PC 3001 VARIOpro，作为VACUUBRAND的颜值担当，不仅造型美观轻便，而且能力强大。它以MD 1C隔膜泵为主泵（三级四泵头），PTFE隔膜材质与“三明治”夹层结构极耐化学腐蚀，极限真空达到2mbar（200 Pa），抽速达到33.33 L/min，搭配CVC 3000真空控制器能够实现全自动/半自动真空控制，尤其适用于旋转蒸发过程。       小编最近收到客户反映：试剂或产品在旋蒸过程中出现爆沸问题，于是带上这款样机来到了客户的实验室。实验采用：乙醇+水，v：v（体积比）=1：1，总体积400mL，水浴50℃，冷凝水10℃；实验过程：打开PC 3001 VARIOpro，选择自动蒸馏模式，开始旋蒸。起初真空度会直线下降，当下降到180mbar左右时接近乙醇的饱和蒸气压，慢慢开始出现爆沸，连接上我们的变频泵则可以抑制乙醇爆沸，通过合适的泵速蒸出乙醇。       客户在现场体验过我们的变频泵后，感觉怎么形容呢，一见钟情。       小伙伴们一定好奇这款产品是如何抑制爆沸？如何抑制产品往冷凝管上冲？原理：PC 3001 VARIOpro采用变频电机，特有的传感器技术可以自动检测沸点压力，通过直接调节泵的电机转速实现精准的真空控制，按一个键后，即可实现全自动的蒸发控制。       除此以外，在变频泵家族成员还有很多，PC 3002 VARIO，PC 3003 VARIO，PC 3004 VARIO，PC 3010 NT VARIO，PC 3012 NT VARIO，PC 3012 VARIO DUO，PC 3016 NT VARIO…不同极限真空不同抽速，总有一款满足你。

    免疫系统分固有免疫和获得性免疫，此次分享关于调动固有免疫系统杀伤肿瘤的内容！肿瘤细胞会表达MICA/B蛋白，NK细胞通过NKG2D受体可识别MICA/B蛋白杀伤肿瘤细胞，但肿瘤细胞会进化出一种免疫逃避机制：通过酶水解掉表达于细胞表面的MICA/B躲避NK细胞的识别、杀伤！文章作者设计了一种单抗可结合到水解位点，阻断MICA/B的水解从而促进NK细胞对肿瘤细胞的识别、杀伤，具体内容如下：设计：水解发生在α3结构域，用α3结构域（此结构域对于MICA/B是保守的）免疫小鼠筛以此位点为抗原表位的抗体，阻断水解抑制免疫逃逸的同时不干扰NK细胞NKG2D受体对于α1/2结构域的识别结合！此外单抗的Fc段还可以与Fc受体结合，诱导ADCC作用筛得3个单抗，可以包含α3结构域的序列结合（6D4为阴性对照，可与MICA/B结合不与α3结构域结合）筛得的单抗不影响NKG2D受体对MICA的结合In vitro，筛得的单抗作用于A375细胞后能抑制MICA被水解进入培养上清，促进其在细胞表面的表达（阴性抗体6D4和同型对照无此作用）以7C6为研究对象，7C6在体外能诱导NK细胞对肿瘤细胞的杀伤单抗7C6能够抑制表达MICA的肿瘤细胞（B16F10和CT26）向肺部转移7C6作用后小鼠血清中游离MICA浓度明显降低，说明单抗能够抑制MICA从肿瘤表面水解7C6能够到达肿瘤部位到达肿瘤部位后能够提供肿瘤细胞表面MICA的表达水平（与前面降低血清中MICA含量呼应） In vivo实验用的小鼠并不是免疫缺陷小鼠，接种表达MICA的肿瘤之后会产生相应抗体，主要为IgG1亚型既然所用小鼠产生了内源性抗体，需要看一下内源性抗体有无抑制肿瘤生长的作用，野生型小鼠和B细胞缺陷小鼠（无抗体产生）肿瘤生长曲线重合，暗示B细胞产生的内源性抗体并未对抑制肿瘤生长发生贡献和在野生型小鼠上一样，7C6在B细胞缺陷小鼠上依然能够抑制肿瘤生长、抑制MICA水解进去血中，进一步确证抗肿瘤作用是单抗7C6直接引起的，并不依赖内源抗体前面“正着”说明了单抗7C6的抗肿瘤作用，开始“反着”看：7C6只能抑制MICA/B表达于膜的肿瘤细胞生长，当不表达或表达分泌型MICA时无法发挥抗肿瘤作用用抗体“敲掉”NK后7C6抗转移的作用消失，暗示7C6起效时NK细胞依赖的，效应分子层面则是穿孔素依赖的基因水平的数据发现7C6作用后，NK细胞被激活突变7C6的Fc段得到抗体7C6-DANA（无法与Fc受体结合，但依然能够抑制MICA的水解-支撑文档里有相应数据，略）：失去Fc结合能力后杀伤肿瘤细胞能力降低，阻断NKG2D受体后单抗杀伤能力亦降低，暗示单抗杀伤肿瘤作用是Fc受体、NKG2D受体依赖的 – In vitroIn vivo再次验证7C6起效是NK细胞、Fc受体、NKG2D受体依赖的（Fcgr3a对应Fc受体，Klrk1对应NKG2D受体）在NSG小鼠上用人的NK和肿瘤验证单抗功能7C6能够抑制肿瘤细胞肺转移、延长存活时间7C6还能抑制肝转移，且不依赖NK！肝脏驻扎着巨噬细胞，“敲掉”巨噬细胞抑制肝转移的作用消失，暗示7C6还调动起了肝脏巨噬细胞 – 通过Fc段对肝脏巨噬细胞进行分析发现7C6促进了巨噬细胞的激活     不同于CART对T细胞“大刀阔斧”的改造，这篇文章的思路更像是“投石击水”，不做很大改变，用一个单抗保护住MICA/B后通过本来存在的NKG2D、Fc受体调动NK细胞 - 用更“本来”的东西实现目的！重头戏是拿到单抗 – 这其实是结构生物学家的工作，细胞生物、分子生物学、免疫学家熟悉“过程”，“过程”以结构为基础发生，这篇文章是“大家”合作完成的！     Ferrari L D A, Tay R E, Pan D, et al. Antibody-mediated inhibition of MICA and MICB shedding promotes NK cell-driven tumor immunity.[J]. Science, 2018, 359(6383):1537-1542. 想了解更多CNS级期刊最新内容，请关注我们的公众号，常有更新哦，也可加笔者微信交流：qianle522568！

线粒体内的一些蛋白需要细胞核编码，在胞浆合成后转运到线粒体内部。细胞有相关转通路，此次整理分享的文章关注的是当转运受阻，发生“交通事故”之后细胞是如何做出反应，调动各种蛋白来疏导的！首先“造模”：Cox5a以前体（pre）形式转运到线粒体后N段会被切去一部分生成Cox5a，以Cox5a前体的量为指标反映线粒体蛋白的转运情况。过表达一系列线粒体相关蛋白后发现某些蛋白会造成Cox5a前体“堆积”，这几个蛋白都含双向信号（CCCP能影响线粒体膜电位，也会造成蛋白“堆积”）根据上面双向信号的提示，过表达其他双向信号蛋白也会造成cox5a前体“堆积”选取PSD1过表达系统为模型，PSD1过表达能使一系列含前体序列的蛋白发生“堆积”既然因为转运受限发生了蛋白堆积，那么堆积发生在什么位置，文章作者没有用显微镜进行定位研究，而是分别提取不同位置的蛋白后WB验证，发现CCCP处理或PSD1过表达后，Cox5a前体堆积在线粒体而非胞浆从细胞中分离出线粒体，碳酸钠处理后WB检测不溶部分（P）和可溶部分（S），发现Cox5a前体蛋白和线粒体结合的比较紧密，并不会被碳酸钠从线粒体中“洗出”（另一蛋白Cis1则结合的不那么紧密会被“溶”到碳酸钠中）同样在线粒体转运受限的条件下，无跨膜序列的蛋白Sod2的前体也紧密结合在线粒体上，不会被碳酸钠溶出，说明线粒体转运受限时，蛋白堆积定位于线粒体并不依赖于跨膜序列稳定对PSD1进行序列分析，发现Cox5a前体堆积定位于线粒体是依赖于PSD1上线粒体靶向序列MTS和疏水序列HS的前面发现PSD1过表达能引起线粒体转运障碍，造成Cox5a前体紧密的堆积在线粒体，那堆积之后细胞会有什么反应呢？测序发现：转录因子PDR3表达增加根据测序结果的提示，以转录因子PDR3的下游Cis1为指标看过表达PSD1后Cis1的表达情况：PSD1过表达会促进Cis1的表达，且促进作用是PDR3依赖的过表达不引起线粒体转运障碍的蛋白测不会促进Cis1的表达对PSD1进行序列分析，找到上面关键的序列：依然是MTS、HS敲掉线粒体转运受限之后上调的PDR3或促进转运的ATP1-111后，Cis1表达下调，暗示线粒体表面发生蛋白堆积时Cis1表达会升高前面找到确证了PDR3和转运受限的关联，开始看PDR3的功能：敲掉PDR3后，堆积的cox5a前体降解速度变慢，暗示PDR3有“疏导交通，缓解拥堵”的作用验证一下PDR3的“疏堵”作用：过表达PDR3能够减少Cox5a前体的堆积PSD1过表达造成转运障碍后线粒体耗氧减少，敲掉PDR3后耗氧进一步减少，暗示PDR3对于线粒体呼吸的作用刺激细胞造成线粒体转运障碍会出现线粒体DNA缺失的rho-cells，敲掉PDR3线粒体DNA缺失的细胞增多，暗示PDR3对线粒体的保护作用，综合起来讲PDR3能促进堆积的蛋白降解，保护线粒体（呼吸、线粒体DNA）Cis1是PDR3的下游，前面的结果也发现了Cis1和线粒转运障碍存在关联，进行定位研究发现Cis1定位于线粒体敲掉Cis1和敲掉PDR3一样，会使线粒体DNA丢失，而连续表达Cis1会减少Cox5a前体的堆积、增加成熟Cox5a的量，暗示位于PDR3下游的Cis1参与PDR3对线粒体转运障碍时的保护敲掉Msp1后，转运障碍条件下Cox5a前体堆积加重，成熟Cox5a减少，正常条件下缺失Msp1则不会造成Cox5a前体堆积，暗示Msp1只在“病理”条件下参与Msp1缺失条件下，连续表达Cis1促进Cox5a前体降解的作用消失，暗示Cis1通过Msp1发挥“疏堵”作用Cis1和Msp1互作Cis1定位于线粒体是外膜蛋白Tom70依赖的Tom70、Msp1、Cis1三者存在互作，且互作会因为转运障碍增强综合起来：线粒体转运功能受限后，PDR3上调，进而上调位于其下下游的Cis1，Cis1通过Tom70定位于线粒体表面，召集Msp1，最终促进堆积于线粒表面蛋白的降解 细胞是台精密的机器，包含各种信号通路调控各种功能、应对各种场景！文章作者由线粒体蛋白需要细胞核编码、胞浆合成后转运到线粒体想到一种场景，即转运受阻！由这个设想出发自己搭建起模型，然后一步一步摸索，理清细胞在分子层面是如何动员起来“疏堵”的 - 是自己发现问题，然后组织方法、解决问题，而非被动的解决别人提出的问题！Weidberg H, Amon A. MitoCPR-A surveillance pathway that protectsmitochondria in response to protein import stress[J]. Science, 2018, 360(6385):eaan4146.想了解更多CNS级期刊最新内容，请关注我们的公众号，常有更新哦，也可加笔者微信交流：qianle522568！

铸就恒久品质，创造新鲜生活。二十年余来，松下冷链(大连)在商用制冷设备领域孜孜以求、精益求精，创新不断、精彩不断，在业内率先通过ISO9001质量管理体系、ISO14001环境管理体系、OHSAS18001职业健康安全管理体系、ISO13485医疗器械质量管理体系、CE等国际化认证，获准进入美国、欧盟、日本、东南亚等国家和地区，走上了国际化发展道路。目前国内外用于储存生物大分子、细胞、组织、人体器官组织、全血、血浆、血清、生物体液或经处理过的生物样本DNA、RNA蛋白等的超低温箱的需求越来越多，但目前国内市场的超低温箱的品牌冗杂，大多数产品都存在箱内温度均一性较差，保温层材质厚以至于产品看起来比较“笨重”，松下冷链(大连)技术团队针对于科研现状，潜心研发，现推出医用超低温箱MDF-U780V。产品特点：●个人机型&实验室内机型 独有的压缩机技术和先进的复叠式制冷系统提供了稳定的超低温环境，优异的制冷技术，外加精良的箱体设计达到最佳的保温效果。●人性化设计 过滤网检测由微电脑自动控制，确保正常的制冷循环冷凝器过滤网位于机身前面右下侧，开拉式，便于清洗和更换。紧凑设计的机身，仅需少量的放置空间，可置于室内，适合个人使用。防滑设计，可单手操作的外门把手，可另行附加挂锁，保存更加安全。●MDF-U780V 医用超低温箱以最小的占地面积提供最大的储存容量，满足你不断增长的样品储存需求。专利的VIP真空隔热板技术，同体积的情况下和传统超低温箱对比，有效容积提高了22.1%。融合国内外先进技术专利，为您打造出性价比超高的超低温箱。欢迎各位业内人士前来咨询。

尽管CAR-T的研究取得的一些进展，但依然存在一些问题，如：肿瘤“逃逸”造成复发、细胞因子风暴等毒副作用、灵活性不高（改造的T细胞只能针对特定肿瘤抗原）。此次整理分享的是一款相当“灵活”的CAR-T，只需对T细胞进行一次改造即可通过更换配体快速改变T细胞靶向性以识别新的肿瘤抗原，具体内容如下： 设计思路：传统CAR是scFv段和胞内信号段一起表达于T细胞表面，文章作者设计的SUPRA CAR则是将一个BZip和胞内信号段一起表达于T细胞，通过加入不同的配体（zipFv-一端识别结合BZip，另一端识别结合肿瘤抗原）实现对T细胞靶向性的控制，这样设计的优势在于只需对T细胞进行一次改造，后续即便肿瘤抗原逃逸，只需要给予新的、对应的zipFv配体即可！ In vitro验证：三种不同的细胞系，分别表达Her2、Meso、Axl，加入对应的zipFv配体后可实现对相应细胞的高效杀伤 此系统的另一个优势在于“多处可调”（zipFv上Fv对抗原的亲和力可调、zip对T细胞表面相应受体亲和力可调；配体zipFv加入的量可调；T细胞表面zip受体表达水平可调）：对于T细胞表面不同亲和力的zipFv配体激活T细胞产生IFN-γ的能力与亲和力正相关。 以IFN-γ为指标看各个可调节点和T细胞激活水平的相关性 SUPRA系统的灵活性不只体现在上面讲的可调性，它还具备可控性：通过加入阻断配体SYN可降低CAR-T的细胞毒性，且抑制作用和阻断配体与zipFv的亲和力正相关 可控性 - “or”逻辑：靶细胞表达两种抗原时，可在体系内加入两种zipFv配体，实现“or”逻辑-只要细胞表达一种抗原即可实现杀伤 可控性 - “not”逻辑：假设肿瘤组织和正常组织都表达Her2，但正常组织还表达Axl，在体系内先加入识别Axl的zipFv，再加入识别Her2的zipFv，结合在正常细胞的Axl-zipFv会阻断Her2-zipFv的识别，抑制CAR-T的细胞毒作用。对于不表达Axl的组织Axl-zipFv则无法发挥抑制作用 可控性 - 又来了一个“and”逻辑，加入了共刺激域：只有两条通路都打通T细胞才能激活 可控性 - 针对不同T细胞亚群：针对CD4和CD8 T细胞设计了不同的配体系统（RR对应CD4和FOS 对应CD8），通过加入不同的配体可实现对细胞亚群的控制 In vivo验证有效性 In vivo验证有效性：还做了阴性对照RR zipFv组、以IFNγ为指标看T细胞激活程度 换个肿瘤模型继续验证体内有效性 In vivo验证可调性：T细胞激活水平（以IFNγ为指标）与配体zipFv的量、亲和力正相关 In vivo验证可控性：阻断zipFv可抑制T细胞激活（以IFNγ为指标） 综合起来作者就是设计了一个高度灵活的、精确可控的CAR-T系统 文章思路很简单，但极具创新性！笔者没有去考证文章作者的背景，但隐隐觉得这篇文章的作者里肯定有做结构生物学的，因为这篇文章从思路的产生到zipFv配体的设计制备纯化都需要极强的结构生物学基础！反观“功能”层面的验证，文章作者只做了细胞毒、IFNγ、CD69，并没有做如CAR-T细胞接受刺激之后的增殖、分化检测、persistence、exhaustion等相关指标的检测。 Lan Y, Zhang D, Xu C, et al. Universal Chimeric Antigen Receptors for Multiplexed and Logical Control of T Cell Responses[J]. Cell, 173, 1-13, May 31, 2018.想了解更多CNS级期刊最新内容，请关注我们的公众号，常有更新哦，也可加笔者微信交流：qianle522568！

    今天，GE细胞成像研讨会在北京隆重举行。本次会议邀请了来自国内外的成像届学术大咖，分享了各种前沿的成像技术和方法在不同科研领域的应用。       没有到现场的朋友没有关系，我们开放了全程的视频回放，您可以随时扫描下方二维码来观看。       除此之外，更令人惊喜的是，会上隆重发布了全新一代DeltaVision™ Ultra高分辨活细胞成像系统，喏，就是下面这个啦??，让我们来欣赏一下介绍视频！视频1DeltaVision Ultra高分辨活细胞成像系统  DeltaVision™ 拍摄活细胞到底有多厉害？看看这些图片就知道了！视频2DeltaVision 活细胞工作站系列图像展示       为什么DeltaVision™ 活细胞成像系列可以拍出如此出色的图片？GE的新产品都有哪些亮点呢？下面我们一一为您介绍一下。【外观介绍】 如果您是个颜值控，那么相信全新一代DeltaVision™ Ultra完全符合您的口味。科技感十足的哑光黑硬朗机身，再配以浆果红色流畅的线条，每一个细节都彰显对于工艺的极致追求。【极致性能】 作为业界最受欢迎的高分辨活细胞成像系统之一，新一代产品结合了多项全新技术与性能改进，活细胞成像从未像现在这样如此简单。TruLight™ Illumination 新型七色固态荧光光源 新一代环境控制装置新一代 sCMOS检测器可适配多种样品类型的精良载物台还原型反卷积成像技术 想了解更多DeltaVision高分辨活细胞成像系统？请长按或扫描下方二维码了解。       北京德泉兴业商贸有限公司为GE healthcare北京及山东科学仪器独家授权。       现已提供全线产品支持，欢迎来函及致电：    扫描二维码了解更多GE成像产品：

找到了一篇相对较老的Cell，以恶性疟原虫为对象，研究细胞间信息的传递，工作量不大，但很精巧！恶性疟原虫要完成其生活史需要人和蚊子两个宿主，在人红细胞内经历滋养体（又称环状体）/裂殖体/配子体几个阶段，文章详细内容如下： 为了研究胞间信息传递，构建了两种恶性疟原虫，都表达绿色荧光蛋白，3D7edhfr对WR耐药，CS2eBsd对Rs耐药，两者单独感染红细胞于WR+Rs培养体系内无法在红细胞内形成环状体，只有混合培养时才能成功感染红细胞，形成环状体，暗示两种虫体之间存在耐药信息的传递 换了“虫子”验证耐药信息的传递：只有耐两种药的“虫子”混合培养才能在WR+Rs培养体系中形成环状体，携带耐药信息的红细胞或质粒均无法在“双药”体系中长出环状体，暗示红细胞或质粒均不足以传递耐药信息 耐药信息发生传递，那荧光蛋白信息呢？两种带不同荧光蛋白的疟原虫共培养后，荧光蛋白出现了共表达，暗示荧光蛋白信息也发生了传递 用荧光原位杂交探针检测耐药基因，发现共培养后耐药基因确实发生了传递，出现了同时表达两种耐药基因的疟原虫 PCR扩增后再次确证：耐药基因和荧光蛋白基因发生了传递 既然发生了信息传递，那么信息传递是否需要两者接触呢？利用trans well隔离培养两种疟原虫，发现耐药信息传递不需要接触，且存在方向性-由CS2eBsd传向3D7edhfr 再次验证传递存在方向性 前面是以环状体形成为指标验证耐药，在核酸层面再次确证发生了耐药信息的传递 将两种疟原虫共培养于上层小室，取分泌到小室外的培养基上清加入到“双药”体系培养3D7edhfr，发现耐一种药的3D7edhfr能够在“双药”体系中存活且扩增能力与加入的混合培养上清体积成正比！这个类似rescue的实验说明耐药信息传递的载体被分泌到了培养上清中 耐药信息是被分泌到培养上清中，且存在方向性，设计了新实验：CS2eBsd于上层小室培养，让其分泌“耐药信息载体”到下层，可见，分泌时间越长，越利于下层疟原虫获得耐药信息进而扩增 将环状体期或裂殖体期的分别耐药的两种疟原虫置于“双药”体系共培养，发现环状体期共培养在双药体系中生长更好，暗示耐药信息是在环状体期发生传递的 分别耐药的两种疟原虫置于上层小室共培养一段时间后移除上层小室，药物刺激组的配养上清更能促进新的疟原虫生长，暗示药物刺激能促进耐药信息载体的分泌 微丝和微管参与细胞的分泌功能调节，使用微丝或微管抑制剂后，两种分别耐药疟原虫共培养的“双药”体系中环状体形成减少，且存在剂量-效应关系，暗示耐药信息载体可能是细胞分泌的囊泡 100kDa的“袋子”能阻碍耐药信息的传递，暗示耐药信息载体大于100kDa 原子力显微镜确实拍到红细胞有“吐泡”，白色箭头是正在“吐”，黑色箭头是已经“吐”出来了，视野较小，不具一般性！ 大视野下，设置多组实验发现：混合培养组红细胞的确会分泌更多的“小泡”，加抑制剂后分泌减少，暗示耐药信息载体是这些“小泡” 离心法分离得到培养上清不同组分，发现4号5号促进裂殖体形成能力最强 比较无促进作用的3号和有促进作用的4号，发现4号尺寸在70nm，3号尺寸较小，再结合上面的数据：尺寸70nm的外泌体样囊泡（exsome-like vesicles没有说是外泌体）为耐药信息载体 KO PTP2蛋白后，疟原虫接受耐药信息，环状体形成受到抑制，暗示PTP2蛋白在耐药信息传递过程中起到重要作用 SIM超分辨和电镜看PTP2蛋白定位情况：定位于SBP1标记的Maurer’ s cleft（MC） KO PTP2后外泌体样囊泡生成减少 环状体阶段接收到的信息传递到了胚子体阶段 “双药”体系共培养组才能高效的发育到配子体阶段 共培养后获得耐药信息的疟原虫发育成配子体的能力强于天然双耐药组（3D7idhfr/Bsd） ，提示胞间信息传递对于疟原虫发育的巨大正向作用 换个方法验证胞间信息传递对于发育的正向作用：流式检测配子体的量 笔者觉得这篇文章最闪光的地方不在于用到了多么高端实验技术，而在于实验设计的巧妙：利用trans well空间分隔能力巧妙的研究了外泌体样囊泡，更进一步，梯度离心拿到不同组分，发现了囊泡尺寸和信息传递功能之间的相关性，王晓东老师当年发现细胞色素C在凋亡中的作用也是这个模式（柱分离接到的不同试管依次验证功能，慢慢纯化，最终发现起效的是细胞色素C的）- 很简单，很平凡……  Regevrudzki N, Wilson D W, Carvalho T G, et al. Cell-Cell Communication between Malaria-Infected Red Blood Cells via Exosome-like Vesicles[J]. Cell, 2013, 153(5):1120. 想了解更多CNS级期刊最新内容，请关注我们的公众号，常有更新哦，也可加笔者微信交流：qianle522568！

之前分享过双特特异性抗体的内容，此次分享的是关于双功能蛋白M7824的内容，不同于双特异性抗体，M7824一端是能识别结合PD-L1的抗体，另一端则是用于trap TGF-β的受体，同时阻断相互独立又彼此互补的PD-L1通路和TGF-β通路能够促进免疫细胞对肿瘤细胞的杀伤，具体内容如下：结构设计：全长PD-L1单抗（源于已经上市的avelumb）通过linker 融合TGF-βRII（可识别结合同源二聚化的TGF-β）同时阻断内源/外源两条免疫抑制通路 在细胞及包被相应分子的孔板上验证M7824结合的特异性（C：HEK293表达PD-L1 – 检测对PD-L1结合特异性，D：不同亚型TGF-β包被于孔板 – 检测对TGF-β结合特异性，E：M7824或PD-L1抗体包被于孔板 – 检测对TGF-β结合特异性 F：PD-L1包被于孔板加trap control或M7824后再加TGF-β – 同时检测对PD-L1/TGF-β结合特异性） M7824能够增强T细胞活性抑制TGF-β信号 M7824药代动力学：非线性代谢，PD-L1阻断趋势与药代动力学曲线一致 M7824能够降低血清中TGF-β浓度（trap之后内化进而清除。TGF-β3清除作用较差，文章作者分析是因为TGF-β3本来含量就很低，因检测方法限制所以没能反映出M7824对其清除能力） In vivo：M7824能够抑制肿瘤生长（做了多个肿瘤模型验证-略） In vivo：M7824能够抑制肿瘤转移 In vivo：M7824能大幅延长荷瘤小鼠存活时间，且对存活小鼠再次接种的肿瘤无法生长，暗示M7824产生了长期的保护性免疫反应 In vivo，M7824对于CD8+ T细胞的正向作用：A促进浸润，B促进浸润细胞的激活，C促进浸润细胞的增殖，D促进浸润细胞的成熟，E促进产生effector memory亚型 In vivo，M7824对于NK细胞的正向作用：促进NK细胞的浸润，激活，生长 In vivo，M7824对于DC细胞的正向作用：促进其在肿瘤部位聚集成熟 In vivo，M7824抑制中性粒在肿瘤部位聚集，促进单核细胞聚集 In vivo，M7824促进M1型巨噬细胞在肿瘤部位聚集，但不改变两型比例，降低了TAM的exhausion 还做了流式的“量效” IHC和流式结果一致，M7824促进了CD8+ T细胞浸润 换了另一个肿瘤模型把免疫细胞变化检测了一遍 药物刺激后进行RNA测序，分析基因表达模式：M7824作用后基因表达模式和PD-L1抗体作用后类似，暗示PD-L1阻断药效团在基因表达层面的影响占主导 基于基因表达的免疫打分：趋势与流式检测的M7824对免疫细胞亚型的影响一致 M7824促进免疫效应分子基因表达 “正着”看完M7824起效机制（激活免疫细胞），开始“反着”看，用抗体去除小鼠体内免疫细胞，观察对药效影响：M7824抑制肿瘤细胞生长是依赖于CD8+ T和NK细胞的，不依赖CD4+ T细胞 M7824上包含了全长的IgG1，所以看一下它是否依赖ADCC作用起效：糖基化M7824溶解肿瘤细胞、抑制其生长的作用和M7824相当，暗示不依赖ADCC发挥作用 α-SMA在TGF-β信号下游，M7824有效阻断了TGF-β信号 联系实际、扩大自己药物应用范围：M7824和放疗联用，提高放疗疗效 M7824和放疗联用促进了“远位效应” 联系实际、扩大自己药物应用范围：M7824和化疗联用，提高化疗疗效 目前M7824已进入I期临床试验用于治疗实体瘤，关于这篇文章笔者觉得有趣的点：1、做双功能蛋白而非双特异抗体，文章作者选的两个功能都是阻断免疫抑制通路，却又巧妙相关-PD-L1药效团将M7824带到肿瘤部位，到位后TGF-β药效团在肿瘤微环境内可发挥作用trap TGF-β，trap之后整个复合物会内化入胞实现对TGF-β的清除；2、不光做细胞、蛋白水平的检测，还做了测序检测基因表达，得到数据后与细胞、蛋白数据关联-数据更完整、有说服力；3、以“放化疗的副作用之一是促进TGF-β、PD-L1表达”作为理论基础进行过渡联系实际、扩大自己药物应用范围！产生这样思想的底层是什么呢...... Lan Y, Zhang D, Xu C, et al. Enhanced preclinical antitumor activity of M7824, a bifunctional fusion protein simultaneously targeting PD-L1 and TGF-β[J]. Science Translational Medicine, 2018, 10(424):eaan5488.想了解更多CNS级期刊最新内容，请关注我们的公众号，常有更新哦，也可加笔者微信交流：qianle522568！

梅特勒-托利多                                            densito手持式密度计                                                                一键操控，一手掌握 1: 随时随地测量密度       无论是室内还是室外，亮彩的液晶显示屏给您最佳的视觉体验。背光可见式测量池能够使您轻松观察样品是否有气泡或分层等现象的产生，提升测量结果的准确性。随机配备的保护套更能使其适应多种测量环境.2: 轻便、符合人体工程学设计        无论您习惯左手还是右手，工作环境是否需要戴工套，一切都不是问题。超轻的机身配以符合人体工程学的质感设计——您只需要单手即可完成整个操作！3：易于使用       无需进行手动进样，仅需轻轻向上推动操纵杆，即可完成自动吸液。引导式工作流程可清晰的指导您完成从测量到清洗的多个步骤。4：densito可在任何环境条件下使用        适用于各种应用：不仅可以测试葡萄的成熟度或发酵度，还可以用来检测入库原料和成品的质量。也可通过仪器的内置计算功能来测量密度、比重、白利糖度等。独特地设计使您可用单手进行操作，以便帮助您更顺利地完成取样过程。

              长非编码RNA主要起维持细胞核完整、调控基因表达的作用，此次整理分享的文章研究的是长非编码RNA在核糖体RNA合成过程中如何发挥其调控作用。这篇文章做的极其“细腻”，具体内容如下：RNA测序发现长非编码RNA SLERT高表达，NB也确认了这一点 SLERT表达模式 以SLERT表达水平相对低的HeLa细胞为工具，设计缺失不同位点的质粒转染，NB检测SLERT表达水平，发现位于末端的H/ACA snoRNP对于SLERT表达是必须的 SLERT定位于核仁，而编码SLERT的TBRG4 DNA不定位于核仁，暗示SLERT表达后会重定位  对SLERT进行突变，发现位于末端的snoRNA被突变后SLERT不再定位核仁，而具备snoRNA末端、中间序列插入EGFP组依然定位于核仁，暗示SLERT需要snoRNA末端以重定位到核仁 因为SLERT定位于核仁，而核仁是rRNA的合成场所，所以设计用CRISPR Cas9 KO掉SLERT：只KO了SLERT，而未影响TBRG4蛋白的表达 KO SLERT后pre-rRNA及成熟rRNA均下调，暗示SLERT参与rRNA的合成调控 F：5-FU阻断pro-rRNA processing发现KO SLERT后未成熟pre-rRNA合成降低，暗示SLERT是在转录层面调节rRNA的合成；G：荧光素酶报告基因法确证了SLERT是在转录层面进行调节 KO之后rescue再次确证SLERT调控pre-rRNA合成 在功能上的调控必定依赖于结构层面的互作，因此给SLERT加一个tRSA标签，去“钓”与SLETRT互作的蛋白（RBPs） 钓完之后质谱分析，发现了蛋白DDX21 反过来蛋白DDX21也钓到了SLERT，共定位结果也确证了两者发生互作 完整的SLERT和非snoRNA段钓DDX21的能力相当，暗示SLRERT上互作位点在非snoRNA段 看SLERT上哪一段与DDX21互作-281-423的143nt长片段 EMSA实验再次确证SLERT143为与DDX21互作序列 由SLERT以互作为线索找到了DDX21，看DDX21的定位情况：定位于核仁 SIM拍到了DDX21在核仁内更加细节的情况：DDX21呈圆环样分布于核仁，平均每个细胞有约60个圆环状结构（为了排除是抗体或者固定造成的环状结构，作者还做了活细胞成像，确证DDX21呈环状分布） 分别用AMD阻断rRNA转录或5-FU阻断rRNA processing发现阻断转录后DDX21不再形成环状结构，阻断rRNA processing不影响其环状结构形成，说明DDX21的组装发生在rRNA转录阶段 DDX21组装成环状结构在转录阶段形成让人联想到在转录阶段很重要的RNA聚合酶，SIM观察两种共定位后发现RNA聚合酶亚单位RPA194定位于DDX21环的中心位置 多种细胞系的活细胞成像结果确证了RNA聚合酶定位于DDX21环状结构中心 IP结果确证了DDX21与RNA聚合酶发生互作  结构层面的互作往往意味着功能层面存关联，沉默DDX21后发现pre-rRNA及未成熟pre-rRNA上调，暗示DDX21抑制rRNA的合成 沉默DDX21后，编码rRNA的rDNA占位增加，暗示DDX21是通过阻止RNA聚合酶占位DNA抑制rRNA的转录最终抑制rRNA的合成 前面观察到DDX21环状结构中心是RNA聚合酶，而RNA聚合酶可以结合rDNA，这些再结合支撑文档一些数据（略）提示做三者的共定位研究，发现：RNA聚合酶包裹rDNA，DDX21包裹RNA聚合酶这种“大圈套小圈”的模式 前面已经证实DDX21能影响pre-rRNA的合成，那两者的定位关系呢：pre-rRNA定位与DDX21环状结构边缘，pre-rRNA的量与DDX21环的直径正相关 前面还发现了SLERT能影响pre-rRNA的合成，共定位研究发现SLERT与DDX21共定位，不与RNA聚合酶共定位 SLERT不但与DDX21共定位，而且其表达量与DDX21环的直径正相关 KO SLERT并不影响RNA聚合酶及DDX21的表达，但这三者都能影响pre-rRNA的合成，且存在一定关联(互作/共定位)，SLERT影响DDX21环的直径，文章作者创造性的假设SLERT通过影响DDX21构象调节pre-rRNA的合成 荧光共振能量转移实验研究SLERT对于DDX21分子内及分子间互作的影响，发现KO SLERT之后DDX21分子内头尾互作降低，分子呈open构象；分子间互作不收SLERT调节 IP找DDX21上与SLERT及RNA聚合酶互作的序列（两端序列负责定位，支撑文档里有相应数据支持，略去） KO SLERT后DDX21与RNA聚合酶互作增强，暗示Open构象的DDX21（这个说法依据为FRET结果）与RNA聚合酶互作能力强 IP实验确证：SLERT竞争性抑制DDX21与RNA聚合酶互作 过表达SLERT促进RNA聚合酶对rDNA的占位，KO则抑制，结合前面的结果：SLERT通过竞争性抑制DDX21与RNA聚合酶的互作促进RNA聚合酶占位rDNA，启动转录 综合起来：SLERT与DDX21互作，促进其分子内头尾互作，影响DDX21构象使其组装成更大的减少与RNA聚合酶Pol I的互作，促进pre-rRNA的合成。当SLERT缺乏时，DDX21成open构象，组装成的环直径变小，与RNA聚合酶Pol I互作，抑制pre-rRNA的合成 失调的rRNA合成与肿瘤发生有关，KO SLERT后细胞增殖及肿瘤生长受到抑制，过表达则促进细胞增殖，，暗示SLERT能促进肿瘤发生 - 做两个小实验“拉近”一下和应用转化的关系-a potential therapeutic target 文章按逻辑顺序呈现：发现SLERT通过与DDX21互作改变DDX21构象进而改变其组装成的环状结构直径，降低与RNA聚合酶的互作，最终促进pre-rRNA的合成，然而实验进行的历史顺序很可能不是这样的！实验数据往往是纷乱的呈现在我们眼前，怎样才能抽丝剥茧缕清线索？笔者浅薄的认知：主线是基于结构的互作传递、产生量变引起生命活动的变化！对于这篇文章：SLERT、DDX21的量分别与pre-rRNA正、负相关，这种量的相关性来源于互作 - SLERT“包裹”DDX21，DDX21“包裹”RNA聚合酶，RNA聚合酶“包裹”rDNA。 Xing Y H, Yao R W, Zhang Y, et al. SLERT, Regulates DDX21 Rings Associated with Pol I Transcription[J]. Cell, 2017, 169(4):664.想了解更多CNS级期刊最新内容，请关注我们的公众号，常有更新哦，也可加笔者微信交流：qianle522568！

超微量紫外可见分光光度计（梅特勒-托利多） UV5Nano用于生命科学领域的超越系列紫外可见分光光度计。1：精确的超微量测量2：在很宽浓度范围快速测量3：强大的紧凑式结构4：生命科学直接测量和专用方法 .FastTrack™技术可靠的超微量测量避免出错，确保准确* 巧妙的臂内镜面光转向设计可以直接在集成光电池上测量样品*光程可在0.1或1mm之间准确调节并能再现*牢固耐用的专利设计消除了光程漂移 - 不需要昂贵的停工再校准*在选定的光程测量时安全锁定测量臂*测量时样品不会失去水分，提高了重现性*90度开口的测量臂可以方便的滴加样品

       针对实体瘤，CART细胞traffic到肿瘤部位并在此停留、存活一直是个需要解决的问题，之前整理分享过一篇Nature，文章作者发现了一个转录因子此能够促进T细胞的停留，这次分享的文章是通过引入IL-7和CCL19提高CART细胞的增殖及浸润能力。CAR的设计：CAR（三代、靶向CD20），IL-7（提高细胞的增殖、生存能力），CCL19（提高细胞的迁移能力）CAR的表达情况在CART中引入了IL-7和CCL19，进行验证：7x19 CART能特异性的响应刺激分泌IL-7和CCL19 ( red bar: co-cultured with mitomycin C-treated P815-hCD20, gray bar:  immobilized anti-CD3 mAb, blue bar: negative controls, CAR-T cells were co-cultured with mitomycin C-treated P815, white bar: negative controls, without any stimulations) In vitro：抗原刺激后7x19 CART有更强的增殖能力不刺激不增殖，多轮刺激7x19 CART依然增殖，表现出更强的persistenceIn vitro：抗原刺激后7x19 CART有更强的迁移能力In vitro：特异性杀伤肿瘤细胞的能力In vitro反向验证IL-7的作用：CD127为IL-7受体，CCR7为CCL19受体，利用抗体分别阻断两个受体，阻断IL-7受体7x19 CART的增殖收到抑制，阻断CCL19受体不影响增殖In vitro反向验证CCL19的作用：阻断CCL19受体抑制了7x19 CART的迁移In vivo：延长荷瘤小鼠生存时间In vivo：抑制肿瘤生长（还做其他类型肿瘤，套路都一样，思路最重要，故略去）文中主做的是双共刺激域的三代CART，关于二代或者三代CART谁好一直没有定论，所以验证了一下二代CART：7x19二代CART依然表现出了优于传统CART的抗肿瘤作用，暗示引入IL7、CCL19的意义In vivo正向验证了引入IL7和CCL19的意义之后开始反向验证：设计了分别引入IL-7和CCL19的CART单一引入一种因子或者将两种CART物理混合的效果均不如将两种因子同时引入的7x19 CART好高分文章牛的地方就在于“像强迫症一样的折腾”，“阻断”IL-7和CCL19后看7x19 CART的效果：延长存活。抑制肿瘤生长的作用被削弱，反向证明了IL-7和CCL19的积极作用对于实体瘤，病理切片不可少，HE片子：7x19 CART治疗组肿瘤出现了更多的坏死区7x19 CART治疗组有更多的T细胞浸润到了肿瘤部位-呼应CCL197x19 CART治疗组还出现了DC细胞浸润，且与T细胞共定位，暗示7x19 CART能把DC细胞召集到肿瘤部位（DC细胞有抗原提呈作用，它应该会把内源T细胞“激活”，所以，往下看！）构建了一个能够抗受体鼠内源T细胞的模型：7x19 CART是用CD90.1-CD90.2+的细胞制备的，受体鼠自身T细胞为CD90.1+CD90.2-，发现受体鼠内源T细胞（CD90.1+）的确出现在了肿瘤部位用抗体“消灭”受体鼠内源T细胞后，7x19 CART抑瘤作用减弱，暗示除7x19 CART抑瘤外，内源T细胞也有贡献CART细胞治疗后存活4周的小鼠脾脏T细胞亚型进行分析：7x19 CART治疗组，不管是内源T细胞还是CART细胞都有更高比例的central memory亚型（CD44+CD62L+）分选得到CART细胞和内源T细胞：7x19 CART细胞依然能够特异的对抗原刺激产生反应分泌IFN-γ；传统CART治疗组的内源性T细胞对于新肿瘤抗原刺激不会产生反应，而7x19 CART治疗组的内源性T细胞会对新抗原产生反应，暗示7x19 CART诱导受体鼠产生了肿瘤反应性T细胞为了验证“7x19 CART诱导受体鼠产生了肿瘤反应性T细胞”的猜想，对7x19 CART治疗组存活下来的小鼠进行再次种瘤，发现无再次接种的肿瘤是否表达CD20抗原，7x19 CART治疗过的小鼠均能看自身抑制肿瘤生长，再次证明7x19 CART7x19 CART诱导受体鼠产生了肿瘤反应性T细胞，且能识别结合新的肿瘤抗原-表位扩展 这篇文章前面的部分就是通常做CART的套路：设计、检测增殖、杀伤、分化、浸润等，笔者觉得最有趣也是最具提示意义的地方在于CART和DC共定位、内源T细胞浸润到肿瘤部位并产生了肿瘤反应性，这里面还有深层次的免疫细胞间“互作”可挖。CART只是对大自然亿万年进化而来的T细胞进行了小小改造，我们“功利”性的关注它和肿瘤细胞的“互作”，但是“一石激起千层浪”也说不准 - 进入体内后其实CART会“偶遇”很多很多......Keishi Adachi, Yosuke Kano, Tomohiko Nagai, Namiko Okuyama, et al. IL-7 and CCL19 expression in CAR-T cells improves immune cell infiltration and CAR-T cell survival in the tumor.[J].Nature Biotechnology, 30 January 2018.想了解更多CNS级期刊最新内容，请关注我们的公众号，常有更新哦，也可加笔者微信交流：qianle522568！

      高压蒸汽灭菌是生物实验常用的灭菌方法，因此高压灭菌锅应用非常广泛，是很多实验室不可或缺的角色。下面是我们总结的灭菌锅的日常维护保养TIPS，供大家参考（好好学习，天天向上）：日常维护保养TIPS一、每周：1．每周必须至少排放一次灭菌腔内的水，同时清洗灭菌腔体。这样可保证灭菌质量、延长加热管寿命、防止排水管道堵塞。2．定期用干净的抹布，擦拭灭菌腔底的水位传感器上的污垢，防止水位传感器被腐蚀，造成加热管干烧。3.取出水位板，观察加热管表面是否干净。如有污垢应用软毛刷擦洗并冲水。4. 确保门框、胶圈无损坏，进汽口不可堵塞。建议最好每天使用完后在胶条上涂滑石粉，以延长胶条寿命。注意：使用纯净水、保证用水及加热管表面干净对延长加热管寿命非常重要。二、每月：1.定期检查密封圈表面是否有污垢，如有污垢，可以加少许清洁剂并用湿布擦拭干净。2.如果长时间不使用，必须把灭菌腔里的水排干。三、每半年：检查一下漏电保护开关，如致微灭菌锅，请按漏电保护开关印有“T”标志的复位键。四、每年：除自行检查一次安全阀是否正常工作外，建议一年之后，每年要请有资格的检测部门做一次全面系统的检查，包括：腔体体、门、管路系统、电器系统等。安全阀、温度表、压力表要定期校验。五、停放保养： 如长期停放，灭菌锅应置于通风、干燥处，不得被雨淋，必要时应有遮盖物。应排干蒸汽发生器内的水，并把门处于打开状态，灭菌室内要保持清洁干燥。            北京德泉已开启和厦门致微（ZEALWAY）灭菌锅多年的合作历程，其品质和服务均有保证。致微（ZEALWAY）灭菌锅也在各个行业有着广泛的应用，如制药（可3Q认证）、科研、高校、医院（可提供医疗注册证），欢迎来电咨询，热线热线热线（重要的事情讲三遍）-010-83834948；010-63836985

      上次分享的内容是凋亡过程中，BAK/BAX通过在线粒体外膜“打洞”使得线粒体DNA释放出来，这次整理分享的是线粒体自噬相关内容。截止到这篇文章，对线粒自噬过程中外膜相关分子事件研究较多，发生自噬的目的是“吞”掉线粒体DNA等“异物”，而这些异物位于内膜，因此推测线粒体内膜上存在相关调控分子-内膜自噬受体。自噬过程中LC3起到关键作用（结合到要被吞噬的“货物”上），作者利用Strep标记的LC3通过IP和MS技术“钓鱼”，找与LC3互作的蛋白，发现了PHB1和PHB2造线粒体自噬的模（OA是线粒体呼吸抑制剂，Parkin是个E3链接酶）-Parkin依赖的线粒体自噬：反过来用PHB1和PHB2能“钓”到LC3-II前面的IP结果只能说明LC3-II、PHB1、PHB2同时出现在了沉淀复合物中，无法判断出LC3-II是否是与PHB直接相互作用还是依赖于其他蛋白作桥梁，因此进行了进一步的IP实验，发现即便不加Parkin，PHB2依然能钓到LC3-II，暗示PHB2与LC3-II的互作更直接用纯化的GST-LC3去“钓，”进一步证实PHB2与LC3-II直接互作沉默PHB2后分别用PHB1、PHB2 IP：PHB1与LC3-II的互作是依赖于PHB2的前面在关注PHB1、PHB2、LC3-II三者的体系中确证了PHB2与LC3-II的直接互作，之前研究确证了某些能与LC3-II互作的蛋白，如GATE-16、GABARAP不与PHB2互作，更加暗示PHB2的关键作用，后面的实验围绕PHB2进行OA诱导的线粒体自噬中，ATP5B、HSP60、TIM50均会出现下调，RNAi沉默PHB2后这几个蛋白下调被抑制，暗示PHB2和线粒体自噬的正相关（ATG7是个自噬关键基因，沉默ATG7之后线粒体自噬受到抑制-相当于阳性对照）用Cre系统看PHB2在线粒体自噬中的作用：PHB2是线粒体自噬必需的在缺失Parkin（E3连接酶）的情况下，基本用OA诱导了自噬，胰酶也无法降解PHB，只有在Parkin存在条件下（介导线粒体外膜降解），胰酶才能接触到PHB将其降解，暗示线粒自噬过程中PHB会暴露于胞浆上面结果暗示PHB在线粒体自噬过程中会暴露于胞浆，LC3-II是位于胞浆的，应用蛋白酶体抑制剂后，PHB2无法将LC3-II沉淀下来，暗示互作对蛋白酶体的依赖前面利用的是IP技术，从逻辑上说明PHB2、LC3-II互作对蛋白酶体的依赖，应用PLA发从空间上看蛋白酶体对于两者互作的影响：蛋白酶体被抑制后互作显著下降（红点）应用蛋白酶抑制剂后，OA介导Parkin依赖的线粒体自噬过程中，线粒体形态上的变化：蛋白酶体抑制剂有助于维持线粒体形态OA能引起线粒体破损，蛋白酶体抑制剂能阻断线粒体的破损，沉默PHB2无此作用，综合起来：线粒体自噬时蛋白酶体降解线粒体外膜后PHB2才能与LC3-II互作 上面关于线粒体自噬时蛋白酶体降解线粒体外膜后PHB2才能与LC3-II互作的猜想是将孤立的实验（光镜、电镜、WB）结合到一起分析而来，共聚焦显微镜分辨率不足以解析亚细胞结构线粒体膜上发生的共定位情况，使用SIM进行观察，以实现在同一实验验证。 细胞静息时，PHB2（红色）分布在TOMM20（蓝色，代表线粒体外膜）附近，两者不会有接触，“红蓝”交替很好的勾勒出了线粒体的轮廓，LC3（绿色）不会出现在线粒体附近OA诱导自噬后，线粒体形态被破坏（红蓝交替勾勒的轮廓消失），LC3出现在线粒体附近，与PHB2发生共定位（红绿重合为黄色），未与外膜蛋白TOMM20（蓝色）共定位 OA诱导自噬但加入蛋白酶体抑制剂后，线粒体形态被破坏，LC3（绿色）只是出现在线粒体附近，无法与PHB2再共定位外膜、内膜、LC3同时标记：由左至右-静息状态下外膜、内膜蛋白（蓝、红）有序排列勾勒出线粒体轮廓，LC3不会出现在线粒体附近；OA诱导自噬后，线粒体形态丢失，LC3（绿色）与内膜蛋白（红色）共定位（黄色）；单纯沉默PHB2线粒体轮廓良好；对于PHB2沉默的细胞诱导自噬后线粒体形态丢失，LC3只是出现在线粒体附近将诱导了自噬的线粒拿出来看：由左至右-LC3不与外膜蛋白共定位；LC3与内膜蛋白共定位；LC3与内膜蛋白共定位发生在外膜蛋白破损处 利用分辨率更高的电镜再次确认：线粒体发生自噬时，LC3会出现在线粒体附近，在蛋白酶体将外膜降解后LC3可定位到线粒体内膜处WB、光镜、电镜的结果已经强有力的从结构、功能角度阐述了PHB2对于线粒体自噬的重要作用，开始找PHB2上与LC3互作的结构域，对PHB2和PHB1的AA序列进行比对突变结合IP技术（LC3、PHB2突变交替互相“钓”）找到了互作关键结构域LIR 121-124（YQRL）OA诱导自噬后，ATP5B会下调，PHB2被Cre“搞掉”后ATP5B不再下调，野生型的PHB2可以rescue，LIR域突变PHB2无法rescue和上面看ATP5B一样，接着验证LIR结构域的功能LIR突变影响到线粒体自噬相关功能，但不影响PHB2与HSP60的共定位LIR突变不影响其他功能，暗示PHB2通过LIR与LC3互作调节自噬而非其他间接途径调控自噬上面的实验都是在工具细胞系上进行的，在模式生物（使结论更加说服力）上验证PHB2对于自噬的关键作用：PHB2沉默组胚胎发育的模式与自噬关键基因ATG-7组（阳性对照）模式类似，暗示PHB2在线虫发育过程中对于自噬的调控依然发挥作用还是线虫上，看PHB2对于线粒体DNA的作用，模式依然与阳性对照ATG-7类似，再次说明PHB2在线虫发育过程中对于自噬的调控作用 这篇文章简单讲就是说明了一个蛋白（PHB2）对于自噬过程的调控作用，文章很大篇幅都在通过IP（互相“钓”）、PLA、共定位（共聚焦、超分辨、电镜）证明互作，证明互作后在做一点功能方面的验证。为什么是这个模式呢？笔者浅薄的理解：一切生命行为都有其分子基础，生命得以运作来源于分子热运动-彼此碰撞，进而发生的互作！IP能判断分子间能否互作，但互作是在一定空间下进行的，所以需要共定位这种空间层面的验证。特定空间彼此“相遇”，发生互作，而后产生新的“功能”。Wei Y, Chiang W C, Jr S R, et al. Prohibitin 2 Is an Inner Mitochondrial Membrane Mitophagy Receptor.[J]. Cell, 2017, 168(1-2):224.想了解更多CNS级期刊最新内容，请关注我们的公众号，常有更新哦，也可加笔者微信交流：qianle522568！

        IKA生产的磁力搅拌器凭籍其专业性畅销全球。在这里，总有一款适合您的需求。 下面为各位看官介绍几款全球限量版的产品。RCT basic：       全球热销的加热型磁力搅拌器，技术持续创新，优异的控温精度，忠实地体现实际温度并避免温冲。始终如一的高品质和智能诊断功能，为长时间的加热反应提供安全保障。安全温度可调（50-360℃），独立温度监控回路。防护等级 IP 42，成熟工艺下具有极佳防尘防水性能的铸铁镀锌外壳。IKA Plate（RCT digital）：       真正为化学家打造的坚固磁力搅拌器，先进的铝镍钴永磁技术，确保卓越的温度稳定性和磁力感应，耳目一新钢化玻璃，显示屏快速响应，具有卓越的耐化学性能，IKA SmartTemp-确保反应及化学家安全，更集成定时和计时功能，声响预警，特别适合投料过程，到达时间提示用户，并且不会中断反应过程。“锁机键”可有效避免参数设定被意外改动。C-MAG系列产品：        一体成型无缝陶瓷盘面，抗化学腐蚀性能极好，盘面温度高达500度，可轻松实现更高温度的控制。可选C-mag HS7基本性或控制型，以满足用户不同的控制需求。 RET control visc：       全球首创安全型加热磁力搅拌器，内置称重功能。清晰的TFT屏幕方便设定各种参数，如扭矩变化，监控物料转相过程。 集成温度控制系统结合外接温度探针，可精确控制样品温度。可选配双头PT1000温度探针，可同时监控样品和介质温度，精确控温±0.2℃。不锈钢盘面，最高加热温度可达340°C，可实现快速加热。 RS232及USB 接口可连接电脑进行参数控制及数据 拷贝，同时USB接口可用于固件更新。“锁机键”可有效避免参数设定被意外改动。     

肿瘤抗原的特异性及表达水平对于CART的疗效很关键，肿瘤特异性抗原往往存在异质性强的问题-同种肿瘤不同细胞间相同抗原表达水平不一，甚至随着治疗进行出现抗原表达丢失的现象，此次分享的是关于胶质瘤抗原CSPG4的内容，这个抗原很有意思，随着CART治疗其表达会出现上调。胶质瘤患者肿瘤组织CSPG4免疫组化肿瘤组织内CSPG4和平滑肌微丝蛋白α-SMA共定位正常脑组织不会表达CSPG4CSPG4表达水平和存活时间负相关利用从病人身上取得的肿瘤构建了GBM-NS细胞系，这个细胞系在CSPG4表达水平上存在差异GBM-NS细胞系上各种肿瘤抗原表达水平比较制备了针对CSPG4抗原的带有4-1BB共刺激域的CART：CART细胞的CAR表达水平及亚型CSPG4 CART体外能杀死肿瘤细胞抗原刺激后，CSPG4 CART增殖抗原刺激后，CSPG4 CART分泌细胞因子体内对于高表达肿瘤抗原的肿瘤，CSPG4 CART能有效抑制肿瘤生长，延长小鼠存活时间体内对于中等表达肿瘤抗原的肿瘤，CSPG4 CART能有效抑制肿瘤生长，延长小鼠存活时间小动物活体成像及流式发现CSPG4 CART在体内存在时间长于对照组（看的是persistence）CART干预后并未出现抗原丢失现象上面用的是单一4-1BB共刺激域，测试CD28共刺激域及CD28/4-1BB双共刺激域：体外并未表现出优势（双刺激域并未表现出优势）上面用的是单一4-1BB共刺激域，测试CD28共刺激域及CD28/4-1BB双共刺激域：体内也未表现出优势上面用的是单一4-1BB共刺激域，测试CD28共刺激域及CD28/4-1BB双共刺激域：在persistence上未表现出优势CSPG4 CART干预后，出现了一个很有趣的现象：CSPG4抗原（黑色峰为同型对照）表达出现上调（其他肿瘤抗原没有出现上调）通过分选得到不同表达水平的细胞群体Black histograms indicate the expression of CSPG4 in CSPG4L and CSPG4H cells as compared to unselected BT168-NS(white histograms)体外培养分选得到的两种细胞，发现并未出现CSPG4抗原表达上调的现象将分选得到的细胞分别移植到小鼠身上，体内培养一段时间后再分离检测发现：原来低表达组的抗原表达出现了上调，暗示体内的一些成分参与了抗原表达的调节既然前面结果暗示是体内的成分参与了调控，所以检测了肿瘤微环境内的细胞，发现小胶质细胞浸润到了肿瘤部位取得微环境组分进行分析发现相较正常脑组织，微环境内出现了两种细胞因子上调发现了小胶质细胞浸润及细胞因子出现在肿瘤微环境，文献有报道称小胶质细胞能分泌TNF-α，所以做了肿瘤细胞GBM-NS分别与小胶质细胞和TNF-α共培养，发现两者均能引起肿瘤抗原CSPG4的表达上调（Light gray, gray, and dark gray histograms indicate CSPG4 expression after hTNF? stimulation, no stimulation, and isotype control）分选出的、不同抗原表达水平的细胞经TNF-α刺激后均出现了CSPG4上调现象上面结果从正面说明了TNF-α对于CSPG4上调的作用，开始反面验证-利用抗体阻断，发现阻断后诱导上调的作用消失，确证了TNF-α对CSPG4的上调作用上面结果及文献均暗示了小胶质细胞和TNF-α存在关联，免疫荧光发现小胶质细胞（Iba1为小胶质细胞特异性marker）和TNF-α共定位-是小胶质细胞分泌的TNF-α进而引起CSPG4表达上调CSPG4与小胶质细胞在组织层面空间上的相关性，结合前面的结果也说明是小胶质细胞分泌的TNF-α进而引起CSPG4表达上调这篇文章设计的是针对肿瘤抗原CSPG4的CART，CART本身性质其实并不优异，最好的4-1BB CART的persistence在不足10天，文章作者在讨论部分讲这可能是因为血脑屏障的阻碍是的CART无法充分调动起免疫系统，这部分缺陷可通过多次“给药”来弥补！笔者觉得这篇文章有提示意义的点在于：1、需要对共刺激域进行筛选，且多并不意味着好；2、CART和脑部小胶质细胞存在互动，小胶质细胞分泌TNF-α能促进CART识别的CSPG4上调-这个“巧合”很利于CART发挥作用，具有提示意义！之前的文章往往忽略了CART和自身免疫细胞的互动，新近的文章开始关注这点，下次分享的内容也涉及CART和自身免疫细胞的互动。 Pellegatta S, Savoldo B, Di Ianni N, Corbetta C, et al. Constitutive and TNFα-inducible expression of chondroitin sulfate proteoglycan 4 in glioblastoma and neurospheres: Implications for CAR-T cell therapy.[J]. Science translational medicine, 28 February 2018.想了解更多CNS级期刊最新内容，请关注我们的公众号，常有更新哦，也可加笔者微信交流：qianle522568！

你见或不见，我就在那里；你念或不念，关爱就在您身边！春天的脚步慢慢走近，实验室的复苏也悄然开始。一个假期的休整，老师们斗志满满，然而工具们确小问题不断。 天平："感觉自己有点不公平（实际就是没校准... ...）"移液器："感觉“关节”有点痛（实际就是有点卡... ...）"纯水仪："我可能得了尘肺病（实际就是柱子污染物有点多... ...）"... ... 在得知这一情况后，德泉市场部整顿人马，“客户服务日”活动正式启动，第一站我们来到了—中国检验检疫科学研究院?答疑?解惑感觉不过瘾，那我们来一场讲座吧，交流新问题，传递正能量是不是也想来一次这样的邂逅？下一站有可能就在您身边哦~010-83834948~北京德泉市场部随时欢迎您的来电。最细致的服务，最贴心的交流，北京德泉与您相约“客户服务日”！ 你见或不见，我就在那里；你念或不念，德泉就在您身边！

  导读       细胞增殖、分化等生理活动与其生存的微环境有着密切联系。       当前细胞生物学研究大多还是在2D培养模式下进行，培养环境与机体内生理环境差别很大，导致细胞在形态、功能以及细胞间通讯上与体内生理条件下存在明显差异。与之相比，先进的3D培养可以模拟体内的生理环境，让细胞在生理行为上与体内生理环境更接近。       此外，3D培养让研发企业相当程度上摆脱了伦理上对动物实验的约?束，缩短了研发周期，提高了结果可信度，从而大大提高了企业竞争力。因此，很多生物及药物研发企业更倾向于使用3D培养细胞来开?展实验和研?究。       3D培养的应用方向主要包括：干细胞分化及组织工程，癌症和肿瘤细胞生物学，癌症共培养模型，毒性筛选等。本期，针对干细胞分化实验的周期长、通量高、操作复杂等特点，小编将携BioTek产品为您介绍高通量自动化的3D培养干细胞分化研究方案。       研究方案       人类间充质干细胞（Human mesenchymal stem cells，hMSCs）是多能干细胞，这些细胞易分离且能够分化成脂肪细胞、软骨细胞、骨细胞等细胞，在成熟组织修复中具有重要作用，因此是组织工程研究的重点。如图1，在384孔板中，分别使用2D培养和磁力悬浮3D培养hMSCs细胞，并将孔板置于BioSpa 8自动孵育器中进行细胞培养。图1. 磁力悬浮3D细胞培养过程        在细胞培养期间，使用EL406洗板分液系统自动更换培养基（每3天一次）后，由Cytation5明场成像验证细胞是否脱落（图2），避免换液过程造成的细胞损失。图2. 更换培养基后检查细胞是否损失（A-C）3D培养条件下三个时间点的细胞球明场图像，（D-F）2D培养条件下三个时间点的细胞明场图像，4×        对细胞核、微丝、II型胶原进行荧光标记，使用Cytation5荧光场对2D培养进行自动聚焦成像（图3）；对3D培养细胞进行Z-层切成像（图4）。图3. 2D培养hMSCs随时间向软骨细胞分化(A-C)未分化细胞，(D-F)软骨向分化细胞，10×；蓝色：细胞核，绿色：微丝，红色：II型胶原图4. 3D培养hMSCs随时间向软骨细胞分化(A-C)未分化细胞，(D-F)软骨向分化细胞，20×；蓝色：细胞核，绿色：微丝，红色：II型胶原       结果显示，在普通培养基中，细胞不会向软骨向分化；而在分化培养基中，无论是2D或3D培养条件，hMSCs均明显向软骨向分化。亦可发现，2D培养的细胞在第20天时即有大量脱落现象（图3），而3D培养条件下细胞状态很好（图4），表明3D培养更适合于长时间的细胞分化实验。Gen5软件的Z-层切功能轻松实现多层图片的叠加，还原3D细胞球的真面目。图5. 3D细胞球图像的形成(A-C) 3D细胞球的单层图像，(D) Z轴叠加和投射处理后的3D细胞球图像，20×；蓝色：细胞核，绿色：微丝，红色：II型胶原        图片处理后，Gen5软件的Dual-Mask功能可自动选出表达II型胶原的区域（图6），并对细胞软骨向分化进行定量分析（图7）。可以看出3D培养hMSCs分化程度随时间逐渐增加。图6. Dual-Mask分析功能，自动选中表达红色荧光的区域 查看往期《应用笔记》相关内容：【应用笔记】利用无标记细胞计数进行细胞增殖动力学分析        本期介绍的方案中，BioSpa 8提供干细胞培养环境，EL406负责更换培养基，Cytation5完成所有的细胞成像，三台仪器完美无缝对接，近一个月的实验过程全自动进行，期间无需人为操作。BioTek智能成像系统不仅适用于2D培养细胞，在3D细胞培养中具有高通量、自动化、低成本、应用广泛等优势，有利于加速组织工程领域的转化研究。        美国伯腾仪器有限公司（BioTek Instruments, Inc.,）是全球领先的设计、制造和生产商，其产品一直保持美国原产地设计和制造。自从1981年推出第一款酶标仪，BioTek 逐渐发展成为以微孔板为基础、旨在提高医疗、制药、农业和研究等领域客户生产效率的全球领先者之一。BioTek产品线覆盖酶标仪、液体处理系统、成像系统、自动化系统，为客户提供全方位的技术服务。

关于凋亡信号通路的研究已经很透彻：内源性途径中，位于线粒体外膜的BAK/BAX激活，线粒体膜通透性改变，细胞色素c释放进入胞浆激活Caspase（如下图）过往的研究主要依赖WB技术从时间角度确证蛋白间信号的传递过程，此次整理分享的文章利用显微镜技术，从时间、空间两个维度，实时的观察到凋亡中线粒体DNA进入胞浆的过程。研究者以永生化的小鼠胚胎成纤维细胞为工具：利用BCL抑制剂ABT-737诱导凋亡，在线粒体外膜蛋白TOMM20上fusion了HALO tag（可用JaneliaFluor-646标记-红色）用于定位线粒体，在线粒体DNA转录因子TFAM上fusion了mNeonGreen（绿色）用于定位线粒体DNA给予凋亡诱导剂ABT-737后线粒体形态（红色）、线粒体DNA（绿色）分布发生了变化活细胞显微镜数据：400s线粒体DNA（绿色）与线粒体（红色）共定位（黄色），到528s“红绿分开，黄色减少”线粒体DNA不再与线粒体共定位，到624s图片不再那么清晰-细胞不再贴壁，脱离了焦平面基于前面的共聚焦拍摄结果进行3D重建：线粒体DNA（绿色）是逐步从线粒体（红色）中出来的，但未完全脱离因为共聚焦显微镜分辨率有限，所以利用3D SIM显微镜进行观察：线粒体DNA（绿色）从线粒体“出来”但为完全脱离，线粒体（红色）呈杯状结构文章关注的是线粒体DNA在凋亡中的变化，实时观察到了线粒体DNA（绿色）“离开”线粒体（红色）的现象，凋亡过程中细胞色素c也有“离开”线粒体的行为，因此又对细胞色素c进行标记，看细胞色素c（蓝色）和线粒体DNA谁先“离开”的 - 细胞色素c先于线粒体DNA“离开”利用WB再看一下胞浆中线粒体DNA、细胞色素c出现的先后顺序：WB结果也表明细胞色素c先“离开”线粒体细胞是台极其精密的机器，线粒体DNA离开线粒体必然有其分子基础，所以要到参与调控其离开的蛋白！前面观察到凋亡过程中线粒体形态发生改变，线粒体的形态主要受fision（分裂）fusion（融合）相关蛋白调控，如上图：fusion蛋白（Opa、Mfn1、Mfn2）缺失后均促进了细胞色素c和线粒体DNA离开Fision调控蛋白Drp的缺失也能引起细胞色素c、线粒体DNA离开，但对“离开”作用影响并不像fusion蛋白那么大 线粒体DNA释放后会激活cGAS，引起cGas依赖的IFN-γ分泌，fision调控蛋白Drp的缺失并不会抑制线粒体DNA释放引起的IFN-γ分泌，说明线粒体DNA的释放不是fision依赖的线粒体是一个与胞浆隔离开的小环境，物质的出入受mitochondrial permeabilitytransition pore (MPTP)调控，用CsA抑制MPTP后并不影响线粒体DNA的释放，说明线粒体DNA的释放也不是MPTP依赖的Antimycin和Oligomycin A能引起线粒体膜电位变化，但不影响线粒体形态及DNA的释放，说明线粒体膜电位的丢失也不是DNA释放的基础在发现线粒体形态调控蛋白、MPTP、线粒体膜电位均不对线粒体DNA的释放起决定性作用后，研究者把目光放到了BAK/BAX上，诱导凋亡后BAK/BAX（蓝色）分布发生改变且与线粒体（红色）、线粒体DNA（绿色）存在共定位关系基于活细胞观察，在时间维度上，Bax聚集、线粒体形态变化、线粒体DNA释放、细胞色素c释放之间存在交叉关联 共聚焦数据重建后，共定位（空间维度）也发现了BAX和线粒体DNA释放存在关联共聚焦数据重建得到的共定位结果在更高分辨率的3D SIM上得到了确认3D SIM数据分析的结果又再更高分辨率的电镜上得到了确认：BAK/BAX在线粒体外膜上打了“孔”造成内膜包裹着线粒体DNA从线粒体脱离 光电相关显微镜最终确认（Correlative light and electron microscopy）线粒体DNA释放机制 笔者是从技术、工具的角度去审视一篇文章的，每篇文章都是在说明一个科学命题，各种技术、工具为科学家提供数据基础，每种技术、方法都有其优势、劣势，正因为如此科学家们才需要用多种技术、工具同时测量一个指标来互相弥补，避免因技术、工具的“系统误差”引起数据的偏差，最终导致错误命题的产生！活细胞成像就像视频和照片的关系 - 多个时间点获取蛋白间的空间定位关系更具可靠性，3D SIM应该是目前为止在时间分辨率及空间分辨率两个维度综合实力最强的技术！ Kate McArthur, Lachlan W. Whitehead, John M. Heddleston, Lucy Li, et al. BAK/BAX macropores facilitate mitochondrial herniation and mtDNA efflux during apoptosis.[J]. Science, 23 February 2018.想了解更多CNS级期刊最新内容，请关注我们的公众号，常有更新哦，也可加笔者微信交流：qianle522568！

本文主要论述了使用Brookfield RST流变仪进行淀粉糊化和流变性能测试的基本方法和仪器配置，同时也简单介绍了使用CT3质构仪对淀粉的粘性和凝胶强度进行物性测试，以便对淀粉性能作全面评价。1.  仪器选型仪器主机为 Brookfield R/S－SST 流变仪，Rheo3000 软件，V40－20 或 V30－ 15 桨式转子、FTKY 水浴夹套、MB－48F 套筒、TC112P 淀粉专用水浴。2. 测量方法将 TC－112P恒温水浴温度设定在室温-95℃自动程序控温，用 CC48 样品套筒装水后，将一定量的样品放入套筒，充分搅拌后放入恒温水浴，将仪器定位后启动仪器开始自动采集数据。下图是我们用 RS-SST 流变仪测试得到的粘度曲线，可以看到随着时间的增加，粘度不断增加，曲线在某个时间有明显的拐点，即淀粉糊化达到最大粘度值后，粘度随着时间的增加又开始下降。同样的我们也可以得到粘温曲线，得到不同样品的糊化温度值。利用 Rheo3000 软件导出的数据信息量很大，除了粘度 Eta 外，还有很多其它的指标 Tau(Pa)、剪切力 n (rpm)、 转子转速（转/分钟）、M%.(0-999%o)扭距最大值的千分比、t (s) 时间（秒）、T（℃）样品温度、Gamma 形变量、J（t）接触面的法/切向蠕变柔量、M(mNm) 扭距、G（Pa）模量材料强度、Phi(rad) 弧度值转子转动轨迹的总和。 通过对这些数据的分析，除了可以测试出淀粉的粘度外，还可以对粘度的综合性能作出完整的评价，不同淀粉的糊化性质不相同。通过 Rheo3000 软件可以综合比较和分析样品测试数据。 一般的，淀粉糊在剪切力的作用下粘度会下降，大多呈现出假塑性流体的特性。3、淀粉粘性和强度测量 另外，Brookfield 还为用户提供 CT3质构仪，用于测试淀粉凝胶强度和面团强度，其测试标准符合国际标准 AOAC 的 Bloom 实验方法和中国标准 GB6783，对粘性的测试，也可以使用ＣＴ３质构仪的拉伸夹具和探头进行直接测试，对淀粉的性能进行综合评价。

CAR-T细胞是弄清T细胞工作机制之后对T细胞进行改造而来，某种意义来讲它是“山寨”的T细胞！山寨的东西会分高仿、精仿、超精仿以表明相似度，CAR-T也类似，只不过它是用代数来表示的-一代CAR-T只有胞外scFv段和胞内信号段，二代加了一个共刺激域，三代加两个共刺激域！此次分享的内容作者将细胞因子信号相关结构加到了CAR上，利用JAK-STAT信号为CAR-T功能做贡献。CAR的设计：ΔNGFR（truncated version of nerve growth factor receptor）原文未提及作用，查了下文献这个受体能够促进共刺激分子的表达和细胞因子的生成；FMC63 scFv段用于识别CD19抗原；CD28、4-1BB为不同共刺激段；IL2R用于召集STAT5，胞内信号段CD3z后面的YRHQ motif用于召集STAT3 抗原刺激后CAR的表达情况（Protein L可用于CAR的检测-有文献，可以留言索取）：可以看出新设计的CAR在抗原刺激后表达水平上并未显示突出的优势。 新CAR的亮点就在于引入JAK-STAT信号，在细胞整体水平上验证抗原刺激后STAT3及STAT5的磷酸化：新CAR-T能够特异的、快速的响应抗原刺激发生STAT的磷酸化 用WB再次验证新CAR-T能够抗原依赖的激活JAK-STAT信号 前面“正向”的验证了新CAR-T中引入的STAT结构能够抗原依赖的发挥功能，开始“反向”验证：去除CAR中STAT3相应结构域之后STAT3抗原依赖的磷酸化降低，STAT5的磷酸化不受影响；突变STAT5对应结构域之后亦是只影响STAT5的磷酸化 刚刚证明了新CAR中引入STAT相关结构后STAT能够抗原依赖的激活，开始看新CAR对于T细胞功能的影响：新的CAR-T在抗原刺激后增殖更加旺盛而死亡更少  抗原刺激后，新CAR-T更多的表达“记忆”相关marker，如CD27、CD28、CD95 使用STAT3抑制剂S3I-201、STAT5抑制剂Pimozide削弱了新CAR在抗原刺激后的增殖优势，暗示了STAT的引入和新CAR-T功能增强的关联 新CAR在抗原刺激后抗exhaustion上并未表现出优势 抗原单次刺激新CAR-T在细胞因子生成上并无优势，但对于多次抗原刺激新CAR-T细胞因子生成能力更强，暗示其具备更强的persistence In vivo的数据也能说明新CAR-T在增殖、细胞因子生成某些方面具有更强的功能  对几种CAR-T抗原刺激后的基因表达情况进行检测，主成分分析发现几种CAR分别聚簇、各自受不同变量影响GESA显示相较其他CAR-T，新CAR-T的基因表达模式向STAT表达模式富集 新CAR-T细胞毒作用相关效应分子基因表达水平更高 In vitro新CAR-T具有更强的杀灭肿瘤细胞的能力 In vivo - NALM6-GL细胞：关注肿瘤细胞的数量、CAR-T细胞的数量、小鼠的存活率 In vivo - B-ALL细胞：关注肿瘤细胞的数量、CAR-T细胞的数量、小鼠的存活率 In vivo - 实体瘤：关注瘤的体积、CAR-T细胞的数量（外周、浸润到肿瘤部位的）、小鼠的存活率 本文设计的CAR-T是通过模拟自然状态下T细胞激活过程中细胞因子的工作模式来实现增强活性的目标。说通俗一点，文中的新CAR-T就是在二代CAR-T的基础上又连了根“线” - 细胞因子牵头的JAK-STAT通路！不同于三代CAR-T“简单粗暴”的增加共刺激域，JAK-STAT是一个新的“修饰”T细胞的思路，预示着新的方向！ Yuki Kagoya, Shinya Tanaka, Tingxi Guo, Mark Anczurowski, et al. A novel chimeric antigen receptor containing a JAK– STAT signaling domain mediates superior antitumor effects.[J]. Nature Medicine, 5 February 2018.想了解更多CNS级期刊最新内容，请关注我们的公众号，常有更新哦，也可加笔者微信交流：qianle522568！

粉体流动行为难题：物料难以从料斗筒仓中流出？在送料器、定量配料机、包装机械中的流动性差？采购部门对来料如何进行QC检测？如何评价新配方的流动性？PFT粉体流动测试仪继流变仪、质构仪之后，博勒飞家族的第三名成员-PFT粉体流动测试仪粉体也终于跟大家见面了。博勒飞的PFT粉体流动测试仪帮您解决您所遇到的粉体流动行为的所有问题。产品的特点:多种测试模式流动函数时间固结的流动函数测试壁面摩擦松装密度测试时间短测试样品所需时间2-30分钟输出数据：粉体流动性的流动指数拱架尺寸(指数)鼠孔尺寸料斗半角重力溜槽角(壁面摩擦角)松装密度曲线技术参数垂直轴向压力负载：7kg  精度：±0.6% FSR轴速度：0.1mm/s  可高达5mm/s距离：精度±0.3mm扭矩：±7.0N·m  精度：±1.2% FSR料槽旋转速度：1转/小时（RPH）可高达5RPH温度感应：-20℃~120℃湿度感应：10% to 95%RH±5%?多种测试报告

劳达全球范围内提供准确的液体恒温系统，产品系列之PRO系列独特优势：1：控制器可以360度旋转并可以拆下来使用；全方位使用2：所需加液体积小，配合强力的变量泵，达到快速的温度变化3：经过优化的浴槽内循环，大大提高了温度稳定性和均一性4：多种借口模块可选5：制冷回路使用混合式冷却并提供天然制冷剂的类型PRO制冷恒温浴槽：提供的温度控制范伟为-60到250 ℃，可以满足诸多应用的要求，标配的浴槽边缘加热功能，可以防止浴槽盖结冰的现象。更多PRO详细资料，欢迎来电咨询，北京德泉期待您的来电！

生命行为本质上是基于结构的互作所引起的！分子间相互作用的检测方法有很多，如IP、SPR、ITC、FRET等，细胞间相互作用的研究目前科学家们只能依赖活细胞工作站，像“狗仔队”一样蹲守、抓怕，存在“断章取义”风险！此次整理分享的是利用流式细胞术检测抗原提呈细胞DC与T细胞的相互作用，流式较显微镜有着无可匹敌的优势 - 显微镜只能通过拍到两个细胞相互接触那一刹那来证明互作（而且视野里就那么几个细胞，无法说清是个别行为还是普遍行为），而这次分享的流式方法只要两者有过接触都能够检测出来，所得数据更加全面、更具说服力！ 首先是方法：所用工具是SrtA和G5：SrtA可以识别结合LPETG肽段，结合后可将这个肽段共价转移到G5上工具用法：一个细胞表达SrtA，另一个细胞表达G5，两者如果能够互作，SrtA细胞识别结合带标记的LPETG底物就能够转移到G5细胞上研究者将HEK293T细胞分为4组，表达以上蛋白：G5-CD40、CD40L-SrtA为检测互作的实验组，CD40L*-SrtA、Srt-PDGFR组为阴性对照组（CD40L*和SrtA不会与CD40互作） 只有G5-CD40细胞生物素表达升高，说明只有它与CD40L-SrtA细胞发生了互作，初步说明此种检测细胞互作方法的有效性和特异性 WB结果也证明了方法的有效性和特异性 用更多的互作组合证明方法有效性和特异性换一种细胞组合，用显微镜的方法证明方法的有效性和特异性 Ex vivo验证：构建转基因小鼠，G5-DC细胞（提呈OVA），SrtA-T细胞（OVA特异性），实验流程图 OVA刺激可引起DC与T的互作，CD40L抗体能够阻断DC与T的互作，DC无法再接受T细胞SrtA转移来的生物素标记底物，但不会影响T细胞表达的SrtA识别结合生物素标记抗原刺激引起DC细胞与T细胞互作的“量效”曲线前面用DC做APC，拿B细胞做APC验证，同时看T细胞的激活TCR是OVA抗原特异的，只与提呈OVA的APC互作：只有提呈OVA的DC可与T相互作用，“得到”生物素抗原刺激引起DC细胞与T细胞互作的“时效”曲线 In vivo验证：DC可与T细胞发生互作，接受T细胞传递的生物素，同时激活T细胞所用细胞不会与生物素标记的底物非特异性的结合细胞互作的检测基于对生物素的检测，看标记物（生物素）的“代谢” DC与T作用不同时间后检测两者的互作情况看与不同DC亚型的互作：稀有的的XCR1亚型DC与T的互作亦能检测到有文献报道，DC上的CD40可不依赖抗原的与T上是CD40L互作，所以检测这种情况对于特异性的影响：所用T细胞的TCR是OVA特异性的，当DC与T“在一起”48h后，除了可与提呈OVA的DC互作外还与提呈LCMV-GP的DC发生了互作，“在一起”12h能保持互作的特异性 相较活细胞工作站检测互作的方法，流式的优势体现在快速、有统计学意义-瞬间完成大群细胞的检测，而显微镜需要长时间拍摄同时需要足够的耐心去找寻相关片段，找到片段里又只有“几个”细胞！各种技术手段都是工具，使用者的根本目的其实不在工具、方法的掌握，而在得到高质量的数据，我们的价值就在于让您将工具用的更好，把注意力放在更有价值的事情上！ Giulia Pasqual, Aleksey Chudnovskiy, Jeroen M. J. Tas, Marianna Agudelo, et al. Monitoring T cell–dendritic cell interactions in vivo by intercellular enzymatic labelling.[J]. Nature, 17 January 2018.想了解更多CNS级期刊最新内容，请关注我们的公众号，常有更新哦，也可加笔者微信交流：qianle522568！

松下冷链(大连)有限公司创立于1994年，是国内领先的商用制冷设备综合方案提供商，业务遍及20多个国家和地区。多年的市场、技术、管理积淀，凭借着在产品研发、设备提供、工程配套、E站式服务等综合优势，松下冷链(大连)成为国内顶尖的全程冷链综合解决方案专家，在超商设备领域、饮品设备领域、商用厨房设备领域、低温物流设备领域、生物医疗设备领域及解决方案事业领域 为客户提供卓越的服务。产品包含：医用冷藏箱、血液冷藏箱、医用低温箱、恒温培养箱、雪花制冰机、医用超低温冰箱和医用药品保存箱等。2018年，北京德泉兴业（www.dq-science.com ）将开启与松下冷链(大连) 合作之路，和松下携手并进，共同打造“行业领先的科学器材服务公司平台”。欢迎来电咨询： 010-83836985\010-83834948.

继ECM2001之后，BTX近期推出其豪华升级款ECM2001+。ECM2001+是一套多功能的电融合电穿孔仪，能够快速高效的完成杂交瘤细胞生成、杂交细胞电融合和核移植操作；同时可高效完成多种细胞的电穿孔过程，包括干细胞和原代细胞等难转细胞。作为BTX家族的新成员，ECM2001+有哪些特点呢？下面带您一探究竟。外观精致● 仪器小巧，43.2cm×39.4cm×30cm（宽×深×高），节省实验室空间● 标配7寸的触摸屏，带有预装软件，操作准确方便操作简单● 操作系统人性化设计，容易上手●模块化设计，电融合和电穿孔互不干扰●内有大量预设程序，涵盖几乎所有细胞类型●可存储海量自定义程序，方便实验时调用参数灵活● 电融合不局限于AC/DC/AC三步法，每个DC可设置19个不同的AC程序●交流正弦波频率在0.2-2MHz内可调●交流电压在5-75V之间可调，且可设置为恒定值或线性变化●直流脉冲电压设置更精准：5-3000V，1V调进●每个样品1-99个方波脉冲可选安全可靠●可在低阻抗下操作，最低8Ω●独有的预脉冲电阻测量技术，保护样品● 电弧保护，完美杜绝电弧短路●实验过程中，过大电流导致脉冲中止功能齐全●可实时监测样品的电压、电流及电阻●可保存实验日志，方便实验条件的优化● 可进行高达9ml的细胞融合，且不需要特殊的电融合缓冲液● 配合专业电极，可进行活体电转化●有海量文献数据库供参阅主要应用● 动物细胞电融合●杂交瘤细胞生成●核移植● 胚胎操作●哺乳动物细胞电穿孔●植物原生质体融合●干细胞生成讲了这么多，ECM2001+有没有使您心动呢？欢迎随时联系我们了解详情。

厌倦了制胶、跑胶、卸胶、转印？厌倦了蛋白分子量相近时每次都要stripping？厌倦了配大量缓冲液？厌倦了辛辛苦苦制好的胶，漏掉了？来自GE的miniVE扫走所有您厌倦的...将凝胶灌制、电泳和转印集成一体，为您带来无限惊喜！图1. miniVE迷你型垂直电泳&转印仪√独特的凝胶模块既是灌胶平台，又是最终的跑胶装置和电泳上槽。无需卸胶、直接跑胶，有木有感觉好方便~~~√只需搭配转印模块即可进行Western blotting转印过程只需45分钟，方便快捷。miniVE能同时容纳2个凝胶模块或2个转印模块，即一次可以跑2块凝胶或进行4块凝胶的转印，大大节省您的时间哦~~~图2. 灌胶模具&转印模块√凝胶长度为9.5cm，比传统的7cm胶长30%分离效果更好，特别对于分子量很接的蛋白，可以提供更好的分辨率。√革新的印迹模具缓冲液量大大减少！仅需300mL缓冲液，极大地节约您的试剂消耗。√配合SE235灌胶模具一次可灌2-4块凝胶，不易漏胶。图3. 多种配套灌胶模具 心动不如行动，给miniVE手动点赞！电泳75折促销活动已经开始！如果您感兴趣，可以随时联系我们的销售代表和技术支持。北京德泉兴业商贸有限公司为GE healthcare北京及山东科学仪器独家授权。

上期小编带大家了解了下博勒飞的RST触屏流变仪，相信大家对其有了一定的了解了。那么这期再来带大家了解下博勒飞的另一款产品--CT3质构仪首先，我们来了解下质构分析，质构分析主要是对产品（通常是食品）与人们感官感觉相关的机械特性进行测量评估。通过机械设备的量化分析代替人们对食品的硬度、咀嚼性，胶黏性，柔软性，成熟度，新鲜程度，弹性，粘性的感觉。CT3质构仪拥有7种测试模式和众多的测强大的、性价比最高的质构分析专业仪器。产品特点：标准测试模式：一个单压缩循环         压缩并保持        多次压缩凝胶强度试验             TPA分析            拉伸测试鱼糜弹性强度             校准校验Texture Loader 软件：允许将测试程序下载至仪器进行单机操作，最多可下载10个程序。压缩距离：高达10cm，可测量高达22.5cm的样品（接近9英寸高）负载单元选择：7种量程可选，最高达50KG工作基台选：有圆形旋转基台和方形夹具基台两种、为大样品和更多夹具附件的应用提供了可能。探头和夹具：CT3质构仪配备有非常齐全的测试配件、夹具以及探头，可满足您全方位的测试要求。Brookfield还可为用户专门定制设计更广泛应用的探头和夹具。应用领域：它可用于肉制品、粮油食品、面食、谷物、糖果、果蔬、凝胶、果酱等食品的物性学分析，也可以用来分析食品的嫩度、硬度、脆性、粘性、弹性、内聚性、咀嚼性、拉伸强度、抗压强度、穿透强度等各项物性指标。还可以用于个人护理品、胶类（明胶/果胶等）、药品胶囊、民用和工业粘结材料（粘胶剂/树脂）等行业。试夹具，是至今为止单机操作中功能最全的，也是目前世界上最强大的、性价比最高的质构分析专业仪器。产品特点：标准测试模式：一个单压缩循环         压缩并保持        多次压缩凝胶强度试验             TPA分析            拉伸测试鱼糜弹性强度             校准校验Texture Loader 软件：允许将测试程序下载至仪器进行单机操作，最多可下载10个程序。压缩距离：高达10cm，可测量高达22.5cm的样品（接近9英寸高）负载单元选择：7种量程可选，最高达50KG工作基台选：有圆形旋转基台和方形夹具基台两种、为大样品和更多夹具附件的应用提供了可能。探头和夹具：CT3质构仪配备有非常齐全的测试配件、夹具以及探头，可满足您全方位的测试要求。Brookfield还可为用户专门定制设计更广泛应用的探头和夹具。应用领域：它可用于肉制品、粮油食品、面食、谷物、糖果、果蔬、凝胶、果酱等食品的物性学分析，也可以用来分析食品的嫩度、硬度、脆性、粘性、弹性、内聚性、咀嚼性、拉伸强度、抗压强度、穿透强度等各项物性指标。还可以用于个人护理品、胶类（明胶/果胶等）、药品胶囊、民用和工业粘结材料（粘胶剂/树脂）等行业。 

SE250/SE260垂直电泳仪，精心设计，解决您制胶繁琐、跑胶过热、条带弯曲、分辨率不足等各种电泳难题，快来一起看看吧~我们的电泳仪以红黑为配色，是不是看起来非常高大上还有点萌呢？如图1，我们有两个型号。SE250和SE260。那么它们都有哪些特点呢？图1. SE250（左）SE260（右）垂直电泳仪卓越的冷却效果SE250和SE260系列电泳槽为保证最佳的电泳效果，冷却装置设计精细：√ 氧化铝陶瓷板与传统的玻璃板的灌胶装置不同，此系列采用一块玻璃板和一块氧化铝陶瓷板配合使用。氧化铝陶瓷板的厚度仅为玻璃板的一半，比玻璃板有效散热至少大40倍，能快速高效带走电泳时产生的热量，有效地杜绝蛋白条带出现“微笑”效应，带给您高质量的电泳效果。√ 热交换装置此系列电泳槽可外连循环水浴，准确控制电泳温度，为更高要求的实验提供硬件支持。        图2. 内置热交换装置优质的分离效果提供8x7 cm（SE250）和8x9.5 cmcm（SE260）两种凝胶大小规格，与传统的7cm凝胶相比，9.5 cm凝胶长度长30%，分离效果更好，特别对于分子量很接近的蛋白，可以提供更好的分辨率，条带更清晰。方便、快速√ 一次可灌制最多10块胶配合灌胶模具，一次可灌2~10块凝胶，而且不占用大量实验台空间。优化的设计，在避免漏胶的同时，保证平整的凝胶底边，不会造成“皱眉”效应。图3. 多种配套灌胶模具来自GE的电泳产品是不是很棒呢？如果您感兴趣，可以随时联系我们的销售代表和技术支持。电泳促销活动也即将开始，敬请期待。北京德泉兴业商贸有限公司为GE healthcare北京及山东科学仪器独家授权

在正常组织中是会驻扎一种叫Tissue-resident memory CD8+ T (TRM)的T细胞，它对于感染损伤部位快速启动免疫保护反应至关重要。组织停留（Tissue-residency）特性能帮助实体瘤CAR-T锚定在肿瘤部位，细胞的一切行为都有其分子基础，因此必然存在某种蛋白对于组织停留功能起着关键的作用！此次整理分享的是调控TRM细胞组织停留特性很关键的转录因子Runx3。科研工作者发存在TRM这一细胞群体，但对于调控它组织停留的机制并不清楚，因此使用测序这种“大数据”技术（RNA-seq和ATAC-seq）比对抗原刺激后循环T细胞（外周血和脾脏）与组织停留T细胞（小肠上皮IEL、肾脏kid）的基因表达差异。循环T细胞与组织停留TRM细胞有着截然不同的基因表达模式 循环T细胞与组织停留TRM细胞在染色质可接近性上也不同：对于TRM细胞的促进循环的基因S1pr1和Klf2 DNA没有“开放” 上面发现两类细胞的基因表达模式不同，基因表达由转录因子调控，两种细胞必然有着不同的转录调节模式，文章作者设计了筛选平台来找出相关转录因子。RNA-seq + ATAC-seq + PageRank大数据方法结合RNAi技术搭建的筛选平台 筛选出的因子有旧（Nr4a1, Blimp, Klf2 and T-bet）有新（Nr4a3 and Runx3）：先前有过关于Runx3参与T细胞功能调节的报道，此次筛选又发现了Runx3可能参与TRM的组织停留调节，所以进一步设计了实验验证Runx3的作用 把Runx3沉默之后，小肠上皮（IEL）TRM停留marker CD69和CD103表达受到抑制 将Runx3沉默细胞与对照细胞1：1混合注射给小鼠，抗原刺激后检测两种细胞分化成TRM的比例：Runnx3沉默细胞在IEL分化为TRM显著降低，说明Runx3对于TRM分化至关重要 重复上面实验，但改变沉默Runx3的时间点发现无论提前或延后沉默，Runx3沉默细胞都向TRM的分化都显著受到抑制，说明Runx3除了对于TRM的分化很关键，对于维持TRM的稳态也很重要 其他组织上重复实验，发现Runx3对于肾脏、皮肤、肺组织的TRM细胞停留也很关键，暗示Runx3对于TRM细胞组织停留特性的调控不受组织类型限制 上面发现了Runx3在“空间”角度对于TRM细胞的调控作用，看它对T细胞功能的影响：影响颗粒酶和细胞因子的生成 上面发现了Runx3在“空间”角度对于TRM细胞的调控作用，看它对T细胞功能的影响：能帮助T细胞抵抗凋亡 上面发现了Runx3在“空间”角度对于TRM细胞的调控作用，看它对T细胞功能的影响：不影响T细胞的“运动”和增殖 过表达Runx3促进TRM分化-看细胞表型 过表达Runx3促进调控组织停留相关基因表达，抑制循环相关基因表达-看Runx3下游 上面证明了Runx3对于TRM细胞的关键作用，肿瘤浸润淋巴细胞TIL在空间角度的行为与组织停留记忆细胞TRM相近，那么Runx3是否能调控TIL呢？TIL的基因表达模式与TRM类似 沉默Runx3会降低淋巴细胞对肿瘤组织的浸润，过表达则会促进对肿瘤组织的浸润 沉默或过表达Runx3对T细胞功能的影响：exhaustion、颗粒酶、细胞因子 沉默或过表达Runx3在体内水平上对于肿瘤免疫疗法的影响：沉默抑制、过表达促进 所有实验设计、验证均是在小鼠模型上进行的，对人体是否存在意义呢？小鼠黑色素瘤TIL和人的黑色瘤TIL基因表达模式类似！ 假想一下文章作者开始做这部分工作是的情形：1、CAR-T的效果很好，但针对实体瘤存在问题，如果让CAR-T老老实实的待在肿瘤部位会不会提高疗效？2、存在TRM这种细胞，细胞的一起行为都有其分子基础，是什么机制让TRM成为TRM的？之后就是搭建技术平台进行筛选，而后验证了。测序搭配RNAi的技术平台（生物信息学技术从测序大数据中抓取信息点，RNAi技术实际的去验证所抓取到的信息点）使文章作者在大海里捞到了针；分子生物学、细胞生物学方法再次去验证；TRM过渡到TIL一方面为研究成果转化（CAR-T）提供理论基础，另一方面为小鼠到人类，扩大研究意义做了铺垫！ JJ Milner, C Toma, B Yu, K Zhang, K Omilusik , et al. Runx3 programs CD8+ T cell residency in non-lymphoid tissues and tumours.[J]. Nature, 2017, Dec 14 ;552(7684).想了解更多CNS级期刊最新内容，请关注我们的公众号，常有更新哦，也可加笔者微信交流：qianle522568！