柱式植物RNA提取试剂盒

本产品是植物RNAour的柱式升级产品，它结合了植物RNAour的高效性(其效果在近五十多种各类植物中得到验证，植物名单见植物RNAou产品介绍的附录)和天泽基因柱式纯化系列产品的快捷性。

该产品特点如下:

1. 操作更加简单快速，处理- -个样品只需要约十分钟，比植物RNAour快一

倍。

2. RNA纯度更高，平均OD260/280 - -般都在2.0左右，能够有效去除大

多数植物中的多糖污染。

3. 适用于所有用植物RNAour能提出RNA的植物(注:对有些植物可能需要

在溶液A中额外添加RVC)。

4. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern杂交、cDNA合成等实验。

5. 性价比高于进口的柱式植物RNA提取产品。

6. 由于小RNA太短很难上柱，故如果要提取小RNA需要用本公司专门的

试剂盒。

1. 估算组织细胞的用量。每次微量提取一-般需要100-200 mg植物叶片、

或50-100 mg植物种子、或200-500 mg植物果实。

2.样品破碎:

1)匀浆法: 先将新鲜植物组织剪切成小块(保存在RNALOCKER中的植物

组织需用纸吸去RNALOCKER液体后再剪切成小块)，放入10-15 mL

塑料离心管中，加入1 mL溶液A,然后用匀浆器匀浆5-20秒。匀

浆时会产生泡沫，但不影响提取效果。

2)液氮研磨法 (适用于复杂，易降解样品):取适量新鲜植物组织放入

含液氮的研钵中，迅速将组织研磨成粉末后，将粉末转移到合适的塑

料离心管中，加入1 mL柱式植物RNA提取溶液A,立即剧烈振荡

20秒，充分混沟。

注意:溶解柱式植物RNA提取溶液A沉淀。柱式植物RNA提取溶

液A在4C放后可能会产生沉淀,使用前必须放在65C水浴使沉

淀御底溶解并充分播匀后再取用。

3. 将匀浆物或液氮研磨物转移至干净的1.5 mL塑料离心管中(可以不必转

移非液体的细胞碎片)。有的植物组织(比如果实)含有大量水份，匀浆

液会多于1 mL,转移时也只取1 mL。

4. 在离心管中加入0.3 mL的柱式植物RNA提取溶液B和0.2 mL自备氯

仿，在振荡器.上振荡30秒混匀，此时溶液呈均匀的乳浊状。振荡器振荡

时必须使管底溶液震荡起来。

5.室温 12000-15000g离心3-5分钟，两相间将有约5-10毫米厚的细胞

破碎物。

6. 将.上清液(约0.6 mL)转移到另- -干净的1.5 mL塑料离心管中，下层有机

相和中间层含有DNA、蛋白质和其他杂质，避免触及或吸取。最好留下

100 μL.上清液不取。

7.加入等体积的柱式植物 RNA提取溶液C,充分颠倒混匀。如果有沉淀产

生(对某些植物，属于正常现象),千万不要去掉沉淀，- -定要把所有的

混合物上柱。

8.将一半的溶液(如果有沉淀，则先混匀)转移到离心吸附柱中,

13000- 15000 g室温离心半分钟，弃穿透液。

9.将剩下的一半溶液(如果有沉淀，则先混匀)转移到同一离心吸附柱中，

13000-1 5000 g室温离心半分钟，弃穿透液。

10.加0.7 mL通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。再加0.3 mL通用

洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。一般样晶如此洗涤两次即可，但如

果在第7步加入柱式植物RNA提取溶液C后有沉淀产生,则需要洗三

次，每次加入的通用洗涤液的量分别为0.4、0.3 和0.3 mL。

11.室温离心半分钟。此步十分重要，否则残留的乙醇会影响RNA的使用。

12.将离心吸附柱转移到RNase-free收集管中，加入50-100 u山RNA洗脱

液，室温放置1-2分钟。

13.13000-15000 g室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以

立即使用或存放于-80C待用。

14. RNA完整性的电泳检测:如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使

用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子

(BioTechniques, 28: 414, 2000)。如果电泳发现DNA污染严重(跟

样品相关)建议使用含有RNase-free DNase处理步骤的柱式植物

RNAout 2.0,也可以另购膜结合DNA滑除剂

(CAT#90904)升级成柱式植物RNAout 2.0.

15. RNA产量产率测定:将5-10 u山RNA溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2之

间)检测其在OD260的光吸收o通过光吸收可以得出RNA浓度(10D260

的RNA=40 μg/ mL) ,进而计算出RNA的产量(浓度X体积)和产率(RNA

产量/组织用量)。

16. RNA纯度测定:无污染的总RNA的0D260/0D280 -般在1.8-2.1之

间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分

别表示样品可能有蛋白质污染，但- -般不影响RT-PCR等反应。