牡蛎组织

牡蛎基因组测序项目(OGP)日前在中科院海洋所正式启动。　　中国科学院海洋研究所介绍，开展牡蛎全基因组测序和组学研究，揭示牡蛎各种特异性状的基因组学基础，可以提升贝类和海洋基因组学研究水平，促进发展贝类养殖产业健康和可持续发展。　　中国是牡蛎的故乡，分布有近20种牡蛎。牡蛎是一种重要的海洋生物资源，为全球性分布种类。牡蛎也是海洋生态系统的重要成员，对海洋内湾和近海水域藻华的调控有重要作用，养殖的牡蛎每年可固化150余万吨的二氧化碳。牡蛎是海洋养殖年产量最大的类群，世界牡蛎年产量400多万吨，产值35亿美元。　　中国科学院海洋研究所张国范研究员和美国新泽西州立大学郭希明教授联合国际国内有关专家，组成一个牡蛎基因组国际研究团队，计划于2008年12月完成牡蛎基因组测序，2009年上半年完成牡蛎基因组精细图谱绘制。

仪器信息网讯 日前，《2013年第一批国家标准制修订计划的通知》公布，通知显示PCR将成为9项有关动植物、水产品的检验防疫的国家推荐标准方法。另外，还有3项检测涉及了显微镜法。这些标准的完成时间为2014年。 计划编号项目名称标准性质制修订代替标准号采用国际标准完成时间主管部门归口单位起草单位20130409-T-469甘蔗条纹花叶病毒实时荧光RT-PCR检测方法推荐制定　　2014国家标准化管理委员会全国植物检疫标准化技术委员会农业部甘蔗及制品质量监督检验测试中心、农业部福建甘蔗生物学与遗传育种重点开放实验室、福建农林大学甘蔗综合研究所20130476-T-326无乳支原体PCR检测方法推荐制定　　2014农业部全国动物防疫标准化技术委员会中国农业科学院兰州兽医研究所20130477-T-326隐孢子虫套式PCR检测方法推荐制定　　2014农业部全国动物防疫标准化技术委员会中国农业科学院上海兽医研究所20130478-T-326猪传染性胃肠炎病毒-流行性腹泻病毒-轮状病毒多重RT-PCR诊断方法推荐制定　　2014农业部全国动物防疫标准化技术委员会华中农业大学动物医学院20130479-T-326猪肺炎支原体PCR检测方法推荐制定　　2014农业部全国动物防疫标准化技术委员会江苏省农业科学院20130480-T-326猪瘟病毒RT-nPCR检测技术推荐制定　　2014农业部全国动物防疫标准化技术委员会中国兽医药品监察所、中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所20130491-T-326斑节对虾杆状病毒病诊断规程 PCR检测法推荐制定　　2014农业部全国水产标准化技术委员会中国水产科学研究院黄海水产研究所等20130498-T-326对虾肝胰腺细小病毒病诊断规程PCR检测法推荐制定　　2014农业部全国水产标准化技术委员会中国水产科学研究院黄海水产研究所等20130512-T-326桃拉综合征诊断规程 RT-PCR检测法推荐制定　　2014农业部全国水产标准化技术委员会中国水产科学研究院黄海水产研究所等20130505-T-326牡蛎包纳米虫病诊断规程 显微镜检查组织法推荐制定　　2014农业部全国水产标准化技术委员会中国水产科学研究院黄海水产研究所等20130506-T-326牡蛎单孢子虫病诊断规程 原位杂交法推荐制定　　2014农业部全国水产标准化技术委员会中国水产科学研究院黄海水产研究所等20130507-T-326牡蛎马尔太虫病诊断规程 显微镜检查组织法推荐制定　　2014农业部全国水产标准化技术委员会中国水产科学研究院黄海水产研究所等20130508-T-326牡蛎小胞虫病诊断规程 显微镜检查组织法推荐制定　　2014农业部全国水产标准化技术委员会中国水产科学研究院黄海水产研究所等

方法优势■ 筛选海产品中的多环芳烃（PAHs）用时不到4分钟■ 通过更快、更简单的样品制备取得准确的结果■ 通过使用荧光检测进行选择性测定沃特世解决方案配有荧光检测器的ACQUITY UPLC@ H-Class系统DisQuETM基质分散样品制备试剂盒Empower&trade 2软件关键词多环芳烃，PAHs，QuEChERS，荧光检测，食品安全目的证实DisQuE基质分散样品制备试剂盒和UPLC-FLR的组合能够提供一种适合海产品中PAHs检测的快速筛选工具。引言以往重大漏油事件，如：1989年瓦尔迪兹号（ExxonValdez）漏油和2010年4月墨西哥湾漏油事件，已经引起人们对出自这些地区的海产食品质量的担忧。鱼、甲壳类动物以及软体动物可能会接触或摄食石油，从而给消费者带来潜在的健康风险。在石油中发现的多种化合物中，一组重要的化合物是多环芳烃（PAHs）。美国环境保护局（US EPA）已经将这些化合物确定为重点污染物1。美国食品药品管理局（US FDA）还确定了多个方面的问题，包括鱼类中苯并（a）芘的含量达3.5 x 10-2mg/kg，牡蛎中菲和蒽的总含量达2.0 x 103mg/kg。2如果PAHs的含量达到关注水平的一半，则必须进行确证实验分析2。为避免食用受污染的海产食品并尽可能减小对海产食品业的影响，需要采用一种快速筛选法对这些令人担忧的化合物进行分析。我们在这里证明了通过使用.DisQuE基质分散样品制备试剂盒（QuEChERS）进行简单萃取后，配有荧光检测器的ACQUITY UPLC H-Class系统可用不到4分钟的时间完成一次PAHs分析。试验LC条件系统： 带大容量流动池（LV FC）的ACQUIT Y UP LCH-Class色谱柱： PAH 4.6 x 50 mm，3&mu m柱温： 35℃进样量： 10&mu L采样率： 20点/秒检测： 采用程序定时控制荧光检测波长变化软件： Empower 2流动相A： Milli-Q 水流动相B： 甲醇，Fisher最优级流动相C： 乙腈，Fisher最优级标准品： PAH认证标准，AccuStandard M 8310流速： 2.0 mL/min梯度程序： 时间 流速 %A %B %C 梯度线型 （ 分钟） （mL/min） 0.00 2.0 30 70 0 2.25 2.0 0 70 30 6 3.50 2.0 0 0 100 6 3.60 2.0 30 70 0 6样本制备用食品加工机按Ramalhosa等人3描述的方法对鱼肉块（比目鱼）、带壳虾以及带水的去壳牡蛎分别进行均质化处理。每个样品取15g均质后的组织到离心管中，按三种不同水平加入认证的PAH标准溶液。向鱼和虾样品中加入5ml水来帮助混合，牡蛎不需要另外加水。加标后的各种样品彻底混合，并允许在室温下放一个小时。向每个离心试管中加入DisQuE管（P/N 186004571）的试剂，即6 g硫化镁 + 1.5 g醋酸钠以及15 mL乙腈。用力摇动试管至少1分钟，从而形成海产食品组织、缓冲盐和乙腈的一种乳浊液。这次还按照Ramalhosa3的程序进行，因为既未向乙腈中加入醋酸，也没有执行二次PSA清洗步骤。我们试验室的初期工作证明，对于带荧光检测器的液相色谱法分析不必采取PSA步骤（数据未公布）。按3000 rpm的转数离心5分钟后，一部分乙腈浮层被转移至一个自动取样管进行进样。1&mu g/g和10&mu g/g浓度的加标样品分别用1:10和1:100的乙腈稀释。用6-点线性校正曲线对样品进行定量。标准曲线是用乙腈稀释认证的标准品来绘制的。结果和讨论分散样品制备通常也称为QuEChERS，是用于食品中农药分析的一种行之有效和快速的样品制备方法4。就在最近，该方法已被用来从食品基质中萃取其他污染物，包括多环芳烃3。利用ACQUITY UPLC H-Class系统，在短短的3.5分钟内就将被US EPA列为重点污染物的15种荧光PAHs分离出来了。分析物的分离如图2所示，箭头所指向的是程序定时控制波长的变化。图3所示为以10&mu g/g的浓度加标的虾、鱼和牡蛎基质的色谱图实例。如图3D中所示，同样通过样品制备程序制备出的空白水样显示了非常清晰的色谱图。本样品制备程序中使用的未加标型海产食品基质的实例同样未见基质干扰，如图4所示。各样品按照每一种分析物的6-点校正曲线进行定量。苯并(a)芘的示范校正曲线如图5所示。所有分析物的线性系数（R2） 0.995。通过Waters DisQuE基质分散样品制备试剂盒，从三种不同的海产品基质中提取多环芳烃。虾、鱼和牡蛎的回收率和RSD百分比如表1～表3所示。回收率范围为68%～149%。表4中列出了一系列QC水样加标的回收率，按所列水平浓缩，并贯穿于前述样品制备过程。这些结果对于所有化合物在每一种添加水平下都非常好，除了水中的苊的最低添加水平外（5 ng/g）。在该低水平上，由于峰面积小而且基线倾斜导致苊的检测结果变化波动很大，所以只能在这个水平以上检出。表5是根据7份各种海产品基质按5 ng/g的浓度加标后估算出的检测限，计算依据为US EPA 40 CFR，附录B至第136部分，修订号1.15.应用说明证实了DisQuE基质分散样品制备试剂盒和液相荧光色谱法的组合能够提供一种适合海产品中PAH检测的快速筛选工具。■ 分散样品制备提供了从不同海产品基质中提取多环芳烃的快速有效的方法。■ 实践证明，该方法比其他样品制备技术更有优势，因为通过很少的样品制备和较短的时间就能够得到准确的结果3。表5 加标型虾、鱼和牡蛎的检测限（LOD），根据每种海产品基质在5 ng/g浓度下个7个单标的检测结果计算出标准方差，计算依据为US EPA 40 CFR，附录B至第136部分，修订号1.1.■ 鉴于样品制备的时间缩短了，快速色谱分离对于通过该方法来分析样品、标准和相关QC样品十分重要。■ ACQUITY H-Class系统的分离时间还不到4分钟，能够满足方法要求。■ 本解决方案可帮助实验室筛选海产食品中的PAHs，并能经济、及时地给出结果；这样，消费者就可对这些产品的安全性感到放心。参考文献[1] USEPA Method 8310 &ldquo PolyNuclear Aromatic Hydrocarbons &ldquo 修订号 0，1986年9月。[2] Gratz et. al., &ldquo SCREEN FOR THE PRESENCE OF POLYCYCLICAROMATIC HYDROCARBONS IN SELECT SEAFOODS USING LCFLUORESCENCE&rdquo ,USFDA Laboratory Information Bulletin,页：2010年7月29日[3] Ramalhosa等人，&ldquo Journal of Separation Science&rdquo ，2009，32，页码： 3529-3538.[4] Anastassiades等人，Journal of the AOAC Int，2003，86，页码： 412.[5] EPA 40 CFR，第136部分之附录B，修订号：1.1 页码 566.