直接凝集反应

直接凝集反应

某些病原微生物或红细胞悬液等颗粒性抗原与相应抗体结合，在有适量电解质存在下，经过一定时间出现肉眼可见的凝集小块，称为凝集反应（agglutination）。

根据反应的方式不同，凝集反应可分为直接凝集反应、间接凝集反应和抗球蛋白试验等。直接凝集反应时颗粒性抗原和相应抗体直接结合，在有电解质存在的条件下，出现肉眼可见的凝集小块，为直接凝集反应。有玻片凝集法和试管凝集法。前者是一种定性实验，多用已知诊断血清检验未知抗原和进行细菌分型，也可以用来鉴定人类红细胞ABO血型；后者是一种半定量试验，用于鉴定被检者血清中有无某些病原菌的抗体及其含量，以协助临床诊断或供流行病学调查研究。本节将通过玻片凝集法和试管凝集法详细介绍直接凝集反应。

   （一）玻片凝集试验

   （1）取洁净载玻片1片，一端滴生理盐水1滴作为对照，另一端滴加诊断血清1滴。

   （2）用接种环取分离好的病原菌，于生理盐水中和诊断血清中分别混匀（注意不可先涂血清后涂盐水以免发生误差）。

   （3）室温静置数分钟。如果抗原抗体相对应出现阳性反应，则诊断血清中出凝集块，而盐水侧则为均匀的乳白色。否则为阴性反应。

   （二）试管凝集反应

   （1）排列洁净干燥试管8支于试管架上。

   （2）用吸管吸取生理盐水，分别加0.5ml于各试管中。吸取10倍稀释的被检血清，加0.5ml于第一管中。

   （3）自第一管开始稀释，使充分混合，然后吸出0.5ml放入第二管，依次稀释至第七管，在从第七管内吸出0.5ml弃去。第一管至第七管血清稀释度为1∶20，1∶40，1∶80，1∶160，  1∶320，1∶640；1∶1280。第八管不加血清，作为对照。

   （4）吸取诊断菌液，每管加0.5ml（加菌液时由对照管向前依次加入），此时每管内的血清稀释度又增加一倍。其操作程序见表15-1。

   （5）摇匀后，放37℃温箱18～24h或37℃水浴箱4h后观察结果。观察结果时先观察对照管，再观察各试验管。注意观察凝集颗粒的松软、大小、均匀度等性状以及液体的混浊程度。若液体仍呈均匀混浊或经振摇后呈混浊者为阴性结果；上部液体较清亮，同时管底有凝集块者为阳性反应。阳性反应者可根据下面标准确定凝集的强弱。

   ＋＋＋＋ ： 完全凝集、上清液澄清。

   ＋＋＋  ：大部凝集、上清液微混。

   ＋＋  ：中等凝集、上层液较混浊。

   ＋  ：少量凝集、上层液混浊。

   －  ：无凝集、菌液混浊。

   记录结果后判定效价（又称滴度）。凝集效价是指能发生中等凝集（＋＋）现象的最高血清稀释度。