那西肽

[align=center][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]富集[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]O-[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]GlcNAc[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]糖肽新[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]平台[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]研究基础[/color][/size][/font][/align][font='times new roman'][size=16px]在基于化学酶促反应[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]-[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]可逆羟胺富集[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]O-[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]GlcNAc[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]糖肽的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]方法开发方面，已经初步建立了新的[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]一[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]步法标记富集[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]O-[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]GlcNAc[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]糖肽新[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]平台，具体阐述如下：[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]基于化学酶促反应标记[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]可逆羟胺富集的原理，设计了整体实验流程，将简单或复杂的样本进行提蛋白、酶解、切糖、转糖等前处理步骤，用羟胺材料进行可逆富集，将洗脱样品进行质谱检测分析。（图一）[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px] [/size][/font][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310312050370377_6805_6198277_3.png[/img][align=center][font='times new roman']图[/font][font='times new roman']1[/font][font='times new roman']. [/font][font='times new roman']转接[/font][font='times new roman']Gal-ketone[/font][font='times new roman']羟胺材料富集[/font][font='times new roman']O-[/font][font='times new roman']GlcNAc[/font][font='times new roman']糖肽实验流程[/font][/align][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]在羟胺材料制备及表征方面，与郭志谋老师合作，在硅胶材料上键和上烯丙基羟胺小分子，合成羟胺材料，巯基硅胶碳含量为[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]5.32%[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，氮含量为[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]0.1%[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]SOA[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]填料碳含量为[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]6.33%[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，氮含量为[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]0.41%[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]。表结果为[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]5um[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]硅胶的比表面积为[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]337m[/color][/size][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][color=#000000]2[/color][/size][/sup][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]/g[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，键和密度为[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]0.85umol/m[/color][/size][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][color=#000000]2[/color][/size][/sup][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]。（图[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]2[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]）[/color][/size][/font][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310312050377926_4692_6198277_3.png[/img][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310312050375916_3943_6198277_3.png[/img][align=center]图2. [color=#000000]羟胺材料的制备与表征[/color][/align][align=center][/align][size=16px]在标肽层次进行[/size][size=16px]UDP-[/size][size=16px]糖的筛选、转糖、富集、释放可行性的考察，本研究通过合成更高效的[/size][size=16px]UDP-[/size][size=16px]糖，提高转糖效率。（图[/size][size=16px]3[/size][size=16px]）我们分别选用了文献中报道过的[/size][size=16px][color=#0d0d0d]UDP-[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]GalNAz[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d], UDP-GalNAc[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]以及本研究中的[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]UDP-GalNAc[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]在[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]标肽中进行[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]转糖活性验证。并对合成的[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]UDP-[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]糖[/color][/size][size=16px]对[/size][size=16px]O-[/size][size=16px]GlcNAc[/size][size=16px]转接[/size][size=16px]Gal-ketone[/size][size=16px]反应条件进行了优化，目前[/size][size=16px]30[/size][size=16px]℃条件下[/size][size=16px]5-6[/size][size=16px]小时即可达到很高的反应效率，一般转接[/size][size=16px]Gal[/size][size=16px]或者[/size][size=16px]GalNAc[/size][size=16px]实验需要[/size][size=16px]4[/size][size=16px]℃条件下反应[/size][size=16px]20[/size][size=16px]小时，相比之下转[/size][size=16px]糖时间[/size][size=16px]大幅缩短，大大提高了转糖效率。使用烯丙基羟胺材料对[/size][size=16px]转糖标肽[/size][size=16px]（[/size][size=16px]P2[/size][size=16px]：[/size][size=16px]NNLEES*(O-[/size][size=16px]GlcNAc[/size][size=16px])LLKLE[/size][size=16px]）进行富集，在只有[/size][size=16px]转糖标肽[/size][size=16px]和未转[/size][size=16px]糖标肽存在[/size][size=16px]的情况下，富集反应[/size][size=16px]4[/size][size=16px]小时即可反应完全。释放条件优化方面，目前[/size][size=16px]500mM[/size][size=16px]甲氧羟胺[/size][size=16px]/50mM[/size][size=16px]醋酸钠[/size][size=16px]/1%[/size][size=16px]苯胺可以达到很好的释放效果。[/size][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310312050381242_5784_6198277_3.png[/img][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310312050382643_4962_6198277_3.png[/img][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310312050380296_3640_6198277_3.png[/img] [img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310312050385796_7032_6198277_3.png[/img][align=center]图3. [color=#000000]标肽层次对方法可行性的验证[/color][/align][size=16px]对标肽层次转化效率以及选择性进行分析，测试了三条带有[/size][size=16px]O-[/size][size=16px]GlcNAc[/size][size=16px]修饰的肽段（[/size][size=16px]SGP1[/size][size=16px]：[/size][size=16px]NNLEES([/size][size=16px]GlcNAc[/size][size=16px])LLKLE[/size][size=16px]；[/size][size=16px]SGP2[/size][size=16px]：[/size][size=16px]SVES([/size][size=16px]GlcNAc[/size][size=16px])GSVDVK[/size][size=16px]；[/size][size=16px]SGP3[/size][size=16px]：[/size][size=16px]TAPTS([/size][size=16px]GlcNAc[/size][size=16px])TIAPG[/size][size=16px]）转接酮糖后与烯丙基羟胺、甲氧羟胺的反应活性。同时运用[/size][size=16px]BSA[/size][size=16px]干扰实验在标肽层次对结果表明在糖肽：[/size][size=16px]BSA=1:1000[/size][size=16px]的条件下也可以将糖肽很好的富集出来，并且特异性较高。（图[/size][size=16px]4[/size][size=16px]）[/size][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310312050387145_4550_6198277_3.png[/img][align=left][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310312050388174_307_6198277_3.png[/img][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310312050385643_7722_6198277_3.png[/img][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310312050386865_1760_6198277_3.png[/img][/align][align=center]图4. [color=#000000]标肽层次对转化效率及特异性考察[/color][/align][size=16px]进而使用[/size][size=16px]HeLa[/size][size=16px]细胞核[/size][size=16px]肽[/size][size=16px]进行转糖富集实验条件优化，用[/size][size=16px]Tip[/size][size=16px]洗涤材料并在一定程度上减少材料用量可以降低非特异性吸附，目前实验结果在[/size][size=16px]pH=5.0[/size][size=16px]条件[/size][size=16px]下，[/size][size=16px]400[/size][size=16px]微克肽段对应[/size][size=16px]2mg[/size][size=16px]富集材料的效果最好，使用这个条件对[/size][size=16px]HeLa[/size][size=16px]细胞全[/size][size=16px]肽进行[/size][size=16px]富集，[/size][size=16px]400[/size][size=16px]微克[/size][size=16px]HeLa[/size][size=16px]细胞[/size][size=16px]全肽可富集[/size][size=16px]到[/size][size=16px]1080[/size][size=16px]个[/size][size=16px]O-[/size][size=16px]GlcNAc[/size][size=16px]肽段，氨基酸顺序大于[/size][size=16px]3[/size][size=16px]的[/size][size=16px]844[/size][size=16px]处潜在修饰位点中只有[/size][size=16px]31[/size][size=16px]处位于[/size][size=16px]NXS/T[/size][size=16px]序列，与天冬酰胺在蛋白质中的频率基本相符，提示本方法不引入此类假阳性干扰。对鉴定到的[/size][size=16px]O-[/size][size=16px]GlcNAc[/size][size=16px]修饰糖肽进行[/size][size=16px]GO[/size][size=16px]分析，对蛋白参与的生物学过程、细胞定位及分子功能进行研究。（图[/size][size=16px]5[/size][size=16px]）[/size][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310312050388174_307_6198277_3.png[/img][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310312050393157_229_6198277_3.png[/img][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310312050394166_1500_6198277_3.png[/img][align=center]图5. [color=#000000]Hela[/color][color=#000000]细胞[/color]全肽O-GlcNAc糖基化水平及GO分析[/align][size=16px]以上工作在简单标肽样品及复杂样品：[/size][size=16px]Hela[/size][size=16px]细胞核肽及细胞[/size][size=16px]全肽样品层次均证实了方法的可行性，实现了对[/size][size=16px]O-[/size][size=16px]GlcNAc[/size][size=16px]糖肽的一步标记，一步富集，通过优化转糖、富集步骤，大大提高了[/size][size=16px]O-[/size][size=16px]GlcNAc[/size][size=16px]糖肽的鉴定数量，为该方法应用于后续对[/size][size=16px]O-[/size][size=16px]GlcNAc[/size][size=16px]水平调控相分离的研究提供了可靠的技术支持。[/size]

[font=宋体]从2011年至今，经历了大大小小几十次各类评审，基本上每次评审都会有不符合项，其中总有一些我认为比较典型的不符合项，本文通过分享不符合项整改及分析，供参考。[/font][b][font=宋体]1.[/font][font=宋体]不符合项描述[/font][/b][font=宋体]实验室未对CNAS认可标识使用和认可状态声明建立管理程序。[/font][b][font=宋体]2.[/font][font=宋体]不符合条款[/font][/b][font=宋体]CNAS-R01:2020[/font][font=宋体]中5.1.2条款[/font][b][font=宋体]3.[/font][font=宋体]原因分析[/font][/b][font=宋体]实验室通过CNAS实验室认可后，对CNAS认可标识和认可状态声明的要求不重视，未将CNAS-R01的要求文件化。[/font][b][font=宋体]4.[/font][font=宋体]纠正措施[/font][/b][font=宋体]a[/font][font=宋体]）质量负责人组织相关人员编制《认可标识使用和认可状态声明管理程序》，规范CNAS认可标识使用和认可状态声明。[/font][font=宋体]b[/font][font=宋体]）质量负责人组织相关人员学习CNAS-R01:2020《认可标识使用和认可状态声明规则》和《认可标识使用和认可状态声明管理程序》，使相关人员熟悉CNAS要求及程序文件要求。[/font][font=宋体]c[/font][font=宋体]）监督员对之前认可标识和认可状态声明的使用情况进行检查，对后续使用进行监督，确保执行到位。[/font][b][font=宋体]5.[/font][font=宋体]完成情况[/font][/b][font=宋体]a[/font][font=宋体]）XX月XX日，完成《认可标识使用和认可状态声明管理程序》的编制，提供《认可标识使用和认可状态声明管理程序》和文件新增审批表。[/font][font=宋体]b[/font][font=宋体]）XX月XX日，完成CNAS-R01:2020《认可标识使用和认可状态声明规则》和《认可标识使用和认可状态声明管理程序》培训，提供培训和评价记录。[/font][font=宋体]c[/font][font=宋体]）XX月XX日，监督员对之前认可标识和认可状态声明的使用情况进行检查，未发现不符合情况，对后续使用情况进行监督，均符合要求。[/font][b][font=宋体]6.[/font][font=宋体]总结分析[/font][/b][font=宋体]这个不符合项没有开在CNAS-CL01，而是开在CNAS-R01，比较少见。不过，CNAS-R01:2020《认可标识使用和认可状态声明规则》属于通用认可规则，是实验室必须遵守的文件，开在这里也是正常的。[/font][font=宋体] [/font][img=,690,102]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211301432183674_1168_2428545_3.png!w690x102.jpg[/img][font=宋体] [/font][font=宋体]实验室在取得CNAS认可证书后，就会涉及到认可标识使用和认可状态声明，实验室应在第一时间根据CNAS-R01制定相应的程序文件，确保认可标识使用和认可状态声明符合要求。这也是后续CNAS监督评审、复评审的评审重点之一。[/font]

不懂这玩意怎么使用 有需要的请联系 原价不便宜 倒闭转让帕纳倒闭转让帕纳科venus200荧光分析仪一台 13665391156 venus200荧光分析仪一台 13665391156 [img=,690,920]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/07/202207151759048543_8056_5372372_3.jpg!w690x920.jpg[/img][img=,690,920]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/07/202207151759132154_303_5372372_3.jpg!w690x920.jpg[/img][img=,690,920]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/07/202207151759251000_1515_5372372_3.jpg!w690x920.jpg[/img]