Bst 4.0 Basic Mix(with UDG)

Bst 4.0 Basic Mix(with UDG)

商品属性：

 产品介绍：

描述：

该制品为双组分的试剂，Basic Buffer Mix 包含了反应缓冲液、Mg2+、dU/A/C/GTP(不含 dTTP)、冻干赋形剂，酶 Mix 包含 Bst 4.0 DNA/RNA 聚合酶、热敏 UDG。得益于 Bst 4.0 识别 dUTP 底物，反应底物中不包含dTTP，因此扩增产物均为 dUTP 产物，在配合热敏 UDG的情况下，实现防污染性能。在实际测试中，含有 10e5Copies 的污染物的条件下，完全抑制污染扩增。本制品尤其适用于开盖的 LAMP 反应（如试纸条检测）、密封腔体（污染风险较高）的检测试验（如定量 PCR腔体）。

试剂使用特点：

（1）Basic Buffer Mix 中不含染料，可自行添加 SYBR Green、Eva Green 等染料进行荧光检测。
（2）本试剂适用于开盖检测如核酸试纸条检测。
（3）试剂中含有冻干赋形剂，试剂可直接冻干，无需再优化冻干配方。

使用方法：

1. 配制 LAMP 反应体系
2.5xBst4.0 Basic BufferMix 10 μl
25xBst4.0/UDG Enzyme 1 μl
10xLAMP Primer Mix 2.5 μl
模板 DNA/RNA X μl
ddH2O 到总体积 25 μl
10xLAMP Primer Mix 浓度：FIP/BIP 分别为 16 μM、LoopF/B 分别为 4~8 μM、F3/B3 分别为 2 μM。
注意：如何应用核酸试纸条进行特异性检测，可来信咨询。
2. 反应体系配好后，室温（25-37°C）放置 2min，以消化去除潜在的核酸污染，随后置于 65°C 进行反应15~30min。
试剂冻干策略（有冻干经验人员操作）：
1. 配制 LAMP 冻干体系
2.5xBst4.0 Basic BufferMix 10 μl
25xBst4.0/UDG Enzyme 1 μl
10xLAMP Primer Mix 2.5 μl
ddH2O 到体积 1.5 μl
冻干总体积 15 μl
2. 体系配制完毕后，加入 0.2 ml EP 管进行上机冻干。该试剂的冻干体积为 15 μl， 检测反应体积为 25 μl。

特别说明：
（1）本试剂防污染原理为：热敏 UDG 消化去除含有 dUTP的扩增产物，热敏 UDG 在随后 50℃以上迅速失活，并不影响后续 LAMP 扩增。因此，本试剂无法去除采用 dTTP扩增的污染物，也不能消化天然的核酸底物（DNA/RNA）。为避免扩增气溶胶污染，实验室应长期使用本试剂进行实验，一旦使用 dTTP 试剂扩增后，造成实验室污染，采用本试剂不会消除假阳性扩增。
（2）本试剂适用基于 OG 染料变色法、SYBR Green 法、基于 Biotin/FAM 探针的核酸胶体金法（ 具有胶体金法特异性使用策略，如需技术支持，请来信咨询）。本试剂不支持 HNB、pH 显色法。其它使用策略自行优化调整。 
（3）基于本试剂， 提供冻干制备服务。八联管起订量 480T，冻干球起订量 2000T。

pcr相关试剂实验结果分析：

PCR实验结果的分析涉及多个方面，‌包括实验操作、‌试剂质量、‌实验条件等，‌这些因素都会影响PCR实验的成功率和结果的准确性。‌以下是对PCR实验结果分析的一些关键点：‌

循环次数过多：‌增加模板量减少循环次数，‌缩短退火时间及延伸时间，‌或改用两种温度的PCR循环，‌可以有效避免循环次数过多导致的问题。‌

退火温度过低：‌退火温度的适当调整对于PCR反应的成功至关重要，‌过低的退火温度可能导致非特异性扩增，‌影响结果的准确性1。‌

电泳体系问题：‌包括凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大、‌凝胶没有凝固好、‌琼脂糖质量差等问题，‌这些都会影响DNA片段的分离效果。‌

试剂盒问题：‌运输储存不当可能引起试剂盒失效，‌试剂盒本身质量问题如引物选择、‌循环参数设置不当也可能导致实验失败1。‌

降解的陈旧模板：‌使用降解的陈旧模板进行扩增容易产生涂布，‌影响结果的解读1。‌

PCR假阴性结果：‌可能由引物长度不够、‌试剂浓度不标准、‌靶序列突变或缺失、‌循环参数设置错误、‌标本中有Taq酶抑制剂、‌PCR产物检测系统灵敏度不够等因素引起。‌

为了获得准确的PCR实验结果，‌需要注意以下几点：‌

确保PCR反应体系中各种试剂的配比和操作步骤的精准度。‌

在PCR反应过程中需要对PCR产物进行实时监测，‌以便及时对反应条件进行调整。‌

防止样本的污染和交叉感染，‌以免影响PCR反应的准确性和可靠性。‌

通过上述分析，‌可以更好地理解和控制PCR实验中的关键因素，‌从而提高实验结果的准确性和可靠性。‌

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