6500 系列四极杆(Q-TOF) 液质联用系统

超临界流体色谱 (SFC) 与质谱检测联用系统 (SFC/MS) 适用于广泛的应用需求。本技术概述介绍了 Agilent 1260 Infinity 分析型 SFC 系统与 Agilent 6230 飞行时间 LC/MS (6230 TOF) 的联用。采用安捷伦喷射流 ESI 离子源。它能够兼容 SFC 系统，并使用超热鞘气（氮气）使雾化器喷雾集中，从而获得更高的质谱灵敏度。优化了主要的离子源参数，例如干燥气和鞘气的温度与流速以及雾化器压力和毛细管电压，显示了各种参数之间的关系。在分析的所有参数中，干燥气温度和干燥气流速对质谱灵敏度的影响最大，其能够显著提高灵敏度 (3x)。

AGILENT 7200 系列 GC/Q-TOF 生成的精确质量数 MS/MS 谱图有利于建 立碎片离子之间的联系，从而确定结构相关性。这一高分辨率系统能够 在保持质量准确度的同时，在 MS/MS 模式中以快速采集速率运行，从 而帮助您为每个峰采集多个 MS/MS 数据而无需多次运行。 在本文集中，您将了解到涵盖农药、SVOC 和三氯蔗糖等化合 物的现有及新兴应用。同时，我们的产品和应用专家将帮助您 在满足严格监管标准的同时最大程度提高工作效率。

在不经过任何衍生化的情况下，对柱上pg 水平的氯代酸类除草剂进行液相色谱串联质谱（LC/MS/MS）分析。所有目标分析物从柱上量极低的pg 到ng 级水平，均呈现良好的线性关系。

采用Agilent 6510 四极杆飞行时间质谱(QTOF) 分析地表水样品中存在的药物。采用快速分离高通量Extend C18 色谱柱（粒径1.8 μm）运行一个简单的梯度洗脱程序。在54种潜在的化合物中，使用安捷伦分子特征提取算法(MFE) 在一个样品中鉴定出多达11种化合物。另一种算法（即Mass Profiler）也被应用于MFE 数据处理过程，用来对几个样品进行比较。由于MFE 根据特征可能生成数千个潜在化合物，所以用Mass Profiler 对两个不同样品的特征进行统计比较时，能够判断出哪一个是独有的，哪一个是共存的。所有工作都采用全扫描质谱数据进行。确定目标化合物时，可借助精确质量全扫描串联质谱进行结构鉴定。

纸浆厂、排污口或者农药径流将大量的废水以复杂混合物的形式排放至水生环境中。本研究以两类排放物（杀虫剂和纸浆厂冷凝物）来说明液相色谱／四极杆-飞行时间质谱 (LC/Q-TOF) 的灵敏度、线性范围和定量分析功能。

全氟烷基化合物(PFASs) 由于其优良的化学惰性、抗热性和防水油的特点而被广泛地用于各种产品。由于全氟烷基化合物(PFASs) 在野生物中持续存在而且生物积聚的趋势越来越强，因此开始受到关注。由于不同的生产和降解过程，所以环境中存在不同长度的烷基链和功能团的全氟烷基化合物(PFASs)。液相色谱／ 四极杆－ 飞行时间质谱(LC/Q-TOF) 是不同样品基质中筛查、定性及定量全氟烷基化合物(PFASs) 的最佳手段。 本方法中的四极杆－飞行时间质谱(QTOF) 具有优异的质量精确度（小于3 ppm）和高分离度（> 13,500)。结果表明对于肝脏盲样中的全氟烷基化合物(PFASs) 具有很好的定量线性。

本研究利用安捷伦1290 Infinity 液相色谱/6540 精确质量数Q-TOF 液质联用系统测定分析水样中磺胺类抗生素和合成代谢类固醇的高分辨率和高质量精度。首次在四极杆-飞行时间质谱仪上，用高分辨（> 20000 FWHM）进行了符合欧盟关于禁用药物的鉴定点要求的分析。

This Application Note presents different online 2D-LC concepts for the high?resolution analysis of complex N-linked glycans in erythropoietin (EPO) using the Agilent 1290 Infinity 2D-LC Solution with fluorescence detection. EPO has a complex glycosylation pattern with differently branched and charged glycans. A combination of hydrophilic interaction chromatography (HILIC) with weak anion exchange chromatography (WAX) enables highly orthogonal separation. Comprehensive 2D-LC analysis with HILIC in the first and WAX in the second dimension facilitates high-resolution 2D chromatography together with simultaneous charge profiling. In addition, multiple heart-cutting 2D-LC analysis, combining WAX and HILIC separation, provides a flexible alternative whereby the user can select multiple peaks to be analyzed in the second dimension and, moreover, run longer gradients.

This Application Note demonstrates the utility of capillary electrophoresis/mass spectrometry (CE/MS) for the analysis of intact monoclonal antibodies (mAbs).The Agilent 7100 CE System coupled to an Agilent 6530 Q-TOF LC/MS was used to study the intact and reduced forms of mAbs. The combination of mass measurements obtained by CE/MS and the data processing capabilities of Agilent MassHunter and BioConfi rm Software enables the identifi cation of heterogeneity in an intact mAb and its fragments. The result demonstrates the utility of CE/MS as a complementary technique to liquid chromatography/mass spectrometry (LC/MS) for the analysis of mAbs.

天冬酰胺 (Asn) 脱酰胺化、天冬氨酸 (Asp) 异构化和甲硫氨酸 (Met) 氧化等修饰是重组抗体的典型降解产物。研究表明，单克隆抗体中 Asn、Asp 和 Met 残基的降解会影响蛋白质活性。因此，蛋白质候选药物（例如 mAb）中的上述修饰是关键质量属性 (CQA)，需在储存和制剂条件下进行密切监测。它们通常是药物开发过程中进行的影响因素试验和强制降解研究的重点。要评估上述 CQA，需要同时进行鉴定和定量分析。 本应用简报介绍了采用一体化工作流程（包括 Agilent AssayMAP Bravo 平台、Agilent 1290 Infinity II LC、Agilent 6545XT AdvanceBio LC/Q-TOF 和 Agilent MassHunter BioConfirm 软件），通过肽谱分析方法同时鉴定和定量分析重组 mAb的化学诱导脱酰胺化和氧化修饰。

糖基化是最重要的一种翻译后修饰，指的是将糖基部分连接到蛋白质上。糖基化模式的改变对免疫原性和整体生物活性有很大影响。因此，糖基化表征对基于生物医药的应用至关重要。虽然现在已有多种分析技术被应用于分析 N-糖基化，但低水平糖基化的精确测定仍面临着极大的挑战。 本应用简报展示了利用毛细管电泳和质谱 (CEMS) 对重组单克隆抗体 (mAb) 糖基化进行分析。此方法包括利用 N-糖苷酶 F (PNGase F) 酶解 mAb 得到多糖，对多糖进行荧光标记（ 8-氨基吡-1,3,6-三磺酸三钠盐，ATPS），并利用 Agilent 7100 CE 串联 Agilent 6520 精确质量 Q-TOF LC/MS 进行分析。从使用的重组 mAb 中，我们共鉴定出 7 种多糖，从每种多糖成分的相对百分比可知，主要及次要糖基化修饰均有存在。本应用简报证明了高分离速度的 CE 与高灵敏度检测限的 MS 相结合，使 CE-MS 成为一种替代 LC/MS 方法对 mAb 或其它糖蛋白进行糖基化表征的有效且最有前景的方法。

2.7 μm Agilent AdvanceBio 肽图分析色谱柱专为改善多肽分离和肽图分析应用而设计。该色谱柱采用了表面多孔技术，能够实现复杂多肽混合物的快速有效分离。本文以重组人促红细胞生成素(rhEPO) 的胰酶分解物作为糖肽分析的消化物模型，展示了AdvanceBio 肽图分析色谱柱卓越的肽图分析性能。与很多蛋白治疗药物类似，rhEPO 在生产过程中发生了修饰，因此表现出广泛的异质性。AdvanceBio 肽图分析色谱柱采用了优化的 C18 涂层技术，能在一个很宽的洗脱范围内为多肽分析提供卓越的选择性和分离度，以增强糖肽片段的分离，从而实现其快速、有效和灵敏的质谱分析。

本应用简报介绍了如何像生物分析科学家在典型生物药理学环境下进行纯度分析那样，使用 Agilent Easy Access 软件来分析模式治疗性蛋白的批次间纯度。分析模式治疗性蛋白的批次间纯度时，将 Agilent 1290 Infinity 液相色谱系统与 Agilent 6530 精确质量Q-TOF LC/MS 联用，并通过 Agilent Easy Access 软件进行数据分析。LC/MS 平台拥有卓越的色谱分离度和质量精度，结合强大的数据处理能力，可简便、快速地分析批次间的蛋白纯度。本应用简化了工作流程，使用者可以快速做出决策，以作进一步的下游处理。该软件可用于比较蛋白谱图，从而确保监管机构要求的批次一致性。此外，该软件还有助于了解工艺放大或生产过程中纯化后蛋白的杂质谱图。该数据可帮助开发生物仿制药的公司在产品上市前评估其产品与原始药物的相似度，重要性不言而喻。

安捷伦 6550 iFunnel Q-TOF LC/MS 系统 (6550 Q-TOF) 结合流动注射分析 (FIA) 方法对 96 个生物提取样品中的小分子化合物进行分析。本实验展示了这一仪器分析系统的优越性能，与上一代 Q-TOF 仪器的检测结果相比，本分析系统在检测离子数量方面增加了一个数量级。同时灵敏度和分辨率的大大提高，使得大肠杆菌代谢组学研究的覆盖范围增加了六到七倍，而且提供了更详细的代谢途径分析。

安捷伦科技公司是代谢组学解决方案领域名符其实的领导者。代谢组学是对代谢物，即参与细胞内生物学过程中的有机小分子进行鉴定和定量的技术。这些分子是生物学功能的重要指标，通过研究这些分子，可以获得有关细胞生理学、代谢及毒性的独特见解。 由于不同种类的代谢组学实验需要不同的技术方法，因而安捷伦提供了几种不同的工作流程解决方案。这些工作流程采用液相色谱/质谱 (LC/MS)、气相色谱/质谱 (GC/MS)以及核磁共振 (NMR) 仪器采集数据，利用代谢组学化合物数据库进行化合物鉴定，并用软件进行数据分析和生物学解析。 本文将对这些代谢组学工作流程的各个部分进行概述。同时还讨论了在选择各种方法时需要考虑的问题。例如，实验的多个技术因素如灵敏度要求、样品复杂性、样品前处理，以及目标代谢物的化学性质等都会影响到最终的技术决策。这些因素以及其它一些因素都会在后面的章节中一一进行详细阐述。

液质联用鉴定肽段的样品制备，通常由多步骤工作流程组成，包括溶液内蛋白酶解、肽段纯化，以及肽段分馏。该过程通常需要根据样品特性及分析目的（ 即定量或表征）定制为具体的应用方法。样品制备工作流程的自动化可提高样品处理能力、降低差异性，并且无需熟练操作人员执行重复工作。然而，自动化平台通常并不用于最初的分析开发，这是因为分析开发者很少具有开发复杂自动化方案的经验。相反，分析通常是采用湿式工作台相关技术进行开发，然后在自动化专家的帮助下移植到自动化平台。 采用 AssayMAP 肽段样品制备解决方案，无需掌握专门的技术也能实现自动化操作。开发者可通过一个简单的软件用户界面和灵活的实验方案对关键实验变量进行完全控制，从而能够专注于科学分析研究。如今，分析开发者、科学家或技术员无需具备自动化专业知识也能实现可扩展、精确的自动化操作。采用 AssayMAP 平台，整个工作流程可直接在相同的硬件上进行开发，如需实现高通量样品前处理，也易于对硬件进行扩展，从而可减少或避免已有实验方案实现自动化所需的额外时间和资源。本文将介绍发现（鸟枪法）蛋白组学研究的一种常规液质联用工作流程，包括溶液内酶解、反相肽段纯化，以及肽段的强阳离子交换分馏 (SCX)，所有这些操作均由 AssayMap Bravo 液体处理器完成。采用 SCX 小柱通过增加 pH 或离子强度对大肠杆菌蛋白裂解液进行逐步洗脱，在六个 SCX 馏分中鉴定出 15000 多条特定肽段序列，其中 64-67% 的肽段可专属性地在其中一个馏分中得到鉴定。

肽图分析是蛋白质鉴定，特别是重组蛋白鉴定的最常用的方法。它通过酶解（一般使用胰蛋白酶）将蛋白质打碎形成肽段，然后以可重现的方式进行肽段的分离和鉴定。肽图分析是一种非常有用的方法，已成为生物技术领域中最有价值的工具之一，它能检测和监控单个氨基酸改变、氧化、去酰胺化，以及其它降解形式。它还能直接检测常见的单克隆抗体修饰变异，如 N 端环化，C 端赖氨酸处理，N- 糖基化，以及内含子表达等非预期的变异。肽图是蛋白质及其酶解产物的指纹图谱，它能提供待测蛋白质的全面信息。肽图分析包含四个主要步骤，蛋白质的分离和纯化；肽键的选择性酶切；多肽的色谱分离；多肽的分析和鉴定。对测试样品与参考标准品或对照样品进行同步的酶解和分析。肽图应该包括足够数量的肽段以进行有效的分析；它不仅要提供蛋白质鉴定所需的必要信息，还应尽可能地涵盖完整的蛋白质序列。

尽管蛋白质生物制品总体来说是相对稳定的分子，但是在生产、制剂和储存过程中，还是会发生一些化学修饰和降解反应。许多蛋白质在纯化过程中可能发生水解断裂，而断裂形成的片段污染物可能会导致患者免疫反应的不良后果。由于存在化学修饰和降解反应，因此需要可靠而且灵敏的方法来评价研发和生产过程中蛋白质的纯度和结构完整性。 完整蛋白质、完整亚基或结构域的精确质量测定对于蛋白质序列组成的快速确认和翻译后修饰、降解和样品处理引起的分子变异的鉴定非常有帮助。电泳、色谱和质谱 (MS) 技术是完整蛋白质及其降解物分子量测定的最常用技术。其中一种最常用的分析是体积排阻色谱 (SEC)，它用于测定蛋白质是否为单体结构，并且在生产和制剂过程中是否始终保持这一结构。

Agilent 1290 Infinity LC 系统可实现优异的色谱分离，Agilent 6550 Q-TOF 提供了高分辨率精确质量 MS/MS 数据。 此外，Mass MetaSite 软件非常有助于系统、可靠地鉴定代谢物结构。

全新的 Agilent 1290 Infinity 二维液相色谱解决方案让您可以根据样品的复杂程度选择合适的分离性能。只需轻轻转下旋钮，即可在一维超高效液相色谱 (UHPLC) 和具有超高色谱性能的二维液相色谱之间进行选择。此外，安捷伦的解决方案也将二维液相色谱的易操作性提升至新的高度，帮助您通过中心切割、多中心切割或全二维分析快速获取正交数据。

法医毒理学化合物的分析十分具有挑战性，原因有以下两点，分别是浓度低以及需要监测和定量分析的分析物数量过多。在考虑到这些变量的前提下，很难从一个可靠的起点开始进行方法开发。 安捷伦法医毒理学 tMRM 数据库结合安捷伦三重四极杆液质联用系统，快速建立的方法允许您在一次分析中对上百种分析物进行靶向筛查以及可靠定量分析。安捷伦已完成了大部分开发工作，使您有更多的时间生成高质量数据，从而满足法医毒理学研究中的严格要求。 安捷伦 tMRM 数据库包括上百个三重四极杆液质联用系统的离子对参数，帮助您创建 MRM、动态 MRM (dMRM) 或触发式 MRM (tMRM) 方法。您可选择最适合您分析需求的模式。

全离子 MS/MS 技术可用来快速筛查、定量和鉴定食品基质中的农药。该分析方法使用高分辨飞行时间 (TOF) 或四极杆飞行时间质谱仪对样品进行快速分析并生成目标化合物的定量信息。 为验证该新方法在复杂基质分析和低浓度分析中的有效性，将综合农药标准品加标到三种不同的食品基质中，采用全离子 MS/MS 技术对样品进行分析。该技术有助于消除假阳性结果，且快速、准确，显著提高了农药筛查及定量分析的效率。

全离子 MS/MS 技术可用来快速筛查、定量和鉴定食品基质中的农药。该分析方法使用高分辨飞行时间 (TOF) 或四极杆飞行时间质谱仪对样品进行快速分析并生成目标化合物的定量信息。 为验证该新方法在复杂基质分析和低浓度分析中的有效性，将综合农药标准品加标到三种不同的食品基质中，采用全离子 MS/MS 技术对样品进行分析。该技术有助于消除假阳性结果，且快速、准确，显著提高了农药筛查及定量分析的效率。

全离子 MS/MS 技术可用来快速筛查、定量和鉴定食品基质中的农药。该分析方法使用高分辨飞行时间 (TOF) 或四极杆飞行时间质谱仪对样品进行快速分析并生成目标化合物的定量信息。 为验证该新方法在复杂基质分析和低浓度分析中的有效性，将综合农药标准品加标到三种不同的食品基质中，采用全离子 MS/MS 技术对样品进行分析。该技术有助于消除假阳性结果，且快速、准确，显著提高了农药筛查及定量分析的效率。

全离子 MS/MS 技术可用来快速筛查、定量和鉴定食品基质中的农药。该分析方法使用高分辨飞行时间 (TOF) 或四极杆飞行时间质谱仪对样品进行快速分析并生成目标化合物的定量信息。 为验证该新方法在复杂基质分析和低浓度分析中的有效性，将综合农药标准品加标到三种不同的食品基质中，采用全离子 MS/MS 技术对样品进行分析。该技术有助于消除假阳性结果，且快速、准确，显著提高了农药筛查及定量分析的效率。

全离子 MS/MS 技术可用来快速筛查、定量和鉴定食品基质中的农药。该分析方法使用高分辨飞行时间 (TOF) 或四极杆飞行时间质谱仪对样品进行快速分析并生成目标化合物的定量信息。 为验证该新方法在复杂基质分析和低浓度分析中的有效性，将综合农药标准品加标到三种不同的食品基质中，采用全离子 MS/MS 技术对样品进行分析。该技术有助于消除假阳性结果，且快速、准确，显著提高了农药筛查及定量分析的效率。

全离子 MS/MS 技术可用来快速筛查、定量和鉴定食品基质中的农药。该分析方法使用高分辨飞行时间 (TOF) 或四极杆飞行时间质谱仪对样品进行快速分析并生成目标化合物的定量信息。 为验证该新方法在复杂基质分析和低浓度分析中的有效性，将综合农药标准品加标到三种不同的食品基质中，采用全离子 MS/MS 技术对样品进行分析。该技术有助于消除假阳性结果，且快速、准确，显著提高了农药筛查及定量分析的效率。

2010 年全世界有5280 万死亡病例，其中约有三分之二是由慢性疾病引发，主要包括心 血管疾病（> 1500 万）和癌症（> 700 万）[1]。因此，我们应该查明慢性疾病主要是由 遗传因素、环境暴露所致，还是基于两者的某种联合作用。由瑞典家庭癌症数据库汇编 的数据显示，15 种常见癌症的遗传(G) 风险为10% 或更低[2]。这就表明大约90% 的致 癌风险来自环境暴露(E) 或G×E 相互作用。当然，除了悬浮颗粒物、吸烟和一些营养物 质以外，主要的致癌环境暴露因素尚不明确。 尽管癌症和其他慢性疾病的遗传风险都相对较小，我们还是可以使用精妙的手段在人类 疾病研究中探讨G 因素的影响。事实上，全基因组关联分析研究(GWAS) 当前已测试出 2000-20000 个受试者100 多万个单核苷酸多态性。相比之下，个体环境暴露的影响推测 还与一个世纪之前的做法相同，来自于个人专访或自填问卷调查[3]。G 和E 特性的表征 差异使我们无法对GxE 的综合作用进行彻底研究，因此，必须开发一种用于环境暴露研 究的数据导向分析的技术和方法[4]。