【CNS前沿文献追踪】- CART细胞与内源T细胞“互作”

       针对实体瘤，CART细胞traffic到肿瘤部位并在此停留、存活一直是个需要解决的问题，之前整理分享过一篇Nature，文章作者发现了一个转录因子此能够促进T细胞的停留，这次分享的文章是通过引入IL-7和CCL19提高CART细胞的增殖及浸润能力。

CAR的设计：CAR（三代、靶向CD20），IL-7（提高细胞的增殖、生存能力），CCL19（提高细胞的迁移能力）

CAR的表达情况

在CART中引入了IL-7和CCL19，进行验证：7x19 CART能特异性的响应刺激分泌IL-7和CCL19 ( red bar: co-cultured with mitomycin C-treated P815-hCD20, gray bar:  immobilized anti-CD3 mAb, blue bar: negative controls, CAR-T cells were co-cultured with mitomycin C-treated P815, white bar: negative controls, without any stimulations)
 

In vitro：抗原刺激后7x19 CART有更强的增殖能力

不刺激不增殖，多轮刺激7x19 CART依然增殖，表现出更强的persistence

In vitro：抗原刺激后7x19 CART有更强的迁移能力

In vitro：特异性杀伤肿瘤细胞的能力

In vitro反向验证IL-7的作用：CD127为IL-7受体，CCR7为CCL19受体，利用抗体分别阻断两个受体，阻断IL-7受体7x19 CART的增殖收到抑制，阻断CCL19受体不影响增殖

In vitro反向验证CCL19的作用：阻断CCL19受体抑制了7x19 CART的迁移

In vivo：延长荷瘤小鼠生存时间

In vivo：抑制肿瘤生长（还做其他类型肿瘤，套路都一样，思路最重要，故略去）

文中主做的是双共刺激域的三代CART，关于二代或者三代CART谁好一直没有定论，所以验证了一下二代CART：7x19二代CART依然表现出了优于传统CART的抗肿瘤作用，暗示引入IL7、CCL19的意义

In vivo正向验证了引入IL7和CCL19的意义之后开始反向验证：设计了分别引入IL-7和CCL19的CART

单一引入一种因子或者将两种CART物理混合的效果均不如将两种因子同时引入的7x19 CART好

高分文章牛的地方就在于“像强迫症一样的折腾”，“阻断”IL-7和CCL19后看7x19 CART的效果：延长存活。抑制肿瘤生长的作用被削弱，反向证明了IL-7和CCL19的积极作用

对于实体瘤，病理切片不可少，HE片子：7x19 CART治疗组肿瘤出现了更多的坏死区

7x19 CART治疗组有更多的T细胞浸润到了肿瘤部位-呼应CCL19

7x19 CART治疗组还出现了DC细胞浸润，且与T细胞共定位，暗示7x19 CART能把DC细胞召集到肿瘤部位（DC细胞有抗原提呈作用，它应该会把内源T细胞“

激活”，所以，往下看！）

构建了一个能够抗受体鼠内源T细胞的模型：7x19 CART是用CD90.1-CD90.2+的细胞制备的，受体鼠自身T细胞为CD90.1+CD90.2-，发现受体鼠内源T细胞（CD90.1+）的确出现在了肿瘤部位

用抗体“消灭”受体鼠内源T细胞后，7x19 CART抑瘤作用减弱，暗示除7x19 CART抑瘤外，内源T细胞也有贡献

CART细胞治疗后存活4周的小鼠脾脏T细胞亚型进行分析：7x19 CART治疗组，不管是内源T细胞还是CART细胞都有更高比例的central memory亚型（CD44+CD62L+）

分选得到CART细胞和内源T细胞：7x19 CART细胞依然能够特异的对抗原刺激产生反应分泌IFN-γ；传统CART治疗组的内源性T细胞对于新肿瘤抗原刺激不会产生反应，而7x19 CART治疗组的内源性T细胞会对新抗原产生反应，暗示7x19 CART诱导受体鼠产生了肿瘤反应性T细胞

为了验证“7x19 CART诱导受体鼠产生了肿瘤反应性T细胞”的猜想，对7x19 CART治疗组存活下来的小鼠进行再次种瘤，发现无再次接种的肿瘤是否表达CD20抗原，7x19 CART治疗过的小鼠均能看自身抑制肿瘤生长，再次证明7x19 CART7x19 CART诱导受体鼠产生了肿瘤反应性T细胞，且能识别结合新的肿瘤抗原-表位扩展

 
这篇文章前面的部分就是通常做CART的套路：设计、检测增殖、杀伤、分化、浸润等，笔者觉得最有趣也是最具提示意义的地方在于CART和DC共定位、内源T细胞浸润到肿瘤部位并产生了肿瘤反应性，这里面还有深层次的免疫细胞间“互作”可挖。CART只是对大自然亿万年进化而来的T细胞进行了小小改造，我们“功利”性的关注它和肿瘤细胞的“互作”，但是“一石激起千层浪”也说不准 - 进入体内后其实CART会“偶遇”很多很多......

Keishi Adachi, Yosuke Kano, Tomohiko Nagai, Namiko Okuyama, et al. IL-7 and CCL19 expression in CAR-T cells improves immune cell infiltration and CAR-T cell survival in the tumor.[J].Nature Biotechnology, 30 January 2018.
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