推荐厂家
暂无
暂无
基本原理 高真空状态下,利用升华原理使预先冻结的物料中的水份直接从冰态升华为水蒸汽而被除去,从而使物料干燥。 真空冷冻干燥广泛应用于多种产品,可确保物品中蛋白质、维生素等各种营养成份,特别是那些易挥发热敏性成份不损失,因而能最大限度地保持原有的营养成份。还能有效防止干燥过程中的氧化,可以避免营养成份的转化和状态变化。冻干制品呈海绵状、无干缩、复水性好、含水份极少,相应包装后可在常温下长时间保存和运输。 操作步骤 1、系统准备 检查系统是否清洁和干燥,真空泵与冷冻机是否连接,接通电源,检查排气口、冷冻管的密封性。 2、加样 样品需要预冷到至少-40℃,可以在深低温冰箱(-70℃)或者液氮(-196℃)中进行。打开密封管开关,搬开冷冻舱,将样品置于冷冻舱里的隔板上。关闭密封管开关。 3、冷冻 打开冷冻开关,等待20~30分钟,直到冷冻舱的温度低于-40℃。 4、抽真空 打开真空泵开关,等待10~15分钟,直到系统压力低于100 millitorr。 5、监控过程 确保系统参数(冷冻温度、真空压力)在正常范围内; 定期检查冷冻舱中的结冰情况,决定是否要除霜; 观察样品是否干燥完全,一般干燥过程需要24~72小时,视具体样品通过目测而定。 6、关闭系统 关闭总开关,接上排气管或打开密封管开关以解除真空状态。 关闭真空开关,关闭冷冻开关,取出样品。 7、系统维护 除霜:冷冻舱下面的压缩舱内如果有霜,则接上排水管,然后用少量热水(不能超过压缩舱容积的一半)促进冰霜的融化。不能通过敲击冰块来除霜。 除湿:压缩舱、冷冻舱、真空泵压缩机以及垫圈等表面的水雾均需擦干。 清洁:压缩舱、冷冻舱可以用温和的去污剂或苏打水来清洗,然后干燥并撤去排水管,并重新密封排水孔。 泵油:定期检查油位,排除油雾。
最近一直在摸索着用高压冷冻和冷冻替代样品制备技术,刚开始做的时候冰晶特别严重,如下图Hela细胞。冰晶已经把细胞超微结构破坏的不行了。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609231539_611900_2423894_3.jpg经过很长时间的摸索,得到以下制样方法:1 取样1.1 培养细胞:取适量的细胞悬浮液,低速离心成细胞团,去上清,细胞团呈米糊状,用移液枪取适量细胞,填满Carrier,加入适量冷冻保护液1-Hexadecene,滤纸吸取多余水分,使冷冻保护液液面略高于Carrier(Carrier用丙酮清洗,然后在空气中晾干,用1-Hexadecene浸泡备用)。1.2 小鼠肝脏:从活体上取出的组织,先用锋利的刀片在低温下切成尽可能薄片状,从中挑选合适的部分切下来,然后装入Carrier,加入适量冷冻保护液1-Hexadecene,滤纸吸取多余水分,使冷冻保护液液面略高于Carrier。2高压冷冻高压冷冻仪在使用前,要先做一些准备工作:要先加入足够的液氮,并加入压力液甲基环己烷,然后用空载的carrier高压冷冻三次,保证高压冷冻仪在最佳工作状态。2.1 将上述装有样品的carrier快速安置到高压冷冻仪,准备高压冷冻。2.2 高压冷冻样品,迅速把样品冷冻下来,并做好记录。通过高压冷冻仪冷冻样品后产生的冷冻速度和压力变化曲线,可以选择冷冻效果较好的样品继续下面实验。2.3 转移样品,首先把现配的替代液1%锇酸(0.5g锇酸溶于50mL丙酮)分装到2mL冻存管中,迅速放入液氮冷冻备用,冷冻过程中保持冷冻管直立。与此同时,冷冻替代仪加满液氮,将自制的冻存管架放入样品腔,预冷至-100℃。用预冷的镊子,在液氮下将Carrier分别装入冻存管,冻存管盖不宜拧的过紧,然后迅速转移到冷冻替代仪样品腔室的冻存管架里。3 冷冻替代 步骤 温度 时间 1 -100℃ -90℃ 4h 2 -90℃ 72h 3 -90℃ -60℃ 8h 4 -60℃ 8h 5 -60℃ -30℃ 4h 6 -30℃ 8h 7 -30℃ -20℃ 2h 8 -20℃ 8h 9 -20℃ 4℃ 2h 10 4℃ 1h 温度达到4℃后,用4℃的丙酮浸洗样品3次,每次15分钟。此过程中,会有部分样品与Carrier分离,若还有没分离的可以用解剖针将样品从Carrier中剥离。4 渗透包埋分别用以下渗透液渗透。 步骤 渗透液 浓度 时间 1 Epon812/丙酮 1:1 1.5-2h 2 Epon812/丙酮 3:1 6-12h 3 Epon812 100% 1h 4 Epon812 100% 8h 5 Epon812 100% 1h然后将样品转移至包埋槽,60℃烘箱聚合48h。5 超薄切片把两种生物样品对应的每一个包埋块分别超薄切片,各捞两个铜网,并染色。6 电镜观察观察细胞内超微结构保存情况,对感兴趣区域拍照。终于有所改善,如下图的小鼠肝脏细胞,轮廓十分清楚,结构保存完好。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609231516_611895_2423894_3.jpg局部放大后观察,能看见核孔,双层核膜,甚至是膜的磷脂双分子层结构(这是在常规化学固定制样中很难看到的),看到这些让人激动不已。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609231516_611894_2423894_3.jpg碰巧看见一个正在分裂的线粒体。线粒体脊很清楚,双层膜紧挨着,不像常规制样间隙那么大。另外,线粒体基质保存完好,所以线粒体整体较细胞基质反差大。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609231516_611893_2423894_3.jpg以下是常规化学固定制样的结果,可与上面高压冷冻及冷冻替代制样技术结果对比:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609231644_611928_2423894_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609
在ELISA实验中,ELISA试剂盒是缺一不可的存在,我们知道,完整的ELISA试剂盒主要包含:[align=center][img=,450,450]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/01/202401311430051524_9023_6341941_3.jpg!w450x450.jpg[/img][/align] 1、酶的底物。 2、已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂)。 3、酶标记的抗原或抗体(结合物)。 4、结合物及标本的稀释液。 5、洗涤液。 6、阴性对照品和阳性对照品(定性测定中),参考标准品和控制血清(定量测定中)。 7、酶反应终止液,常用的HRP反应终止液为硫酸,其浓度按加量及比色液的体积而异,在板式ELISA中一般采用2mol/L。 ELISA试剂盒 被冷冻后的试剂盒质量会受损吗 为其保存后可以使用,但不能反复冻融,如果您在一周之内做实验,可以2-8℃保存;如果您在一周至一个月之内做实验,可以-20℃保存;如果您在一个月以上做实验,可以-80℃保存。但是值得注意的是,冻融一次比2-8℃保存损失更大,主要是因为蛋白的降解,冻融一次蛋白都有降解。 在建立ELISA方法作反应动力学研究时,实验表明,两次抗原抗体反应一般在37℃经1~2小时。温育常采用的温度有43℃、37℃、室温4℃等。室温温育时平置于操纵台上即可。37℃是实验室中常用的保温温度,也是大多数抗原抗体结合的合适温度。 保温的方式除有的ELISA仪器附有特制的电热块外,一般均采用水浴,可将ELISA板置于水浴箱中,ELISA板底应贴着水面,使温度迅速平衡。操纵时的室温应严格限制在划定的范围内,尺度室温温度是指20~25℃,但详细操纵时可根据仿单的要求控制温育. 以上就是ELISA试剂盒冷冻后的处理方式,大家在实验的过程中一定要多加注意。关于更多,可以参考上海通蔚[url=https://www.tw-reagent.com/jishu2.php?val=jishu]ELISA技术支持[/url],谢谢!