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ELISA标本的处理
ELISA标本的处理
可用作 ELISA 测定的标本十分广泛，体液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液）、
细胞培养上清、细胞、组织等均可作标本以测定其中某种成份。有些标本可直接进行测定，有些
则需经预处理。
◆ 血清：
室温血液自然凝固 10-20 分钟后，离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。收集上清。如
有沉淀形成，应再次离心。
◆ 血浆：
应根据试剂盒的要求选择 EDTA 、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，加入 10 ％（ v/v ）抗凝剂
( 0.1M 柠檬酸钠或 1% heparin 或 2.0%EDTA.Na2) 混合 10-20 分钟后，离心 20 分钟左右
（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清。如有沉淀形 成，应再次离心。
◆ 尿液、胸腹水、脑脊液：
用无菌管收集。离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清。如有沉淀形成，
应再次离心。
◆ 细胞培养上清：
检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集
上清。检测细胞内的 成份时，用 PBS （ PH7.2-7.4 ）稀释细胞悬液，细胞浓度达到 100 万
/ml 左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转
/ 分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
◆ 细胞：
检测细胞的成份时，对于贴壁细胞，去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。加
入适量裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞10 秒后，细胞
就会被裂解。对于悬浮细胞，离心收集细胞，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍.加入适
量裂解液, 用枪吹打把细胞吹散。用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉
淀。如果细胞量较多，必需分装然后再裂解。充分裂解后，10000-14000g离心3-5 分钟，取上
清，即可进行后续操作。
◆ 组织标本：
切割标本后，称取重量。加入一定量的 PBS 或组织蛋白萃取试剂，缓冲液中可加入蛋白酶抑制
剂。用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集
上清置于 -20 度或 - 70 度保存，如有必要，可以将样品浓缩干燥。分装后一份待检测，其余
冷冻备用。
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