LA-795小鼠肺腺癌细胞系的应用及使用说明！

                  LA-795小鼠肺腺癌细胞系的应用及使用说明！

一、背景

LA-795小鼠肺腺癌细胞系是一种常用的实验细胞系，来源于小鼠的肺腺癌组织。这种细胞系具有稳定的生长特性和一定的增殖能力，常用于肺癌研究、药物筛选和疫苗研制等领域。

在生物学特性方面，LA-795小鼠肺腺癌细胞系系呈贴壁生长，具有上皮细胞的形态和特点。这种细胞系对化疗药物和放疗具有一定的敏感性，可用于研究肺癌的治疗方法。此外，LA-795小鼠肺腺癌细胞系中存在某些与肺癌相关的基因突变，如K-Ras基因突变等，这些突变可以作为肺癌研究的模型之一。

在应用方面，LA-795小鼠肺腺癌细胞系被广泛用于肺癌的研究和治疗。这种细胞系可以用于体外药物筛选和疫苗研制，也可以用于研究肺癌的发病机制和传播途径。此外，LA-795小鼠肺腺癌细胞系还可以用于制备抗体和其他生物分子，为生物医学研究提供了重要的工具和资源。

二、LA-795小鼠肺腺癌细胞系细胞使用说明

1、LA-795小鼠肺腺癌细胞系细胞株的复苏

a.将冻存管在37℃水浴锅中迅速完全融化(保持冻存管的盖子在液面以上以防止污染)，并适当轻轻摇晃促融，切勿vortex。快速、完全融化可以提高细胞的复苏效果。

b.打开冻存管前时用70%酒精擦拭细胞冻存管外壁，注意某些记号笔不耐酒精，小心标注的记号被擦拭掉。

c.将完全融化的细胞直接离心，或者转移至无菌1.5ml或其它合适无菌离心管中，500×g离心2-5min，吸除上清，注意不要吸走细胞沉淀，然后用新鲜完全培养液重悬后转移至培养器皿，混匀，置于CO2培养箱37℃培养。

d.第二天视贴壁或生长状态，更换培养液。

2、LA-795小鼠肺腺癌细胞系细胞的常规传代流程

a.将细胞培养液、PBS等放入37℃水浴锅内预热。

b.以10cm细胞培养皿为例。吸出原培养皿中的培养液，用2-5ml无菌PBS润洗细胞1-2次以去除残留的血清(如果细胞贴壁较差，润洗时要轻柔以避免细胞飘起)，然后加1-2ml胰酶细胞消化液(含EDTA)室温消化，注意消化时间，通常为1-5分钟。如果细胞比较难消化，可以置于37℃细胞培养箱一定时间以加速消化。注意：消化时间过长，会导致传代后细胞出现生长状态不良的情况。

c.每30秒-1分钟用显微镜观察细胞消化情况，贴壁细胞明显收缩、细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起，并用移液器吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来时，吸除胰酶细胞消化液，再加入1-2ml新鲜完全培养液，适当晃动细胞皿以终止胰酶作用，用移液器轻轻吹打贴壁的细胞，获取细胞悬液。吹打时需控制力度，避免产生大量气泡，将细胞悬液分别接种到另外的2~5个细胞培养皿内，加入新鲜培养液，置于CO2培养箱37℃培养，第2天观察细胞贴壁生长情况。

d.也可以在消化后，加3-5ml完全培养液终止消化，用移液器轻轻吹打细胞悬液，尽量把细胞全部吹落、吹散，然后将全部细胞悬液500×g离心2-5min，离心后去上清，再用完全培养液重悬后转移到新的培养皿中，添加适量完全培养液，于CO2培养箱37℃培养。

e.注意培养液的酚红颜色变化或根据细胞的换液要求定期换液，待细胞密度达到80-90%时需要传代或者冻存。如果没有及时传代导致细胞过密，传代后细胞容易出现生长状态不良的情况。

三、应用

LA-795小鼠肺腺癌细胞系可以用于LA795细胞不同转移率克隆株的建立及其转移相关特性的研究：

正常细胞的恶性转化实际上是源于细胞功能的系统紊乱，对瘤细胞转移行为的研究也存在同样的系统复杂性；因此，为最终阐明瘤细胞的转移机制，首先必须对其转移相关性质有深入的了解。

以我国肿瘤工作者自己建立的LA-795小鼠肺腺癌细胞系为基础，从中分离了4个具不同转移潜能的克隆株，并对其多方面的转移相关性质进行了系统的研究。

主要实验结论如下：

(1)论文首先建立了一个对不同恶性度肿瘤细胞进行克隆分离的有效方法并利用这一方法从LA795细胞母系获得了4个具不同转移潜能的克株，即LA1、LAE、LAD、LA5，其同基因T739小鼠体内肺自发转移率分别为0％、0％、16％、32％。

(2)在不同转移潜能克隆株建立之后，论文从组织形态、超微结构、细胞骨架结构等方面对其进行了描述。在对瘤细胞与正常细胞接触结构的研究中，论文建立了一个可用于特殊研究目的的膜系统弱消化法，并利用这一方法发现了瘤细胞和正常组织细胞间柱状交通结构(直径0.05-1.5um)的存在，这一发现对研究瘤细胞与正常细胞间相互作用的机制具有一定意义。

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