MDA-KB2人正常乳腺贴壁细胞系的特点与应用！ 一、背景 MDA-KB2人正常乳腺贴壁细胞系是一种来源于人类乳腺癌的细胞系，它最初是由美国国立癌症研究所(NCI)于1970年代从一名患有乳腺癌的女性体内分离出来的。这种细胞系在实验室中被广泛用于研究乳腺癌的发生、发展和治疗。 二、MDA-KB2细胞系的特点包括 贴壁生长：MDA-KB2细胞系可以在含有血清的培养基中贴壁生长，形成单层或多层的细胞群落。 异质性：MDA-KB2细胞系具有较高的异质性，即不同克隆的细胞在形态、生长速度和基因表达等方面存在差异。 耐药性：MDA-KB2细胞系对多种化疗药物具有耐药性，这使得它成为研究乳腺癌耐药机制的重要工具。 基因突变：MDA-KB2细胞系中存在多个已知的致癌基因突变，如TP53、PIK3CA等。这些突变可能与该细胞系的恶性转化有关。 三、MDA-KB2人正常乳腺贴壁细胞系细胞培养操作 1)复苏MDA-KB2人正常乳腺贴壁细胞系细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2)MDA-KB2人正常乳腺贴壁细胞系细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3)MDA-KB2人正常乳腺贴壁细胞系细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例； a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 四、应用 MDA-KB2人正常乳腺贴壁细胞系可以用于邻苯二甲酸酯类化学物的内分泌干扰效应： 利用受体介导的报告基因试验检测邻苯二甲酸酯类化学物内分泌干扰效应 应用雌激素受体(ER)、雄激素受体(AR)以及甲状腺激素受体(TR)介导的MDA-KB2人正常乳腺贴壁细胞系报告基因试验检测三种邻苯二甲酸酯类化学物:邻苯二甲酸乙基己基酯(DEHP)、邻苯二甲酸二丁酯(DBP)和邻苯二甲酸单丁酯(MBP)的拟或(抗)雌激素、雄激素和甲状腺激素活性,并对三种化学物的激素干扰效应进行比较。 方法： 1、雌激素受体介导的报告基因试验:将表达大鼠ERα的质粒rERα/pCI与重组Luc报告基因质粒pERE-aug-Luc共转染CV-1细胞。根据受试化学物能否诱导Luc的表达,以及能否拮抗E2诱导的Luc的表达,判断受试化学物的ER激动和拮抗效应。 2、雄激素受体介导的报告基因实验:应用稳定转染了pMMTV-Luc的MDA-KB2人正常乳腺贴壁细胞系,将受试化学物单独染毒细胞,以及与AR拮抗剂氟他胺(Flu)共同染毒,检测Luc的表达情况,判断受试化学物的AR激动效应,将受试化学物与双氢睾酮(DHT)共同染毒,检测其AR拮抗效应。 3、甲状腺激素受体介导的报告基因试验:将表达人TRβ配体结合域和Gal4-BD(酵母转录因子结合域)融合蛋白的质粒pGal4-L-TRβ与Gal4反应的报告基因质粒pUAS-tk-luc共转染CV-1细胞,根据该物质能否诱导Luc的表达以及拮抗T3诱导的Luc表达,判断受试化学物的TR激动作用和拮抗作用。 结果： 1、雌激素受体介导的报告基因试验:三种邻苯二甲酸酯类化学物中DEHP和MBP几乎不能诱导Luc的表达,与对照组相比无统计学差异,DBP在高浓度能诱导Luc的表达,最高诱导倍数为溶剂对照的2.6倍。三种邻苯二甲酸酯类化学物均无法抑制10-9 M E2所诱导的Luc表达。 2、雄激素受体介导的报告基因实验:DBP、MBP和DEHP均可以诱导MDA-KB2人正常乳腺贴壁细胞系Luc的表达,EC50分别为6.17×10-6、1.13×10-5和大于10-4 M。将三种化学物与10-5 M Flu共同染毒,三种化学物诱导的Luc表达均被抑制。代谢产物MBP比DBP表现出更强的活性。DBP、MBP和DEHP均能抑制10-9 M DHT所诱导的Luc的表达,IC50分别为1.05×106、1.22×107和大于104 M,抑制效应强度:DEHP 3、甲状腺激素受体介导的报告基因试验:DBP、MBP和DEHP均能抑制5×10-9 M T3所诱导的Luc的表达,IC50分别为1.31×105,2.77×106和大于104 M,三种化学物的抑制效应强度:DEHP 结论： 1、所研究的三种邻苯二甲酸酯类化学物中DEHP、MBP无拟雌激素活性,DBP表现出较弱的拟雌激素活性。该三种化学物均无抗雌激素活性。 2、三种邻苯二甲酸酯类化学物均具有拟雄激素活性,其活性强度:DEHP 3、三种邻苯二甲酸酯类化学物均具有抗甲状腺激素活性,其活性强度:DEHP 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   解淀粉芽孢杆菌在农业应用中的潜力有哪些？ 解淀粉芽孢杆菌是一种广泛分布于大自然中的革兰氏阳性菌，也是一种重要的益生菌，在农业中发挥着关键作用。作为一种植物生长促进剂和土壤病原体抑制剂，解淀粉芽孢杆菌在提高农作物产量、改善土壤健康和促进可持续农业发展方面展现出巨大潜力。 1、提高农作物产量 解淀粉芽孢杆菌在提高农作物产量方面发挥着重要作用。其能与植物根系形成共生关系，促进植物根系的生长，增加养分吸收能力，从而提高了农作物的产量和质量。同时，解淀粉芽孢杆菌还能分泌生长素等有益代谢产物，刺激植物生长和发育，增强农作物的抗逆性，减少病虫害对作物的影响，从而对提高农作物产量发挥了积极作用。 2、改善土壤健康和结构 解淀粉芽孢杆菌对土壤健康和结构的改善也起到了重要作用。它能够分解有机物质，提供植物生长所需的养分，并促进土壤微生物活动的增加。解淀粉芽孢杆菌还能抑制土壤中的一些病原菌和线虫的生长，减少病害的发生。通过改善土壤健康，解淀粉芽孢杆菌有助于增强土壤的保水能力、通气性和肥力，提高农作物的生长环境，并减少化学农药的使用。 3、对植物病害的防控作用 解淀粉芽孢杆菌的生防潜能一直被人们多关注。目前已发现解淀粉芽孢杆菌对多种植物病原菌有抑制作用，如根腐病、枯萎病、炭疽病、灰霉病、花叶病毒、线虫等。解淀粉芽孢杆菌的抑菌机制是多方面的，不同的菌株其抑菌机理可能不同，但主要是产生抑菌物质。目前了解的解淀粉芽孢杆菌产生的抑菌物质主要包括甜蛋白、类甜蛋白、抗生素类物质、几丁质酶、芽孢素类和细菌素等多种抑菌活性物质。 4、促进可持续农业发展 解淀粉芽孢杆菌的应用对可持续农业的发展至关重要。它能够提供一种可行的替代方案，减少化学农药和化肥的使用。通过使用该微生物，农民可以降低生产成本，减少环境污染，并提供安全可靠的农产品。解淀粉芽孢杆菌的应用还有助于保护生物多样性和生态平衡，维持农业生态系统的稳定。 解淀粉芽孢杆菌在农业中的应用具有重要意义。它可以帮助提高农作物的产量，改善土壤质量，并推动农业朝着更可持续的方向发展。随着人们对其应用价值的深入研究和认识，解淀粉芽孢杆菌为农业生产带来了更多的发展机会，为实现农业的绿色、高效、可持续发展作出重要的贡献。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                     盐杆菌属的保藏条件与培养方法及注意事项！ 盐杆菌属，嗜盐杆状古细菌。革兰氏阴性，嗜盐杆状古细菌。大小为0.6～1.0 μm×1～6 μm，单个或多形态（特别是在贫瘠的培养基中）。以二分分裂繁殖。 一、产品信息平台编号：Bio-097375规格：冻干物拉丁属名：Halobacterium Sp菌株名称：盐杆菌属收藏时间：2012/7/26原始编号：NRC-1原产国：中国资源归类编码：15111111101模式菌株：非模式菌株主要用途：分类;研究;教学特征特性：非模式菌株。在最适条件下生长时，细胞呈杆状，0/5-1/2μm×6/1μm。在老的液体培养基和固体培养基上生长时，常出现多形性：弯曲和膨大的杆状、棒锤形、球形，未发有休眠期，革兰氏染色阴性，以丛生鞭毛运动，细胞以缢缩分裂方式繁殖/大多数菌株严格好氧。培养基编号：HALO-2培养温度：37℃注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、菌种简介单个或多形态(特别是在贫瘠的培养基中)。以二分分裂繁殖。极生丛毛运动或不运动。革兰氏染色阴性。细胞壁主要由脂蛋白构成，不含有胞壁酸和二氨基庚二酸。细胞荚膜含有约20%的类脂。有机营养型，专性需氧，呼吸代谢，从不发酵。在高浓度(12%以上)的NaCl溶液中才能生长，且保持杆状。若NaCl浓度不足则呈多形态，从氨基酸取得能源。菌体内含类胡菌卜素，其主要色素为菌红素，使菌落呈淡紫色到鲜红色或朱红色，菌落小于2 mm，圆形，凸起，完整，半透明。氧化酶和接触酶阳性。通常不液化明胶。在30～50℃生长好;最适生长温度范围为35～40℃。pH的生长范围5.5～8.0，最适pH为7.2～7.4。绝大多数菌株对多黏菌素敏感(300单位)。DNA中G+C的mol数为0.66～0.68或0.57～0.60。模式种为盐制品盐杆菌(H.salinarium)，是饱和或近饱和的NaCl环境中的极端嗜盐菌。主要存在于死海、盐湖、盐田及有盐分的食品如盐腌制品上。 三、保藏条件安瓿瓶和斜面菌种在 2-8°C 保存。  四、培养基halo-2 培养基NaCL 250.0g MgCl₂ ·6H₂ O 30.0g 酵母浸膏 2.0g乳清蛋白水解物 2.50g 水 1000.0ml Adjust ph to 7.2-7.4 五、微生物菌种培养方法1、孢子制备⑴ 放线菌孢子的制备一般采用琼脂斜面培养基,培养基中含有一些适合产孢子的营养成分,如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。碳源和氮源不要太丰富(碳源约为1%,氮源不超过0.5%),碳源丰富容易造成生理酸性的营养环境,不利于放线菌孢子的形成,氮源丰富则有利于菌丝繁殖而不利于孢子形成。一般情况下,干燥和限制营养可直接或间接诱导孢子形成。放线菌斜面的培养温度大多数为28 ℃,少数为37 ℃,培养时间为5~14天。⑵ 产品仅限用于科研霉菌孢子的制备霉菌的孢子培养,一般以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基。这是由于这些农产品中的营养成分较适合霉菌的孢子繁殖,而且这类培养基的表面积较大,可获得大量的孢子。霉菌的培养一般为25~28 ℃,培养时间为4~14天。2、种子制备⑴ 摇瓶种子制备摇瓶种子进罐,常采用母瓶、子瓶两级培养,有时母瓶种子也可以直接进罐。种子培养基要求比较丰富和完全,并易被菌体分解利用,氮源丰富有利于菌丝生长。原则上各种营养成分不宜过浓,子瓶培养基浓度比母瓶略高,更接近种子罐的培养基配方。⑵ 种子罐种子制备种子罐种子制备的工艺过程,因菌种不同而异,一般可分为一级种子、二级种子和三级种子的制备。孢子(或摇瓶菌丝)被接入到体积较小的种子罐中,经培养后形成大量的菌丝,这样的种子称为一级种子,把一级种子转入发酵罐内发酵,称为二级发酵。如果将一级种子接入体积较大的种子罐内,经过培养形成更多的菌丝,这样制备的种子称为二级种子,将二级种子转入发酵罐内发酵,称为三级发酵。同样道理,使用三级种子的发酵,称为四级发酵。 六、注意事项1）冻干粉以 200ul-500ul 无菌水或者推荐培养基的液态溶解，最适接种量为 2 支斜面（18*180试管）或者 2 支 5ml 液体（请不要在平板上，更不要在锥形瓶中复苏菌种）待菌种活化成功后才能扩大培养。如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；2）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；3）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；4）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；5）请充分了解所购菌种的情况，尤其是该菌种的用途和生物安全信息，并且掌握必需的微生物操作技术，已具备必要的设备条件；如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌钟后 2 个月内联系，逾期不予受理。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                    动物源性食品中细菌的检测——大肠埃希氏菌 大肠埃希氏菌（Escherichiacoli，E.coli）习惯上称为大肠杆菌，分类于肠杆菌科，归属于埃希氏菌属，并且大肠杆菌株ATCC 11775是该属的模式菌种。大肠杆菌的不同菌株间DNA相关性为80%，而与同科的志贺氏菌属（除鲍氏志贺氏菌外）的DNA相关性可达80%～87%。大肠杆菌常见于人和动物的肠道内，大多数血清型的大肠杆菌并不致病，而且是肠道内常在的有益菌。 致病性大肠杆菌是通过环境污染进入食品中的，有些血清型的致病性大肠杆菌感染食品，某些菌株具有毒性（其中一些类似导致痢疾的毒素），可以导致食物中毒，这通常是因为食用了被污染的肉类产品等（通常是屠宰过程或储藏贩卖过程中的污染所致）。疾病的严重程度可以相差很多，尤其对儿童、老人和免疫缺失病人可以是致命的，但通常是温和的。大肠杆菌的内毒素可能对热稳定或不稳定，其结构和功能与霍乱毒素相当接近，全毒素包含1个A亚基和5个B亚基，B亚基起黏附作用，使毒素进入肠道细胞，而A亚基断裂出来，使得细胞脱水引起腹泻。不同的大肠杆菌菌株生活在不同动物中，因此可以通过其判断粪便来源于人或者鸟类等。通过突变，新的大肠杆菌菌株不断出现，其中一些可能对宿主动物造成损害。尽管对于大多数健康成年人，这样的菌株可能只引起一次腹泻，或者根本没有症状，但对于幼儿、大病初愈的人或者进行某些药物治疗的人来说，陌生的菌株可能引起严重疾病甚至死亡。 与人类疾病有关的大肠杆菌统称为致泻性大肠杆菌，一般包括五种：肠毒素性大肠杆菌（ETEC）、致病性大肠杆菌（EPEC）、肠出血性大肠杆菌（EHEC）、侵袭性大肠杆菌（EIEC）和黏附性大肠杆菌（EAEC）。肠出血性大肠杆菌O157：H7就是一个毒性很强的菌株，属埃希氏菌属的一种血清型。在1982年，美国首次从汉堡包集体食物中毒事件中发现食物中毒由大肠杆菌所致，大约10个细菌即可导致感染，这是迄今为止能引起食物中毒的最小菌量。致病性大肠杆菌可经带菌人的手、食物和生活用品进行传播，也可经空气或水源传播。带菌食品由于加热不彻底或因生熟交叉污染或熟后污染而引起食物中毒。另外，大肠杆菌耐酸，即便在胃的酸性条件下也能存活。它在水中生存的时间相当长。美国每年约有20000人染上肠出血性大肠杆菌病，其中约有50人死于该病。大肠杆菌是美国碎牛肉中必须控制的目标菌。 1、病原学特征 大肠杆菌为革兰氏阴性短杆菌，大小为0.5μm×（1～3）μm。周身鞭毛，能运动，无芽孢。能发酵多种糖类，产酸、产气，是人和动物肠道中的正常栖居菌，婴儿出生后即随哺乳进入肠道，与人终身相伴，其代谢活动能抑制肠道内分解蛋白质的微生物生长，减少蛋白质分解产物对人体的危害，还能合成B族维生素和维生素K及有杀菌作用的大肠杆菌素。大肠杆菌在正常栖居条件下不致病，但若进入胆囊、膀胱等处可引起炎症。在肠道中大量繁殖，几乎占粪便干重的1/3。兼性厌氧菌。在环境卫生不良的情况下，常随粪便散布在周围环境中。若在水和食品中检出该菌，可认为是被粪便污染的指标，从而可能有肠道病原菌的存在。因此大肠菌群数（或大肠菌值）常作为饮水和食物（或药物）的卫生学标准（国家规定，每升饮用水中大肠杆菌数不应超过3个）。 大肠杆菌的抗原成分复杂，可分为菌体抗原（O）、鞭毛抗原（H）和表面抗原（K），表面抗原有抗机体吞噬和抗补体的能力。根据菌体抗原的不同，可将大肠杆菌分为150多型，其中有16个血清型为致病性大肠杆菌，常引起流行性婴儿腹泻和成年人肋膜炎。大肠杆菌是研究微生物遗传的重要材料，如局限性转导就是1954年在大肠杆菌K12菌株中发现的。莱德伯格（Lederberg）采用两株大肠杆菌的营养缺陷型进行试验，奠定了研究细菌接合方法学上的基础及基因工程的研究。 该菌对热的抵抗力较其他肠道杆菌强，55℃经60min或60℃加热15min仍有部分细菌存活。在自然界的水中可存活数周至数月，在温度较低的粪便中存活更久。胆盐、煌绿等对大肠杆菌有抑制作用。该菌对磺胺类、链霉素、氯霉素等敏感，但易耐药，是由带有R因子的质粒转移而获得的。 2、流行病学特征 大肠杆菌是人和动物肠道等处的常在菌，1g粪便中约含有106个菌。该菌在饮水中出现被认为是粪便污染的指标。禽大肠杆菌在鸡场中普遍存在，特别是鸡舍通风不良、大量积粪时，在垫料、空气尘埃、污染用具和道路，粪场及孵化厅等处环境中染菌量最高。大肠杆菌随粪便排出，并可污染蛋壳或从感染的卵巢、输卵管等处侵入卵内，在孵育过程中使禽胚死亡或出壳发病和带菌，是该病传播过程中重要途径。带菌禽以水平方式传染健康禽，消化道、呼吸道为常见的传染门户，也可经生殖道造成传染。啮齿动物的粪便常含有致病性大肠杆菌，可污染饲料、饮水而造成传染。禽大肠杆菌病主要发生在密集化养禽场，各种禽类不分品种、性别、日龄均对该菌易感。特别是幼龄禽类发病率最高，如污秽、拥挤、潮湿通风不良的环境，过冷过热或温差很大的气候，有毒有害气体（氨气或硫化氢等）长期存在，饲养管理失调，营养不良（特别维生素的缺乏）以及病原微生物（如支原体及病毒）感染所造成的应激等均可促进该病的发生。 人可通过饮用受污染的水或食用未熟透的食物（特别是免治牛肉、汉堡扒及烤牛肉）而感染，出现腹泻等症状。饮用或食用未经消毒的奶类、芝士、蔬菜、果汁及奶酪而染病的个案亦有发现。此外，若个人卫生欠佳，亦可能会通过人传人的途径，或经食用受粪便污染的食物而感染该种病菌。 由于大肠杆菌是人及各种动物肠道中的正常寄居菌，常随粪便从人及动物体中排出，广泛散播于自然界，所以一旦检出大肠杆菌，即意味着所检样品直接或间接地被粪便污染，因此卫生学上被用于作为饮水、牛奶或食品等的粪源性污染卫生细菌学指标；并且由于大肠杆菌在外界存活时间与一些主要肠道病原菌相近，它的出现也可能预示着某些肠道病原菌（例如沙门氏菌、志贺氏菌）的存在，因此该细菌是国际上公认的卫生监测指示菌。有些国家在执行危害分析和关键控制点（HACCP）管理中，将大肠杆菌检测作为微生物污染状况的监测指标和HACCP实施效果的评估指标。 3、危害 致泻性大肠杆菌是引起人体以腹泻症状为主的全球性疾病，其中尤以EPEC、ETEC所占比例为引起的腹泻数量始终位于第二位，可见大肠杆菌肠道传染的广泛性。另外，致泻性大肠杆菌亦可常年引发人体腹泻，以夏秋季节为高峰，在患者感染住院率中，婴幼儿占60%以上。近来，EHEC O157：H7被WHO定为新的食源性致病菌，其可引发出血性肠炎的暴发或散发。1982年美国首次报道了由肠出血性大肠杆菌O157：H7引起的出血性肠炎暴发。此后，世界各地陆续报道了该菌引起的感染，感染数并有上升趋势。1996年在日本发生的肠出血性大肠杆菌O157：H7的暴发流行引起了出血性腹泻，先后波及日本30多个都、府、县，感染近万人，并造成12人死亡，引起了全世界的关注。此外，美国、加拿大、瑞典、澳大利亚、英国的苏格兰和威尔士等国家和地区也相继报道了肠出血性大肠杆菌O157：H7的散发性感染和暴发流行。日本、加拿大及瑞士等国家已将肠出血性大肠杆菌O157：H7列为必须报告的传染病，予以高度重视。我国于1988年首次分离到肠出血性大肠杆菌O157：H7，从已有的流行病调查资料来看，我国亦存在肠出血性大肠杆菌O157：H7的散发，但尚未有暴发流行的报道。 4、国内外卫生要求 美国联邦法规中规定大肠杆菌在鸡肉、牛肉和猪肉中的限量分别为m＝100CFU/cm2、M＝1000CFU/cm2（鸡肉），m≤5CFU/cm2、M＝100CFU/cm2（牛肉），m＝10CFU/cm2、M＝10000CFU/cm2（猪肉）；（m是指合格菌数限量，M是指附加条件后合格菌数限量）加拿大在新鲜或冷冻禽肉标准中规定大肠埃希氏菌的限量为m＝10CFU/cm2、M＝1000CFU/cm2；欧盟的食品微生物法规汇编中规定碎肉或冷冻碎肉中的大肠埃希氏杆菌的限量为m＝50CFU/cm2、M＝500CFU/cm2；澳大利亚食品标准法规中规定生乳或未经巴氏消毒的乳中大肠杆菌的限量为m＝3CFU/mL、M＝9CFU/mL。在我国的动物源性食品标准中，除了冻禽产品标准中规定了致泻性大肠杆菌不得检出外，其他所有相关标准只是规定了大肠菌群的限量标准。 5、检测方法 包括病原的分离鉴定及分子生物学方法、免疫学方法等。 5.1 细菌分离鉴定方法 5.1.1 增菌 以无菌操作将待检样品放入营养肉汤中均质，制成悬液，于（36±1）℃培养16h。 5.1.2 分离 将肉汤增菌液接种于麦康凯或伊红美蓝琼脂平板上；污染严重的样品，制成悬液后可直接划线接种麦康凯或伊红美蓝平板；也可接种于显色培养基上，于（36±1）℃培养16～20h，观察菌落。从每个平板上至少挑取2个可疑菌落，用接种针接触菌落中心部位，移种到营养琼脂斜面上，于（36±1）℃培养18～24h，以备进行生化试验。 5.1.3 革兰氏染色 取18h营养琼脂斜面培养物做革兰氏染色、镜检，大肠杆菌为革兰氏阴性杆菌。 5.1.4 生化鉴定 挑取营养琼脂斜面菌落分别接种于三糖铁琼脂、蛋白胨水、半固体、pH7.2尿素琼脂、氰化钾肉汤，并置（36±1）℃温箱中培养过夜。 三糖铁底层产酸，硫化氢阴性，氰化钾阴性和尿素阴性的培养物为大肠杆菌。 5.1.5 血清学分型 挑取经生化试验证实为大肠杆菌的菌落，用大肠杆菌多价O血清和肠出血性大肠杆菌O157血清做玻片凝集试验。当与某一种多价O血清凝集时，再与该多价血清所包含的单价O血清做凝集试验。 5.2 生化鉴定试剂盒方法 API20E试验条由20个含干燥底物的小管所组成。这些测定管用细菌悬浮液接种。培养一定时间后，通过代谢作用产生颜色的变化，或是加入试剂后变色而观察其结果。 挑取营养琼脂斜面上单个纯菌落于灭菌纯水中，制成菌悬液。按照生化鉴定试剂盒操作说明，将菌悬液加入20E反应条的各反应孔内，放入反应槽中，置37℃温箱中培养24h。取出后根据说明书观察反应结果，在软件上记录结果，系统将自动出现检测结果。所得反应的类型必须以数字化形式记录在报告单中，每3个测定为一组，每个以1、2和4标明，在每组中，阳性反应以相应的数字相加，由API20E的20个测定可得一个7位数。 5.3 分子生物学方法 从营养琼脂平板上挑取可疑菌落，用无菌去离子水制成菌悬液，水浴煮沸10分钟，3000r/min离心，以上清液为模板，进行扩增。上游引物为5′-TGT TCA GTG GCA AGA GTT-3′，下游引物为5′-TAA TCG ATA TAC CCG CTC-3′；扩增体系：10×buffer5μL，Taq DNA聚合酶（2U/μL）1μL，氯化镁溶液（25mmol/L）5μL，dNTP（2.5mmol/L）5μL，双蒸水（ddH2O）29μL，上游引物（10μmol/L）2μL，下游引物（10μmol/L）2μL，模板1μL。反应条件：95℃预变性5min，94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸45s，共作用36个循环。PCR产物用15%的琼脂糖在100V条件下进行电泳，得到扩增长度为353bp的扩增产物，可鉴定该菌为大肠杆菌。 5.4 VIDAS鉴定肠出血性大肠杆菌O157方法 VIDAS鉴定肠出血性大肠杆菌O157（ECO）方法是一种在自动VIDAS仪器上进行的酶联荧光免疫分析的方法。其原理是：煮沸过的增菌肉汤加入试剂条孔后，在特定时间内，样品在固相容器（用抗肠出血性大肠杆菌O157抗体包被一个类似于加样头的一次性使用装置）内、外反复循环。样品中的O157抗原与包被在固相容器内部的O157抗体结合，未结合的其他成分通过洗涤步骤清除。标记有碱性磷酸酶的抗体也在固相容器内、外循环并与固定在固相容器壁上的肠出血性大肠杆菌O157抗原结合，最后洗去未结合的抗体标记物。仍结合在固相容器壁上的酶将催化底物转变成具有荧光的产物4-甲基伞形酮，在VIDAS中由光扫描器在450nm处检测其荧光强度，试验完成后由计算机自动分析结果，得出检测值，并打印出每份样品的试验报告。其检测步骤如下： 挑取肠出血性大肠杆菌O157可疑菌落，放入1mL无菌纯水中制成菌悬液，或直接取1mL培育24h的增菌液，置水浴锅中95～100℃煮沸15min后，冷却至室温，同时设质控对照并煮沸、冷却，以备检测。 （1）将所需试剂取出，使其恢复至室温（至少30分钟）。 （2）每个样品使用一条ECO试剂条及一个ECO固相容器，先必须做好质控和校正。确保取出试剂后，将装有剩余固相容器的袋子重新密封好。 （3）输入所需的信息以便建立工作列表（work list），键入“ECO”至检测编号，再输入将要检测的试验号。标准（S1）必须在work list的首位并做双份，随后是质控（C1和C2）。 （4）使用前彻底混匀标准、质控及灭活的样品。准确吸取500μL以确保测试的正确性。 （5）吸取500μL的质控及灭活的样品至ECO试剂条样品孔的中央。 （6）依屏幕所示，将固相容器和试剂条放入仪器的相应位置。核对位置，以确保固相容器上3个字母编码的颜色标记与试剂条相符。 （7）检测结束后，仪器自动打印检测结果。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  LA-795小鼠肺腺癌细胞系的应用及使用说明！ 一、背景 LA-795小鼠肺腺癌细胞系是一种常用的实验细胞系，来源于小鼠的肺腺癌组织。这种细胞系具有稳定的生长特性和一定的增殖能力，常用于肺癌研究、药物筛选和疫苗研制等领域。 在生物学特性方面，LA-795小鼠肺腺癌细胞系系呈贴壁生长，具有上皮细胞的形态和特点。这种细胞系对化疗药物和放疗具有一定的敏感性，可用于研究肺癌的治疗方法。此外，LA-795小鼠肺腺癌细胞系中存在某些与肺癌相关的基因突变，如K-Ras基因突变等，这些突变可以作为肺癌研究的模型之一。 在应用方面，LA-795小鼠肺腺癌细胞系被广泛用于肺癌的研究和治疗。这种细胞系可以用于体外药物筛选和疫苗研制，也可以用于研究肺癌的发病机制和传播途径。此外，LA-795小鼠肺腺癌细胞系还可以用于制备抗体和其他生物分子，为生物医学研究提供了重要的工具和资源。 二、LA-795小鼠肺腺癌细胞系细胞使用说明 1、LA-795小鼠肺腺癌细胞系细胞株的复苏 a.将冻存管在37℃水浴锅中迅速完全融化(保持冻存管的盖子在液面以上以防止污染)，并适当轻轻摇晃促融，切勿vortex。快速、完全融化可以提高细胞的复苏效果。 b.打开冻存管前时用70%酒精擦拭细胞冻存管外壁，注意某些记号笔不耐酒精，小心标注的记号被擦拭掉。 c.将完全融化的细胞直接离心，或者转移至无菌1.5ml或其它合适无菌离心管中，500×g离心2-5min，吸除上清，注意不要吸走细胞沉淀，然后用新鲜完全培养液重悬后转移至培养器皿，混匀，置于CO2培养箱37℃培养。 d.第二天视贴壁或生长状态，更换培养液。 2、LA-795小鼠肺腺癌细胞系细胞的常规传代流程 a.将细胞培养液、PBS等放入37℃水浴锅内预热。 b.以10cm细胞培养皿为例。吸出原培养皿中的培养液，用2-5ml无菌PBS润洗细胞1-2次以去除残留的血清(如果细胞贴壁较差，润洗时要轻柔以避免细胞飘起)，然后加1-2ml胰酶细胞消化液(含EDTA)室温消化，注意消化时间，通常为1-5分钟。如果细胞比较难消化，可以置于37℃细胞培养箱一定时间以加速消化。注意：消化时间过长，会导致传代后细胞出现生长状态不良的情况。 c.每30秒-1分钟用显微镜观察细胞消化情况，贴壁细胞明显收缩、细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起，并用移液器吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来时，吸除胰酶细胞消化液，再加入1-2ml新鲜完全培养液，适当晃动细胞皿以终止胰酶作用，用移液器轻轻吹打贴壁的细胞，获取细胞悬液。吹打时需控制力度，避免产生大量气泡，将细胞悬液分别接种到另外的2~5个细胞培养皿内，加入新鲜培养液，置于CO2培养箱37℃培养，第2天观察细胞贴壁生长情况。 d.也可以在消化后，加3-5ml完全培养液终止消化，用移液器轻轻吹打细胞悬液，尽量把细胞全部吹落、吹散，然后将全部细胞悬液500×g离心2-5min，离心后去上清，再用完全培养液重悬后转移到新的培养皿中，添加适量完全培养液，于CO2培养箱37℃培养。 e.注意培养液的酚红颜色变化或根据细胞的换液要求定期换液，待细胞密度达到80-90%时需要传代或者冻存。如果没有及时传代导致细胞过密，传代后细胞容易出现生长状态不良的情况。 三、应用 LA-795小鼠肺腺癌细胞系可以用于LA795细胞不同转移率克隆株的建立及其转移相关特性的研究： 正常细胞的恶性转化实际上是源于细胞功能的系统紊乱，对瘤细胞转移行为的研究也存在同样的系统复杂性；因此，为最终阐明瘤细胞的转移机制，首先必须对其转移相关性质有深入的了解。 以我国肿瘤工作者自己建立的LA-795小鼠肺腺癌细胞系为基础，从中分离了4个具不同转移潜能的克隆株，并对其多方面的转移相关性质进行了系统的研究。 主要实验结论如下： (1)论文首先建立了一个对不同恶性度肿瘤细胞进行克隆分离的有效方法并利用这一方法从LA795细胞母系获得了4个具不同转移潜能的克株，即LA1、LAE、LAD、LA5，其同基因T739小鼠体内肺自发转移率分别为0％、0％、16％、32％。 (2)在不同转移潜能克隆株建立之后，论文从组织形态、超微结构、细胞骨架结构等方面对其进行了描述。在对瘤细胞与正常细胞接触结构的研究中，论文建立了一个可用于特殊研究目的的膜系统弱消化法，并利用这一方法发现了瘤细胞和正常组织细胞间柱状交通结构(直径0.05-1.5um)的存在，这一发现对研究瘤细胞与正常细胞间相互作用的机制具有一定意义。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                     需钠弧菌——用于研究和生产及合成琼胶酶 需钠弧菌属于菌株类。革兰氏阴性细菌，兼性厌氧，呼吸和发酵代谢。常用于实验和科研检测用。 一、菌种简介平台编号：Bio-85355规格：冻干粉拉丁属名：Vibrio Natriegens中文名称：需钠弧菌拉丁名称：Vibrio natriegens来源历史：←集美大学食品与生物工程学院收藏时间：2014/12/16原始编号：NTi原产国：中国资源归类编码：15131129101模式菌株：非模式菌株主要用途：研究；生产特征特性：经过16S rDNA序列分析，本菌株为弧菌属(Vibrio sp.)，经过gyrB gene 序列分析，本菌株为需钠弧菌(Vibrio natriegens)。具体用途：合成琼胶酶。生物危害程度：四类培养基编号：CM0444培养基名称：细菌用海洋液体培养基[Bacto marine broth (DIFCO 2216)]培养基成分：酵母膏 1.0g，蛋白胨 5.0g，Fe(III) citrate 0.1g，NaCl 19.45g，MgCl2 5.9g，KCl 0.55g，Na2SO4 3.24g，CaCl2 1.80g，Na2CO3 0.16g，KBr 0.08g，SrCl2 34.0mg，H3BO3 22.0mg，NaSiO3 4.0mg，NaF 2.4g，NH4NO3 1.6mg，Na2HPO4 8mg，蒸馏水 1.0L，pH7.6。培养温度：25℃需氧类型：好氧分离基物：红树林泥土采集地：福建省厦门市集美区保存方法：-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享提供形式：冻干物用途：研究；生产注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、储存条件冻干菌种和试管斜面请置于 2-8℃冷藏。西林瓶菌种请置于-20℃冷冻。 三、培养条件1、培养基编号：细菌用海洋液体培养基[Bacto marine broth (DIFCO 2216)]2、培养基成分：酵母膏 1.0g，蛋白胨 5.0g，Fe(III) citrate 0.1g，NaCl 19.45g，MgCl2 5.9g，KCl 0.55g，Na2SO4 3.24g，CaCl2 1.80g，Na2CO3 0.16g，KBr 0.08g，SrCl2 34.0mg，H3BO3 22.0mg，NaSiO3 4.0mg，NaF 2.4g，NH4NO3 1.6mg，Na2HPO4 8mg，蒸馏水 1.0L，pH7.6。3、需氧类型：好氧4、培养温度：25℃ 四、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、试管斜面菌种请尽快转接，不建议长期存放。3、初次使用时请按照本说明书推荐条件进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系或更换新的菌种。 五、打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉檫试冻干管表面进行消毒，将管顶端于酒精灯外焰上均匀加热；立即滴 2-3 滴无菌水于加热部位，使管壁破裂；再用镊子或其他适宜工具敲下破裂处。2、菌株恢复培养：用无菌吸管吸取 0.5ml 左右液体培养基(固体培养基去掉琼脂即可)于冻干管中将冻干菌粉全部溶解。将溶解后的菌悬液转移至盛有 4~5mL 液体培养基的试管中混匀，可将残留在吸管中 1-2 滴菌悬液转接至固体培养基上。将液体试管和斜面试管于推荐条件下静置培养。以液体培养结果为准。3、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在 2-8℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，需要转接至 2-3 代恢复活力。4、复苏后的菌种在传 1-2 代后使用。5、暂不启开的安瓿管应于 4℃中保藏（特殊除外）。6、冻干管打开后需一次用完，不能留存。7、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。8、打管操作应在烧杯或托盘上方进行，用完冻干管应灭菌处理后丢弃。9、如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌钟后 2 个月内联系，逾期不予受理。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                   你知道实验室培养基常见的灭菌方法有哪些吗？ 培养基（Medium）是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料，一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐（包括微量元素）以及生长素和水等。在发酵过程中，培养基灭菌主要有以下几个原因：如不灭菌，会使生物反应的基质或产物，因杂菌的消耗而损失，造成生产能力的下降;杂菌也会产生代谢产物，这就使产物的提取更加困难，造成得率降低，产品质量下降；杂菌大量繁殖后，会改变反应液的pH值，使反应异常;有些杂菌会分解产物，使生产失败;如果发生噬菌体污染，生产菌细胞将被裂解，使生产失败。 常见的灭菌方法： 1、辐射灭菌　　辐射灭菌的原理是利用高能量的电磁辐射与菌体核酸的光化学反应造成菌体死亡。常用的有紫外线、X射线和γ射线。用于室内空气及器皿表面灭菌。 2、化学物质灭菌 原理：药物与微生物细胞中的成分反应，使蛋白质变性酶失活。使用范围：器皿、双手和实验室、无菌室的环境灭菌，不能用于培养基灭菌。　　常用的灭菌剂：甲醛 37%　戊2醛 2% 高锰酸k 0.1%-0.25% ben酚 0.1%-0.15%  漂bai粉 5%  过氧yi 酸 0.02%-0.2%　酒精 75%  焦碳酸2乙酯 0.01%-0.1%　煤酚皂(来苏尔) 1%—5% 3、干热灭菌　　灭菌原理是利用高温对微生物有氧化、蛋白质变性和电解质浓缩作用而杀灭微生物。常用灼烧和电热箱加热，140-180℃ 1-2小时。适于对玻璃及金属用具及沙土管灭菌。 4、湿热灭菌　　灭菌原理是直接用蒸汽灭菌，蒸汽在冷凝时能释放出大量潜热，蒸汽具有强大的穿透力，破坏菌体蛋白和核酸的化学键，使酶失活，微生物因代谢障碍而死亡。水煮常压灭菌：100℃。或饱和蒸汽灭菌：一般121℃，30分钟。适合培养基和发酵设备灭菌。 5、过滤除菌　　除菌原理是利用微生物不能透过滤膜除菌。方法是使用0.01~0.45 mm孔径滤膜，用于压缩空气、酶溶液及其他不耐热化合物溶液除菌。　　在工业生产中，对于培养基、管道、设备的灭菌，通常采用蒸汽加热到一定的温度，并保温一段时间的灭菌方法，称之为湿热灭菌。湿热灭菌的显著优点是：使用方便，无污染，而且其冷凝水可以直接冷凝在培养基中，也可以通过管道排出。 培养基灭菌大多数用湿热灭菌。衡量热灭菌的指标很多，最常用的是“热死时间”，即在限定的温度下杀死原有微生物中一定比例所需的持续时间。影响热灭菌的温度和时间的因素很多，包括：微生物种类、性质、浓度和培养基的性质、浓度等。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                    链格孢属的危害性与生理毒性及分类学研究进展！ 一、知识解析 链格孢属 (Alternaria Nees) 在较早的分类系统中，归属于半知菌类、半知菌亚门等，目前在新的分类系统中归属于真菌界子囊菌门 (Ascomycota) 座囊菌纲 (Dothideomycetes) 格孢腔菌目 (Pleosporales) 格孢腔菌科 (Pleosporaceae) ，模式种为细链格孢 (Alternaria tenuis) 。目前，在Index Fungorum （真菌数据库）中在链格孢属下记载的种类多达765个，其中被认可的种有300多个，仍有许多名称有待进一步核定。 二、危害性 作为腐生菌，链格孢以极强的适应能力存活于水、土壤、空气等不同环境中，是引起农作物、经济作物、果树林木等植物病害的主要元凶之一，可以造成严重的经济损失。 部分链格孢可在已发病的寄主组织上再次定植，占领其他病原物造成的病斑位点、受损部位或其他衰弱组织等，加重其他病害的发生。 由长柄链格孢 (A. longipes) 侵染引发的烟草赤星病在世界烟草的主产区普遍发生，发生严重时烟叶产量损失可达到50%，并严重影响烟草质量，产值损失可达到90%，为烟草主要病害之一。 以芥链格孢 (A. brassicae) 和芸薹生链格孢 (A. brassicicola) 为主的病原菌引发的十字花科黑斑病遍布中国北方地区大白菜、甘蓝和花椰菜等30多个蔬菜品种，损失率可达60%以上；孜然链格孢 (A. burnsii) 引起的多种植物病害遍布于亚洲、欧洲和非洲等，引起我国药用植物羌活叶片灰斑病，印度地区孜然枯萎病，突尼斯地区菜豆叶斑病等，在病害易爆发时期，产量损失可达 70%。 在日本、北美、欧洲和澳大利亚，以及中国梨产区梨黑斑链格孢 (A. gaisen) 发生普遍，流行性强，从落花期到果实成熟期均可引发病害，果实和叶片感病后容易失水干枯或早期脱落；链格孢 (A. alternata) 和柑橘链格孢 (A. citri) 可引起柑橘褐斑病、柑橘和柠檬叶斑病以及储藏期的柑橘黑腐病，给柑橘业生产造成严重经济损失。 除此之外，部分链格孢菌种可以侵染人畜，引起皮癣、哮喘和过敏等疾病。作为内生菌，链格孢菌具有生防潜力。如从长柄链格孢 (A. longipes) 中筛选得到的SRS2生防制剂可被用于防治烟草赤星病，防效在烟草不同生长期可达到65%-90%以上；内生链格孢 (A. alternata) 提取物 B06e 可破坏金黄色葡萄球菌的细胞膜完整性和通透性，导致细菌生长繁殖无法进行。中国农科院植保所从细极链格孢 (A. tenuissima) 中筛选获得了超敏蛋白，研发成功新型蛋白农药——阿泰灵，具有广泛的抗病毒及提高多种植物免疫力的作用。 三、生理毒性 链格孢属真菌可产生70多种链格孢毒素，其中交链孢酚（alternariol，AOH）、交链孢酚单甲醚（alternariol monomethyl ether，AME）、腾毒素（tentoxin，TEN）、细交链孢菌酮酸（tenuazonicacid，TeA）等是目前科学家们关注最多的四种毒素。 交链孢酚 (AOH) ：具有致突变性、致癌性、基因毒性、遗传毒性、细胞毒性、胚胎毒性，但 AOH 对实验所用动物的急性毒性较低。此外，有研究发现 AOH 对细胞天然免疫具有调节作用，能抑制脂多糖 (LPS) 诱导的天然免疫反应。 交链孢酚单甲醚 (AME) ：具有致畸性、致突变性、致癌性、胚胎毒性、诱变性，且 AME 与其他毒素之间存在协同作用，研究表明， AOH 与 AME 的结合具有明显的相加性。 细交链孢菌酮酸 (TeA) ：作为美国食品和药物管理局 (FDA) 在有毒化学物质注册中列出的唯一链格孢属毒素，该毒素的特征是检出率低，但产生毒素的能力非常强。TeA 具有急性及亚急性毒性、胚胎毒性、细胞毒性、致癌性以及致死性。此外，研究发现 TeA 可作为一些抑制剂，是防治棉花和烟田等重要双子叶草和单子叶杂草的一种生物除草剂。 腾毒素 (TEN) ：是环四肽类毒素，具有植物毒性，与植物萎黄病密切相关，能通过降低植物细胞内 ATP 酶活性来抑制光合磷酸化。值得注意的是，TEN 对哺乳动物的毒性试验目前尚未见报道。 欧洲食品安全局 (EFSA)  发现这些毒素一般存在于谷物和谷物制品、番茄和番茄制品、葵花籽和向日葵油、水果和水果制品以及啤酒和葡萄酒中。 EFSA 采用了毒性关注阈值 (TTC) 方法来评估人类饮食中接触这些毒素的相对关注程度。对于遗传毒性毒素 AOH 和 AME，目前人们慢性饮食接触量已超过了相关的 TTC 值，需要引起人们的关注。而非遗传毒性的 TeA 和 TEN 的饮食接触估计值低于相关的 TTC 值，被认为不太可能成为人类健康的问题。 EFSA 对TEN 最大日摄入量的阈值为1500 ng/kg bw/d。我国国家风险评估中心也对链格孢毒素进行了评估，结果表明：随膳食摄入的 TeA 对2～6岁儿童会存在健康威胁。然而，目前除巴伐利亚外，世界各地均无关于链格孢毒素的法规，我国只在出口水果蔬菜中链格孢菌毒素的测定中规定了其检出限为10 μg/kg。 四、分类学研究进展 链格孢属的分类传统上主要依据形态学鉴定方法。由于其形态特性易受环境条件影响，特别是营养条件、pH、温度、光照等多种因素，使得链格孢属下种的描述及分类鉴定非常困难，尤其是对短喙或无喙的小孢子链格孢种。 目前，链格孢属的分类主要以形态学特征结合多基因系统发育分析的方法进行。研究者们基于多基因联合分析构建系统发育关系将链格孢属分成28个组群。这些研究结果显示，基于分生孢子梗发育方式及产孢方式确定的一些链格孢属相似属，与分子系统发育分析结果显然不一致，链格孢属的范围被重新定义。多个属包括一些常见属被合并到链格孢属中：包括Alternariaster，Chalastospora，Prathoda，Embellisia ，Nimbya，Ulocladium 和 Teretispora等。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                   青霉菌菌种的特征和保藏方法及使用注意事项！ 淡紫拟青霉属于内寄生性真菌，是一些植物寄生线虫的重要天敌，能够寄生于卵，也能侵染幼虫和雌虫，可明显减轻多种作物根结线虫、胞囊线虫、茎线虫等植物线虫病的危害。 一、青霉菌的特征 青霉菌属多细胞，营养菌丝体无色、淡色或具鲜明颜色。菌丝有横隔，分生孢子梗亦有横隔，光滑或粗糙。基部无足细胞，顶端不形成膨大的顶囊，其分生孢子梗经过多次分枝，产生几轮对称或不对称的小梗，形如扫帚，称为帚状体。分生孢子球形、椭圆形或短柱形，光滑或粗糙，大部分生长时呈蓝绿色。有少数种产生闭囊壳，内形成子囊和子囊孢子，亦有少数菌种产生菌核。 二、青霉菌菌种具体的保藏方法 1、生活习性 青霉菌通常在柑桔及其他水果上，冷藏的干酪及被它们的孢子污染的其他食物上均可找到，其分生孢子在土壤内，空气中及腐烂的物质上到处存在。青霉菌营腐生生活，其营养来源极为广泛，是一类杂食性真菌,可生长在任何含有机物的基质上. 2、形态 青霉菌的营养体为无色或淡色的菌丝体，菌丝各细胞之间有横膈膜,细胞内通常为多核。整个菌丝体分为伸入营养基质中吸取营养的基质菌丝和伸向空气中的气生菌丝。在气生菌丝上产生简单的长而直立的分生孢子梗，顶端以特殊的对称或不对称的扫帚状的方式分支，称为帚状枝。分支为多极的分生孢子梗最后产生许多瓶梗，在瓶梗上着生分生孢子链。分生孢子为球形至卵形，呈绿色、蓝色或黄色，即通常看到的各种青霉菌落特有的颜色。 3、生活史 自然界中已发现的青霉菌绝大多数以无性繁殖的方式繁衍后代，即分生孢子萌发为菌丝体，在气生菌丝上产生分生孢子梗，在分生孢子梗上串生许多分生孢子，分生孢于在适宜环境中又萌发为菌丝体，以此循环反复。 青霉菌中有极少数种类行有性生殖。其过程为：从营养菌丝上产生雄器和产囊体→雄器顶端与产囊体接触处细胞壁溶解→质配→核配→减数分裂后(一般推测)形成子囊。在此过程中，由产囊体周围营养菌丝逐步包围形成子囊果。当子囊孢子成熟后被释放，在适宜环境中萌发形成新的菌丝体，但不同种青霉其性行为变异很大。有些种雄器似乎没有功能，在原生质体互相接触后，没有发生核的迁移，产囊体内成对的核起源于原来产囊体的核。 4、分类 青霉菌属于曲霉科，青霉和曲霉都为常见属，二者的主要鉴别特征是孢子梗的排列不同，曲霉的孢子梗是辐射状排列，呈头状。 青霉菌与人类生活息息相关。少数种类能引起人和动物的疾病。许多种青霉菌能造成柑桔、苹果、梨等水果的腐烂，对工业产品、食品、衣物也造成危害。在生物实验室中，它也是一种常见的污染菌。加强通风，降低温度，减少空气相对湿度，可以大大减轻青霉的危害。 但在另一方面，青霉菌对人类非常重要。在工业上，它可用于生产柠檬酸，葡萄糖酸等有机酸和酶制剂非常名贵的娄克馥干酪，丹麦青干酪都是用青霉酿制而成，最著名的抗生素——青霉素就是从青霉的某些品系中提取而来，它是最早发现，最先提纯，临床上应用最早的抗生素。 三、淡紫拟青霉的使用注意事项 淡紫拟青霉菌常用于活体杀线虫剂，能防治孢囊线虫、根结线虫等多种寄生线虫。 1、勿与化学杀菌剂混合施用。 2、请注意安全使用，淡紫拟青霉可寄生眼角膜，如不慎进入眼睛，请立即用大量清水冲洗。 3、最佳施药时间为早上或傍晚。勿使药剂直接放置于强阳光下。 4、贮存于阴凉干燥处，勿使药剂受潮。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                   人卵巢癌细胞的复苏与传代及冻存实验操作步骤！ 细胞简介平台编号：Bio-129471规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶细胞信息：OVISE细胞名称：人卵巢癌细胞OVISE产品规格：T25培养瓶x1；1.5ml冻存管x2细胞数量：1x10^6；1x10^6保存温度：37℃；-198℃运输方式：常温保温运输；干冰运输安全等级：1用途限制：仅供科研2类培养体系：DMEM高糖培养基+10%FBS+1%三抗培养温度：37℃二氧化碳浓度：5%简介：人卵巢癌细胞OVISE取自40岁女性供体，该细胞源于JCRB。用途：细胞系注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 细胞复苏操作说明（针对冻存细胞）实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱 ，倒置显微镜 ，水浴锅 ，离心机实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清 ，三抗实验材料：T25 细胞培养瓶 ，需复苏的细胞 ，移液枪 ，枪头 ，离心管实验步骤：1、从液氮罐中取出冻存管 ，直接浸入 37℃温水中 ，并不时摇动令其尽快融化。2、从 37℃水浴中取出冻存管 ，打开盖子 ，移液枪吸出细胞悬液 ，加到离心管并滴加 5 倍以上完全培养基并混匀。3、操作离心 ， 调至 1000 转/分 ，时长 10 分钟4、弃去上清液 ，重悬离心管底部细胞沉淀 ，在 T25 培养瓶中加入 5-6ml 完全培养基 ，计数 ，调整细胞密度，接种培养瓶 ，37℃培养箱静置培养。5、次日更换一次培养液，继续培养。6、注意：冻存细胞建议三管一起复苏到一个 T25 培养瓶中 细胞传代操作说明（贴壁细胞）实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱 ，倒置显微镜 ，离心机实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清 ，0.25%胰酶 ，三抗实验材料：T25 细胞培养瓶 ，需传代的细胞 ，移液枪 ，枪头 ，离心管实验步骤：1、细胞于培养箱中 ，愈合度达到 80% ，可进行传代。2、按 T25 培养瓶计 ，吸出完全培养基 ，并 PBS 缓冲液轻冲 3 遍 ，添加 0.25%含 EDTA 胰酶 2ml ，消化 2min（具体时间视细胞而定），后用完全培养基将细胞冲洗下来。 1000r/min 离心 10 min ，弃上清 收集细胞，铺至 2 个 T25 培养瓶中培养，各添加 7ml 完全培养基。3、注意：消化时间不易过长，消化前血清成分务必去除干净，终止消化请用新鲜完全培养基，原瓶培养基不可继续使用（终止消化或传代）。  细胞传代操作说明（悬浮细胞）实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱 ，倒置显微镜 ，离心机实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清 ，三抗实验材料：T25 细胞培养瓶 ，需传代的细胞 ，移液枪 ，枪头 ，离心管实验步骤：1、细胞于培养箱中，密度达到悬浮细胞传代标准（沉降后可铺满底面），可进行传代。2、按 T25 培养瓶计，吹打均匀，吸出完全培养基，1000r/min 离心 10 min，弃上清收集细胞，铺至 2 个T25 培养瓶中培养，各添加 7ml 完全培养基。3、注意：原瓶培养基不可继续使用（传代）。 细胞冻存操作说明实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱 ，倒置显微镜 ，离心机实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清 ，0.25%胰酶 ，三抗 ，DMSO实验材料：T25 细胞培养瓶 ，需冻存的细胞 ，移液枪 ，枪头 ，离心管 ，冻存管 ，记号笔实验步骤：1、取待冻存的细胞（按 T25 计 ）用 0.25EDTA 胰酶 2ml 消化 2min ，用完全培养基将细胞冲洗下来。1000r/min 离心 10min ，弃上清收集细胞。如果是悬浮生长的细胞 ，则可直接离心收集细胞。2、加入 1ml 冻存液(90%FBS+10%DMSO )制成细胞悬液。3、细胞悬液装入 3 支冻存管中。4、冻存管在 4℃下存放 30 min ，转放-20℃ 1.5～2 h ，再转人-70℃ 4-12 h 后即可转移到液氮内(- 196℃) ，并登记。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  兔气管上皮细胞的培养步骤与应用及研究动态！ 一、背景 兔气管上皮细胞是一种常用的实验细胞，可以用于研究呼吸系统疾病和药物筛选等。这些细胞来源于兔子的气管组织，具有与体内组织相似的形态结构和功能活动，因此被广泛应用于基础和临床研究。 兔气管上皮细胞具有多种特点，例如可以作为气道与外界环境接触的第一道防线，合成和释放多种炎性介质和细胞因子参与气道炎症及免疫反应。此外，这些细胞还可以用于研究气道修复和再生等方面的机制。 在分离和培养兔气管上皮细胞时，通常采用链霉蛋白酶-中性蛋白酶混合消化法结合差速贴壁法等方法，以获得纯度和活性较高的细胞。此外，对于细胞的检测和鉴定也是非常重要的一步，可以通过免疫荧光等方法来确认细胞的身份和纯度。 二、兔气管上皮细胞培养步骤 1、兔气管上皮细胞培养基及培养冻存条件准备： 1)准备：DMEM+10%FBS+1%P/S 2)培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。 3)冻存液：50%basal medium+40%FBS+10%DMSO。 2、兔气管上皮细胞处理： 1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入250px皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 对于贴壁细胞，传代可参考以下方法： 1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。 4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 注：次传代推荐传代比例为1:2，以后传代比例可根据客户需要自己决定。 3）兔气管上皮细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 三、应用 兔气管上皮细胞可以用于兔气管黏膜上皮细胞原代培养的研究： 拟建立气管黏膜上皮细胞原代培养模型,观察细胞在体外生长及传代的规律,为组织工程气管假体的上皮化提供技术支持。 方法： 1、兔气管上皮细胞分离培养：(1)从4月龄新西兰大耳兔取出气管(甲状软骨至气管分叉),剔除气管周围纤维结缔组织,冲洗气管至苍白并且无黏液为止。(2)剪开气管、撕取黏膜,将黏膜置于含有抗生素的PBS液中浸泡除菌。(3)将黏膜剪成约1m×1mm大小的小块。(4)将黏膜组织小块移入培养瓶中,置入培养箱培养。(5)对培养的细胞采用刮除法结合消化排除法纯化。 2、兔气管上皮细胞细胞鉴定：对纯化后的细胞通过SABC法免疫组化鉴定、FITC标记的荧光抗体免疫荧光鉴定。 3、兔气管上皮细胞传代与冻存：(1)对纯化的细胞进行传代研究,并观察细胞在体外的生长规律。(2)对纯化后的细胞进行冻存与复苏的研究。 结果： 1、细胞培养：(1)培养约5-6d可见组织块边缘少量上皮样细胞爬出。此后,组织块周围上皮样细胞覆盖面积逐渐增大,细胞呈现三角形、梭形、圆形、多角形、不规则形等。高倍镜下可见部分细胞顶面伸出纤毛,在培养液中不断摆动。10d后去除组织块,14-15d时,细胞基本长满瓶壁,有纤毛的细胞无增殖。(2)通过刮除法结合消化排除法纯化后的细胞纯度较高。 2、兔气管上皮细胞鉴定：(1)SABC法染色检测细胞中角蛋白,胞质棕黄色,胞核淡蓝色,结果表明分离培养的细胞为上皮细胞。(2)FITC标记的荧光抗体检测细胞中的角蛋白,胞质亮绿色,可见整个细胞形态,表明分离培养的细胞为上皮细胞。 3、兔气管上皮细胞传代与冻存：(1)细胞可以连续传代至第5代,传代后细胞贴壁及生长良好,细胞随着代数的增加细胞体积逐渐变大。传代后未见有纤毛的细胞。第2-4代细胞贴壁及生长时问无明显差异,第5代细胞贴壁数量明显减少,生长缓慢,细胞体积与前几代相比明显变大。(2)本实验复苏冻存3个月的细胞,复苏后细胞存活率、贴壁率较高。经过本方法冻存与复苏的细胞,经过体外培养,细胞活性、增殖能力仍然能够恢复到冻存前水平。 结论：本实验应用组织块法成功构建出一种较为经济、便捷、可传代、可重复的兔气管黏膜上皮细胞的原代培养模型。成功对培养细胞进行鉴定、传代与冻存的研究,为气管黏膜上皮细胞培养提供了技术可行性,为组织工程人工气管的上皮化提供理论基础与技术支持。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   小菌核曲霉的形态特征与生长环境及主要价值！ 小菌核曲霉，壳霉目杯霉科真菌。菌落在查氏琼脂上7天直径30-40mm ，10-14天 50-60mm；菌落在查氏酵母膏琼脂上25℃7天直径达40-50mm；质地丝绒状，浅黄色，近于那不勒斯黄至奶油浅黄褐色（ Naples Yellow一Cream Buff，R. XVI，R. XXX）；形成菌核；菌落反面浅褐色。 一、菌种简介平台编号：Bio-12940规格：冻干物拉丁属名：Aspergillus Minisclerotigenes中文译名：小菌核曲霉拉丁学名：Aspergillus minisclerotigenes原始编号：大连M44菌株来源：←东北科学研究所大连分所直接来源国家：中国保藏时间：1/1/1952生物危害：四类模式菌株：非模式菌株培养温度：25-28℃培养基：0015    提供形式：冻干物用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、形态特征菌落在查氏琼脂上7天直径30-40mm ，10-14天 50-60mm；质地丝绒状，具不规则的皱纹；分生孢子结构生长较稀疏，浅黄色，近于那不勒斯黄至芥子黄（Naples YellowMustard Yellow，R. XVI），有的近于蜡黄（Wax Yellow，R. XVI）或奶油浅黄色（Cream Buff，R. XXX）；有的菌落全面产生大量菌核或仅部分扇形区域产生大量菌核，影响菌落外观，现颗粒状；菌核初为白色，继而变成淡肉色，近于浅赭鲑色（Light Ochraceous Salmon，R. XV），并伴有无色至淡黄色的渗出液；菌落反面近于无色或呈极淡的褐色。分生孢子头球形至辐射形，（50-） 200-500μm，球形者老后裂成几个致密的柱状体，也有少数呈疏松柱形者；分生孢子梗生自基质，孢梗茎 200-700（-1000）μm×6-11μm，壁厚可达1.2μm，近于光滑或显著粗糙，黄褐色；顶囊球形或近球形（10-） 25-35μm，全部表面可育；产孢结构双层：梗基（5-） 8-12（-16）μm×（2- ）3- 5（9．5）μm，瓶梗（5-） 8-11μm×2-2.5μm；分生孢子球形或近球形，较小，（ 2- ）2.5-3μm，壁光滑；菌核多为球形或近球形，直径（700-）1000-1500μm。菌落在查氏酵母膏琼脂上25℃7天直径达40-50mm；质地丝绒状，浅黄色，近于那不勒斯黄至奶油浅黄褐色（ Naples Yellow一Cream Buff，R. XVI，R. XXX）；形成菌核；菌落反面浅褐色。 　　菌落在麦芽汁琼脂上25℃ 7天直径40-50mm ， 10-14天65-70m ；质地絮状；分生孢子结构稀少，主要集中在菌落中央，淡黄色，近于那不勒斯黄（Naples Yellow，R. XVI）至浅黄褐色（Light Buff，R. XV）；老后在絮状菌丝中出现大量白色菌丝团块，而后形成菌核；菌落反面淡黄色。 三、生长环境土壤，药材（荆芥），双肩尺蛾幼虫，象鼻虫，红头苍蝇。37℃生长微弱。 　　 四、中国分布辽宁清源（MQ8269）；福建三明（MQ8423， MQ8424）；山东兖州（MQ8249）；湖北神农架（MQ7760， MQ7895）。 　　 五、世界分布阿根廷，巴西、塞浦路斯、德国、印度、以色利、尼日利亚、巴基斯坦、土耳其、乌克兰、英国和赞比亚。 　 六、模式产地美国烂苹果 七、本种特点本种与硫色曲霉极为相近，区别在于菌核单生、较大，本菌可引起苹果和梨的腐烂；也可产生赭曲霉毒素A和B（Domsch et al．，1980）。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   铅黄肠球菌PCR试剂盒的特点与应用及相关研究！ 一、背景 铅黄肠球菌PCR试剂盒是一种专门用于检测铅黄肠球菌的体外诊断试剂。它采用了聚合酶链式反应（PCR）技术，能够在短时间内快速、准确地检测出铅黄肠球菌。 铅黄肠球菌PCR试剂盒的主要成分包括PCR反应液、DNA模板、引物、酶等。其中，PCR反应液是PCR反应的基础，包含PCR反应所需的各种成分，如缓冲液、离子、酶等。DNA模板是含有铅黄肠球菌特异性基因序列的DNA片段，用于扩增出特异性片段。引物是一段与DNA模板特异性结合的短序列，用于启动PCR反应。酶是热稳定的DNA聚合酶，用于催化DNA合成。 使用铅黄肠球菌PCR试剂盒时，需要将DNA模板、引物和PCR反应液混合后进行PCR反应。在适宜的温度和条件下，引物与DNA模板特异性结合，并通过酶的催化进行DNA合成，最终得到大量的特异性DNA片段。通过凝胶电泳等技术对这些片段进行检测和分析，可以确定是否存在铅黄肠球菌。 二、铅黄肠球菌PCR试剂盒产品及特点 因此快速灵敏检测铅黄肠球菌具有重要意义。本产品就是为此目的根据PCR原理开发的试剂盒，它具有下列特点： 1、即开即用，用户只需要提供DNA模板。 2、引物经过精心优化，专一性强，只扩增铅黄肠球菌，与其他植物没有交叉反应。 3、提供阳性对照，便于区分假阴性样品。 4、PCR mix中含上样染料，PCR后可以直接上样电泳。 5、本试剂盒足够做40μL体系的PCR 50次，但只能用于科研。 三、应用 铅黄肠球菌PCR试剂盒可以用于林麝肺源铅黄肠球菌FML1805的分离、全基因组测序分析及其蜂胶佐剂灭活疫苗的试制： 从病死林麝肺脏中分离出一株铅黄肠球菌,命名为FML1805。对此株FML1805进行生理生化鉴定和16S r RNA测序分析后,进行了小鼠致病性试验、全基因组测序分析及ANI计算分析,同时试制了蜂胶佐剂灭活疫苗。疫苗通过动物安全试验后分别注射家兔与林麝,并用间接ELISA方法检测家兔与林麝三免后84 d的血清抗体效价。 主要试验结果如下： 1、林麝肺源铅黄肠球菌的分离及致病性试验结合分离菌株的生化试验及铅黄肠球菌PCR试剂盒16S r RNA的测定比对,死亡林麝肺脏分离菌株为肠球菌属,并且与铅黄肠球菌16S r RNA同源性最高;该分离菌株可以引起小鼠发病,剖检可见小鼠肺部病变较为明显、其余脏器也有不同程度充血肿大,制备病理切片后观察可发现:小鼠心、肝、脾、肺、肾均有不同程度组织病理变化。分离菌株对小鼠半数致死量为5.9×108CFU/m L;药敏试验结果显示分离菌株对万古霉素耐药、氨基糖苷类几乎耐药、头孢类敏感。 2、全基因组序列测定及分析结果全基因组序列测定结果显示此分离菌株基因组大小为5321641 bp,包含6521个开放阅读框(Open Reading Frame,ORF)。对其进行ANI分析计算后显示与Enterococcus casseliflavus EC20全基因组平均序列一致性达到了99.54%,可判断此分离菌株为铅黄肠球菌。将测得的全基因组数据成功上传至NCBI,命名为FML1805,登录号:WEKZ00000000;对全基因组分析结果显示含有18个与耐药相关的基因及16个与毒力相关的基因。 3、蜂胶佐剂灭活疫苗的试制本研究用天然蜂胶作为佐剂研制灭活疫苗,通过动物安全试验后接种于家兔和林麝体内。间接ELISA测定家兔和林麝三免后84 d内的血清抗体水平,用测得阳性血清OD600nm值(P)比上阴性血清OD600nm值(N)大于等于2.1时的最小血清稀释倍数来表示血清抗体水平,结果显示:家兔在完成免疫程序84 d内的血清抗体效价稳定在3100倍左右;林麝在完成免疫程序84 d内的血清抗体效价稳定在1500倍左右。 综上,本试验从林麝肺脏分离鉴定出一株革兰氏阳性球菌,命名为FML1805。测定并分析FML1805全基因组后确定此菌株为耐万古霉素的铅黄肠球菌变异株,并研究了此菌株的致病性和耐药机制。最后试制蜂胶佐剂灭活疫苗,为铅黄肠球菌的临床治疗及其预防工作取得了铺垫。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                三孢布拉氏霉的培养方法与注意事项有哪些？ 三孢布拉氏霉，属于毛霉目、笄霉科，拉丁名是Blakeslea trispora。三孢布拉氏霉菌丝体生长迅速，能生长成粗壮的长菌丝，为长管单细胞，无隔膜，具有多个细胞核，不能产生假根，为单细胞低等真菌。主要用于产β-胡萝卜素。 一、菌种简介平台编号：Bio-103289规格：冻干物拉丁属名： Blakeslea Trispora菌种名称：三孢布拉氏霉 拉丁文名：Blakeslea trispora 培养基编号：157 培养温度：24-28℃ 培养时间：7-9 天其他编号：ATCC14059用途：产β-胡萝卜素 相关的培养基详细信息如下：培养基编号：157 名称：ATCC Medium: 340 Rabbit Food Agar  可用于培养菌种：   备注：兔子饲料(颗粒)　　　　25.0 g 琼脂　　　　　　　　　　　  15.0 g 蒸馏水　　　　　　　　　　　1000 ml 兔子饲料加水煮开，浸泡３０分钟后，用沙布过滤后加琼脂灭菌。用途：产Β-胡萝卜素 产Β-胡萝卜素（一公一母）注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、培养基YpSs 培养基酵母提取物 4.0g 可溶性淀粉 15.0 克 K2HPO4 1.0gMgSO4.7H2O 0.5g 琼脂 15.0g 蒸馏水 1.0L 三、保藏条件斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存,西林瓶请置于-20°C 保存。请勿长期置于室温。  四、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备 菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。 五、注意事项1）冻干首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取 0.3ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支斜面或平板）；经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间；若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养；如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；2）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；3）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；4）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；5）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。6）如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到后 2 个月内联系，逾期不予受理；7）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。8）西林瓶开封：用 75%酒精棉擦拭西林瓶外部，在安全柜内使用尖嘴钳去除塑料盖及铝盖，注意不要同时打开胶塞。缓慢开启胶塞，用 75%酒精棉消毒瓶口部分，使用无菌吸管注入0.5ml 适宜的液体培养基复溶冻干粉末。9）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                     如何理性看待食品中的“指示菌超标”？ 百欧博伟生物：食品中的“指示菌”是在常规卫生监测中，用以指示检品卫生状况及安全性的指示性微生物。常规检验指示菌的目的，主要是以卫生指示菌在检品存在与否以及数量的多少为依据，对照国家卫生标准，对检品的饮用、食用或使用的安全性做出评价。 依据目前实际应用情况可将指示菌分为两种类型： 第一种类型的指示菌是为了评价被检样品的一般卫生质量、污染程度以及安全性，最常用的是菌落总数、霉菌和酵母菌数。 第二种类型是特指粪便污染的指示菌，主要指大肠杆菌和大肠菌群，其它还有肠球菌、亚硫酸盐还原梭菌等。它们的检出标志着检品受过人、畜粪便的污染，而且有肠道病原微生物存在的可能性。 菌落总数是指示性微生物指标，不是致病菌指标，反映食品在生产过程中的卫生状况。如果食品的菌落总数严重超标，将会破坏食品的营养成分，使食品失去食用价值；还会加速食品腐败变质，可能危害人体健康。菌落总数超标的原因，可能是企业未按要求严格控制生产加工过程的卫生条件，也可能与产品包装密封不严或储运条件不当等有关。 食品的菌落总数严重超标，说明其产品的卫生状况达不到基本的卫生要求，菌落总数超标也意味着致病菌超标的机会增大，增加危害人体健康的几率。消费者食用微生物超标严重的食品，很容易患痢疾等肠道疾病，危害人体健康安全。 大肠菌群是国内外通用的食品污染常用指示菌之一。食品中大肠菌群不合格，说明食品存在卫生质量缺陷，提示该食品中存在被肠道致病菌污染的可能，对人体健康具有潜在危害，尤其对老人、小孩的危害更大。大肠菌群超标的原因，可能是包装材料受污染，或在生产过程中产品受到人员、工具器具等生产设备、环境污染。 菌落总数和大肠菌群超标的食品，说明其卫生状况未达到基本卫生要求，存在致病微生物污染的潜在风险。食品原料、生产加工环境或加工环节的不规范操作是导致微生物指标超标的主要原因。 如何理性看待食品中的“指示菌超标”呢？一是消费者要了解大肠菌群指标的实质性意义，它不会对健康造成直接的危害。二是要懂得经过适当的加热或者是再加工，做到位了，即使菌落总数超标，也不会带来大的风险。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                  朱红栓菌的生长环境与分布范围及主要价值！ 一、基本信息 药 名：朱红栓菌 来 源：为菌类植物药多孔菌科植物朱红栓菌的全草。 功 效：清热解毒。 主 治：用于治疗痈疽疮疖、咽喉肿痛、跌打损伤诸症。 性味归经：涩、微辛，温。入肝经。 用法用量：内服：6一12克，水煎服。 别 名：红栓菌、朱砂菌、胭脂栓菌、枯皮蕈、胭脂菰(《新华本草纲要》) 拉丁名：Trametes cinnabarina (Jacg) Franeh 考 证：始载于《新华本草纲要》。 中药化学成分：全菌含朱砂菌酸、朱砂菌素、朱红栓菌素(tramesanguin)等。 二、菌种简介 朱红栓菌是多孔菌科栓菌属的植物。子实体一般小，扁半球形，菌盖表面橙色至红色，后期稍褪色，无环纹，有细绒毛或无毛，稍有皱纹。菌肉橙色，管孔面红色，每毫米2-4个。此菌的主要特征是子实体从外到内都是鲜艳的橙色至红色，生于针、阔叶树枯枝上，往往成群成片生长。因其为菌之一种，形似栓，色朱红，故而得名“朱红栓菌”。  朱红栓菌产于中国东北、华北、西北、西南、中南华东，在日本、大洋洲、北美洲、欧洲等地亦有分布。喜高温，菌丝生长温度为10-50℃，适宜温度为35-40℃，被太阳直射、干燥的段木发育较好。 朱红栓菌子实体入药，味微辛、涩，性温，具有清热除湿，消炎解毒，止血的功效，主治痢疾，咽喉肿痛，跌打损伤，痒疹，伤口出血，风湿痹痛等症状。据《新华本草纲要》记载：“全菌：味涩，微辛，性温。有清热解毒、祛湿、止血等功能。”  三、植物学史 朱红栓菌，又名红栓菌、朱砂菌、胭脂栓菌、朱红密孔菌等。因其为菌之一种，形似栓，色朱红，故而得名“朱红栓菌”。  四、形态特征 子实体一般小。扁半球形、扁平、无柄、新鲜时肉质松软，干后变为木栓质。菌盖直径2-11cm，厚0.5-1cm，表面橙色至红色，后期稍褪色，变暗，无环纹，有细绒毛或无毛，稍有皱纹。菌肉橙色，有明显的环纹，遇氢氧化钾变黑色，管孔面红色，每毫米2-4个。此菌的主要特征是子实体从外到内都是鲜艳的橙色至红色。 朱红栓菌危害多种阔叶树木等，引起木材腐朽。被侵害处开始呈橙色，后期为白色腐朽。在香菇、木耳栽培的段木上，常出现此菌，属食菌段木上常见的“杂菌”。 五、生长环境 夏秋季生于栎、槭、杨、柳等阔叶树和松、杉等针叶树枯倒木上，群生或叠生。喜高温，菌丝生长温度为10-50℃，适宜温度为35-40℃，被太阳直射、干燥的段木发育较好。  六、分布范围 分布于我国黑龙江、吉林、辽宁、河北、山西、内蒙古、陕西、甘肃、江西、河南、浙江、安徽、江苏、广东、广西、湖南、四川、贵州、青海、云南、新疆、西藏等地区。在日本、大洋洲、北美洲、欧洲等地亦有分布。  七、主要价值 朱红栓菌含有多种生物活性成分，如真菌多糖、朱红栓菌素、朱砂菌酸、生物酶等，可药用，具有除风湿、消炎止血、解毒生肌、抗癌等功效，对小白鼠肉瘤180和艾氏癌的抑制率均为90%。日本的研究表明，朱红栓菌固培物多糖对于小鼠肉瘤S-180抑制率达90%。朱红栓菌固培物水浸膏经临床验证，对食管癌、贲门癌有治疗作用。抗菌活性试验显示，朱红栓菌对大肠杆菌、李斯特菌具有抑制生长能力，对串珠链球菌具有抑制产孢能力，可以转化蒂巴因碱获得新型止痛药。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                   人胃腺癌细胞(低分化)的应用及培养操作步骤！ 一、背景 人胃腺癌细胞(低分化)源自一位62岁的胃癌（未分化腺癌）患者，表达CEA。STR检测发现该细胞被HeLa细胞污染。 胃低分化腺癌是胃癌当中的一种，胃癌根据细胞核分裂程度，可以分为高分化、中分化、低分化。低分化代表胃癌细胞分化程度比较差，分化潜能比较大。低分化的癌肿瘤恶性程度高，生长快，容易发生转移。进行治疗时，或在进行肿瘤危险因素评估时，低分化的肿瘤出现复发转移的风险相对高，高分化癌细胞已经具有可塑性已经成型，恶性程度相对比较低。如果检测是低分化胃癌，其危险分期较高。 二、人胃腺癌细胞(低分化)培养操作 1)复苏人胃腺癌细胞(低分化)：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。 将含有1 mL人胃腺癌细胞(低分化)悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将人胃腺癌细胞(低分化)悬液加入6 cm平皿中，加入约4 mL完全培养基，培养过夜）。第三天换液并检查细胞密度。 2)人人胃腺癌细胞(低分化)传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗人多发性骨髓瘤细胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02%EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-3min（视细胞消化情况而定），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 c、将人胃腺癌细胞(低分化)悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3)人胃腺癌细胞(低分化)冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例； a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 三、应用 人胃腺癌细胞(低分化)可以用于二烯丙基二硫抑制人胃低分化腺癌增殖的转录组学研究： 二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)可以抑制多种肿瘤细胞增殖,但具体作用机制尚未完全阐明。本研究旨在构建DADS处理胃癌MGC803细胞差异表达基因表达谱、差异转录因子活性谱、差异microRNA,研究DADS抑制人胃癌MGC803细胞增殖的分子机制。 方法：通过人全基因组寡核苷酸微阵列芯片、转录因子活性谱芯片、microRNA芯片检测DADS作用于MGC803细胞后差异基因的表达谱;Real-time PCR验证MMP9、TIMP3,Real-time PCR验证miR-222、miR-665。 结果： 1、系统构建了DADS处理胃癌MGC803细胞差异基因表达谱,表达相差1.5倍以上为差异具有显著性。与对照组相比,处理组上调基因1293个(>2.0基因384个),下调基因1228个(>2.0基因202个)。利用dchip软件以t test,P 2、差异表达基因的功能分类,通过多种生物信息学软件对基因芯片数据基因综合分析,系统评价了差异表达基因的功能分类。Panther软件分析发现上调基因共参与152条pathway,61条pathway的实际参与基因数量超过预期基因值,而“Angiogenesis”、“Integrin signalling pathway”和“Oxidative stress response”3条pathway的P0.05。上调基因共参与229个BP分类,106个BP分类中实际参与基因数超过预期基因数,“Signal transduction”、“Cell structure and motility”、“Cell proliferation and differentiation”、“Cell cycle control”等17个BP分类的P0.05。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  枯草芽孢杆菌的生态特性和生态作用及应用领域！ 枯草芽孢杆菌是一种常见的益生菌，具有多种重要的生态作用。本文将详细介绍枯草芽孢杆菌的生态作用，帮助读者更好地理解其在环境、农业和人类健康领域的重要作用。 一、环境领域 1、土壤生态作用 枯草芽孢杆菌能够在土壤中增加有机质分解和放气作用，提高土壤肥力和通气性。此外，还能抑制病原菌和有害微生物的生长，保护作物生长。 2、水生态作用 枯草芽孢杆菌能够消化有毒物质和厌氧菌氧化，提高水质和活性。同时还能降解污水中的有机物和重金属离子，减少水污染。 3、空气生态作用 枯草芽孢杆菌能够抑制有害微生物和异味的产生，净化室内空气。 二、农业领域 1、促进植物生长 枯草芽孢杆菌能够调节植物生长激素，提高营养物质吸收和利用率，促进植物生长。 2、控制病害 枯草芽孢杆菌能够分泌抑菌物质，抑制病原菌生长，防治作物病害。 3、降低化肥使用 枯草芽孢杆菌能够增加土壤固氮菌的数量，促进植物吸收氮元素，减少化肥的使用。 三、人类健康领域 1、改善免疫力 枯草芽孢杆菌能够增强人体免疫力，降低感染病菌的几率。 2、促进肠道健康 枯草芽孢杆菌能够调节肠道菌群平衡，减少有害菌群的生长，促进肠道健康。 3、预防过敏 枯草芽孢杆菌能够增加IgA的分泌，预防过敏反应的发生。 四、枯草芽孢杆菌的应用 1、食品工业 枯草芽孢杆菌能够产生多种有益的代谢产物，如多酚类成分、抑菌物质等，被广泛应用于酱油、醋、巧克力等食品的发酵工艺中，不仅改善了食品味道和口感，还能增强其营养价值和保质期。 2、饲料工业 枯草芽孢杆菌能够增加动物肠道内有益菌的数量，改善消化和营养吸收能力，预防疾病发生，被广泛应用于畜禽和水产饲料中。 3、医药工业 枯草芽孢杆菌能够产生多种生物活性物质，如抗菌素、酶类、蛋白质等，并被用于治疗消化道疾病、皮肤感染、过敏反应等。 4、环保领域 枯草芽孢杆菌能够降解重金属、石油类污染物和有机废水等，被广泛应用于水质净化、土壤修复、垃圾处理等领域。 综上所述，枯草芽孢杆菌的应用非常广泛，且在各个领域都具有重要的应用价值和作用。我们应该进一步加强对其的研究和应用，挖掘其更多的潜在作用和新用途，以更好地服务于人类的可持续发展和健康生活。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                   人子宫内膜间质细胞的培养操作步骤及注意事项！ 一、细胞简介平台编号：Bio-116084规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶细胞信息：原代细胞细胞名称：人子宫内膜间质细胞用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞详述子宫是产生月经和孕育胎儿的器官，位于骨盆腔中央，在膀胱与直肠之间。子宫内膜由2层组成，即单层柱状上皮与固有层。其中，固有层的结缔组织细胞主要为子宫内膜基质细胞，属于成纤维细胞。 三、细胞特性1)细胞来源于人正常子宫组织。2)细胞鉴定：波形蛋白（Vimentin）免疫荧光染色为阳性。3)经鉴定细胞纯度高于90%。4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。5)细胞生长方式：长梭形，不规则细胞，贴壁培养。 四、产品的运输和保存视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。 五、产品使用1)本产品仅能用于科研2)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核3)本产品未通过用于活体诊断的审核 六、细胞培养步骤1、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。2、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2.加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。3.轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4.按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心8-10分钟，弃上清液，补加1-2ml培养液后吹匀，将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。方法二：可选择半数换液方式，弃半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右完全培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。3、细胞冻存：（注：无血清冻存液冻存细胞的方法请参考我司官网货号：C7001）（1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；（2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；（3）用适量的冻存液重悬细胞，并放置于冻存管中；（4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃ 七、注意事项1、收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。2、收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。3、由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。4、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

              寡养单胞菌属：具有较强的生物防治植物寄生线虫活性 寡养单胞菌属是Stenotrophomonas属的微生物，原产地为中国。菌落呈圆形，边缘光滑，深色，有少许土腥味。主要用途为研究，具体用途为可以同时还原六价铬和吸附二价锌。  一、菌种简介平台编号：Bio-85315规格：冻干粉拉丁属名：Stenotrophomonas Sp.中文名称：寡养单胞菌属拉丁名称：Stenotrophomonas sp.来源历史：←南阳师范学院生命科学与技术学院收藏时间：2015/1/26原始编号：SCT-8原产国：中国资源归类编码：15131127103模式菌株：非模式菌株主要用途：研究特征特性：菌落呈米白色、规则圆形、边缘整齐、不透明、表面光滑、球状凸起、粘稠状， G-。菌体为直或微弯的杆状，单个或成对排列。16S rRNA GenBank号：KP262338。具体用途：具有较强的生物防治植物寄生线虫活性。生物危害程度：四类培养基编号：CM0033培养基名称：LB培养基(LB Medium)培养基成分：蛋白胨 10.0g，酵母粉 5.0g，NaCl 10.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH7.0。培养温度：37℃需氧类型：好氧分离基物：松材线虫Bursaphelenchus xylophilus体内采集地：江苏省南京市保存方法：-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享提供形式：冻干物用途：具有较强的生物防治植物寄生线虫活性。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、产品特点1、菌种功能明确、品种稳定、应用;2、产品仅限用于科研本品芽孢含量高,稳定性好、耐高温和挤压;3、繁殖能力快、定植能力强、易存活、耐受低pH值环境;4、复活迅速,可在短期内成为优势种群;5、本品安全高效、无抗药性、不污染环境;6、对多数抗生素不敏感,可与低浓度抗革兰氏阴性菌抗生素同时使用。 三、产品优势1、产品质量稳定,是为科研和 提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。2、国内首创封闭管包装,冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法,保证菌种的复苏质量。3、严格的质检程序,确保产品质量的稳定性。4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业,疾控中心、质检局、出入境、药检局等等,得到广泛好评。 四、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备 菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。 五、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、菌种恢复培养前，建议将收到的菌种安瓿保存在 6-10°C 的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，如在说明建议的培养时间还未长起来，请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间，直至菌种培养完成，有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长，一般来说菌种培养稳定后才能用于您的后续实验。3、初次使用时请严格按照本说明书推荐条件和操作步骤进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、恢复培养厌氧菌时，在操作过程中应严格控制厌氧条件：制作培养基时，应使用厌氧螺口试管，并利用高纯氮气去除试管和培养基中的氧气，使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、与菌种相关的其它信息请参阅微生物菌种查询网网站。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                 ATCC 33125灿烂弧菌的资源简介与描述及检测方法！ 灿烂弧菌用于实验和科研检测用，属于菌株类。 一、基本信息平台编号：Bio-74333规格：Freeze-Dried拉丁属名：Vibrio Splendidus菌株名称：灿烂弧菌用途：ATCC原装进口注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、详细描述Vibrio splendidus (Beijerinck) Baumann et al. 菌株拉丁名(ATCC® 33125™) 菌株编号Deposited As Beneckea splendida (Beijerinck) Reichelt et al.Strain Designations 菌株别名 [NCMB 1]Isolation 分离源 Marine fishBiosafety Level 生物安全等级 1Biosafety classification is based on U.S. Public Health Service Guidelines, it is the responsibility of the customer to ensure that their facilities comply with biosafety regulations for their own country.Product Format 提供形式 freeze-driedPreceptrol® noType Strain 模式菌株 yes Ref, Ref, Ref, RefMedium 培养基 ATCC® Medium 101: Photobacterium brothGrowth Conditions 生长条件Temperature 培养温度 : 26.0℃Name of Depositor 寄存人 P BaumannChain of Custody 来源国家 ATCC Isolation 分离源 Marine fishReferences  参考文献 Reichelt JL, et al. Study of genetic relationships among marine species of the genera Beneckea and Photobacterium by means of in vitro DNA/DNA hybirization. Arch. Microbiol. 110: 113-114, 1976.Baumann P, et al. Reevaluation of the taxonomy of Vibrio, Beneckea, and Photobacterium: abolition of the genus Beneckea. Curr. Microbiol. 4: 127-132, 1980.Validation list no. 6. Int. J. Syst. Bacteriol. 31: 215-218, 1981. Skerman VB, et al. Approved lists of bacterial names. Int J Syst Bacteriol 30: 225-420, 1980.type strainReichelt JL, et al. Study of genetic relationships among marine species of the genera Beneckea and Photobacterium by means of in vitro DNA/DNA hybirization. Arch. Microbiol. 110: 113-114, 1976.Baumann P, et al. Reevaluation of the taxonomy of Vibrio, Beneckea, and Photobacterium: abolition of the genus Beneckea. Curr. Microbiol. 4: 127-132, 1980.Validation list no. 6. Int. J. Syst. Bacteriol. 31: 215-218, 1981.Skerman VB, et al. Approved lists of bacterial names. Int J Syst Bacteriol 30: 225-420, 1980.Cross References Nucleotide (GenBank) : X74724 V.splendidus (ATCC 33125T) gene for 16S ribosomal RNA 三、资源简介资源名称灿烂弧菌数据标识符jichuwei_1511C0002100006396关键词cgmcc1.1586灿烂弧菌Vibriosplendidus细菌负责单位名称中国科学院微生物研究所联系方式北京市朝阳区北辰西路1号院3号最近更新日期20090617资源类目名称弧菌属资源分类标准名称微生物菌种资源共性描述规范资源分类版本号1.0安全访问控制限制 四、资源描述革兰氏阴性细菌，兼性厌氧，呼吸和发酵代谢。 五、产品信息产品名称：灿烂弧菌拉丁文名称： Vibriosplendidus产地：美国ATCC,国产上海丽臣生物科技有限公司专业销售各类进口，国产菌株，菌株种类多达七千多种 六、检测方法快速检测灿烂弧菌的PCR方法 七、微生物菌种培养方法1、孢子制备⑴ 放线菌孢子的制备一般采用琼脂斜面培养基,培养基中含有一些适合产孢子的营养成分,如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。碳源和氮源不要太丰富(碳源约为1%,氮源不超过0.5%),碳源丰富容易造成生理酸性的营养环境,不利于放线菌孢子的形成,氮源丰富则有利于菌丝繁殖而不利于孢子形成。一般情况下,干燥和限制营养可直接或间接诱导孢子形成。放线菌斜面的培养温度大多数为28 ℃,少数为37 ℃,培养时间为5~14天。⑵ 产品仅限用于科研霉菌孢子的制备霉菌的孢子培养,一般以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基。这是由于这些农产品中的营养成分较适合霉菌的孢子繁殖,而且这类培养基的表面积较大,可获得大量的孢子。霉菌的培养一般为25~28 ℃,培养时间为4~14天。2、种子制备⑴ 摇瓶种子制备摇瓶种子进罐,常采用母瓶、子瓶两级培养,有时母瓶种子也可以直接进罐。种子培养基要求比较丰富和完全,并易被菌体分解利用,氮源丰富有利于菌丝生长。原则上各种营养成分不宜过浓,子瓶培养基浓度比母瓶略高,更接近种子罐的培养基配方。⑵ 种子罐种子制备种子罐种子制备的工艺过程,因菌种不同而异,一般可分为一级种子、二级种子和三级种子的制备。孢子(或摇瓶菌丝)被接入到体积较小的种子罐中,经培养后形成大量的菌丝,这样的种子称为一级种子,把一级种子转入发酵罐内发酵,称为二级发酵。如果将一级种子接入体积较大的种子罐内,经过培养形成更多的菌丝,这样制备的种子称为二级种子,将二级种子转入发酵罐内发酵,称为三级发酵。同样道理,使用三级种子的发酵,称为四级发酵。 微生物菌种查询网作为中国微生物菌种中心引航者，单位代为引进美国ATCC微生物菌种保藏中心，德国DSMZ菌种保藏中心，荷兰CBS菌种保藏中心，日本JCM微生物菌种保藏中心，包括其中的ATCC微生物细菌与噬菌体（18382）；细胞系和杂交瘤（4997）；真菌和酵母（58183）；原代细胞（146）；原生动物和藻类（2428）；干细胞（102）；载体，克隆与分子（18006）；病毒（3594）；核酸 - DNA / RNA（1350），引进进口微生物菌种货期短，质量保证，UPS国际快递运输。

                  小鼠视网膜神经节细胞株的应用及培养操作步骤！ 一、背景 小鼠视网膜神经节细胞株是一种来源于小鼠视网膜神经节细胞的细胞系。这些细胞具有神经元的特征，可以用于研究视觉信号传导、神经退行性疾病等方面的生物学和医学研究。 小鼠视网膜神经节细胞株可以通过体外培养获得，常用的培养方法包括贴壁法和悬浮法。贴壁法是将小鼠视网膜神经节细胞接种在含有特定培养基的培养皿中，经过一段时间的生长和分化，形成单层贴壁的神经元。悬浮法是将小鼠视网膜神经节细胞悬浮在含有特定培养基的培养瓶中，通过离心等方法分离出神经元进行培养。 小鼠视网膜神经节细胞株在研究中具有广泛的应用价值，例如可以用于研究视觉信号传导的机制、神经退行性疾病的发生和发展等。此外，还可以用于药物筛选和毒性评价等领域的研究。 二、小鼠视网膜神经节细胞株培养操作 1)复苏小鼠视网膜神经节细胞株：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2)小鼠视网膜神经节细胞株传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3)小鼠视网膜神经节细胞株冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例； a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 三、应用 小鼠视网膜神经节细胞株可以用于TGFβ信号通路在小鼠视网膜神经节细胞轴突再生过程中作用的实验研究： 以小鼠视网膜神经节细胞(Retinal ganglion cells,RGCs)为研究对象,观察转化生长因子β(Transforming growth factorβ,TGFβ)信号传导通路在小鼠RGCs轴突再生过程中的作用。 本实验应用木瓜蛋白酶消化法、免疫磁珠筛选等方法成功分离获得小鼠RGCs,Brn3b免疫细胞荧光化学染色对其进行鉴定,应用Calcein AM及Hoechst对细胞进行免疫细胞荧光化学染色,从而在12个蛋白激酶抑制剂中成功筛选出促小鼠RGCs存活及其神经突再生的4个候选激酶抑制剂即TGFβ?型受体激酶抑制剂(TGFβReceptor Inhibibitor,TGFβRI)(AL 47070)、P38MAP激酶抑制剂(AL 42243、AL 42245、AL 46144),其中作用最明显的为TGFβ?型受体的抑制剂(AL 47070); 应用Realtime PCR检测TGFβ下游靶基因IGF1、NRP2、IL6,发现AL 47070作用组与对照组相比较IGF1、NRP2、IL6表达明显下降,说明AL 47070从mRNA水平阻断了TGFβ信号传导通路;应用Western-blot方法检测TGFβRI(AL 47070)作用小鼠RGCs后,总Smad2、P-smad2、总Smad3、P-smad3的表达,发现总Smad2、Smad3并未有明显变化,而P-smad2、P-smad3明显下降,说明从蛋白水平证明TGFβRI(AL 47070)阻断了小鼠RGCs的TGFβ信号传导;应用MAP2b和Tau免疫细胞荧光化学染色,发现TGFβR(IAL 47070)作用小鼠RGCs后即有MAP2b和Tau双阳性的神经突还有MAP2b染色阳性而Tau染色阴性的神经突,证明在体外细胞培养模式下,阻断TGFβ信号传导通路可以促进小鼠RGCs树突及其轴突再生; 应用Calcein AM及Hoechst免疫细胞荧光化学染色成功的证明在细胞培养条件及视网膜组织块培养条件下,TGFβRI(AL 47070)比已知的对轴突再生有促进作用的神经营养因子如BDNF、CNTF、GDNF强; 此外,建立小鼠视神经夹伤模型,应用甲苯胺蓝尼氏小体染色发现手术组比未手术组细胞明显减少,证明我们模型建立成功,应用GAP-43免疫组织荧光化学对视神经进行染色,证明在视神经损伤的情况下,阻断TGFβ信号传导可以促进小鼠RGCs轴突再生。 综上所述,本实验成功的分离培养小鼠RGCs,分别在体外、体内实验发现阻断TGFβ信号传导能路可以促进小鼠RGCs的轴突再生。为治疗青光眼等视网膜神经节细胞损伤疾病提供了新的实验基础,期望能为治疗青光眼等疾病提供新思路及手段。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

              水产用侧孢芽孢杆菌的功效作用与使用方法及注意事项！ 百欧博伟生物：水产养殖需要注意许多方面，尤其是养殖中的饲料和水质检测，这些都直接关系到水产的质量和数量。侧孢芽孢杆菌是一种常见的益生菌，可以帮助水产养殖者改善养殖环境，从而提高鱼类的健康程度和养殖效果。 一、侧孢芽孢杆菌的功效 侧孢芽孢杆菌是一种益生菌，有着多种功效，尤其在水产养殖中可发挥的作用更大。侧孢芽孢杆菌最主要的功效是能够改善水质，控制污染物的生成与分解，从而保持水质稳定。此外，它还能够促进水产养殖动物的消化吸收和减少身体内部的有害细菌生成，增强免疫力，降低发病率，从而提高水产养殖的成活率和养殖效益。 二、侧孢芽孢杆菌的使用方法 1、选择适合的侧孢芽孢杆菌产品 选择适合自己的侧孢芽孢杆菌产品非常重要。 可以根据自己的需求选择不同剂型、菌株、添加剂等，同时选择有口碑的品牌，有效保证产品的质量。 2、按照说明书使用 对于初次使用的水产养殖者来说，最好通过读取说明书来了解产品具体使用方法。按照说明书用量使用不仅可以避免浪费，还可以确保养殖效果。 3、科学配合饲料 侧孢芽孢杆菌的使用还需要科学搭配饲料，使侧孢芽孢杆菌能够更好的发挥作用，同时也能够补充二元养分，提高鱼的健康程度。 4、适量添加 鱼窝中添加太多侧孢芽孢杆菌，不仅不能够起到增长的效果，还会浪费资源。适量添加才能够使侧孢芽孢杆菌在养殖中得到最大程度的利用。 三、使用侧孢芽孢杆菌的优点 1、明显改善水质 侧孢芽孢杆菌能够分解水体中的有害物质，提高水质，从而减少臭水发生，保持水体稳定性。 2、提高鱼儿抗病能力 适量添加侧孢芽孢杆菌有助于鱼体提高免疫力，减少发病率，从而提高鱼的抗病能力。 3、促进鱼儿的消化吸收 侧孢芽孢杆菌中的多种酶类和益生菌有利于它们的饵料消化、吸收营养。 4、降低养殖成本 添加侧孢芽孢杆菌，能提高鱼的健康程度和生长速度，从而减少死亡率，增加收成，降低了养殖成本。此外，侧孢芽孢杆菌还能够改善鱼肉的品质和口感，提高市场营销价值。 5、环保 使用侧孢芽孢杆菌不会产生环境污染，而且能够有效地分解有害物质，减少污染物的排放，对环境保护具有重要意义。 四、侧孢芽孢杆菌用量 侧孢芽孢杆菌的用量根据养殖的种类和规模的不同而有所区别。在使用前，可以向专业人员咨询建议。一般来说，应该根据养殖密度、水体污染程度、鱼类种类等进行适量添加，不能过量使用。 五、注意事项 1、必须选择质量有保障的产品。在购买产品前，要了解产品的菌种、剂型、生产企业等信息，避免购买假冒伪劣产品。 2、适用于肝脏病以及使用抗生素长期治疗的患者，但是建议在医生指导下使用，不可盲目使用。 3、每个养殖池只需要添加适当的量，过量使用不仅会浪费资源，而且会造成对环境污染。 4、使用侧孢芽孢杆菌的同时，还需要注意水产的饲料、水质、池塘清洁等多个因素，确保养殖效益。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                 从农业到生活环境——地衣芽孢杆菌的全方位作用！ 地衣芽孢杆菌是一种广泛存在于环境中的细菌，其分布范围广，形态多样，可以在不同的条件下生长繁殖。随着科学技术的不断发展，地衣芽孢杆菌的作用越来越被人们所熟知。 一、预防疾病 1、预防和治疗呼吸道疾病 地衣芽孢杆菌可以有效地预防和治疗呼吸道疾病。它能够通过合成抗生素和其他物质来控制病原菌的生长繁殖，从而达到治疗和预防的效果。同时，地衣芽孢杆菌还可以增强人体的免疫力，避免了一些呼吸道感染等疾病。 2、降低消化系统疾病的风险 地衣芽孢杆菌还能够预防和缓解人体消化道疾病，促进肠道微生态平衡。它可以代替消化道中的有害菌群，促进有益菌群的发展和壮大，保护肠道黏膜免受病原微生物的侵害，从而降低疾病的风险。 二、增强免疫力 免疫力是人体维持健康的基础保障，而地衣芽孢杆菌可以通过增强人体免疫力的效果，来保障身体健康。 1、促进白细胞和抗体的产生 地衣芽孢杆菌可以刺激人体免疫细胞的活性，促进白细胞和抗体的产生。这样，人体面对细菌感染和病毒感染时，能及时的进行免疫反应，从而提高免疫力。 2、调节免疫反应 地衣芽孢杆菌还可以调节免疫反应，使其保持在适当的状态，避免免疫炎症反应过度，对身体产生不利的影响。 三、农业发展 地衣芽孢杆菌在农业方面的应用越来越多，主要表现为增加产量和提高作物质量等方面。 1、提高农业产量 地衣芽孢杆菌可以使植物受到较高的养分供给和较好的生长环境，从而提高植物的产量。同时，地衣芽孢杆菌也可以通过协议固氮作用，把氧气转变为氮，促进植物生长，从而增加农作物的产量。 2、提高作物的质量 地衣芽孢杆菌可以促进植物的光合作用和气孔开放程度，增加植物色素、蛋白质和碳水化合物的含量，从而提高作物的质量。此外，地衣芽孢杆菌还可以促进作物根系发育，提高植物的吸水能力和抗逆性，更好地应对环境变化和自然灾害。 四、污水处理 地衣芽孢杆菌在污水处理中也起到了很好的作用。污水处理的方法有很多种，其中一种方法就是利用细菌分解有机物质使其降解，而地衣芽孢杆菌可以分解有机物质，降解废污水。此外，地衣芽孢杆菌还能将废污水中的钾、氮等元素分解出来，起到提高污水利用率的作用。 五、改善生活环境 生活环境也是地衣芽孢杆菌的应用领域之一。 1、净化室内空气 室内污染是一种常见的污染形式，容易影响人类的身体健康。地衣芽孢杆菌可以吸附室内空气中的有害物质，使室内空气得到净化。 2、环境监测和污染修复 地衣芽孢杆菌在环境监测和污染修复方面也有较好的应用。例如，在土壤污染修复中，地衣芽孢杆菌可以利用其分解有机物和生物降解的功能，对污染土壤进行修复。 地衣芽孢杆菌的作用越来越被人们所重视，其在预防疾病、增强免疫力、提高农业产量、污水处理以及生活环境改善等方面都有广泛的应用。未来，随着科学技术的不断发展，地衣芽孢杆菌在更多领域中的应用将有更加广泛的前景和发展。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                    大鼠脾淋巴细胞的知识与应用及培养操作步骤！ 一、背景 大鼠脾淋巴细胞是一种来源于大鼠脾脏的淋巴细胞系。这些细胞具有免疫细胞的特征，可以用于研究免疫学、肿瘤学、传染病学等领域。 大鼠脾淋巴细胞可以通过体外培养获得，常用的培养方法包括贴壁法和悬浮法。贴壁法是将大鼠脾淋巴细胞接种在含有特定培养基的培养皿中，经过一段时间的生长和分化，形成单层贴壁的淋巴细胞。悬浮法是将大鼠脾淋巴细胞悬浮在含有特定培养基的培养瓶中，通过离心等方法分离出淋巴细胞进行培养。 大鼠脾淋巴细胞在研究中具有广泛的应用价值，例如可以用于研究免疫应答的机制、肿瘤免疫治疗、病原体感染的免疫应答等。此外，还可以用于药物筛选和毒性评价等领域的研究。 二、大鼠脾淋巴细胞培养操作 1)复苏大鼠脾淋巴细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2)大鼠脾淋巴细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3)大鼠脾淋巴细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例； a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 三、应用 大鼠脾淋巴细胞可以用于IRE1/XBP1对重症急性胰腺炎大鼠脾淋巴细胞凋亡的作用研究： 探讨IRE1/XBP1对重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)大鼠脾淋巴细胞凋亡的作用。 方法：30只SPF级别的成年雄性SD实验大鼠,随机分成假手术组(Sham-operated group,SO组)、SAP 6h组及SAP 12h组,每组各10只。5%牛磺胆酸钠溶液胰胆管逆行注射构建SAP实验动物模型,SO组大鼠只是翻动胰腺后随即关腹做实验对照组。 SO组大鼠于术后12h取材,SAP组大鼠分别于术后6h、12h取材,利用紫外分光光度计测定所有实验大鼠血清淀粉酶及脂肪酶含量,大鼠胰腺组织采用HE染色观察病理严重程并进行病理评分,流式细胞术检测脾淋巴细胞凋亡率,透射电镜观察脾淋巴细胞凋亡形态,RT-q PCR、Western blot法检测大鼠脾淋巴细胞IRE1、XBP1、凋亡相关基因Bax及Caspase-3 mRNA和蛋白表达水平。 结果：(1)与SO组相比,SAP组脾淋巴细胞凋亡率明显增高,在6h达到高峰,12h时稍下降,但仍高于SO组,差异有统计学意义(P (2)SO组大鼠脾淋巴细胞IRE1、XBP1 mRNA及蛋白呈低表达;与SO组比,SAP组大鼠脾淋巴细胞IRE1、XBP1表达水平升高,SAP 12h组升高更为明显,差异有统计学意义(P (3)SO组大鼠脾淋巴细胞Bax、Caspase-3 mRNA及蛋白呈低表达,与SO组比,SAP组大鼠脾淋巴细胞Bax、Caspase-3的表达水平明显升高,在6h时达到高峰,12h稍下降,但仍高于SO组,差异有统计学意义(P (4)SAP 6h组、12h组大鼠脾淋巴细胞IRE1、XBP1蛋白表达水平与Bax、Caspase-3蛋白表达水平呈正相关(均P (5)SAP6h组、12h组大鼠脾淋巴细胞IRE1、XBP1蛋白表达水平与淋巴细胞的凋亡呈正相关(均P 结论：SAP大鼠脾淋巴细胞IRE1/XBP1表达水平明显升高,淋巴细胞凋亡增多;IRE1/XBP1高表达引起Bax和Caspase-3的表达水平升高,可能是导致SAP大鼠脾淋巴细胞凋亡增多的重要原因。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  食品微生物检验中样品的制备应符合什么原则？ 百欧博伟生物：样品的制备是样品采集和检测操作之间的衔接环节，通常并不是一个独立存在的步骤。样品制备不仅包括了实验室样品的前处理或预处理步骤﹐如解冻和缓化、混合、均质、称重、稀释、部分特殊处理方式等侧重于检测分析的部分操作,也可包含二次取样、样品缩分和混合等侧重于样品采集的部分操作。 多数情况下,样品制备实验室内检测工作的第一步,不同性状的样品、不同的检测项目,样品制备方法可能各不相同。整个过程中,既要秉承样品采集过程的要求,也要根据样品基质特性和目标微生物特征,为后续检测环节进行必要的操作处理,使检测结果能客观真实地反映样品的卫生状况。 样品的制备主要应符合以下原则： 1、无菌操作 食品微生物检验样品制备应在符合洁净度要求及生物安全要求的实验室内进行,全部过程应为无菌操作﹐并严格依据相关标准或实验室操作规范进行操作,以防止对人员和环境造成危害;用于样品制备的所有设备和材料、容器及工具等均应为无菌状态,样品制备过程中,包装也应进行适当的消毒,并避免人员和环境对样品造成污染。 2、维持样品的代表性和随机性 根据样品的性状,采用适宜的方式尽可能使样品混合均匀及分样,使得抽取的测试样品部分能延续采样的代表性和随机性。液体样品可振摇混匀,粉末状的样品宜边取边混,固体样品应从不同部位取样,兼顾表面和深度,若需获得适当粒度的试样,可使用粉碎、研磨、绞碎或均质等方法,若需要多次粉碎,每一步都应将样品充分混合。当样品量较大时,宜对分布均匀的颗粒状,粉末状或液体样品进行混合、缩分,制成混样和(或)集样,再进一步缩分为试料。 3、维持样品的稳定性 样品采集和运输过程中,食品中微生物群落可能是变化的,因此实验室接收后应尽快制样、尽快检验。实验室接收的样品应无损坏,并在样品制备前尽可能接近最初贮存的条件。样品应密封保存,应特别注意避免暴露在阳光下或受温度波动的影响，冷冻样品应在规定温度和时间下解冻或缓化。实验室应选取能够满足后续检测所需的制备方法，并能尽量延长样品保存期。 4、去除可能干扰目标微生物检测的因素 样品本身的物理或化学性状(如酸碱度﹑渗透压、黏度、水活度、脂肪含量等)、保存状态(如冷冻、冷藏、减氧包装等),加工食品中目标微生物受损情况、特定的取样部位要求(如水产品取指定部位),以及样品中可能存在的内源性或外源性抑菌物质等因素均可能对目标微生物的检测操作造成干扰,进而影响检测结果。在样品制备过在中,应对这些因素予以充分关注及考量,如有必要,应采用有针对性及特定的样品制备及处理方法﹐以尽重去除或减少这些因素的干扰。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                CCC-HSF-1 人皮肤成纤维细胞的培养操作说明！ 细胞简介平台编号：Bio-49376规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶细胞信息：CCC-HSF-1细胞名称：人皮肤成纤维细胞CCC-HSF-1产品规格：T25培养瓶x1；1.5ml冻存管x2细胞数量：1x10^6；1x10^6保存温度：37℃；-198℃运输方式：常温保温运输；干冰运输安全等级：1用途限制：仅供科研3类培养体系：DMEM高糖培养基（Hyclone）+10%胎牛血清（Gibco）+1%双抗（Hyclone）培养温度：37℃二氧化碳浓度：5%简介：人皮肤成纤维细胞CCC-HSF-1取材自引产的15周男性胚胎组织，中国医学科学院基础医学研究所细胞资源中心建立。注释：To cite this cell line use:CCC-HSF-1(RRID:CVCL_6886)用途：细胞系注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）　验收细胞注意事项1、收到人皮肤成纤维细胞CCC-HSF-1细胞，请查看瓶子是否有破裂，培养基是否漏出，是否浑浊，如有请尽快联系。2、收到人皮肤成纤维细胞CCC-HSF-1细胞，如包装完好，请在显微镜下观察细胞。,由于运输过程中的问题，细胞培养瓶中的贴壁细胞有可能从瓶壁中脱落下来，显微镜下观察会出现细胞悬浮的情况，出现此状态时，请不要打开细胞培养瓶，应立即将培养瓶置于细胞培养箱里静止3-5小时左右，让细胞先稳定下，再于显微镜下观察，此时多数细胞会重新贴附于瓶壁。如细胞仍不能贴壁，请用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，如台盼蓝染色证实细胞活力正常请按悬浮细胞的方法处理。3、收到人皮肤成纤维细胞CCC-HSF-1细胞后，请镜下观察细胞，用恰当方式处理细胞。若悬浮的细胞较多，请离心收集细胞，接种到一个新的培养瓶中。弃掉原液，使用新鲜配制的培养基，使用进口胎牛血清。刚接到细胞，若细胞不多时血清浓度可以加到15％去培养。若细胞迏到80%左右，血清浓度还是在10％。4、收到人皮肤成纤维细胞CCC-HSF-1细胞时如无异常情况，请在显微镜下观察细胞密度，如为贴壁细胞，未超过80%汇合度时，将培养瓶中培养基吸出，留下5-10ML培养基继续培养：超过80%汇合度时，请按细胞培养条件传代培养。如为悬浮细胞，吸出培养液，1000转/分钟离心3分钟，吸出上清，管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。5、将培养瓶置于37℃培养箱中培养，盖子微微拧松。吸出的培养基可以保存在灭菌过的瓶子里，存放于4℃冰箱，以备不时之需。6、24小时后，人皮肤成纤维细胞CCC-HSF-1细胞形态已恢复并贴满瓶壁，即可传代。（贴壁细胞）将培养瓶里的培养基倒去，加3-5ml（以能覆盖细胞生长面为准）PBS或Hanks’液洗涤后弃去。加0.5-1ml 0.25%含EDTA的胰酶消化，消化时间以具体细胞为准，一般1-3分钟，不超过5分钟。可以放入37℃培养箱消化。轻轻晃动瓶壁，见细胞脱落下来，加入3-5ml培养基终止消化。用移液管轻轻吹打瓶壁上的细胞，使之完全脱落，然后将溶液吸入离心管内离心，1000rpm/5min。弃上清，视细胞数量决定分瓶数，一般一传二，如细胞量多可一传三，有些细胞不易传得过稀，有些生长较快的细胞则可以多传几瓶，以具体细胞和经验为准。（悬浮细胞）用移液管轻轻吹打瓶壁，直接将溶液吸入离心管离心即可。7、贴壁细胞，悬浮细胞。严格无菌操作。换液时，换新的细胞培养瓶和换新鲜的培养液，37℃，5%CO2培养。特别提醒：原瓶中培养基不宜继续使用，请更换新鲜培养基培养。 细胞复苏操作说明（针对冻存细胞）实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱 ，倒置显微镜 ，水浴锅 ，离心机实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清 ，三抗实验材料：T25 细胞培养瓶 ，需复苏的细胞 ，移液枪 ，枪头 ，离心管实验步骤：1、从液氮罐中取出冻存管 ，直接浸入 37℃温水中 ，并不时摇动令其尽快融化。2、从 37℃水浴中取出冻存管 ，打开盖子 ，移液枪吸出细胞悬液 ，加到离心管并滴加 5 倍以上完全培养基并混匀 。3、操作离心 ，调至 1000 转/分 ，时长 10 分钟4、弃去上清液 ，重悬离心管底部细胞沉淀 ，在 T25 培养瓶中加入 5-6ml 完全培养基 ，计数 ，调整细胞密度，接种培养瓶 ，37℃培养箱静置培养。5、次日更换一次培养液，继续培养。6、注意：冻存细胞建议三管一起复苏到一个 T25 培养瓶中 细胞传代操作说明（贴壁细胞）实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱 ，倒置显微镜 ，离心机实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清 ，0.25%胰酶 ，三抗实验材料：T25 细胞培养瓶 ，需传代的细胞 ，移液枪 ，枪头 ，离心管实验步骤：1、细胞于培养箱中 ，愈合度达到 80% ，可进行传代。2、按 T25 培养瓶计 ，吸出完全培养基 ，并 PBS 缓冲液轻冲 3 遍 ，添加 0.25%含 EDTA 胰酶 2ml ，消化 2min（具体时间视细胞而定），后用完全培养基将细胞冲洗下来。 1000r/min 离心 10 min ，弃上清收集细胞，铺至 2 个 T25 培养瓶中培养，各添加 7ml 完全培养基。3、注意：消化时间不易过长，消化前血清成分务必去除干净，终止消化请用新鲜完全培养基，原瓶培养基不可继续使用（终止消化或传代）。  细胞传代操作说明（悬浮细胞）实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱 ，倒置显微镜 ，离心机实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清 ，三抗实验材料：T25 细胞培养瓶 ，需传代的细胞 ，移液枪 ，枪头 ，离心管实验步骤：1、细胞于培养箱中，密度达到悬浮细胞传代标准（沉降后可铺满底面），可进行传代。2、按 T25 培养瓶计，吹打均匀，吸出完全培养基，1000r/min 离心 10 min，弃上清收集细胞，铺至 2 个T25 培养瓶中培养，各添加 7ml 完全培养基。3、注意：原瓶培养基不可继续使用（传代）。 细胞冻存操作说明实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱 ，倒置显微镜 ，离心机实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清 ，0.25%胰酶 ，三抗 ，DMSO实验材料：T25 细胞培养瓶 ，需冻存的细胞 ，移液枪 ，枪头 ，离心管 ，冻存管 ，记号笔实验步骤：1、取待冻存的细胞（按 T25 计 ）用 0.25EDTA 胰酶 2ml 消化 2min ，用完全培养基将细胞冲洗下来。1000r/min 离心 10min ，弃上清收集细胞。如果是悬浮生长的细胞 ，则可直接离心收集细胞。2、加入 1ml 冻存液(90%FBS+10%DMSO )制成细胞悬液。3、细胞悬液装入 3 支冻存管中。4、冻存管在 4℃下存放 30 min ，转放-20℃ 1.5～2 h ，再转人-70℃ 4-12 h 后即可转移到液氮内(- 196℃) ，并登记。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                    益生菌：丁酸梭菌的特性与多重功效及应用领域！ 丁酸梭菌作为一种重要的益生菌，具备多重功效和广泛应用领域。从保护肠道健康到环境净化，从动物饲养到人类健康，丁酸梭菌正成为推动生态健康发展的重要力量。 一、丁酸梭菌简介及独特特性 丁酸梭菌是一种常见的厌氧、芽孢形成细菌，存在于土壤、水体、动物和人体的肠道中。它具备以下独特特性和优势： 1、丁酸梭菌产生丁酸，能够降低酸性环境，促进益生菌生长，并抑制病原菌的繁殖，从而维护肠道健康。 2、丁酸梭菌具有耐热、耐酸、耐盐和耐药物的特性，能够在宿主体表面形成菌群，提高免疫力，抵御外界环境的侵袭。 3、丁酸梭菌还具有纤维素降解能力，能够促进饲料的消化吸收，提高养殖效益和资源利用效率。 二、丁酸梭菌在动物养殖中的应用 1、饲料添加剂：将丁酸梭菌添加到动物饲料中，可以促进消化道菌群平衡，改善动物的肠道健康，提高饲料的利用率，并减少对抗生素的依赖性。 2、疾病防控：丁酸梭菌具有广谱抗菌活性，可以抑制病原菌的生长，降低疾病发生的风险，从而减少对化学药物的依赖性，提高养殖动物的健康水平。 3、发酵剂：丁酸梭菌作为一种优良的发酵菌，可以用于生产益生菌制剂、酸奶和乳饮料等，增强产品的益生菌含量和营养价值，满足人们对健康食品的需求。 三、丁酸梭菌在环境净化中的应用 1、污水处理：丁酸梭菌具有良好的降解性能，可以应用于污水处理工艺中，分解有机物质和改善废水质量，减少对环境的污染。 2、土壤修复：丁酸梭菌可以降解土壤中的有毒物质，如重金属离子等，促进土壤的修复和生态系统的恢复。 3、水体净化：通过将丁酸梭菌引入水体中，可以降低水中的有害物质浓度，抑制藻类的过度生长，调节水体的微生物组成，提高水体的质量。 四、丁酸梭菌在人类健康中的应用 1、肠道健康：丁酸梭菌作为一种益生菌，可以调节人体肠道菌群平衡，降低患肠道疾病的风险，如便秘、腹泻和炎症性肠病等。 2、免疫调节：丁酸梭菌能够刺激人体免疫系统，增强免疫力，提高抵抗力，减少感染和炎症的发生。 3、心血管健康：丁酸梭菌能够降低血脂和胆固醇水平，改善心血管健康，预防心血管疾病的发生。 4、预防胃溃疡和消化道不适：丁酸梭菌具有保护胃黏膜的作用，可以减少胃酸的腐蚀和胃溃疡的发生。此外，丁酸梭菌还能缓解胃肠道炎症和不适症状，如胃灼热、胃胀等。 丁酸梭菌作为一种独特而重要的益生菌，在动物养殖、环境净化和人类健康等领域都具有广泛的应用前景。它的多重功效包括保护肠道健康、改善环境质量、提高动植物生长能力和促进人类健康等。随着人们对生态健康意识的增强和需求的不断变化，丁酸梭菌的应用将越来越重要。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                  你知道TCBS琼脂弧菌检测的方法和手段准确吗？  TCBS琼脂培养基主要用于副溶血弧菌和霍乱的分离培养。在南美白对虾的养殖过程中，主要用于池塘水和病虾的肝脏组织的弧菌培养，在35℃的培养箱中培养18小时后根据平板上生长出菌落颜色、大小、光滑程度来判断是否为弧菌的感染及感染的程度。 判断标准 在养殖水体中，弧菌的数量标准值为：水中黄弧菌数量≤1000个/L，绿弧菌数量≤100个/L，没有；在培养基上所培养出的菌落数量，建议黄弧菌不要超过20个菌落，绿弧菌不允许存在，当菌落的颜色和菌落的数量越多，感染弧菌的风险就会越大。 根据TCBS培养基上弧菌培养后所生长出的菌落颜色，分为：黄弧菌和绿弧菌，大多数情况下认为黄弧菌为溶藻弧菌，绿弧菌为副溶血弧菌。对于TCBS培养基培养弧菌只是检测的一种手段，不能完全确定池塘中的对虾就一定是有弧菌的感染。 首先，在TCBS培养基上所长出的菌落有可能是绿色的副溶血弧菌、创伤弧菌等，也有可能是黄色的溶藻弧菌、哈维氏弧菌等。但在培养基上长出的菌落不仅仅是弧菌，也可能是维氏气单胞菌、嗜水气单胞菌等其他菌落。 第二，弧菌本身属于养殖水体中的常在菌，属于一个条件性致病菌，往往是养殖池塘环境恶化，强烈的应激，对虾的免疫力下降才会使对虾感染弧菌；在良好的水体环境中即便是由弧菌也不一定对虾就会感染。 第三，即便是在培养基上培养出黄色或绿色菌落，只要养殖池塘中的对虾，生长速度、采食量、免疫力都挺好，也没必要过于在意弧菌的培养。不要盲目的采取消杀的手段去杀灭弧菌。消毒不仅可以杀灭水中的病害菌，同时，也可以杀灭水中的常在有益菌，可能会导致水体菌群失调，菌藻不平衡，会使水质更加恶化，反而环境的改变影响了对虾的免疫力和体质，甚至发病。 在判断对虾是否感染弧菌时，一定要结合水质情况、天气变化、应激等外界变化，也要结合对虾的临床症状、体色、肝胰脏病变情况、肠道的颜色进行综合评判。 微生物菌种查询网隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，成立于二〇一四年十月份，是一家专业提供中国微生物菌种，标准菌种，质控菌株,ATCC菌种,细胞系以及培养基等产品的查询网站！自成立至今，已提供各类微生物菌种、细胞、培养基数量达四万余份，接待咨询客户数量5万余人次，成交合同数量2万余份！是国内微生物菌种及细胞信息Z全的网站！ 我们拥有自主研发能力，提供的ATCC菌种达15000余份,ATCC各类细胞系达3000余份,保藏中心涵盖菌种资源更达数十万余份！ 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到Z终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得Z优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                   仓鼠肾成纤维细胞的培养操作与应用及相关研究！ 一、背景 仓鼠肾成纤维细胞是一种来源于仓鼠肾脏的成纤维细胞系。这些细胞具有较强的增殖能力和良好的细胞形态，广泛应用于生物学和医学研究中。 仓鼠肾成纤维细胞可以用于研究肾脏疾病的发生机制、药物筛选和毒性评价等。例如，可以通过细胞培养技术，观察不同药物对细胞增殖、凋亡、代谢等方面的影响，从而评估药物的疗效和安全性。 此外，仓鼠肾成纤维细胞还可以用于研究肾脏疾病的分子机制和信号通路。通过基因表达分析、蛋白质组学研究等技术手段，可以深入了解肾脏疾病的发生和发展过程，为疾病的诊断和治疗提供重要的理论基础。 二、仓鼠肾成纤维细胞培养操作 1)复苏仓鼠肾成纤维细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2)仓鼠肾成纤维细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3)仓鼠肾成纤维细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例； a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 三、应用 仓鼠肾成纤维细胞可以用于鸭坦布苏病毒诱导细胞自噬的机制研究： 细胞自噬是一种在真核生物中高度保守的细胞内分解代谢途径,可去除衰老、聚集、未折叠的蛋白质和受损的细胞器。同时,大量研究证实,细胞自噬在病毒感染中也发挥重要作用,可以调控病毒的复制和宿主免疫反应,从而影响病毒的致病性。除了DTMUV外,黄病毒属还包括多种人畜共患病病毒,例如西尼罗河病毒(West Nile virus,WNV)、日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)、登革病毒(Dengue virus,DENV)和寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)等。报道表明,细胞自噬在多种黄病毒的感染和复制中起着重要作用,但DTMUV与细胞自噬之间的具体相互作用尚不清楚。因此,本研究分析了DTMUV与自噬间的相互关系、DTMUV的编码蛋白对自噬的影响,以及DTMUV及其重要功能蛋白诱导自噬的相关信号通路。 研究结果表明,DTMUV感染鸭胚成纤维细胞(Duck embryo fibroblasts,DEF)和仓鼠肾成纤维细胞后能显著诱导LC3-II的表达,引起细胞自噬,使用自噬诱导剂雷帕霉素(Rapamycin,RAPA)和自噬抑制剂3-MA(3-Methyladenine)分别处理细胞后感染DTMUV,发现诱导自噬能促进病毒复制,而抑制自噬则显著降低了病毒的复制。为确定DTMUV诱导自噬的主要功能蛋白,将DTMUV的3种结构蛋白(衣壳蛋白C、膜蛋白M、囊膜蛋白E)和7种非结构蛋白(NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B、NS5)转染DEF细胞。 结果表明,DTMUV非结构蛋白NS3能诱导细胞自噬,又通过Western blot、免疫荧光和透射电镜观察等方法,验证了NS3蛋白对自噬的诱导且发现其能诱导完整的自噬流。 此外,为进一步明确NS3蛋白诱导细胞自噬的信号通路,使用细胞外信号调节激酶2(Extracellular regulated protein kinases 2,ERK2)的特异性抑制剂U0126和si RNA抑制ERK2介导的信号通路后,发现NS3蛋白诱导的自噬水平降低,说明ERK2参与NS3蛋白诱导的细胞自噬。最后,通过抑制NS3诱导的自噬,与对照组相比DTMUV复制和滴度降低,说明NS3诱导的自噬同样可以促进DTMUV的复制。 综上所述,DTMUV感染DEF细胞可诱导细胞自噬,且NS3蛋白能通过ERK2信号通路诱导自噬,诱导的自噬能促进病毒复制。以上研究结果为进一步研究DTMUV与自噬的相互关系奠定了基础,同时也加深了对DTMUV分子致病机制的理解。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！