非冻型血液RNA保存液

   由于血液富含RNase,因此血液RNA(主要是白细胞RNA)非常容易降解，是临床分子生物学研究中的一个棘手的问题。为解决此问题，它具有下列特点:

  1.能快速渗透 到新鲜抗凝血液中的有核细胞内(主要 是白细胞),抑制RNA

 分子的降解。保存的血液白细胞RNA常温可放置3天，4°C可放置5天，

 -20C可放置3个月。

 2.操作简单， 直接将本产品和白细胞样品按比例混合即可。

 3.适用于人新鲜血和哺乳动物新白细胞，不适盱陈旧血液和冻凝血液,也不适用于禽类血液和其他   动物血液。

 4.重复性好， 效果跟进口同类产品相当。

 5.保存的样品可直接用本公司动物RNAout提取RNA。

一、白细胞的分离和保存

1.本产 品保存全血的效果不好，故不建议用于全血的保存。必须先分离白细

胞。

2.室温1500-2000 g离心新鲜血液10-15分钟，最上层为血浆，最下层为

红细胞，中间层为膜状的、含白细胞的BuffyCoat(含白细胞多的血液此

层可能很厚)。

3.

吸出血浆后，小心将中间的白细胞层吸出( 允许污染少量红细胞)，按0.5

mL白细胞加入到2.5mL(5倍体积)的本产品的比例，将两者混合。

4.如此 保存的白细胞可以在常温(不超过30°C)下放置3 天，4°C可放置5

天。如果需要-20°C放置，需要先在4C放置1天，然后在13000 g室温

离心3分钟，小心吸出浅粉红色的上清液，再将没有液体保存液的白细胞

沉淀放置在-20°C,如此可放置3个月。不能直接有液体保存液的白细胞

悬浮液放置在-20C，否则凝固形成的冰晶将会刺破白细胞膜，在凝固的

冰晶融化时，白细胞胞浆成分(含 RNA)会进入上清，在离心时丢失，离

心得到的只是细胞残骸。

5.使用时， 对4C或以上温度保存的白细胞，将1.5 mL本产品和白细胞的

混合物转移到离心管中，13000 g室温离心3分钟。小心吸出浅粉红色的

上清液，沉淀为白细胞，直接用于RNA提取。如果是在-20C保存的已经

按上步方法处理的白细胞沉淀，则直接用于RNA提取。

.二、提取RNA (本产品不提供RNA提取相关产品)

5. 建议使用Trizol或类似Trizol的动物RNAout (本公司产品)。需要注意

的是在加入异丙醇沉淀RNA时，本产品处理的样品由于盐离子浓度高会

出现两层(即两相，正常样晶会出现RNA沉淀，不会出现两层)，小心去

除上清，然后加入相当于下层体积2倍的50%的异丙醇，颠倒混匀后

13000 g室温离心10分钟，RNA将沉淀在管底。再按Trizol的标准操

作流程用75%乙醇洗涤沉淀即可。

三、RNA的检测(列出步骤仅供参考,本产晶不提供相关产品)

7. RNA完整性的电泳检测:强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，

因为非变性胶中单链RNA分子会自生折叠成各种形状，尤其不能使用

DNA.上样液，因为没有经过去RNase处理。

8. RNA 产量产率测定:将5-10 μuL RNA用TE缓冲液(pH8.2)稀释10倍

后检测其在0D260的光吸收o通过光吸收可以得出RNA浓度(1 0D260

的RNA=40 ug/ mL) ,进而计算出RNA的产量(浓度X体积)和产率(RNA

产量/组织用量)。人血RNA产率- - 般为2-5 ug/mL .

9. RNA 纯度测定:无污染的总RNA的0D260/ 0D280一般在2.0左右(具

体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表

示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。