除剂原液按1:1000的比例加入到需要处理的水中，混合均匀后室温放置24小时即可直接使用，得到的水可以配制电泳溶液和裂解液。但如果需要溶解RNA。工作平台的清洁：直接将固相RNase清除剂原液或10倍的新鲜稀释液喷于台面，5分钟后用普通吸水纸擦净，最后用沾有固相RNase清除剂1000倍新鲜稀释液的吸水纸擦净，晾干。实验仪器的清洁：用浸有固相RNase清除剂原液或10倍的新鲜稀释液的纸擦拭仪器表面，再用吸水纸擦净，最后用沾有固相RNase清除剂1000倍新鲜稀释液的吸水纸擦净，晾干。用固相RNase 清除剂原液处理金属器械的时间不能超过5分钟。玻璃和塑料器皿的清洁：将器皿浸泡在固相RNase 清除剂的10或100倍的新鲜稀释液中，静置处理5分钟后取出，再用固相RNase清除剂1000倍或10000倍新鲜稀释液浸泡二次以上，倒立晾干后备用。移液枪的清洁：根据生产厂家的使用手卸下移液枪的前端，留下接口塞和圈套后将其浸放在固相RNase清除剂的10或100倍的新鲜稀释液中一分钟，再用固相RNase清除剂1000倍或10000倍新鲜稀释液彻底冲洗后，晾干，装回移液枪。塑料离心管和滴头的清洁：将反应塑料离心管和滴头充分浸泡在固相RNase清除剂的1000倍的新鲜稀释液中5分钟以上(最好不要有气泡)， 然后再用固相RNase清除剂1000倍或10000倍的新鲜稀释液充分浸泡两次，试管或离心管可立即使用或干燥后备用。

LB培养基的作用及配置LB培养基是微生物学实验中最常用的培养基，用于培养大肠杆菌等细菌。其分为液态或是加入琼脂制成的固态培养基。早LB培养基中加入抗生素还可用于大肠杆菌为宿主的克隆。LB一般被解释为Luria-Bertani培养基,然而根据其发明人贝尔塔尼(Giuseppe Bertani)的说法,这个名字来源於英语的lysogeny broth,即溶菌肉汤.LB培养基的配置：成分：胰蛋白胨(tryptone) 10g；酵母提取物(yeast extract) 5g；氯化钠(NaCl) 10g；配制方法：　　（1）称量 分别称取所需量的胰化蛋白胨、酵母提取物和NaCl，置于烧杯中；　　（2）溶化 加入所需水量2/3的蒸馏水于烧杯中，用玻棒搅拌，使药品全部溶化；（3）调pH 用1mol/L NaOH溶液调pH至7.2；　　（4）定容 将溶液倒入量筒中，加水至所需体积；　　（5）加琼脂 加入所需量琼脂，加热融化，补足失水；　　（6）分装、加塞、包扎；　　（7）高压蒸汽灭菌100Pa灭菌20min；固体培养基另加 琼脂粉 15-20g；LB固体培养基1L和液体一样，加10g~15g琼脂粉，一定要在温度降下之前加好抗生素，并且倒好板。LB固体培养基倒板：1.配制：100mlLB培养基加入1~1.5g琼脂粉2.抗生素的加入：高压灭菌后，将融化的LB固体培养基置于55℃的水浴中，待培养基温度降到55℃时（手可触摸）加入抗生素，以免温度过高导致抗生素失效，并充分摇匀。3.倒板：一般15ml-20ml倒1个板子。培养基倒入培养皿后，打开盖子，在紫外下照10-15分钟。4.保存：用封口胶封边，并倒置放于4℃保存，一个月内使用。LB培养基与琼脂培养基之间的两大区别：区别一：琼脂培养基就是加了琼脂粉凝结成固体的LB培养基。固体的培养基用于细菌涂板，抗性筛选挑选单克隆之用 液体的用于单克隆菌种扩大培养，提取目的基因或者蛋白之用。区别之二：就是LB培养基是液体的，而营养琼脂培养基(牛肉膏蛋白胨培养基)是固体 具体的配方问题—— LB培养基的配方如下: 胰蛋白胨(Tryptone) 10g/L 酵母提取物(Yeast extract) 5g/L 氯化钠(NaCl) 5g/L。另外根据经验值用NaOH调节该培养基的pH,使其达到7.4，然后来培养E-coli。 营养琼脂培养基配方： 牛肉膏 0.3g 蛋白胨 1g 氯化钠 0.5g 琼脂 2g 自来水 100mL pH 7.0～7.2。

微生物鉴定中常用的生化反应实验原理有些细菌具有合成淀粉酶的能力，可以分泌胞外淀粉酶。淀粉酶可以使淀粉水解为麦芽糖和葡萄糖，淀粉水解后遇碘不再变蓝色。细菌产生的脂肪酶能分解培养基中的脂肪生成甘油及脂肪酸。脂肪酸可以使培养基pH下降，可通过在油脂培养基中加入中性红做指示剂进行测试。中性红指示范围为pH6.8（红）～8.0（黄）。当细菌分解脂肪产生脂肪酸时，则菌落周围培养基中出现红色斑点。某些细菌分泌蛋白酶分解明胶，产生小分子物质。如果细菌具有分解明胶的能力，则培养基可由原来固体状态变成液体状态。牛乳中主要含有乳糖、酪蛋白等成分。细菌对牛乳的利用主要是指对乳糖及酪蛋白的分解和利用。牛乳中常加入石蕊作为酸碱指示剂和氧化还原指示剂。石蕊中性时呈淡紫色，酸性时呈红色，碱性时呈蓝色，还原时则部分或全部脱色。细菌对牛乳的利用可分三种情况：（1）酸凝固作用：细菌发酵乳糖后，产生许多酸，使石蕊牛乳变红，当酸度很高时，可使牛乳凝固，此称为酸凝固。（2）凝乳酶凝固作用：某些细菌能分泌凝乳酶，使牛乳中的酪蛋白凝固，这种凝固在中性环境中发生。通常这种细菌还具有水解蛋白质的能力，因而产生氨等碱性物质，使石蕊变蓝。（3）胨化作用：酪蛋白被水解，使牛乳变成清亮透明的液体。胨化作用可以在酸性条件下或碱性条件下进行，一般石蕊色素被还原褪色。实验材料1、活材料：大肠杆菌（E. coli）、枯草杆菌（Bacillus　subtilis）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、产气肠杆菌（Enterobacter aerogenes）、黏乳产碱杆菌（Alcaligenes viscolactis）、铜绿假单胞菌（Psudomonas aeruginosa）、普通变形杆菌（Proteus vularis ）。2、培养基：淀粉培养基：牛肉膏蛋白胨培养基加0.2%的可溶性淀粉；油脂培养基：牛肉膏蛋白胨培养基加花生油10mL、0.6%中性红水溶液1mL；明胶液化培养基：蛋白胨5g，明胶100～150g，水1000mL, pH7.2～7.4，115℃灭菌20min。石蕊牛乳培养基：牛奶粉100g、石蕊0.075g、水1000 mL、pH6.8，121℃灭菌15 min 。3、试剂：卢哥氏碘液。实验用品平皿、接种环、酒精灯、试管、接种针等。实验方法（一）淀粉水解试验1、准备淀粉培养基平板：将熔化后冷却至50℃左右的淀粉培养基倒入无菌平皿中，待凝固后制成平板。2、接种：用记号笔在平板底部划成两部分，在每部分分别写上菌名，用接种环取少量的待测菌，点接在培养基表面的相对应部分的中心，其中一个菌种应是枯草杆菌做对照菌。★你能解释原因吗？3、培养：将接种后的平皿置于28℃恒温箱培养24h。4、检测：取出平板，打开平皿盖，滴加少量的碘液于平板上，轻轻旋转，使碘液均匀铺满整个平板。菌落周围如出现无色透明圈，则说明淀粉已经被水解，表示该细菌具有分解淀粉的能力。可以用透明圈大小说明测试菌株水解淀粉能力的强弱。（二）油脂水解试验1、将装有油脂培养基的三角瓶置于沸水浴中熔化，取出并充分振荡，使油脂均匀分布，再倾入无菌平皿中，待凝固成平板。2、接种：于同一平皿的两边接种，其中一种是金黄色葡萄球菌作为对照菌。置于37℃恒温箱培养24h，取出后观察平板菌苔颜色，如果出现红色斑点，即说明脂肪被水解了，此反应为正反应。红色斑点大小说明测试菌株水解脂肪能力的强弱。（三）明胶液化试验1、接种：用穿刺接种法接种大肠杆菌或产气肠杆菌于明胶培养基中。2、培养：放20℃恒温箱中培养48h。若细菌在20℃下不长，则应放在最适温度下培养。3、观察结果：观察培养基有无液化情况及液化后的形状。因明胶在低于20℃时凝固，高于25℃时自行液化，若是在高于20℃下培养的细菌，观察时应放在冰浴中观察，若明胶被细菌液化，即使在低温下明胶也不会再凝固。（四）石蕊牛乳试验1、接种：将黏乳产碱杆菌和铜绿假单胞菌接种入石蕊牛乳培养基中。2、培养：将接种后的试管于37℃恒温培养7d，另外保留一支不接种的石蕊牛乳培养基作为对照。3、结果观察：取出培养物，以不接种任何细菌的试管为对照，观察接种不同细菌生长后的变化情况。

GST-pulldown操作流程实验目的：体外检测蛋白质与蛋白质之间相互作用。用于验证两个已知蛋白的相互作用，或者筛选与已知蛋白相互作用的未知蛋白。实验原理：利用重组技术将探针蛋白与GST（Glutathione S transferase）融合，融合蛋白通过GST与固相化在载体上的GTH（Glutathione）亲和结合。因此，当与融合蛋白有相互作用的蛋白通过层析柱时或与此固相复合物混合时就可被吸附而分离。试剂：NaCl， KCl，Na2HPO4，KH2PO4，Triton-100，IPTG(Merck分装)，PMSF（Amersco），Cocktaier（Merck 539134），Immobilized Glutathione（PIERCE 15160）实验操作程序：材料及试剂探针蛋白与GST融合的原核蛋白，裂解的细胞蛋白，或者组织蛋白提取物细胞蛋白裂解液，洗脱液：PBS及PBS+1%Triton-100PBS (1L)NaCl：         8gKCl：          0.2gNa2HPO4：     1.44gKH2PO4：      0.24g加入800ml蒸馏水，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L即可，高温高压灭菌！4℃保存备用！PMSF(苯甲基磺酰氟) MW:174.19 工作浓度0.1-1mM，这里使用1mM，储存浓度100mM，将0.174g PMSF溶于10ml无水乙醇混匀即可！保持于-20℃或者4℃（以下流程仅供研究已知原核蛋白A和真核过表达蛋白B相互作用）1：原核融合蛋白A的获得1.1：将编码蛋白A与GST的重组质粒化转BL21(DE3)菌株1.2：挑取单个克隆到含有5mlLB(+100ug/mlAmp)的10ml试管里，37℃培养过夜1.3：将培养菌液转移到含有500ml LB(+100ug/mlAmp)的1L锥形瓶中，37℃，225rpm培养至OD600≈1.0-1.5左右，加入适当浓度的IPTG，在适当温度下培养适当时间（诱导条件需要根据不同的蛋白做调整），6000g，10分钟，4℃离心收集细菌，去尽上清，将菌体至于-20℃放置O/N1.4：室温冻融菌体，马上置于冰上，每500ml培养液加入10-20ml细菌裂解液（PBS+1%Triton-100+PMSF），吹打混匀1.5：冰上超声破碎，开2秒，停9秒，总40-60分钟。至裂解液充分清凉1.6：11000rpm，15分钟，4℃离心分离上清， -80℃保存备用2：真核融合蛋白B的获得2.1：将编码B蛋白的碱基序列克隆到编码标签蛋白（如HA,或者myc）的真核表达载体上，进行细胞转染3：48小时后，取适量融合蛋白GST-A冰上冻融4：取50-70ulGST-Beads（Immobilized Glutathione）到EP管中，用800ul PBS+1%Triton-100润洗一次，将冻融融合蛋白GST-A与之混匀，4℃层析柜旋转结合1小时。5：PBS+1%Triton-100洗3次，PBS洗3次。留取20ul（ PBS+Beads）作Offer。6：同时，裂解真核融合蛋白B，去尽培养基，用PBS(RT)洗一次，加入300ul裂解液（以6well为例，PBS+1%Triton-100+ Cocktaier），4℃放置30分钟。7：吹打收集至1.5mlEP管，超声破碎。13000rpm，15分钟，4℃离心取上清。8：BCA蛋白定量（optional）留取20ul做Offer，其余样品加入到已纯化蛋白的EP管中，用PBS补足液体到600ul左右，以便蛋白之间能充分结合！4℃旋转结合O/N9：PBS+1%Triton-100洗3次，PBS洗3次。10：40ul 5×loading buffer溶解beads上的蛋白，煮沸3分钟，高速离心，Run –SDS PAGE做Western Blot检测。用HA或者myc Blot。

与Bioss 一起寻找舌尖上的美味活动方案说明各位值得尊重的Bioss 代理商：您好！首先感谢大家在销售Bioss 产品所付出的艰辛努力，感谢您对Bioss 的支持和厚爱！为了促进各地区销售，回馈客户，Bioss 在2017 年5 月20 日-2017年6 月10 日，推出“与Bioss 一起寻找舌尖上的美味，买Bioss 抗体就送好利来蛋糕券、哈根达斯券活动”，活动方案说明如下：一、活动时间：活动预热宣传时间：2017 年5 月4 日开始活动时间：2017 年5 月20 日-2017 年6 月10 日二、活动涉及区域：国内市场三、活动方式：（1）Bioss 官网：www.bioss.com.cn 进行推广。（2）微信：公众号推广；（3）附件为本次活动的宣传单页，各地代理商可根据地区情况，选择线上、线下推广模式，宣传单页可自行印刷。四、活动详细方案：（1）在2017 年5 月20 日至2017 年6 月10 日期间，凡是从博奥森经销商或者博奥森直接购买产品的终端科研客户（不包含技术服务），单笔订单金额或活动期间订单金额累计达到奖励要求，即可获得哈根达斯、好利来蛋糕券！（2）赠送券金额：满1000 元，可获得100 元好利来蛋糕券；满2000 元，可获得200 元哈根达斯、好利来蛋糕券（任选其一）；满3000 元，可获得300 元哈根达斯、好利来蛋糕券（任选其一）；满4000 元，可获得500 元哈根达斯、好利来蛋糕券（任选其一）；满5000 元，可获得600 元哈根达斯、好利来蛋糕券（任选其一）；（3）活动规则需注意并牢记的事项：1、购买金额，以发票(销售单)金额为准；2、仅限2017 年5 月20 日-2017 年6 月10 日期间所购买产品的订单，订单日期以我公司收到订单之日为准。3、本次活动只针对终端科研客户；4、以第一时间填写“与Bioss 一起寻找舌尖上的美味申请表”的信息为准，重复领取不予派发；5、如领取券后，发生退货情况，剩余货款价格不足博奥森规定的领取券金额或者不足其所领取券的奖金级别时，已领取券的金额从退货款中扣除；6、券发放日期，以收到您的“与Bioss 一起寻找舌尖上的美味申请表”起，7 个工作日内发放到客户手中。7、如您的地区没有哈根达斯、好利来蛋糕店，可替换等值其他礼品或现金红包。8、本次活动截止日期：2017 年8 月31 日9、本次活动最终解释权归北京博奥森生物技术有限公司所有。（4）领取方式奖励申领流程：1.客户登录官网页面填写在线申请表填写申请表；2.客户关注博奥森公众号填写在线申请表；注：哈根达斯、好利来蛋糕券为电子券，我们在收到申请表审核后，7 个工作日发放电子券给客户。您如有任何疑问，欢迎随时致电Bioss（电话：400.901.9800）或在Bioss 代理商群与我们联系。Bioss 将一如既往以高质量的产品和优质服务全力支持各地代理商的工作，让我们通过此次活动再创佳绩！                                            北京博奥森生物技术有限公司                                                  2017 年5 月4 日

详解16种肿瘤标志物，看完不再困惑 肿瘤标志物在1978年就被发现了，它是指在血液、体液及组织中可检测到的与肿瘤相关的物质，达到一定水平时，可反映某些肿瘤的存在。血清肿瘤标志物分类： 一个最广谱的指标：癌胚抗原（cea）1965年发现的cea可谓是最广谱的指标，它的升高可见于结/直肠癌、胃癌、肺癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、子宫及子宫颈癌、泌尿系肿瘤等，其他恶性肿瘤也有不同程度的阳性率。总之，腺癌中cea最容易升高，其次是鳞癌和低分化癌。肿瘤分期晚、瘤体负荷大、肿瘤转移者，也会出现cea升高。此外，肝硬化、肝炎、肺气肿、肠道憩室、直肠息肉、结肠炎等良性病也会导至cea升高，胸腔积液、腹水、消化液、分泌物中的cea常常升高33%的吸烟人群的cea会升高，需要特别注意。肝癌：甲胎蛋白（afp）afp是一个古老但优秀的肿瘤标志物，在原发性肝癌中特异性很高，阳性率达70%。如果患者有乙肝病史、肝脏有包块、afp＞400ng/ml且持续1个月，即可诊断为肝癌。除肝癌之外，内胚窦癌、畸胎瘤、睾丸癌、卵巢癌、胃癌伴肝转移者afp也会升高，病毒性肝炎、肝硬化患者绝大部分也会出现afp升高，但不会超过400ng/ml。妇女妊娠3个月后，afp开始升高，7~8个月时达到高峰（也不会超过400ng/ml），分娩3周后恢复正常。卵巢癌：糖类抗原125（ca125）ca125在临床上最重要的意义就是反映卵巢癌，阳性率达61.4%，且ca125是判断卵巢癌疗效和复发的良好指标，治疗有效时ca125下降，复发则ca125升高先于症状。 本文来自ca125于其他恶性肿瘤也有一定的阳性率，宫颈癌、 m体癌、子宫内膜癌中阳性率为43%，胰腺癌50%，肺癌41%，胃癌47%，结直肠癌34%，乳腺癌40%。 本文来自其他非恶性疾病也有不同程度的ca125升高，虽然阳性率较低，也需引起警惕，如子宫内膜异位症、盆腔炎、卵巢囊肿、胰腺炎、肝炎、肝硬化、结核。良、恶性胸、腹水中都会发现ca125升高，所以不能借此判断其良恶性早期妊娠，也有ca125升高。乳腺癌：糖类抗原15-3（ca15-3）ca15-3在乳腺癌诊断方面有重要的临床意义。在乳腺癌初期的敏感性较低，为30%，于乳腺癌晚期敏感性高达80%，对乳腺癌的疗效观察、预后判断、复发和转移的诊断有重要的价值。 本文来自其他恶性肿瘤也有一定的阳性率，在肝、胃肠道、肺、乳腺、卵巢等非恶性肿瘤性疾病中阳性率不足10%。消化系统：糖类抗原19-9（ca19-9）ca19-9是消化系统肿瘤中一个重要的指标，在胰腺癌、胆囊癌、胆管壶腹癌中，ca19-9明显升高，尤其是胰腺癌，晚期阳性率可达75%。此外，胃癌、结/直肠癌、肝癌中ca19-9阳性率分别为50%、60%、65%。同样，ca19-9升高也不要着急诊断为癌症，急性胰腺炎、胆囊炎、胆汁淤积性胆囊炎、肝炎、肝硬化等一些消化道炎症中，ca19-9也有不同程度的升高。利用ca19-9鉴别癌性黄疸和阻塞性黄疸：后者ca19-9一般＜200 u/ml； 本文来自鉴别胰腺癌和慢性胰腺炎：前者ca19-9明显升高、后者正常。糖类抗原242（ca242）ca242临床应用较少，在腺癌中升高明显，在非鳞状组织中比鳞癌水平高。cea、ca242两者联合检测能提高腺癌的敏感性。ca242被作为ca19-9的升级指标，在胰腺癌、胆管癌中灵敏度与ca199一致，特异性优于ca199，较少受到胰腺炎、肝炎及肝硬化等良性疾病影响，在结直肠癌中，灵敏度可达60%~72%。前列腺特异抗原（psapsa是前列腺最特异的指标，阳性率可高达50%~80%，但前列腺增生、前列腺炎、肾脏和泌尿生殖系统疾病也可见psa升高。当总psa（t-psa）的值为4~10 ng/ml时，可引入游离psa/总psa，即f/t的概念：f/t＞0.16，为正常情况；f/t＜ 0.1，则有56%的可能为前列腺癌；psa ＞0.25时，前列腺癌风险为5%。神经特异性烯醇化酶（nse）小细胞肺癌最敏感、最特异的肿瘤标志物。在神经内分泌肿瘤中升高明显，如：嗜铬细胞瘤、甲状腺髓样癌、黑色素瘤、胰岛细胞瘤等。需要注意的是，nse的值非常不稳定，溶血会导至升高。 本文来自糖类抗原50（ca50）ca50也是一个非常广谱的肿瘤标志物，肝、肺、胃、结/直肠、胰腺、胆囊、肾、子宫、卵 巢、乳腺、膀胱、前列腺癌、淋巴瘤、黑色素瘤中都有升高，在肺炎、肾炎、胰腺炎、结肠炎等某些感染性疾病中也会升高。另外，某些溃疡性疾病、自身免疫性疾病也有ca50升高的现象。胃癌：糖类抗原（ca72-4）ca72-4在胃癌中的阳性率为65%~70%，有转移者更高。在结/直肠癌、胰腺癌、肝癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌中也有一定阳性率 ca72-4可作为癌症治疗后随访及复发和预后的重要判断指标。肺癌：细胞角质素片段抗原21-1（cyfra21-1）检测肺癌的最佳指标。如果肺部存在不清晰的环形阴影，同时血清cyfra21-1浓度＞30ng/ml，需高度怀疑肺癌。初诊肺癌时一旦发现cyfra21-1升高，它就可以作为判断肺癌预后的重要指标。 本文来自cyfra21-1在肺癌中的敏感度：鳞癌>腺癌>大细胞癌>小细胞癌。在子宫癌、卵巢癌、乳腺癌、膀胱癌、前列腺癌、胰腺癌、胃癌、结肠癌、肝癌和良性肝病、肾衰竭中，cyfra21-1也会升高。组织多肽抗原（tpa）tpa由细胞角质蛋白8、18和19组成，可以直接反映细胞增殖、分化和肿瘤浸润程度。肺癌患者tpa 增高，敏感性与cyfra21-1相当，阳性率约61%。 本文来自膀胱癌、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌和消化道恶性肿瘤患者，tpa升高；急性肝炎、胰腺炎、肺炎和胃肠道疾病及妊娠后3个月也可见tpa 升高。 本文来自鳞状上皮癌抗原（scca）鳞癌特异性标志物。用于诊断鳞癌，宫颈癌、肺癌、头颈部癌，其浓度随病情加重而增高。其增高也见于肝炎，肝硬化，肺炎，结核病等良性疾病。人附睾分泌蛋白4（he4）he4是诊断卵巢癌的一个非常好的肿瘤标志物，敏感性最高72.9%（高于ca 125），特异性为95%。ca125+he4是诊断卵巢癌的最佳组合。free-β-hcg生殖细胞癌最敏感指标，尤其是绒癌，敏感性高达100%。肝上有包块时，若是afp升高，则高度怀疑原发性肝癌；若free-β-hcg升高，则怀疑生殖细胞癌。free-β-hcg升高还提示肿瘤恶性程度高，预后差。 本文来自铁蛋白（ft）ft与多种肿瘤相关，但不是肿瘤的直接证据。输血、铁剂治疗；再障、溶血性贫血、地中海贫血；原发性含铁血黄素沉积症；结缔组织病；各种肝脏疾病及慢性肾衰；感染性疾病等都会出现ft升高的现象。缺铁性贫血患者会出现ft下降。肿瘤标志物组合筛查没有哪一种肿瘤标志物的准确率能达到100%，一种肿瘤标志物也可能与多种肿瘤相关，临床上常采用组合筛查的方式。   本文来自通过对这些肿瘤标志物的一一解读，不难得出结论：肿瘤标志物升高，不一定就是癌症；某一些肿瘤并不分泌相关蛋白，所以肿瘤标志物正常也不能排除肿瘤。合理应用、适时监测，才是临床上应用肿瘤标志物的正确方式。 

ELISA法测梅毒抗体假阳性原因分析及对策梅毒血清学试验对梅毒的诊断有很大的价值，但它存在着一定的假阳性和假阴性情况，其结果一定要结合病史和临床、体格检查综合分析考虑。近年来梅毒在我国的发病率呈上升趋势。梅毒是由梅毒螺旋体感染引起的一种性传播性疾病之一，可侵犯全身各脏器，几乎可以引起全身所有组织器官的损害和病变，导致功能障碍。梅毒螺旋体抗体检测在输血前及手术前安全筛查中的意义已远远超出其自身病原体筛查的范畴[1]。酶联免疫吸附试验（ELISA），因其价格低廉、操作方便、灵敏度高、特异性强而被广泛使用。但在临床工作中遇到的最大问题是出现假阳性的问题，而假阳性容易引起医疗纠纷，为了减少假阳性的产生，现将假阳性的原因进行分析，总结如下。1 假阳性原因分析1.1 机体因素1.1.1 老年人随着年龄的增长，出现免疫功能下降或免疫功能的异常，而产生白蛋白抗体或异常蛋白质，从而干扰检测结果，出现假阳性。1.1.2 某些疾病中由于感染或免疫紊乱等会使机体产生与梅毒相交叉的抗体反应，造成生物性假阳性，如疟疾、麻风、系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、结节性多动脉炎、肝硬化。传染性单核细胞增多症，系统性红斑狼疮，非典型性肺炎、甚至妊娠都可出现阳性。可能发生急性BFP反应的感染性疾病有风疹、上呼吸道感染、病毒性肺炎等等。而二酯吗啡（海洛因）成瘾者，抗体滴度可达1：64-1：128。对于阳性结果不能以此认定梅毒。而需进一步分析，除病史和临床之外，应分析如为非特异性试验阳性，必须明确其非特异性试验的滴度（定量试验结果）高低，在RPR滴度在1：8以下，应作确认试验，即特异性梅毒检测，如荧光梅毒螺旋体抗体或TPDA试验。这些特殊成分在反应过程中具有一定的吸附作用，使显色反应结果出现假阳性。1.2 标本因素1.2.1 标本处理不当 抽血后标本凝集不完全即离心分离，纤维蛋白未完全析出，容易在板孔中形成纤维蛋白薄膜或絮状物，粘附在板孔堵塞洗板机针头，造成洗板时清洗不彻底，测量时吸光度（OD）偏高，造成假阳性结果。1.2.2 标本溶血 标本溶血造成的假阳性结果是临床最常见情况之一，Hb具有类过氧化物酶的活性，其效应与辣根过氧化物酶类似，溶血后反应孔非特异性吸附Hb，洗涤时不易洗去，催化底物产生一定程度的显色，使本底吸光度值升高而造成假阳性[2]。解决的办法是防止标本溶血，一旦溶血发生，并且梅毒实验阳性，必须重新采血进行测定。1.2.3 标本污染 某些细菌菌体内可能含有内源性辣根过氧化物酶会产生非特异性干扰，造成假阳性结果。1.2.4 标本保存不当 采取即采血即做实验的方法，因为存放过久的标本，血清中IgG可聚合成多聚体，AFP可形成二聚体，造成假阳性[3]。1.3 技术性因素 如实验室操作错误，洗涤过程中有孔内的洗液溢出现象，尤其是洗涤的前几次，阳性标本孔的洗液污染临近的阴性孔而出现假阳性；这就要求在工作中严格按照操作规程操作，避免不必要的交叉感染。1.4 仪器因素 全自动加样仪加样时不是一份标本一个加样头，遇到高浓度抗体标本时，由于加样针清洗程度不够，同一加样针拖带污染导致其后一孔甚至多孔出现假阳性的现象。酶标仪使用过程中当反应板底部有气泡或污染时，酶标仪对反应孔进行垂直比色，易出现A值升高，导致假阳性结果的产生[4]。2 对 策2.1 严格按照《全国临床操作规程》及试剂使用说明书操作。2.2 血液处理 首先要做好采血环节的工作，方法要正确，操作要规范；尽量使用抗凝血标本，血液抽取后，应及时、完全的分离血清；血液不要存放过久，避免溶血及细菌污染，加强离心和防止标本溶血能减少假阳性发生。在运送标本的过程中，要避免标本管的振动，采集后的血液标本最好应先在37℃水浴箱中放置30分钟后再离心。2.3 吸头灭菌 最好尽量使用一次性吸头，使用前应先彻底清洗，后使用高压蒸汽灭菌。实验证明：经高压灭活处理后，其检测结果的假阳性率显著降低[5]。2.4 洗涤液配制及洗涤时间 洗涤液需现用现配，洗板机的洗液瓶及管道应定时用次氯酸钠消毒液浸泡，防止细菌生长。洗涤时间不易过短，洗涤次数不能低于5次，洗涤要充分。洗涤过程中尤其是洗涤的前几次尽量避免出现溢出现象，避免污染，拍板须尽量扣干。3 小 结梅毒血清学试验是诊断梅毒的重要依据，但不能成为唯一依据。对于TPPA阳性的标本，不能简单的用正在或曾经感染梅毒进行解释。阳性结果只提示所测标本中有抗类脂抗体和（或）抗T.pallidum抗体存在，不能作为患者感染梅毒螺旋体的绝对依据；检测结果应结合临床及病史进行综合分析。从事梅毒血清学检验的专业人员及相关医务工作者应注意学习相关知识，在对检测结果有争议时，能给患者及其亲属作出合理解释。目前我国梅毒的发病有增加趋势，梅毒检查、筛查也日渐增多。由于梅毒血清反应本身存在假阳性，而患者的自我保护意识也逐步增强，一旦出现假阳性极易引发医疗纠纷。在梅毒抗体检测过程中，了解出现假阳性的影响因素，对于减少工作中差错事故的发生有着极其重要的意义。

ELISA标准曲线的绘制方法可以采用各种绘图软件来绘制 ELISA 标准曲线，下面以“Curve Exert1.3”软件为例，绘制ELISA 标准曲线的方法如下；1 启动“Curve Expert1.3”（此软件可以到 ww.boster.com.cn 免费下载）2．X 轴输入标准品的 OD 值，Y 轴输入所对应的浓度值，3．单击[运行] 按钮，出现如下对话框4．单击[ok]按钮，出现如下两个对话框，关闭下面一个对话框5. 在对话框的右上角出现一些曲线的名称，从“1”开始依次点击曲线名称，在右下角会出现相应拟合的曲线，。6. 根据拟合的曲线选取 ELISA 拟合度最佳的曲线双击，出现如下对话框：注意：选择系数（即“r”值）最好的曲线方程来进行运算。在下面的对话框右上角有“r”值 ，当“r”值越接近 1 拟合度越好7．按[Ctrl]键+[L]键，出现如下对话框：8．输入标准的 OD 值，单击[Calculate]按忸，即可得到待测蛋白的实际含量。（标本稀释了N 倍，运算出的数值应在成以 N）。9. 如想得到 ELISA 拟合曲线的方程，可在步骤 6 的对话框空白处右击，选择”Information”10. 得到如下对话框：点击“Copy”在你需要的位置粘贴即可得到如下数据：Rational Function: y=(a+bx)/(1+cx+dx^2)Coefficient Data:

ELISA标本的处理可用作 ELISA 测定的标本十分广泛，体液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液）、细胞培养上清、细胞、组织等均可作标本以测定其中某种成份。有些标本可直接进行测定，有些则需经预处理。◆ 血清：室温血液自然凝固 10-20 分钟后，离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。收集上清。如有沉淀形成，应再次离心。◆ 血浆：应根据试剂盒的要求选择 EDTA 、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，加入 10 ％（ v/v ）抗凝剂( 0.1M 柠檬酸钠或 1% heparin 或 2.0%EDTA.Na2) 混合 10-20 分钟后，离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清。如有沉淀形 成，应再次离心。◆ 尿液、胸腹水、脑脊液：用无菌管收集。离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清。如有沉淀形成，应再次离心。◆ 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清。检测细胞内的 成份时，用 PBS （ PH7.2-7.4 ）稀释细胞悬液，细胞浓度达到 100 万/ml 左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转/ 分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。◆ 细胞：检测细胞的成份时，对于贴壁细胞，去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。加入适量裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞10 秒后，细胞就会被裂解。对于悬浮细胞，离心收集细胞，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍.加入适量裂解液, 用枪吹打把细胞吹散。用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装然后再裂解。充分裂解后，10000-14000g离心3-5 分钟，取上清，即可进行后续操作。◆ 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的 PBS 或组织蛋白萃取试剂，缓冲液中可加入蛋白酶抑制剂。用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清置于 -20 度或 - 70 度保存，如有必要，可以将样品浓缩干燥。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

ELISA结果分析：空白对照孔OD值过高因为只加入了显色液和终止液，所以有一下几种可能：1.显色液存储不当导致自身显色。2.在操作过程中孔内混如酶标。3.目测结果与酶标仪读值是否对的上，也可能使酶标仪设定参数不合适。

ELISA空白孔OD值过高是何因?第一,可能是封闭的问题.检查并尝试不同种类\不同浓度的封闭液;第二,检查配制PBS\PBST所用的蒸馏水.每次配完PBS都要测其PH值.以前我们实验室就有师姐将PBS配错,PH为酸性,导致我做过几次ELISA下来一块板子全显色.第三,有时国产的酶标板重复性很差,不同批次间的重复性也有不同.有条件的话换换其他的酶标条试试.

直接凝集反应某些病原微生物或红细胞悬液等颗粒性抗原与相应抗体结合，在有适量电解质存在下，经过一定时间出现肉眼可见的凝集小块，称为凝集反应（agglutination）。根据反应的方式不同，凝集反应可分为直接凝集反应、间接凝集反应和抗球蛋白试验等。直接凝集反应时颗粒性抗原和相应抗体直接结合，在有电解质存在的条件下，出现肉眼可见的凝集小块，为直接凝集反应。有玻片凝集法和试管凝集法。前者是一种定性实验，多用已知诊断血清检验未知抗原和进行细菌分型，也可以用来鉴定人类红细胞ABO血型；后者是一种半定量试验，用于鉴定被检者血清中有无某些病原菌的抗体及其含量，以协助临床诊断或供流行病学调查研究。本节将通过玻片凝集法和试管凝集法详细介绍直接凝集反应。   （一）玻片凝集试验   （1）取洁净载玻片1片，一端滴生理盐水1滴作为对照，另一端滴加诊断血清1滴。   （2）用接种环取分离好的病原菌，于生理盐水中和诊断血清中分别混匀（注意不可先涂血清后涂盐水以免发生误差）。   （3）室温静置数分钟。如果抗原抗体相对应出现阳性反应，则诊断血清中出凝集块，而盐水侧则为均匀的乳白色。否则为阴性反应。   （二）试管凝集反应   （1）排列洁净干燥试管8支于试管架上。   （2）用吸管吸取生理盐水，分别加0.5ml于各试管中。吸取10倍稀释的被检血清，加0.5ml于第一管中。   （3）自第一管开始稀释，使充分混合，然后吸出0.5ml放入第二管，依次稀释至第七管，在从第七管内吸出0.5ml弃去。第一管至第七管血清稀释度为1∶20，1∶40，1∶80，1∶160，  1∶320，1∶640；1∶1280。第八管不加血清，作为对照。   （4）吸取诊断菌液，每管加0.5ml（加菌液时由对照管向前依次加入），此时每管内的血清稀释度又增加一倍。其操作程序见表15-1。   （5）摇匀后，放37℃温箱18～24h或37℃水浴箱4h后观察结果。观察结果时先观察对照管，再观察各试验管。注意观察凝集颗粒的松软、大小、均匀度等性状以及液体的混浊程度。若液体仍呈均匀混浊或经振摇后呈混浊者为阴性结果；上部液体较清亮，同时管底有凝集块者为阳性反应。阳性反应者可根据下面标准确定凝集的强弱。   ＋＋＋＋ ： 完全凝集、上清液澄清。   ＋＋＋  ：大部凝集、上清液微混。   ＋＋  ：中等凝集、上层液较混浊。   ＋  ：少量凝集、上层液混浊。   －  ：无凝集、菌液混浊。   记录结果后判定效价（又称滴度）。凝集效价是指能发生中等凝集（＋＋）现象的最高血清稀释度。

免疫标记技术免疫标记技术（immunolabelling techniques）是指用荧光素、放射性同位素、酶、铁蛋白、胶体金及化学（或生物）发光剂作为示踪物，标记抗体或抗原进行的抗原抗体反应，借助于荧光显微镜、酶标检测仪等仪器，对实验结果直接镜检观察或进行自动化测定，可在细胞、亚细胞以及分子水平上，对抗原抗体反应进行定性和定位研究；或应用各种液相和固相免疫分析方法，对体液中的半抗原、抗原或抗体进行定性定量测定。根据标记物的种类和检测方法不同，免疫标记技术可分为酶免疫的技术（以酶联免疫吸附试验为常用）、免疫荧光技术、放射免疫技术、发光免疫测定技术等，本节主要介绍酶联免疫吸附技术以及免疫荧光技术。　　一、酶联免疫吸附试验（ELISA）酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）是将抗原抗体反应的特异性和酶的高效催化作用相结合而发展起来的一种免疫标记技术，既可用于组织、细胞内抗原的检测，又可用于体液中抗原抗体的检测。根据检测方法的不同，可将酶联法分为双抗体夹心法、间接法、竞争法、捕获法和其他ELISA，现介绍前三种。1. 双抗体夹心法　双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法，将已知抗体包被于微孔条上，加入待检品（抗原）形成抗原抗体复合物，加酶标抗体与之结合，经显色后用酶标仪测定OD值，从而测定相应抗原含量。（1）以pH9.6碳酸盐缓冲液稀释已知抗体包被酶标板，4℃过夜。市售商品往往已经预先包被好已知抗体。（2）将酶标板、试剂等平衡至室温，分别于相应孔内加入待检样品、阴性对照、阳性对照50μl。（3）分别在每孔内滴加酶标抗体50μl。置37℃温育60min。室温平衡5min，甩干孔内液体，洗液洗涤5次，拍干。（4）每孔加显色剂，37℃避光温育10min。（5）每孔加终止液50μl，轻拍混匀。（6）酶标仪测定OD值，用空白调零。样本OD值/阴性OD值（S/N）≥2.1（同时待检杯OD＞0．10）判为阳性。2. 间接法　间接法是检测抗体最常用的方法， 将已知抗原吸附于固相载体，加待检血清（抗体）形成抗原抗体复合物，经孵育、洗涤后，加酶标抗体使之与抗原抗体复合物结合，经显色后用酶标仪测定OD值，从而间接测定相应抗体含量。步骤如下：（1）以pH 9.6碳酸盐缓冲液稀释已知抗原包被酶标板，4℃过夜。市售商品往往已经预先包被好已知抗原。（2）在预包被已知抗原酶标板内加入待检样品、阴性对照、阳性对照50μl。置37℃温育25～45 min。用洗液洗涤5次，拍干。（3）分别在每孔内滴加酶标抗体100 μl。置37℃温育25～30min，洗涤。（4）每孔加显色剂，轻拍混匀，37℃避光温育10min。（5）每孔加终止液50μl。（6）酶标仪测定OD值，用空白调零。样本OD值/阴性OD值（S/N）≥2．1（同时待检杯OD＞0．10）判为阳性。3. 竞争法　竞争法既可用于抗原半抗原的定量测定，也可用于测定抗体。以抗原竞争法为例，将已知抗体吸附于固相载体，加一定量已知酶标抗原及待测抗原，使两者竞争与固相抗体结合，经洗涤，最后结合于固相抗体上的酶标抗原与待测抗原含量呈负相关。步骤如下：（1）已知抗体包被酶标板，4℃过夜。（2）测定管内加一定量酶标抗原和待检样品，对照管内只加相同量酶标抗原。温育，洗涤。（3）分别于测定管、对照管内加一定量底物显色。（4）用酶标仪测定对照管、测定管内OD值，用空白调零。通过对照管与测定管OD值之差，计算标本中待测抗原含量。进行ELISA操作时应注意以下几点：①实验室温度应控制在18℃～25℃；②加样须准确，同一样本设立对照管、测定管各两孔，取其平均值；③严格控制温育反应温度及时间，洗涤应充分；④结果判定应以仪器为准，肉眼仅作参考。　　二、免疫荧光技术免疫荧光技术是将荧光素如异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)与相应抗体（或抗原）以化学的方法结合，将荧光标记抗体（或抗原）与标本中相应的抗原结合形成荧光标记的抗体-抗原复合物，用荧光显微镜观察。在镜下见到有荧光存在即推断有抗原抗体复合物的存在，根据已知的抗体（或抗原）即可推知另一个未知抗原（或抗体）的存在。1. 直接免疫荧光法　直接免疫荧光法是利用荧光色素标记的特异性抗体直接与相应的抗原结合，以鉴定未知抗原。本法具有操作简单、时程短、特异性高的优点，但也存在缺点如不能检查抗体，敏感性较差。（1）在标本上滴加荧光素标记抗体，放入湿盒中。37℃温育30min。         （2）PBS冲洗后，再用PBS分三缸浸泡，每缸3min。（3）PBS浸泡1～2min，风干。（4）缓冲甘油封片。在荧光显微镜下观察。进行直接免疫荧光法时应注意：①温育时一定要将玻片放在湿盒中，以防液体蒸发。②用PBS浸泡时应不断振荡。2. 间接免疫荧光法　间接免疫荧光法以荧光素标记抗球蛋白抗体，抗体与相应抗原结合后，荧光标记的抗球蛋白抗体与已结合的抗体发生作用，从而推知抗原或抗体的存在。间接荧光技术可以用已知的抗原检测未知的抗体，也可用已知的抗体测出未知抗原。现以检测流行性出血热病毒抗体（IgM）为例介绍如下：（1）将待测病人血清加至抗原片（流行性出血热病毒感染的Vero-E6细胞片）上，每个稀释度加2孔，最后2孔加PBS做对照。将玻片放置湿盒中，37℃温育60min。取出玻片，弃去反应液，用PBS洗涤5min，风干。（2）加入1∶40稀释的FITC标记的羊抗人IgM，37℃温育60min。取出玻片，按步骤2洗涤，风干。（3）PBS甘油封片，荧光显微镜下观察。阳性结果：在细胞膜及细胞质中可见颗粒状荧光颗粒，细胞核呈红色。注意事项：温育时将玻片放在湿盒中，以防液体蒸发。选择低温、干燥、洁净的环境风干。

2017清明节放假通知　　清明节即将来临，根据国务院2017年清明节放假通知精神，结合我司实际情况，作出以下放假安排：　　2017年4月2日(星期日)至2017年4月4日(星期二)休假，共3天，2017年4月1日(星期六)正常上班。　　请公司各部门、以及各代理商、渠道商、以及商家等提前做好节前工作安排!感谢各科研院校长期以来的支持。上海信裕生物科技有限公司全体工作人员提醒各合作单位，在假期期间注意防火、以及人身安全!　　                                         假期有事请电联：13816899465陈经理　　                                              上海信裕生物科技有限公司　　                                                    2017年4月1日

完美的ELISA试剂盒实验最合适不过 国内较好的一些ELISA试剂盒供货商也不在少数，而正因如此，商品的挑选成功可客户的烦恼的地方。如何才干选出作用好、质量好、信誉好、价格公道、诚信、便利的试剂盒呢？做完美的ELISA试验，选本公司试剂盒最合适不过。一、ELISA的质量操控1. 确定操控的目标；2. 规则操控目标的标准(预期值)；3. 制定或挑选操控办法和手法；4. 丈量实践数据；5. 对比或较对实践数据与预期值之间的区别，并说明发生这一区别的因素。超出预订差错规模，报警系宣布信号，反响通道中止。6. 采纳举动，处理区别。恢复原状(原标准状态)的手法发挥作用。质量操控是监督全进程，扫除差错，避免变化，ELISA试剂盒保持标准化现状的一个管理进程。这一进程是经过一个反响环路进行的，首要选用质控图进行。二、ELISA技能的功能免疫酶技能的首要试剂为固相的抗原或抗体、酶符号的抗原或抗体和与符号酶直接相关的酶反响底物。可作固相载体的物质许多，最常用的是聚苯乙烯。ELISA试剂盒聚苯乙烯具有较强的吸附蛋白质的功能，抗体或蛋白质抗原吸附其上后保存本来的免疫活性。聚苯乙烯为塑料，可制成各种形式，在测定进程中，它作为载体和容器，不参加化学反响，加之它的价格低廉，所以被遍及选用。三、试剂盒测定好坏的对比办法用别的免疫学测定办法选出一个典型的阳性标本和一个典型的阴性标本。将它们别离进行一系列稀释后，在不一样的固相载体上按预订的试剂盒操作过程进行测定，然后对比测定成果。在哪一种载体上阳性成果与阴性成果区分最大，这种载体就是这一试剂盒测定的最合适的固相载体。

实验室显色培养基系列产品优点与不足之处 培养基的种类繁多，用处、用法不同，各具长处，然而也有一些缺乏的当地。我公司技术人员专门对试验室显色培育基系列产品剖析出了长处与缺乏之处，它运用不同种属细菌代谢所发生的酶的特异性，在培育基中参加相应的特异性酶底物和抑制剂，当具有某特异酶的细菌与酶底物作用时，使显色基团游离出来附着于菌落上，构成色彩独特的菌落。依据菌落的色彩直接对菌属(种)作出鉴定。一、运用优势：    1.迅速、简洁、节省时间-大多数显色培育基只需在样品增菌后，别离培育18~24h，即可依据菌落的色彩作出开始的鉴定。(阴性弃去，阳性则进一步鉴定)。    2.成果直观，一望而知(依据色彩断定成果)。    3.灵敏度高、特异性强，大大减少了后续的鉴定步骤(确证试验)。二、有哪些缺乏？    1.假阳性：97%的大肠埃希氏菌含有β-葡萄糖苷酶，约10%的沙门氏菌属中也含有此酶。    2.假阴性：O157：H7大肠埃希氏菌不发生β-葡萄糖苷酶。别的，不是一切具有特征性酶的微生物均在含底物的培育基中阳性反应。    与一般选择性培育基对比，显色培育基的假阳性、假阴性的机率相对要低得多。    别的，定期质控的办法应当推行至新购入的培育基，以确保所用试剂的质量安稳，进而确保试验成果的安稳和精确。

 elisa方法类型和操作步骤elisa可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法中有3种必要的试剂：①固相的抗原或抗体，②酶标记的抗原或抗体，③酶作用的底物。根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件，可设计出各种不同类型的检测方法。　　（一）双抗体夹心法　　双抗体夹心法（图15-4）是检测抗原最常用的方法，操作步骤如下： 图15-4双抗体夹心法测抗原示意图　　（1）将特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体：洗涤除去未结合的抗体及杂质。　　（2）加受检标本：使之与固相抗体接触反应一段时间，让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合，形成固相抗原复合物。洗涤除去其他未结合的物质。　　（3）加酶标抗体：使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检物质的量正相关。　　（4）加底物：夹心式复合物中的酶催化底物成为有色产物。根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量。　　根据同样原理，将大分子抗原分别制备固相抗原和酶标抗原结合物，即可用双抗原夹心法测定标本中的抗体。 

ELISA的原理和类型①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅刊物定性或定量分析。由于酶的催化频率很高，故可极大地地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。

ELISA试剂盒阴性对照需要做梯度稀释吗ELISA试剂盒从理论上说，阴性对照的血清，不管稀释多少倍，OD值都不应该有明显变化。有两种可能：1.正常小鼠自身富含该抗原的抗体。2.ELISA过程中非特异性反应去掉不洁净，如洗板、孵育温度时刻、抗原抗体浓度等，这么稀释倍数越高的样本其对成果的影响就越小，就出现逐渐下降的趋势。你的阴性孔的OD值有多少呢，正常状况应低于0.1，否则就要优化下全部试验体系了。ELISA试剂盒判别阴阳性，以阴性OD值的2倍作为判别规范仅仅依据咱们通常的经验而定，更科学的办法是，测定一批阴性样品（比方20个以上），核算OD平均值及规范差，以平均值+2或3倍规范差作为阴阳性的界限。