盐杆菌属的保藏条件与培养方法及注意事项！

                     盐杆菌属的保藏条件与培养方法及注意事项！

盐杆菌属，嗜盐杆状古细菌。革兰氏阴性，嗜盐杆状古细菌。大小为0.6～1.0 μm×1～6 μm，单个或多形态（特别是在贫瘠的培养基中）。以二分分裂繁殖。

一、产品信息

平台编号：Bio-097375

规格：冻干物

拉丁属名：Halobacterium Sp

菌株名称：盐杆菌属

收藏时间：2012/7/26

原始编号：NRC-1

原产国：中国

资源归类编码：15111111101

模式菌株：非模式菌株

主要用途：分类;研究;教学

特征特性：非模式菌株。在最适条件下生长时，细胞呈杆状，0/5-1/2μm×6/1μm。在老的液体培养基和固体培养基上生长时，常出现多形性：弯曲和膨大的杆状、棒锤形、球形，未发有休眠期，革兰氏染色阴性，以丛生鞭毛运动，细胞以缢缩分裂方式繁殖/大多数菌株严格好氧。

培养基编号：HALO-2

培养温度：37℃

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

二、菌种简介

单个或多形态(特别是在贫瘠的培养基中)。以二分分裂繁殖。极生丛毛运动或不运动。革兰氏染色阴性。细胞壁主要由脂蛋白构成，不含有胞壁酸和二氨基庚二酸。细胞荚膜含有约20%的类脂。有机营养型，专性需氧，呼吸代谢，从不发酵。在高浓度(12%以上)的NaCl溶液中才能生长，且保持杆状。若NaCl浓度不足则呈多形态，从氨基酸取得能源。菌体内含类胡菌卜素，其主要色素为菌红素，使菌落呈淡紫色到鲜红色或朱红色，菌落小于2 mm，圆形，凸起，完整，半透明。氧化酶和接触酶阳性。通常不液化明胶。在30～50℃生长好;最适生长温度范围为35～40℃。pH的生长范围5.5～8.0，最适pH为7.2～7.4。绝大多数菌株对多黏菌素敏感(300单位)。DNA中G+C的mol数为0.66～0.68或0.57～0.60。模式种为盐制品盐杆菌(H.salinarium)，是饱和或近饱和的NaCl环境中的极端嗜盐菌。主要存在于死海、盐湖、盐田及有盐分的食品如盐腌制品上。

三、保藏条件

安瓿瓶和斜面菌种在 2-8°C 保存。

四、培养基

halo-2 培养基

NaCL 250.0g MgCl₂ ·6H₂ O 30.0g 酵母浸膏 2.0g

乳清蛋白水解物 2.50g 水 1000.0ml Adjust ph to 7.2-7.4

五、微生物菌种培养方法

1、孢子制备

⑴ 放线菌孢子的制备

一般采用琼脂斜面培养基,培养基中含有一些适合产孢子的营养成分,如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。碳源和氮源不要太丰富(碳源约为1%,氮源不超过0.5%),碳源丰富容易造成生理酸性的营养环境,不利于放线菌孢子的形成,氮源丰富则有利于菌丝繁殖而不利于孢子形成。一般情况下,干燥和限制营养可直接或间接诱导孢子形成。放线菌斜面的培养温度大多数为28 ℃,少数为37 ℃,培养时间为5~14天。

⑵ 产品仅限用于科研霉菌孢子的制备

霉菌的孢子培养,一般以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基。这是由于这些农产品中的营养成分较适合霉菌的孢子繁殖,而且这类培养基的表面积较大,可获得大量的孢子。霉菌的培养一般为25~28 ℃,培养时间为4~14天。

2、种子制备

⑴ 摇瓶种子制备

摇瓶种子进罐,常采用母瓶、子瓶两级培养,有时母瓶种子也可以直接进罐。种子培养基要求比较丰富和完全,并易被菌体分解利用,氮源丰富有利于菌丝生长。原则上各种营养成分不宜过浓,子瓶培养基浓度比母瓶略高,更接近种子罐的培养基配方。

⑵ 种子罐种子制备

种子罐种子制备的工艺过程,因菌种不同而异,一般可分为一级种子、二级种子和三级种子的制备。孢子(或摇瓶菌丝)被接入到体积较小的种子罐中,经培养后形成大量的菌丝,这样的种子称为一级种子,把一级种子转入发酵罐内发酵,称为二级发酵。如果将一级种子接入体积较大的种子罐内,经过培养形成更多的菌丝,这样制备的种子称为二级种子,将二级种子转入发酵罐内发酵,称为三级发酵。同样道理,使用三级种子的发酵,称为四级发酵。

六、注意事项

1）冻干粉以 200ul-500ul 无菌水或者推荐培养基的液态溶解，最适接种量为 2 支斜面（18*180试管）或者 2 支 5ml 液体（请不要在平板上，更不要在锥形瓶中复苏菌种）待菌种活化成功后才能扩大培养。如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；

2）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；

3）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；

4）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；

5）请充分了解所购菌种的情况，尤其是该菌种的用途和生物安全信息，并且掌握必需的微生物操作技术，已具备必要的设备条件；如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌钟后 2 个月内联系，逾期不予受理。

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