【CNS前沿文献追踪】DC细胞和T细胞的游戏：kiss and run

生命行为本质上是基于结构的互作所引起的！分子间相互作用的检测方法有很多，如IP、SPR、ITC、FRET等，细胞间相互作用的研究目前科学家们只能依赖活细胞工作站，像“狗仔队”一样蹲守、抓怕，存在“断章取义”风险！此次整理分享的是利用流式细胞术检测抗原提呈细胞DC与T细胞的相互作用，流式较显微镜有着无可匹敌的优势 - 显微镜只能通过拍到两个细胞相互接触那一刹那来证明互作（而且视野里就那么几个细胞，无法说清是个别行为还是普遍行为），而这次分享的流式方法只要两者有过接触都能够检测出来，所得数据更加全面、更具说服力！

首先是方法：

所用工具是SrtA和G5：SrtA可以识别结合LPETG肽段，结合后可将这个肽段共价转移到G5上

工具用法：一个细胞表达SrtA，另一个细胞表达G5，两者如果能够互作，SrtA细胞识别结合带标记的LPETG底物就能够转移到G5细胞上

研究者将HEK293T细胞分为4组，表达以上蛋白：G5-CD40、CD40L-SrtA为检测互作的实验组，CD40L*-SrtA、Srt-PDGFR组为阴性对照组（CD40L*和SrtA不会与CD40互作）

只有G5-CD40细胞生物素表达升高，说明只有它与CD40L-SrtA细胞发生了互作，初步说明此种检测细胞互作方法的有效性和特异性

WB结果也证明了方法的有效性和特异性

用更多的互作组合证明方法有效性和特异性

换一种细胞组合，用显微镜的方法证明方法的有效性和特异性

Ex vivo验证：

构建转基因小鼠，G5-DC细胞（提呈OVA），SrtA-T细胞（OVA特异性），实验流程图

OVA刺激可引起DC与T的互作，CD40L抗体能够阻断DC与T的互作，DC无法再接受T细胞SrtA转移来的生物素标记底物，但不会影响T细胞表达的SrtA识别结合生物素标记

抗原刺激引起DC细胞与T细胞互作的“量效”曲线

前面用DC做APC，拿B细胞做APC验证，同时看T细胞的激活

TCR是OVA抗原特异的，只与提呈OVA的APC互作：只有提呈OVA的DC可与T相互作用，“得到”生物素

抗原刺激引起DC细胞与T细胞互作的“时效”曲线

In vivo验证：

DC可与T细胞发生互作，接受T细胞传递的生物素，同时激活T细胞

所用细胞不会与生物素标记的底物非特异性的结合

细胞互作的检测基于对生物素的检测，看标记物（生物素）的“代谢”

DC与T作用不同时间后检测两者的互作情况

看与不同DC亚型的互作：稀有的的XCR1亚型DC与T的互作亦能检测到

有文献报道，DC上的CD40可不依赖抗原的与T上是CD40L互作，所以检测这种情况对于特异性的影响：

所用T细胞的TCR是OVA特异性的，当DC与T“在一起”48h后，除了可与提呈OVA的DC互作外还与提呈LCMV-GP的DC发生了互作，“在一起”12h能保持互作的特异性

相较活细胞工作站检测互作的方法，流式的优势体现在快速、有统计学意义-瞬间完成大群细胞的检测，而显微镜需要长时间拍摄同时需要足够的耐心去找寻相关片段，找到片段里又只有“几个”细胞！

各种技术手段都是工具，使用者的根本目的其实不在工具、方法的掌握，而在得到高质量的数据，我们的价值就在于让您将工具用的更好，把注意力放在更有价值的事情上！

Giulia Pasqual, Aleksey Chudnovskiy, Jeroen M. J. Tas, Marianna Agudelo, et al. Monitoring T cell–dendritic cell interactions in vivo by intercellular enzymatic labelling.[J]. Nature, 17 January 2018.

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