亲和介质

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  • 苏州纳微科技有限公司
    纳微科技（NANO-MICRO）通过提供革命性的色谱层析填料或介质、色谱柱、预装柱及分离纯化技术服务，开创单分散色谱分析和制备的新时代。我们在天然产物、抗生素类、蛋白、多肽类、糖类、核酸、标准品、杂质等分离制备方面拥有广泛的专业技术，为业界提供数千种高质量产品类别，涵盖色谱层析微球填料如硅胶正相、反相、HILIC、手性、聚合物反相、离子交换、疏水、PROTEIN A亲和、金属螯合亲和、硼酸亲和、凝胶渗透(GPC)、固相萃取及特殊功能填料，以及各种规格的分析色谱柱、层析制备预装柱、标准微纳米颗粒、功能磁珠、磁珠母球以及光电微球等产品，还提供分离纯化整体解决方案、分析检测服务以及实验技能培训，拥有规模化生产、供货能力和质量保证，致力于为广大色谱分析制备、制药分离纯化以及光电显示产业提供可持续、高品质及创新性的产品和技术服务。 NANO-MICRO通过ISO9001：2008质量管理体系认证，确保产品的质量、批次间重复性，大规模出口高性能色谱填料到欧美、日本、韩国等国际知名制药和色谱企业，成为中国色谱行业的领军企业之一。
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  • 北京博尔西科技有限公司
    北京博尔西科技有限公司致力于为企业提供诊断试剂原料及科研原料，拥有着动物免疫技术，抗原抗体纯化技术，蛋白纯化处理技术等，欢迎各界朋友指导和业务洽谈。产品包括：重组蛋白（肠激酶、链霉亲和素、蛋白AG等）、血凝试剂原料（兔脑粉、兔脑磷脂、牛凝血酶、组织因子）、多克隆单克隆抗体原料（羊抗鼠IgG、酶标荧光二抗）、血液制品（抗血清、小牛血清、新生牛血清、小鼠血清、红细胞）、填料（真菌素免疫亲和柱、亲和层析、离子交换层析、凝胶过滤层析等）。
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  • 江苏美正生物技术有限公司
    一、关于美正生物 江苏美正生物科技有限公司是一家专注于水产安全快速检测技术的创新型公司，公司致力于高通量高灵敏度的水产安全现场快速检测产品的研发、生产及服务。 公司办公地点在风景秀丽的江南名城无锡市太湖湖畔。公司已经建成拥有500平米具有国际先进水平的研发创新平台，形成了自主创新的核心技术及产品，以及覆盖整个大华东地区的产品销售及服务网络。按照公司发展规划，二期将建成1000平米年产值8000万元的符合GMP规范的生产车间，并形成覆盖全国的销售及服务网络。 二、自主研发目标产品 ◆ 检测各种违禁添加物，如：孔雀石绿、各种激素等； ◆ 检测各种抗生素残留，如氯霉素、喹诺酮类、硝基呋喃类、磺胺类等药物； ◆ 检测各种毒素，如河豚毒素及各种贝类毒素。 产品形式包括：胶体金试纸条/检测卡、ELISA试剂盒、免疫亲和柱等三、代理产品 ◆ 北京华安麦科生物技术有限公司系列食品安全检测产品，包括：胶体金试纸条/检测卡、ELISA试剂盒、免疫亲和柱/分子印迹亲和柱，以及配套仪器。◆ 北京良润生物科技有限公司系列微生物检测产品，包括：微生物测试片、胶体金检测卡、微生物培养基等
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  • 默克Fractogel®层析介质 400-622-8982
    Fractogel®介质为基于合成甲基丙烯酸酯的聚合物小球，提供优良的压力稳定性，从而能够采用高流率。视您的应用而定，我们可提供中等大小的M型填料（粒度40-90 µm）和较小的S型填料（粒度20-40 µm）。Fractogel®介质的独特组成，是纯化策略的有力工具。触手是长线形的聚合物链，携带功能配位体。全部触手与Fractogel®介质的羟基以共价键连接。该构型提供了高表面积，使生物分子不受空间位阻，与可及的配位体结合。许多配位体可用于各种层析应用（包括离子交换、亲和、疏水性相互作用和分子筛）。优点：- 更佳的产品收率官能团与目标分子之间的空间位阻最小，更易接触。与常规方法相比，触手介质提供了更高的结合力，特别是对于大型蛋白质、抗体、病毒和质粒。由于目标分子的结合更紧密，使用Fractogel®离子交换介质的捕获步骤，常比其他介质更高效，从而有更大的总收率。- 更安全的产品与基于碳水化合物的介质不同，Fractogel®介质不易为微生物降解。因此，内毒素污染风险大大减少。此外，Fractogel®介质可以多次清洁，也延长了其使用寿命。- 更低的运行费用由于Fractogel®介质的优良化学耐受性，循环次数可以很高。介质寿命极长，更换频率降至最低，从而减少了运行费用。分类：- 用于离子交换层析的Fractogel®介质可以实现从各种来源（例如细胞培养上清液、微生物表达系统、血浆等）中分离天然和重组蛋白质；有效地纯化肽和低分子量物质；DNA、内毒素和HCP，获得优良的对数减少值；安全去除病毒；很适合于有效纯化单克隆抗体。E.g., Fractogel® EMD TMAE, Fractogel® EMD TMAE Hicap, Fractogel® EMD DEAE, Fractogel® EMD SO3, Fractogel® EMD SE Hicap, Fractogel® EMD COO-, etc.- 用于金属螯合亲和层析的Fractogel®介质Fractogel® EMD Chelate选择亚氨基二乙酸作为功能亲和配基，非常适合于金属离子配位作用。金属离子的自由配位点，被用来与各种蛋白质和肽结合。适合于分离重组、组氨酸标签蛋白质；可应用于肽的分离、柱内的在位复性。- Fractogel® EMD BioSEC分子筛填料Fractogel® EMD BioSEC是基于交联聚甲基丙烯酸的分子筛层析填料，机械稳定性强，化学稳定性好，适合生产规模，可应用于精致纯化。更多信息，e.g., 详细参数，填料、预装柱货号信息等，可参见本页面核心参数 – 样本下载中的资料手册。
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    厂商： 默克工艺解决方案
    品牌： Millipore
    型号： Fractogel®
    价格： 面议
  • 默克ProSep® Ultra Plus亲和层析填料 400-622-8982
    ProSep® Ultra Plus是一种蛋白A亲和层析填料，是当前市场上动态结合载量及通量较高的一种亲和树脂。根据在填料粒径与孔径上的优化，抗体动态载量随着每一代的ProSep®填料而增加。基于原有ProSep®填料的成熟技术，ProSep® Ultra Plus具有较同类树脂产品更大的处理能力和产率。此外，其硬性基质有利于后续规模放大，也增强了操作的灵活性，为抗体生产商节约设备，缩小占地面积，及在短期内生产大量高浓度产品提供了极大的便利。ProSep® Ultra Plus的优势在于：动态载量最高；成熟技术；通量高，实现最大产率；操作灵活；易于放大；运行成本低。了解更多：更多信息，e.g., 填料表现，详细性能列表等，可参见本页面核心参数 – 样本下载中的资料手册。
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    厂商： 默克工艺解决方案
    品牌： Millipore
    型号： ProSep® Ultra Plus
    价格： 面议
  • 介质膜反射镜 400-628-5299
    2.介质膜反射镜A.介质膜激光反射镜：1)OML系列介质膜激光反射镜 命名规则:OML直径-波长-厚度OML系列激光反射镜选型表：型号名称面精度直径（mm)厚度(mm)入射角( ° )OML25.4-355-6.35355nm反射镜&lambda /10&phi =25.4T=6.3545OML20-441-4441nm反射镜&lambda /4&phi =20T=445OML25-441-4441nm反射镜&lambda /4&phi =25T=445OML25.4-441-4441nm反射镜&lambda /4&phi =25.4T=445OML30-441-5441nm反射镜&lambda /4&phi =30T=545OML50-441-5441nm反射镜&lambda /4&phi =50T=545OML20-488-4488nm反射镜&lambda /4&phi =20T=445OML25-488-4488nm反射镜&lambda /4&phi =25T=445OML25.4-488-4488nm反射镜&lambda /4&phi =25.4T=445OML30-488-5488nm反射镜&lambda /4&phi =30T=545OML50-488-5488nm反射镜&lambda /4&phi =50T=545OML20-532-4532nm反射镜&lambda /4&phi =20T=445OML25-532-4532nm反射镜&lambda /4&phi =25T=445OML25.4-532-4532nm反射镜&lambda /4&phi =25.4T=445OML30-532-5532nm反射镜&lambda /4&phi =30T=545OML50-532-5532nm反射镜&lambda /4&phi =50T=545OML20-633-4632.8nm反射镜&lambda /4&phi =20T=4452)紫外（深紫外）介质膜激光反射镜（进口）说明： 1.激光介质膜反射镜是一种在面精度为&lambda /10 的BK7 基板上，顺序镀上不同折射率的多层电介质膜的全反射镜。 2.此种膜层比Al+ 氟化镁(MgF2)膜更耐强激光，面精度是镀膜前的反射面的面精度。 3.入射角度为45° ± 3° ，平行度&le 3&prime 。 曲线图：TFM系列紫外（含深紫外）激光波长介质膜反射镜（SIGMA）选型表：
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    厂商： 北京卓立汉光仪器有限公司
    品牌： 卓立汉光/ZOLIX
    型号： OML系列
    价格： 面议
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  • 浅谈令人“爱恨交加”的Protein A亲和层析介质（上）
    下游工艺先进性决定了药品的质量抗体药物生产是个非常复杂的过程，大致分为上游的发酵及下游的分离纯化：上游工艺主要包括细胞复苏、传代、发酵生产。而下游工艺主要包括膜过滤及多步层析分离纯化。过去十多年来，基因工程获得突飞猛进的进步，细胞培养的表达量从原来的不到0.5 g/L 到现在普遍达到5g/L，有的甚至超过10g/L。这些进步是由细胞表达载体的开发，克隆筛选以及细胞培养基优化等技术创新所驱动的。由于发酵产率的大幅度提升，使得上游细胞培养成本大幅度降低，下表是抗体生产成本与表达量的关系。表1.表达量与抗体生产成本关系Titer（g/L）Annualproduction（1000kg）DisposableMaterial物料成本（$/g）Cell Culture PurificationFacilitiesc厂房/设备/人工FormulationCost（$/Vial）Total Cost（$/Vial）100 mg 1 g0.51204100422 134244425413 435102410412 26与上游十多倍生产效率提升相比，下游分离纯化技术进步明显滞后，导致下游工序成为生产瓶颈，抗体主要生产成本也转移到下游。下游工艺在整个生物制药生产中占据60%以上生产成本，也被认为是最需要改进的技术领域。下游工艺先进性决定了药品的质量，及药品生产效率和成本，也成为生物制药企业的核心竞争力所在。由于生物分子由于结构复杂，对外部条件敏感，稳定性差，杂质多，浓度低等特点，且监管部门对生物药的纯度和质量要求越来越高。因此下游的分离纯化成为生物制药的瓶颈，也是生物制药成本最大的一块。层析技术由于具有分离纯化效率高，条件温和且容易保持目标分子的生物活性，因此层析是生物制药分离纯化最主要方法。层析介质的“皇冠之珠”——令人爱恨交加的Protein A生物大分子的层析方法主要分为亲和，离子交换，疏水作用及体积排阻。亲和层析是利用介质上的配基与目标蛋白分子有特异性结合，而对其它的蛋白质及杂质不吸附，因此杂质从层析柱中流出，被吸附的目标生物分子通过改变洗脱液的条件使被分离物质与配基解吸附，即可达到分离纯化的目的。亲和层析无疑是最理想的层析分离方法，其与其它分离方法如离子交换、疏水、体积排阻等最大的不同是由于亲和层析只与目标生物分子发生专一性吸附，其它杂质都不吸附，因此亲和层析分离纯化的工艺条件与杂质的组成及含量多少关系不大，从而大大简化亲和分离工艺开发方法，而其它分离方法如离子交换、疏水、体积排阻等都是基于目标分子跟杂质分子之间的大小，电荷及疏水强度的差异来分离的，因此即使分离纯化同样的目标分子，但不同样品的杂质组分不同，含量不同，纯化工艺方法就需要重新调整。Protein A填料由于与大多数抗体有特异性吸附，因此被广泛地用于抗体药物生产过程中，极大地提高了抗体的分离纯化效率，毫无疑问Protein A 亲和介质是层析介质的皇冠上的明珠，其价格也是普通层析介质的十几倍。Protein A 亲和层析介质之所以会成为层析介质的贵族与它对抗体有特异性吸附有关。Protein A 亲和层析是利用Protein A 配基与目标抗体具有专一亲和吸附作用从而达到分离纯化抗体的目的。因为配基与目标抗体的作用的专一性，其分离纯化与目标样品抗体纯度无关，也与样品杂质含量和种类多少无关，使用Protein A 填料一步纯化目标抗体就可以达到95%纯度以上，回收率达到90%以上。Protein A 层析介质的出现，让抗体的分离纯化步骤及方法大大简化，使得抗体的分离纯化比其结构简单多的生物分子都要简单。抗体分离纯化基本都是标准化的三步曲，第一步用Protein A进行抗体捕获，第二步用阳离子去除多聚体，第三步用阴离子精纯去除剩余少量杂质。Protein A亲和层析已经成为平台化技术，被广泛应用在抗体类分子捕获阶段。Protein A与抗体分子之间可特异性结合，特别对IgG1、IgG2、IgG4有较强亲和作用，使得抗体分子与发酵液中不具FC端结构的杂质如宿主蛋白与核酸等有效分离，进而达到纯化目的。亲和特异性赋予了Protein A填料捕获时可接受更宽泛的样品条件，如pH及电导率等。因此，发酵液通过离心、深层过滤后即可直接进行亲和捕获。另外与离子交换、疏水层析等方法相比，Protein A亲和层析纯化抗体料液可以获得更大的纯度，一步就可以获得抗体纯度大于98%，而且在回收率上也有明显优势，亲和捕获回收率可达95%。抗体工作者对Protein A 是爱恨交加，爱的是Protein A 亲和层析的出现大大简化抗体的分离纯化工艺开发,并大幅度提高抗体纯化效率和纯度，而且几乎适用于所有抗体的分离纯化。恨的是Protein A 亲和介质价格贵，寿命短，占据下游分离纯化成主要本。虽然很多科学家曾经致力于研究新的价廉抗体亲和配基以取代昂贵的Protein A亲和配基，但都没有成功找到一个可以取代Protein A 配基的分子。Protein A亲和层析因其高度特异性及同时具有浓缩的效果成为过去近30年里抗体纯化捕获的金标准。Protein A亲和层析介质贵的主要原因有两方面，一方面是Protein A 蛋白配基成本远比传统的小分子配基昂贵，另一方面，Protein A亲和填料寿命较短也是其成本过高的主要因素。一般离子交换填料使用寿命可高达1000次，而亲和填料寿命通常在100-200次。还有Protein A 介质贵与其一直处于高度垄断的局面也有关系，因此Protein A 亲和层析介质国产化以降低抗体的生产成本是必然的发展趋势。ProteinA结构及作用机制ProteinA蛋白是金黄色葡萄球菌细胞壁锚钉蛋白，其C端为细胞壁结合区域，抗体结合区域包括五个同源区域（E、D、A、B、C，N端顺序）。五个domain的序列同源率65-90%（图1）。图1 重组与天然ProteinA基本性质三维空间上，抗体FC端CH2-CH3区域与ProteinA蛋白B结构域上两条反相平行的α螺旋结构相互结合。抗体与ProteinA结合时，主要依靠的是疏水作用力，其次是氢键和双盐桥作用力。疏水作用主要来自于核心区域组氨酸残基。抗体上高度保守的组氨酸残基与ProteinA上的组氨酸残基发生相互作用。碱性或中性条件下，组氨酸残基不带电荷，其咪唑环的疏水效应的增强促进了FC端与ProteinA的结合。当pH降低至4.5以下时，组氨酸带上正电荷，于是两者产生静电排斥力，抗体从ProteinA上解离。除FC端恒定区域外，可变区VH3也参与了ProteinA结合及洗脱，影响洗脱pH（图2）。图2单抗分子结构 图3 抗体分子与ProteinA作用Protein A来源于金黄色葡萄球菌的一个株系，它含有5个可以和抗体IgG分子Fc段特异性结合的结构域，当其作为亲和配基被偶联到填料基质上后，可特异性地与样品中的抗体分子结合，使其他杂蛋白流穿，借助高效亲和层析仅需一步就可使目标抗体纯度超过95%，此外Protein A也可结合另一些免疫球蛋白，如可用于某些种属IgA、IgM的纯化。由于Protein A亲和层析基于天然存在的生物大分子之间特异性结合为分离机理，这种得天独厚的势使得Protein A亲和层析成为重组蛋白\抗体等分离纯化中的绝佳选择（图3）。下一期，江必旺博士将继续分享Protein A亲和填料的关键考核要素有哪些，敬请持续关注。
    时间： 2021-12-31
    作者： YOLO
  • 亲和层析之蛋白A
    球菌的细胞壁，与IgG的Fc片段具有非常强的特异性，分子量约为42×103，如图所示。一般在蛋白 A亲和层析中，配基在中性pH条件下结合抗体，在酸性pH条件下与蛋白解离。‍蛋白A与抗体IgG的Fc片段结合模式基于蛋白 A 亲和层析的抗体捕获工艺较为稳定，但也存在一些不足，主要包括：（1）介质成本高。（2）配基易脱落。（3）洗脱条件苛刻。（4）Protein A介质的再生比较困难。针对以上问题，部分商业化蛋白A亲和层析介质中使用的基本为改造的蛋白A配基，改善了天然蛋白A的缺点，提高了耐碱能力和洗脱 pH。月旭科技推出的耐碱抗体亲和介质-耐碱Protein A Solid/耐碱Protein A 4FF， 由大肠杆菌表达，经层析纯化获得，纯化过程不适用抗体柱亲和层析，避免了产品中掺入无关IgG的可能，改配基pH耐受0.5M NaOH和0.5M HCl处理，不降解，抗体结合能力不变。该介质适合从大批培养液捕获单克隆抗体或Fc融合蛋白，也适合与从腹水或者血浆中捕获多克隆抗体。技术参数‍应用实例订货信息
    时间： 2021-09-10
    作者： 月旭
  • 盘点Protein A亲和填料质控必看的重要参数
    继上篇《浅谈令人“爱恨交加”的Protein A亲和层析介质》（点击回顾）后，江必旺博士本期带我们了解影响Protein A层析介质的多种参数，供广大用户学习，也欢迎大家在评论区留言讨论。Protein A亲和填料的关键考核要素Protein A是用于抗体第一步分离纯化，其性能影响抗体生产的效率，成本，纯度等等，因此抗体厂家对Protein A 介质的要求较高。其关键点在Protein A 介质的载量，机械强度，耐碱性，使用寿命，纯度和回收率，配基脱落及HCP的残留及产品的质量和稳定供应等等。介质载量：层析介质的载量是药厂选择的重要参数，载量越高，同样柱体积填料可以处理更多的抗体料液，生产效率也就越高。但Protein A 亲和填料载量与柱保留时间有关，一般情况是柱留时间越长，测试的载量越大，也就是说流动相速度越快载量越低，这主要是因为抗体在介质微球中的扩散速度受限造成的。抗体的纯化生产效率与流动相速度有关，速度越快生产效率越高，但速度越快载量越低，上样量越少，因此要平衡好载量和流速以达到最高生产效率。评估亲和介质载量要看，其载量是在什么样的流速下测试的，理想的介质是在高流速条件下具有较高的载量。这样有利于兼顾生产效率和产量；抗体回收率和纯度：一般来说Protein A亲和层析介质用于抗体分离纯化回收率都比较高（一般都高于90%以上），回收率越高，成本越低。另外纯化后抗体的纯度也是药厂重点考虑的因素，Protein A 亲和层析往往是用于第一步捕获，一步亲和层析就可以把纯度提高到95%以上，通过第一步纯化后抗体纯度越高，后续精细分离的压力越小。抗体回收率和纯度往往更Protein A配基种类有关系，不同厂家采用的配基不同，会影响收率和纯度。介质寿命及耐碱性：亲和层析介质比离子交换介质价格高很多，而且使用寿命又比离子交换介质短很多，使得亲和层析介质在抗体的纯化介质中占据80%成本。因此亲和层析介质的寿命是抗体厂家要考虑的另外一个重要参数。高效服役时间的长短会在一定程度上影响纯化的经济性，也能从某种程度上避免更换填料带来的潜在问题；另外药物生产过程中，氢氧化钠被广泛用于层析介质及系统的清洗、消毒及存储等过程。采用氢氧化钠再生可避免不同cycle间的蛋白及核酸的交叉污染，也可有效降低Bioburden。当浓度大于0.1M时，可有效灭活Murine Leukemia Virus等病毒，杀灭细菌及芽孢杆菌，降低内毒素水平。因此Protein A 亲和层析介质的耐碱性对其寿命及纯化抗体的质量具有重大意义。一般Protein A 亲和层析介质需要耐受0.5 M NaOH溶液清洗，且在经过100 Cycles清洗后，动态载量仍要维持在95%以上； 表1氢氧化钠对不同病毒灭活的效果统计HIVBVDCPVBHVPOLSV-40MLVADV0.1M NaOHSpike2.0×1069.5×1062.0×1096.9×1097.1×1081.7×1082.6×1052.2×10820min5.8×1021.5×1049.6×1024.5×1012.0×1044.7×1044.0×1016.3×10160min5.8×1022.7×1045.0×1034.5×1012.1×1032.0×1044.3×1012.9×101Inactivat（log10)3.52.55.68.25.53.93.86.90.5M NaOH Spike2.0×1069.5×1062.0×1096.9×1097.1×1081.7×1082.6×1052.2×10820min5.6×1021.7×1021.5×1035.9×1012.0×1048.4×1034.7×1012.0×10160min6.7×1022.7×1025.0×1035.9×1016.2×1031.0×1035.5×1012.2×101Inactivation（log10)3.54.76.18.15。16.23.77Note：病毒浓度检测采用组织细胞感染计量TCID50大量的微生物如酵母细菌可干扰层析过程，同时可以造成筛板堵塞等问题，更重要的是微生物产生的内毒素和蛋白酶严重污染纯化料液。氢氧化钠可有效抑制、杀灭酵母及细菌等微生物。数据见下表。表2 氢氧化钠对不同病毒灭活的效果统计OrganismConc.NaOH(M)Time(hrs)Temp.E.coli0.0124/22℃S.aureus0.114/22℃C.albicans0.514/22℃A.niger0.514/22℃B.subtilis spores14822℃P.aeruginosa1122℃Note:细菌低于检测限度(3Organisoms/ml)所需要的时间内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁成分，主要是类脂多糖，也被称作热源。注射药物中含有纳克级含量即可使人体产生寒颤，高热甚至休克等不良反应。GMP生产的各环节严格控制热源，层析过程也是重点监控步骤。采用氢氧化钠对层析系统及填料进行SIP可确保把热源含量降至最小。下图是不同浓度氢氧化钠对于内毒素的灭活效果。机械强度：高机械强度的介质耐压性好，耐受更高的流速，从而提高生产效率，缩短纯化周期；另外高机械强度填料可装填更长柱子，从而提高批次处理量；高机械强度介质可以减少碎片避免筛板堵塞，降低压力；还有高机械强度的介质可以上高浓度，高粘度的样品；最后高机械强度有利于放大生产，越大的柱子，对介质机械强度要求越高，因此高机械强度的介质在大规模层析纯化过程中越不容易给压塌，可以确保生产的安全性。Protein A层析介质除了要考虑载量，机械强度，耐碱性及寿命外，还要考虑Protein A的 脱落及内毒素的控制及生产的批次稳定性等。下期，江必旺博士将为我们带来“Protein A 亲和层析介质的制备方法”干货文章，敬请期待。
    时间： 2022-01-07
    作者： YOLO
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  • 亲和层析法的原理及操作步骤

    [font=宋体]蛋白纯化介质在研究目的蛋白的结构、功能以及相互作用过程中起着至关重要的作用。亲和层析法因其出色的选择性、结合力和分辨率，成为一种常用的蛋白和抗体纯化方法。义翘神州提供的多种亲和纯化介质，不仅简单易用，而且适用于批量操作或重力驱动的纯化过程。这些介质能够高效、便捷、可靠地分离蛋白和抗体，为下游应用提供了强有力的支持，确保实验结果的可靠性和重复性。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]亲和层析法的原理[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]亲和层析法是利用生物大分子与特定分子间特异性、可逆结合的特性，实现生物大分子的分离。作为蛋白质分离的有效手段，通常仅需一步操作，即可获得高纯度的蛋白质。在亲和层析中，蛋白质的分离基于其与特定配体的特异性相互作用，而非共价结合的能力。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]凝胶过滤层析，又称分子筛层析法，是一种独特的蛋白质分离和纯化技术。当样本流经葡聚糖凝胶或琼脂糖凝胶等介质时，这些介质根据蛋白质的大小和形状进行筛选。经过这一过程，目的蛋白得以纯化，为后续的下游应用提供了高质量的原料。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]亲和层析操作步骤：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]在进行亲和层析时，需将蛋白在适宜的条件下加载至柱子上，确保蛋白（或标签）与其配体之间能够发生特异性结合。随后，通过洗涤步骤，清除与固定相发生非特异性结合的污染蛋白，同时保持蛋白与配体之间的特异性相互作用不受干扰。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]接下来，采用含有竞争性分子的缓冲液进行洗脱，竞争性分子能够与配体结合，从而将目标蛋白从柱子上取代下来。这一步中，竞争分子通常会在后续的色谱流程或透析处理中予以去除。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]通过以上步骤，亲和层析成功实现了目标蛋白的纯化和分离，为后续的实验和应用提供了高质量的原料。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多详情请关注：[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-purification-by-ac][b]亲和层析纯化蛋白[/b][/url][/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-purification-by-ac[/font][/font][font=Calibri] [/font]

  • 亲和层析纯化蛋白原理解析

    [font=宋体]蛋白纯化介质主要应用于研究目的蛋白的结构、功用以及相互作用的和过程中。比如：在蛋白纯化过程中，由于[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-purification-by-ac][b]亲和层析法[/b][/url]的选择性和结合力较强，分辨率也高。所以，亲和层析法是一种常用的蛋白、抗体纯化方法，天地人和生物多种简单易用的亲和纯化介质，适用于批量或利用重力进行纯化，可以高效、便捷、可靠地从品中分离蛋白和抗体，为下游应用提供有力保证。[/font][font=宋体][b]亲和层析法的原理：[/b][/font][font=宋体][font=宋体]亲和层析是应用生物高分子与配基可逆结合的原理，将配基通过共价键牢固结合于载体上而制得的层析系统。这种可逆结合的作用主要是靠生物高分子对它的配基的空间结构的识别。常用的生物亲和关系有酶[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]底物、底物类似物、抑制剂、激活剂、辅因子，抗体[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗原，激素[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]受体蛋白、载体蛋白，外源凝集素[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]多糖、糖蛋白、细胞表面受体，核酸[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]互补核苷酸序列、组蛋白、核酸结合蛋白等，具有高效、简单、快速的优点，是当前最为理想的分离纯化蛋白的方法。[/font][/font][b][font=宋体][font=宋体]亲和层析的操作步骤[/font][font=Calibri]:[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]在亲和层析中，蛋白在影响蛋白[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]或标签[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]与其配体之间结合的条件下被加载到柱子上。在不破坏特定相互作用但能破坏污染蛋白与固定相之间任何非特异性相互作用的条件下洗涤结合的蛋白。然后用含有竞争性分子的缓冲液或破坏所有蛋白[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]蛋白相互作用的条件洗脱结合的蛋白。竞争分子与配体结合，取代目标蛋白，这种竞争分子通常通过另一种色谱流程或透析法从目标蛋白中去除。[/font][/font][font=宋体] [/font][table][tr][td][b][font=微软雅黑][color=#232323]亲和层析配体和洗脱条件[/color][/font][/b][/td][td][font=微软雅黑] [/font][/td][td][font=微软雅黑] [/font][/td][/tr][tr][td][b][font=微软雅黑][color=#232323]需纯化的蛋白[/color][/font][/b][/td][td][b][font=微软雅黑][color=#232323]配体[/color][/font][/b][/td][td][b][font=微软雅黑][color=#232323]洗脱条件[/color][/font][/b][/td][/tr][tr][td][font=微软雅黑][color=#232323]抗体（抗原特异性）[/color][/font][/td][td][font=微软雅黑][color=#232323]抗原肽[/color][/font][/td][td][font=微软雅黑][color=#232323]游离肽[/color][/font][/td][/tr][tr][td][font=微软雅黑][color=#232323]多聚组氨酸标签蛋白[/color][/font][/td][td][font=微软雅黑][color=#232323]Ni2+或Co2+[/color][/font][/td][td][font=微软雅黑][color=#232323]咪唑或游离组氨酸[/color][/font][/td][/tr][tr][td][font=微软雅黑][color=#232323]FLAG标签蛋白[/color][/font][/td][td][font=微软雅黑][color=#232323]FLAG特异性抗体[/color][/font][/td][td][font=微软雅黑][color=#232323]FLAG肽或低pH值[/color][/font][/td][/tr][tr][td][font=微软雅黑][color=#232323]GST标签蛋白[/color][/font][/td][td][font=微软雅黑][color=#232323]还原型谷胱甘肽[/color][/font][/td][td][font=微软雅黑][color=#232323]游离谷胱甘肽[/color][/font][/td][/tr][tr][td][font=微软雅黑][color=#232323]Myc标签蛋白[/color][/font][/td][td][font=微软雅黑][color=#232323]Myc特异性抗体[/color][/font][/td][td][font=微软雅黑][color=#232323][font=微软雅黑]低[/font][font=微软雅黑]pH[/font][/color][/font][/td][/tr][tr][td][font=微软雅黑][color=#232323]抗体（类特异性）[/color][/font][/td][td][font=微软雅黑][color=#232323][font=微软雅黑]蛋白[/font][font=微软雅黑]A、G和L或精蛋白[/font][/color][/font][/td][td][font=微软雅黑][color=#232323]pH极端值[/color][/font][/td][/tr][tr][td][font=微软雅黑][color=#232323]DNA结合蛋白[/color][/font][/td][td][font=微软雅黑][color=#232323]肝素[/color][/font][/td][td][font=微软雅黑][color=#232323]高离子强度[/color][/font][/td][/tr][/table][font=宋体][font=宋体]更多详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-purification-by-ac[/font][/font]

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