酶联免疫吸附（ELISA）可以：（1）免疫酶染色各种细胞内成份的定位；（2）研究抗酶抗体的合成；（3）显现微量的免疫沉淀反应；（4）定量检测体液中抗原或抗体成份。 实验原理 双抗体夹心法（常用于测定抗原） 用特异性抗体包被于固相载体，经洗涤后加入含有抗原之待测样品，如待检样品中有相应抗原存在，即可与包被于固相载体上的特异性抗体结合，经保温孵育洗涤后，即可加入酶标记特异性抗体，再经孵育洗涤后，加底物显色进行测定，底物降解的量即为欲测抗原的量。 实验步骤 一、材料准备 1. 实验材料：血清、血浆、体液 2. 实验仪器：酶标比色计、96 孔板、移液枪、离心管、离心管盒 3. 所需试剂及试剂盒：碳酸盐包被缓冲液、抗体球蛋白、吐温-20、柠檬酸、硫酸 二、实验操作 1. 包被抗体：用包被缓冲液稀释特异性抗体球蛋白至最适浓度（1～10 μg /ml），每凹孔加 0.3 ml，4℃ 过夜，或 37℃ 水浴 3 小时，贮存冰箱。 2. 洗涤：移去包被液，凹孔用洗涤缓冲液（含 0.05% 吐温-20）洗 3 次，每次 5 分钟。 3. 每凹孔加入 0.2 ml 用稀释缓冲液稀释的含抗原的被检标本，37℃ 作用 1～2 小时。 4. 洗涤：移去包被液，凹孔用洗涤缓冲液（含 0.05% 吐温-20）洗 3 次，每次 5 分钟。 5. 加入 0.2 ml 用稀释缓冲液稀释的酶标记特异性抗体溶液，37℃ 作用 1～2 小时或由预试实验确定作用时间。 6. 洗涤：移去包被液，凹孔用洗涤缓冲液（含 0.05% 吐温-20）洗 3 次，每次 5 分钟。 7. 加入 0.2 ml 底物溶液于每个凹孔（OPD 或 OT），室温作用 30 分钟（另作一空白对照，0.4 ml 底物加 0.1 ml 终止剂）。 8. 加终止剂：每凹孔加 2M H2SO4 或 2 M 柠檬酸 0.05 ml。 9. 观察记录结果：目测或用酶标比色计测定（OPD 用 492 nm）OD 值。

蛋白磷酸化是多种信号转导途径中的重要环节，细胞内大部分重要的生命过程都涉及蛋白磷酸化。蛋白激酶很多，根据其底物蛋白被磷酸化的氨基酸残基种类，可将它们分为 5 类，其中丝氨酸/苏氨酸 (Ser/Thr) 蛋白激酶又可分为以下几类。 （1）蛋白激酶 A（protein kinase A，PKA）即 cAMP 依赖性蛋白激酶。全酶存在胞浆，被 cAMP 激活后，催化亚基可① 调节代谢；②调节离子通道；③调节其他信号转导途径的蛋白；④ 进入细胞核调节基因表达。 （2）蛋白激酶 C 即 Ca2＋和磷脂依赖的蛋白激酶，受 Ca2＋ 、DAG 和 PS 激活。根据其活化需不需要 Ca2＋ 、DAG 和 PS 分为 11 种亚型。PKC 底物非常广泛，包括参与信号转导的底物，如表皮生长因子受体、胰岛素受体、T 细胞受体（TCR）、Ras、GTP 酶活化蛋白等；参与代谢调控的底物，如膜上的通道和泵；调节基因表达的底物，如转录因子、翻译因子、S6K、Raf 激酶等。调节基因表达的底物，如转录因子、翻译因子、S6K、Raf 激酶等。PKC 广泛分布于各组织的胞质，以 Ca2＋依赖的形式从胞质中移位到细胞膜上，此过程称之为转位。PKC 转位是其活化的标志。 （3）钙 / 钙调素依赖性蛋白激酶（CaMK）包括肌球蛋白轻链激酶（myosin light chain kinase，MLCK）、磷酸化酶激酶、CaMKⅡ等。 （4）CMGC 组蛋白激酶，包括脯氨酸依赖性激酶（proline depedent kinase，PDK）；酪蛋白激酶Ⅱ（casein kinase Ⅱ ，CK Ⅱ ）家族。PDK 包括细胞周期素依赖性蛋白激酶（cyclin depedent kinase，CDK）家族；丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）家族；糖原合成酶激酶 3（glycogen synthetase kinase 3，GSK3）；CDK 样激酶（CDK-like kinase，CLK）家族。 （5）蛋白激酶 G，即 cGMP 依赖性蛋白激酶（cGMP –dependent protein kinase，PKG），以 cGMP 为变构剂，在脑和平滑肌中含量较丰富。 （6）G 蛋白偶联受体激酶，有肾上腺素受体蛋白激酶；ARK 相关激酶和视紫红质激酶等。 （7）核糖体 S6 激酶（S6K），包括 S6KⅠ和 S6KⅡ，能催化核糖体 S6 蛋白磷酸化。 （8）整合素连接激酶，整合素连接激酶（intergrin-linked kinase，ILK）可直接磷酸化 PKB/Akt，其活性依赖 PI3K。 （9）DNA 依赖性蛋白激酶，DNA 依赖性蛋白激酶（DNA-depen-dent protein kinaes，DNA-PK） 可磷酸化许多核蛋白，包括核受体、转录因子、DNA 拓扑异构酶和 RNA 聚合酶Ⅱ等。DNA-PK 可发生自主磷酸化，其催化亚基和 Ku 蛋白都依赖于 DNA 和 ATP 而磷酸化。

重组蛋白分为冻干粉和溶液态两种保存形式，原核细胞表达的重组蛋白为冻干粉状态，真核细胞表达的重组蛋白为溶液态保存，这样使得重组蛋白非常稳定，在-80℃ 条件下可保存数年。冻干粉在使用前需进行溶解，其中溶解的方法非常关键，因为溶解不好会降低蛋白的效用。溶液态保存的重组蛋白在冻融稀释使用过程中也需要仔细注意，这些都是用户在实际应用中经常遇到的问题。 （1）原核细胞表达的重组蛋白。 大肠杆菌表达的冻干重组蛋白，已经从包涵体中提纯，添加了蛋白保护剂，使用过滤后的无菌水作为复溶剂即可，复溶冻干蛋白 100 μg，用 86μl 的超纯水，轻轻摇晃使蛋白溶解，再用移液枪的枪头轻吹几下即可完全溶解，一定不能使用涡旋仪进行快速振荡或剧烈摇晃。 （2）真核细胞表达的重组蛋白。有活性的蛋白质不仅要转录和翻译，还要进行翻译后的加工，使得蛋白质的空间折叠方式维持正常，所以重组蛋白必须在真核细胞中进行，如哺乳动物细胞能够识别和去除基因中的内含子，对翻译后的蛋白质进行加工，这样表达的蛋白质具有生物活性。我们用溶液态来保存，保持了其良好的活性和稳定性。 （3）重组蛋白的保护剂。在冻干和储存过程中常用的保护剂或稳定剂有糖类，多元醇，聚合物，表面活性剂，某些蛋白和氨基酸等。我们通常加 8%（质量比体积）的海藻糖和甘露醇作为冻干保护剂。海藻糖可明显阻止蛋白质二级结构改变以及冻干过程中蛋白质的伸展和聚集，甘露醇也是一种普遍应用的冻干保护剂和填充剂。 

      凝胶电泳是每个做分子生物学的研究者天天都要打交道的基本技术。电泳之后的信息处理与电泳本身同样重要。那么,如何正确使用 Quantity One 进行蛋白定量？       目前有大量软件可以用于分析电泳结果，最备受推崇的应该属 Biorad 公司的 1D 凝胶分析软件 Quantity One，其最大的优点是可以完全抛弃人为主观因素进行全自动定量，同时它的很多功能渗透了艰深的数理理论以及概率统计的原理。Quantity One 的定量方式：      首先，根据不同电泳条带的光密度值绘制光密度曲线，然后计算光密度曲线下的面积作为电泳条带的定量根据；      其次，它能够大程度地排除不同泳道之间的背景差异，让各个泳道上的不同电泳条带在一条几乎相同的起跑线上进行对比。执行步骤：       由于 Quantiy One 只能识别黑白的 TIF 文件，且发表论文时，很多杂志也要求提供 TIF 等格式的图片；       因此，建议大家从一开始扫描就统一存储为 TIF 格式的图片。       步骤主要分为四块，分别是创建泳道、不同泳道的背景排除、创建条带、高斯建模与结果分析。注意：       从理论上来说「Rolling Disk Size」的取值越小，它的去除背景效果越好，当然也不能取太小的值，个人感觉 5～20 是一个比较好的取值范围。       我们可以对每条泳道依葫芦画瓢进行以上类似的背景排除工作。但有时候如果觉得可以使用同样的标准，即相同的「Rolling Disk Size」进行排除，那么我们可以「LaneBackground Subtraction」对话框中选择上方的「All Lanes On（same level）」选项。然后在「Rolling Disk Size」中填上一个合适的值，点击「Done」按钮确认就可以了。此时，该电泳图片上的所有泳道都以相同的标准进行了背景去除。

慢病毒（Lentivirus）载体是以人类免疫缺陷I型病毒为基础发展起来的基因治疗载体。区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。在转染遗传物质到细胞基因组中的工作中，重组慢病毒载体是一个强大和有效的工具，该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达。在感染能力方面可有效地感染包括几乎所有的哺乳动物细胞、干细胞和原代培养的细胞，目前慢病毒系统已经被广泛应用到各种细胞系的基因过表达、RNA干扰、microRNA研究以及活体动物实验中，从而达到良好的的基因治疗效果，在美国已经开展了临床研究，效果非常理想，因此具有广阔的应用前景。 慢病毒转染优点：1.外源基因表达水平较高、表达稳定；2.转染效率高，可感染分裂和不分裂的细胞，几乎可以感染所有类型的细胞，特别适合质粒载体转染效率低的细胞；3.慢病毒基因容易操作，易于制备大量病毒且滴度高；4.病毒基因组可整合到细胞基因组，易于构建稳定细胞株。 慢病毒包装技术慢病毒表达载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。将外源基因克隆进入表达载体，同时与包装质粒（表达病毒包装所需辅助蛋白）一起转染细胞，在细胞中进行病毒的包装，包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外的培养基中，收取培养基离心后可直接用于感染宿主细胞，当目的基因进入细胞后被整合到宿主基因组，从而高效表达目的基因。方法一：超速离心沉淀法1. 取6个Ultra-clear SW28离心管，用70%乙醇消毒后，放在超净工作台中打开紫外灯继续消毒30分钟。2. 每个Ultra-clear SW28离心管中加入约32ml的预先处理的病毒上清液。3. 取一支10ml的移液管，吸取12 ml 20%的蔗糖溶液。将移液管一直插入到离心管的底部，缓慢将蔗糖溶液打出4 ml。同样地，将剩下8 ml的蔗糖溶液分别加入到另两个离心管中。另取一支干净的移液管，对剩下3管进行同样处理。4. 用PBS调整各管的重量，使对应的离心管之间的重量相差不超过0.1g。5. 按次序将所有6个离心管放入Beckman SW28 超速离心转头中。6. 4℃，25，000 rpm. (82，700g) 离心2小时。7. 小心将管子从转头中取出。倒掉上清，将离心管倒扣在纸巾上放置10分钟使剩余的上清流干。吸掉剩余的液滴。在管底应当有可见的沉淀。8. 每管中加入100ml 不含钙和镁的PBS洗下沉淀。9. 将SW28超速离心管插入到50ml锥底离心管中，盖上盖子。10. 在4℃溶解2小时，每隔20分钟轻轻震荡。11. 4℃，500g离心1分钟，使溶液集中于管底。12. 用200μl 移液器轻柔吹打使沉淀重悬。避免产生泡沫。将所有管中的液体集中到一个SW28离心管中。13. 集中后的病毒悬液分装成50μl 每份，保存在成品管中。用碎干冰速冻后储存在-80 ℃。方法二：依科赛慢病毒浓缩液1.     收集上清液，3000×g离心15分钟清除细胞和细胞碎片。2.     将上清液转移至无菌容器中，向4V的病毒上清液中加入1V的病毒浓缩液，4°C 孵育过夜（至少12小时）。3.     混合液1500×g离心 30分钟，在容器的底部可能会出现为米色或白色沉淀。4.     吸上清，1500×g离心5分钟，吸液去除所有的残留液体，同时特别注意不要破坏已沉淀的病毒颗粒。5.     用1/10 -1/100体积冷的，无菌PBS缓冲液或DMEM（含25mM HEPES缓冲液）在4℃条件下重悬病毒沉淀。6.     分装在预冷的小瓶中，-70℃储存，直到使用。

 加、减、换一个载体 的MCS的位点 （给一个表达 载体加、减、换小表达标签，如His6， His10，strep II等，和MCS改造是一样的），其实技术 不是问题，问题在于位点的选择 ，因为载体设计 时应该设计者也考虑过mcs的问题，应该给使用者越多的选择越好，但为什么有的载体只给有限的几个位点呢，一可能是这个载体其他部位本身含有的限制性切点比较多，因而MCS位置的选择比较少，二就是设计者是自用的载体，没有考虑到我们的感受 。因此如果你要加、减、换MCS，可以按一下几个步骤进行：1、找到载体全序列 ，查找有没有你想要加的位点（Primer premier5……一堆软件 ，再不济了用word），如果没找到你想加、减、换的位点，恭喜了，要成功了；2、方法上不太推荐点突变或其他以overlap PCR 为基础的技术，推荐小片段 克隆 ，也就是做shRNA 载体的那种方法，人工合成（按引物 合成）你想要的MCS序列的正反链，两端加上载体上两个切点的粘末端序列，人工退火（95度10min，然后每分钟降5度直至Tm值下5度，维持10min，即可），不用电泳检验，直接按克隆的连接体系将这个小片段与你的载体（相应酶双切）连接转化……小片段连入的效率相当高，如果大家要检验：在菌长出来后，做PCR检验（人工合成的这个小片段的正链或反链与载体上的引物）。举个例子：比如要在某载体的EcoR I和BamH I之间加一个新的MCS（EcoR V－Kpn I－Xho I－Hind III）（这几个位点必须在目的 载体上没有，如果有这个切点，你又实在想用的话，可以将目的载体用这个酶单切，绿豆芽核酸 酶/s1核酸酶平端化，再自连——位点封闭）：1、合成 5‘－AATTC GATATC NNN GGTACC NNN CTCGAG NNN AAGCTT G-3'3'－G CTATAG NNN CCATGG NNN GAGCTC NNN TTCGAA CC TA G-5'EcoR I粘末端  EcoRV      Kpn I                  Xho I               Hind III    BamH I粘末端 ； （这里面有几个要点，合成时直接合成粘末端，省得再切，这样既省合成的钱，效率又高，如果你需要在改造后的载体继续使用原载体的连入切点，比如上面例子的EcoR I和BamH I，你像例子中一样可以合成完整的酶切位点粘末端，如果你不想使用它们，那就只合成粘末端，比如上面那个例子，应合成5-AATT GATATC ……和3’-CTATAG ……这样连接后，EcoR I切点就被封闭了；再有要注意考虑连入位点之间要留一定的间隔，因为靠着的两个酶是很难双切开的，有时候分步切都没用，因为留给酶结合的空间太小，没法结合l ，一般按照相邻两个酶的推荐保护碱基数中较大的数目留，万无一失啊）2、退火，如上；3、克隆，同上；4、检验，同上。测序，收工。突变可以考虑，但如果载体太长了，做点突变越不容易，一方面比较难延伸，另一方面，即使延伸了，其他点突变的几率也会比较大，但谁知道呢？有时候要靠一点运气。如果想突变也是可以。

一、试验原理细菌在葡萄糖代谢中生成丙酮酸，从丙酮酸开始，随细菌种类不同而有多种分解途径，有的使丙酮酸进一步分解，生成甲酸、乙酸、乳酸等终产物，有的可以使丙酮酸脱羧变为中性最终产物乙酰甲基甲醇（Acetylmethyl carbinol），亦称 3-羧基丁酮（Acetoin）。本试验即为检查某些细菌在葡萄糖代谢中是否产生乙酰甲基甲醇，作为鉴定依据。乙酰甲基甲醇在碱性环境中可被空气中的氧气氧化为丁二酮（Diacetyl），丁二酮与蛋白胨中精氨酸所含的胍基起作用，生成红色化合物，即为 V-P 试验阳性。肌酸或肌酸酐可供给比精氨酸更多的胍基，故有加快 V-P 试验出现阳性反应的作用。不加α-萘酚，至少要有 10PPm 的丁二酮才能出现阳性，加入α-萘酚可使 V-P 试验的灵敏度提高约 50 倍而不降低试验的特异性，其酒精液还有增强颜色的作用。在试验中，必须先加入α-萘酚，使其先与丁二酮和胍基复合物结合，然后才能加入 40% 氢氧化钾溶液，加入量不得超过 0.2 ml。若加入次序颠倒，氢氧化钾可与蛋白胨某些成分反应产生橙红色而造成假阳性。氢氧化钾作为氧化剂可加速乙酰甲基甲醇氧化为丁二酮，并有助于二氧化碳的吸收。二、试验结果判断三、注意事项牛肉浸汤不能用于本试验，因在肌肉浸出物中含有乙酰甲基甲醇、丁二酮以及其它干扰试验的物质，可造成假阳性。V-P 试验阳性菌偶尔也会不出现阳性反应，为避免这种情况，可将加有试剂的培养物于 50℃ 左右轻微加热，阳性菌即出现红色，而真正阴性菌仍保持原色。在通用培养基中，一般培养 1-3 天多数能出现阳性反应，培养时间过长，可因产酸而使 V-P 反应减弱或造成假阴性。一般来说，V-P 试验和甲基红试验多呈相反结果。但应注意，这也不是的，有少数细菌如蜂房哈夫尼亚菌（Hafnia alvei）和奇异变形杆菌有时两试验均出现阳性反应。本试验一般用于肠杆菌科各菌属的鉴别。在用于芽孢杆菌和葡萄球菌等其它细菌时，通用培养基中的磷酸盐可阻碍乙酰甲基甲醇的产生，故应省去或以氯化钠代替。关于 V-P 试验培养物的培养温度，一般多采用 35℃ 或 37℃，但日本有学者认为 37℃ 培养常使分解乙酰甲基甲醇的酶失去活性，故主张采用 28-30℃ 培养，夏季可培养于室温。已知有少数细菌，如哈夫尼亚肠杆菌，在 37℃ 培养的 V-P 试验结果常不稳定，需在 25-30℃ 培养，才能获得可靠结果。

抗体是免疫系统不可缺少的效应分子，抗体提供了直接和长效的保护以免感染，目前大多利用疫苗开发抗体。当 B 细胞遇到抗原，它们改变生理状态、位置，并且启动分化过程，最终产生抗体分泌细胞（Antibody-secreting cells, ASCs）。抗体分泌细胞是稀有的高度特异性细胞，代表了 B 细胞分化的最终阶段。抗体分泌细胞由短寿命循环再生的浆母细胞（plasmablasts, PBs）组成，这些浆母细胞产生于次级淋巴器官的免疫反应早期。长寿命的有丝分裂后浆细胞（plasma cells, PCs）驻留在次级淋巴器官中，并且特异性地定位在骨髓中。B 细胞和抗体在调节体液免疫方面具有必不可少的作用，而病原抗体同时也是某些由 ASCs 的恶性转化引起的自身免疫疾病的关键驱动因素，如系统性红斑狼疮、多发性骨髓瘤、浆细胞瘤。了解和控制 ASCs 的产生、成熟和长期存活的因素对于改善疫苗设计和确定靶向病原 ASCs 的机制至关重要。成熟的 B 细胞分为三种不同的亚群，滤泡 B 细胞（Fo Bs）、边缘区 B 细胞（MZBs）、B1 细胞，这些都有利于 ASC 细胞池和循环的血清抗体。边缘区 B 细胞和 B1 细胞是 B 细胞的特殊类型，它们主要独立于 T 细胞发挥作用。边缘区 B 细胞位于脾窦边缘的侧面，在那里与血源性抗原反应，而 B1 细胞定位于腹膜和胸膜腔中，在那里提供针对通过粘膜表面进入的病原体的早期防御线。在转录水平上，激活的 B 细胞成为抗体分泌细胞的分化需要数百个基因表达的协同改变。这些变化分为两大类：B 细胞相关转录本的丢失，以及抗体分泌细胞基因调控网络的获得。过去十年的研究表明了 B 细胞促进转录因子 PAX5、BCL6 和 BACH2 在维持 B 细胞生命中的作用，而另一组不同的三个因子—BLIMP1、IRF4 和 XBP1—则用于消除 B 细胞基因并激活抗体分泌细胞程序。B 细胞与抗体分泌细胞之间明确的转录区别是由这些主要调节因子之间的相互拮抗作用维持的，然而外源信号究竟如何发出，比如，对抗原和 T 细胞衍生的辅助分子 CD40L 和细胞因子调节这一过程我们仍然知之甚少。沃尔特和伊丽莎霍尔医学研究所和墨尔本大学的科研人员采用了 RNA-seq 技术和 BLIMP1-GFP 报告小鼠品系，可以在体内和体外鉴定所有的 ASCs，以提供 B 细胞终端分化动态特征的全面描述。研究数据支持了 ASC 转录信号的由来，完善了对不同来源的成熟 B 细胞、激活刺激、定位、细胞分裂史、组蛋白编码和 ASC 成熟如何影响这一至关重要的生物学过程的描述。这一分析同时发现了多种新的 B 细胞和 ASC 分化和特异性的潜在调节因子。终末分化是一个不可逆的过程，导致特异性细胞获得相应的功能，常常在细胞周期中结束这一过程。在 B 细胞中，至少有三个不同的成熟细胞亚群经过终末分化成为抗体分泌浆母细胞和浆细胞。这些细胞分泌同型和具有亲和力的抗体，存在于体内某些部位，具有明显不同的生命周期。尽管存在这些表型差异，研究数据显示，研究中调查的所有的 ASC 共有一个普遍的转录信号，不同于所有 B 细胞亚群的转录信号。对 ASC 转录信号分析表明，新表达基因的主要功能类编码蛋白涉及免疫球蛋白的转录、翻译、胞内运输和糖基化修饰。该数据极大程度上证实了已知的 B 细胞、GC B 细胞和 ASC 命运驱动因子的特异性表达模式，但是这些数据也同样鉴定了一些具有平行表达模式的其他转录调节因子。从经历了特定分裂次数的细胞中收集了转录数据，证实在每个细胞周期中，活化的 B 细胞获得与 ASC 更加近似的转录程序。观察到的与 B 细胞分化为 ASC 有关的明显的转录变化同样被证明在核染色质中同时改变。在人类 B 细胞中，含有超级增强子的基因包括这些编码 PAX5, BACH2, IRF8 和 c-MYC 的基因，它们在终末分化过程中都被强烈下调。与此相反，多发性骨髓瘤与一些 B 细胞超级增强子的不适当维持相关，包括与 MYC 相关的区域。与此相一致，研究中发现，在 ASC 分化过程中沉默的那些基因含有丰富的超级增强子基因，表明这是一个使 ASC 形成的关键过程。研究中确定了许多成熟的 B 细胞群的转录组和小鼠浆细胞分化的阶段；提供了分泌抗体细胞的转录信号，强调了 B 细胞与浆细胞之间明显的转录划分，并能够在位置和成熟度的基础上划定 ASC。基因表达的改变与细胞分裂史和宽松的组蛋白修饰相关，其中包含多种之前未涉及 B 细胞分化的调节因子。这些结果突出并扩展了指导 B 细胞终末分化和抗体产生的核心程序。  

细胞凋亡的形态学检测1 光学显微镜和倒置显微镜(1) 未染色细胞:凋亡细胞的体积变小、变形,细胞膜完整但出现发泡现象,细胞凋亡晚期可见凋亡小体，贴壁细胞出现皱缩、变圆、脱落.(2) 染色细胞:常用姬姆萨染色、瑞氏染色等.凋亡细胞的染色质浓缩、边缘化,核膜裂解、染色质分割成块状和凋亡小体等典型的凋亡形态.2 荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜一般以细胞核染色质的形态学改变为指标来评判细胞凋亡的进展情况.常用的DNA特异性染料有:HO 33342 (Hoechst 33342),HO 33258 (Hoechst 33258), DAPI.三种种染料与DNA的结合是非嵌入式的,主要结合在DNA的A-T碱基区.紫外光激发时发射明亮的蓝色荧光.Hoechst是与DNA特异结合的活性染料,储存液用蒸馏水配成1mg/ml的浓度,使用时用PBS稀释,终浓度为10 ug/ml.DAPI为半通透性,用于常规固定细胞的染色.储存液用蒸馏水配成1mg/ml的浓度,使用终浓度一般为10 ug/ml.结果评判:细胞凋亡过程中细胞核染色质的形态学改变分为三期:Ⅰ期的细胞核呈波纹状(rippled)或呈折缝样(creased),部分染色质出现浓缩状态;Ⅱa期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化;Ⅱb期的细胞核裂解为碎块,产生凋亡小体3 透射电子显微镜观察结果评判:凋亡细胞体积变小,细胞质浓缩.凋亡Ⅰ期(pro-apoptosis nuclei)的细胞核内染色质高度盘绕,出现许多称为气穴现象(cavitations)的空泡结构Ⅱa期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化;细胞凋亡的晚期,细胞核裂解为碎块,产生凋亡小体.

       安乃近解热作用显著、镇痛作用强、作用出现快、但副作用太多，临床应用逐渐减少,但是有些地方还是在用的,下面就有小编为您详细介绍一下安乃近临床表现上的不良反应有哪些吗?      安乃近（诺瓦经、罗瓦尔精）为氨基比林与亚硫酸钠的化合物，有解热镇痛、抗风湿作用，作为解热镇痛药用。急性致死量为5～10g。本药中毒可使中枢神经系统先兴奋后抑制，对胃肠道有刺激作用及肝、肾功能损害，也可引起过敏反应。临床表现不良反应表现如下：1.皮肤皮疹、荨麻疹，甚至发生出血性皮疹、大疱性表皮松解性药疹、剥脱性皮炎等。注射部位红肿、疼痛，可产生肌肉挛缩和关节障碍。2.消化道 可有腹痛、腹泻、胃及十二指肠溃疡、穿孔及上消化道出血。3.肝、肾脏 可有黄疸、转氨酶升高；蛋白尿、管型尿、血尿及肾功能异常等。4.血液系统 可引起粒细胞减少、血小板减少性紫癜、再生障碍性贫血。治疗安乃近中毒的治疗要点为：催吐、洗胃及导泻及相应治疗措施：1.皮肤病变，可予抗组胺药物及糖皮质激素治疗。2.上消化道出血或胃、十二指肠溃疡应给予止血剂、胃黏膜保护剂、制酸剂等。3.肝肾功能损害，采取保护肝、肾功能治疗。4.血液系统改变，可给予升白药物及糖皮质激素等。5.对症、支持治疗：止痛、消炎、控制感染等

      左氧氟沙星具有广谱抗菌作用，抗菌作用强，对多数肠杆菌科细菌，如大肠埃希菌、克雷伯菌属、变形杆菌属、沙门菌属、志贺菌属和流感嗜血杆菌、嗜肺军团菌、淋病奈瑟菌等革兰阴性菌有较强的抗菌活性。对金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、化脓性链球菌等革兰阳性菌和肺炎支原体、肺炎衣原体也有抗菌作用，但对厌氧菌和肠球菌的作用较差。那么您了解左氧氟沙星都适用于哪些症状吗?下面就有小编为您详细列举一下哦! 适用于敏感菌引起的：1．泌尿生殖系统感染，包括单纯性、复杂性尿路感染、细菌性前列腺炎、淋病奈瑟菌尿道炎.2．呼吸道感染，包括敏感革兰阴性杆菌所致支气管感染急性发作及肺部感染。3．胃肠道感染，由志贺菌属、沙门菌属、产肠毒素大肠杆菌、亲水气单胞菌、副溶血弧菌等所致。4．伤寒。5．骨和关节感染。6．皮肤软组织感染。7．败血症等全身感染。8．慢性支气管炎。    左旋氧氟沙星已于1993年在日本上市。该药治疗呼吸道感染、泌尿生殖系感染和皮肤软组织感染等取得良好疗效。其中治疗急、慢性下呼吸道感染的有效率和细菌清除率达80%～100%，对嗜血流感杆菌、卡他摩拉菌、金葡菌和肺炎球菌的清除率高，而对绿脓杆菌的清除较差。对复杂性和单纯性尿路感染的有效率和细菌清除率亦为80%～100%。治疗皮肤软组织感染的有效率为80%～91%、对甲氧西林敏感葡萄球菌的清除率接近90%。治疗妇产科、耳、鼻、喉等感染的有效率亦在90%左右。  葡萄球菌属、肺炎球菌、化脓性链球菌、溶血性链球菌、肠球菌属、消化性链球菌属、淋球菌、布拉汉氏卡他菌、痤疮丙酸杆菌、大肠杆菌、柠檬酸菌属、沙门氏菌属（除外伤寒杆菌和副伤寒菌）、志贺氏菌属、克雷白氏杆菌属、肠菌属、沙雷氏菌属、变形杆菌属、霍乱孤菌、绿脓杆菌、流感嗜血杆菌、不动杆菌属、弯曲杆菌属、沙眼衣原体之中，对本剂敏感菌所引起的下述感染症。 1.肺炎、慢性支气管炎、弥漫性细支气管炎、支气管扩张症（感染时）、慢性呼吸系统疾病的继发性感染.2.咽喉炎、扁桃体炎（扁桃体周围炎、扁桃体周围脓肿）急性支气管炎-肾盂肾炎、膀胱炎、前列腺炎、副睾丸炎、淋球菌性尿道炎、非淋球菌性尿道炎。3.子宫内感染、子宫颈炎、子宫附件炎、前庭大腺炎.4.毛囊炎（包括脓疱性痤疮）、疖、疖肿症、痈传染性脓疱病、丹毒、蜂窝组织炎、淋巴管（结）炎、化脓性甲周炎（包括瘭疽）、皮下脓肿、汗腺炎、集簇性痤疮、感染性粉瘤、肛门周围脓肿.5.乳腺炎、外伤、烫伤及手术伤口等（表浅性）继发性感染.6.胆囊炎、胆管炎.7.外耳道炎、中耳炎、副鼻窦炎、化脓性、唾液腺炎。8.眼睑炎、麦粒肿、泪囊炎、结膜炎、睑板腺炎。9.细菌性血痢、感染性肠炎、沙门氏菌肠炎、霍乱。10.牙周组织炎、牙冠周围炎、颌炎  关于左氧氟沙星主要治疗哪些症状,您记住了吗?是不是再也不会在得了慢性支气管炎 呼吸道感染等病症时,手足无措了,但是您同时也要记住对左氧氟沙星敏感所引起的感染症,这样才会给您的健康减少不必要的负担.

磷脂酰丝氨酸(PS)，被誉为继胆碱和“脑黄金”DHA之后的一大新兴的“智能营养素”。专家认为，这种天然物质能够帮助细胞壁保持柔韧性，并且能够增强传送大脑信号的神经递质的效率，帮助大脑高效运转，激发大脑的活化状态。具体来说，磷脂酰丝氨酸有以下功能。(1)提高学生成绩。曾有人专门测试了磷脂酰丝氨酸缓解精神压力的效果，试验采用了双盲、安慰剂对照，连续30天，每天给予健康大学生300毫克磷脂酰丝氨酸。大学生必须在给定时间内完成具有一定难度的数学测试，并记录他们面对压力的反应。结果发现，使用磷脂酰丝氨酸的学生在反应力、自信和表现方面均好于对照组，他们在考试中的成绩也更好。一项研究针对120名重庆巴蜀中学高三年级学生的研究还发现，服用强化磷脂酰丝氨酸的学生，经过40天后，其语言和非语言的记忆力都有显著提高。 (2)提高大脑机能，集中注意力，改善记忆力。欧美涌现出大量对磷脂酰丝氨酸的荟萃分析(荟萃分析指对某个问题所做的多个独立研究结果进行系统的定量或定性的综合)，其主要目的是将以往的研究结果更为客观地综合反映出来。有人分析了9个双盲、安慰剂对照、共1224例患者参与的临床试验，结果显示，补充磷脂酰丝氨酸后，关于认知和记忆的参数得到显著改善。毫无疑问，补充磷脂酰丝氨酸可以提高长期记忆、长期认知以及自由谈吐和逻辑性发言能力。随着年龄的增长，磷脂酰丝氨酸和其他重要的脑内化学物质会逐渐减少，从而导致记忆力、认知力减弱。补充磷脂酰丝氨酸能增加脑突刺数目、脑细胞膜的流动性及促进脑细胞中葡萄糖代谢，从而使脑细胞更活跃，促进注意力集中，提高警觉性和记忆力。意大利、斯堪的纳维亚半岛和欧洲其他国家都广泛应用磷脂酰丝氨酸补充剂来治疗衰老引发的认知障碍症及老年记忆损失。  (3)帮助修复大脑损伤。磷脂酰丝氨酸是脑部神经的主要成分之一，可营养和活化脑中各种酶的活性，能延缓神经递质的减少进程，有助于修复、更新大脑受损细胞和清除有害物质。它可以使老年人的记忆力恢复到14年前的水平，研究显示，食用磷脂酰丝氨酸12周后，66岁的人拥有了52岁人的记忆力。 (4)缓解压力，促进用脑疲劳的恢复、平衡情绪。多项研究表明，磷脂酰丝氨酸能显著降低工作紧张者体内过多的应激激素的水平，减轻压力，缓解脑部疲劳;磷脂酰丝氨酸还可作用于大脑内影响心情的神经递质水平，可以促进注意力集中、提高警觉性和记忆力，帮助缓解不良情绪(如抑郁、沮丧等)。除此之外，磷脂酰丝氨酸和DHA可以相互促进吸收，对神经 2 A细胞起到保护作用 。丰富的磷脂酰丝氨酸可以增加细胞膜的流动性，促进智力的发育。磷脂酰丝氨酸和DHA一起可以保护中枢神经系统，促进胎儿智力发育。研究表明，磷脂酰丝氨酸之所以能够增强人的智力，主要原因在于它能够迅速穿过血脑屏障，进入大脑。在脑部起到舒缓大脑毛细血管平滑肌细胞，增加脑部供血的作用。所以近几年有很多针对脑卒中方面的产品都以PS作为原料。 

细菌分离纯化：无菌采集肝脏划线接种于麦康凯琼脂培养基，伊美兰琼脂培养基中，37℃恒温培养12-24h，用普通培养基进行纯化培养；细菌形态特征：无菌挑去上述纯化培养菌，革兰氏染色镜检电镜观察：FQ-180菌液培养7h后，3000r/min离心5min，弃上清，ddH2O洗涤2次重悬，取15ul滴在Formver膜覆盖在铜网上，2min后滴加磷钨酸负染2min，待铜网烘干后，在投射电子显微镜下观察生化试验：将初步分离到的可疑菌落进行吲哚试验，MR试验，VP试验，淀粉E试验，枸橼酸钠利用试验，乳糖、麦芽糖、蔗糖、木糖、葡萄糖、甘露糖、甘露醇发酵试验，产硫化氢试验，尿素酶试验，触酶试验，运动性试验，三塘铁斜面穿刺试验（或用ATB全自动生化鉴定系统和ID32E肠道菌鉴定试剂条进行生化试验）药敏试验：按照美国临床检验标准委员会（NCCLS）推荐的标准K-B纸片法进行实验操作和结果判断（所采用的抗生素见图1）血清型鉴定：采用玻板凝集反应对分离株进行血清型鉴定，先用多因子血清通过玻板凝集试验筛选可能的血清型，然后再与大肠杆菌单因子血清各10ul在玻板上混匀，30S内出现明显凝集者为阳性反应，同时以菌液与0.5%碳酸生理盐水混合物作对照，观察有无自凝现象PCR鉴定：将分离纯化后的菌株按照煮沸法制备细菌DNA模板，以大肠杆菌phoA基因的特异性引物进行PCR鉴定毒力基因与耐药性的关系：根据药敏试验的结果，针对药敏性较为普遍的抗生素的耐药基因情况，找出其规律，并研究独立基因与耐药性的关系，然后采用多重PCR方法检测耐药基因，如4种氨基糖苷类耐药基因aadA1，aac2，aac4，aphA3；3种四环素类耐药性基因tetA，tetC以及tetM的流行情况提取DNA及16s rDNA鉴定：提取细菌基因组DNA，并使用16s rRNA Bacterial      Identification PCR kit的特异性引物进行扩增，最后进一步对PCR扩增的DNA克隆、测序并开展序列分析致病性试验：参照A.E.Williams等方法，设置16组试验组，1组阴性对照，实验组每株菌攻毒4只小组，按0.2ul/只腹腔注射菌液浓度为1*109ef/ml，对照组4只小鼠注射等剂量的生理盐水，观察发病及死亡情况，无菌采集死亡小鼠肝脏、心脏进行分离鉴定鸡胚致死试验：将待测大肠杆菌分别划板，挑去平板上的单菌落，与LB液体培养基中37度摇床过夜培养，然后离心，经PBS洗2次，并用PBS悬液进行倍比稀释，取0.1ml稀释液经尿囊腔接种12日龄SPF鸡胚大约100-300CFU/只，每组10只，同时取0.1ml稀释液涂板，做细菌计数，对照分两组，一组直射PBS，一组不注射，计每日死亡数，质4d，计胚胎致死率病毒分离：收集病样加入青霉素（终浓度1000U/ml）和链霉素（终浓度1000U/ml），于4℃作用4h以上，取0.2ul接种于9-10日龄鸡胚羊膜腔，37℃培养72h，4℃过夜后收集羊水，每份样品接种3枚鸡胚，采集的羊水用1%鸡红细胞进行血凝试验，判断病毒是否成功分离，如果标本呈阳性，采用血凝抑制试验进一步坚定，标本呈阴性则继续自传3代

糖化血红蛋白(GHb)是红细胞中的血红蛋白与血清中的糖类相结合的产物。它是通过缓慢、持续及不可逆的糖化反应形成，其含量的多少取决于血糖浓度以及血糖与血红蛋白接触时间，而与抽血时间、患者是否空腹、是否使用胰岛素等因素无关。因此，GHb可有效地反映糖尿病患者过去1～2个月内血糖控制的情况。GHb由HbA1a、HbA1b、HbA1c组成,其中HbA1c约占70%,且结构稳定,因此被用作糖尿病控制的监测指标。正常参考范围1.正常值HbA1c采用亲和色谱或高效液相色谱测定，正常值为4%～6%。2.影响因素（1）参考值随年龄增大有一定增加。（2）高脂血症标本可使结果偏高。（3）实验室温度、试剂的离子强度、pH可对测定结果有一定影响。控制目标:HbAlc的控制范围应因人而异，不能一概而论。中华医学会内分泌学分会在2011年发布了《中国成人2型糖尿病HbAlc控制目标的专家共识》，根据患者的年龄、糖尿病并发症、伴发病、治疗方案等因素给出了不同的目标值。中国成人2型糖尿病HbA1c控制目标值HbA1c 水平适应人群新诊断、年轻、无并发症及伴发疾病，降糖治疗无低血糖及体重增加等不良反应；无须降糖药物干预者；糖尿病合并妊娠；妊娠期发现的糖尿病15年；胰岛素治疗的糖尿病患者计划妊娠≤7.5%已有心血管疾病者或心血管病极高危者≥65岁，预期生存期5～15年≥65岁，或患恶性肿瘤，预期生存期

提到阿司匹林，相信大家并不陌生，近年来，科学家们通过研究发现了阿司匹林的许多“神奇”的用途，不过最近又有科学家研究发现，阿司匹林的药效可没那么简单。今天我们就盘点一下它的那些“神”作用。1、镇痛作用主要是通过抑制前列腺素及其他能使痛觉对机械性或化学性刺激敏感的物质(如缓激肽、组胺)的合成，属于外周性镇痛药。但也不能排除中枢镇痛的可能性。对慢性钝痛有效，而对急性锐痛和剧痛无效。2、解热作用可使发热病人体温下降，但是对正常体温无影响，可能通过作用于下视丘体温调节中枢引起外周血管扩张，皮肤血流增加、出汗、使散热增加而起解热作用，此种中枢性作用可能与前列腺素在下视丘的合成受到抑制有关。3、抗炎、抗风湿其抗炎作用机制尚不太清楚，可能由于其作用于炎症组织，通过抑制前列腺素或其他能引起炎性反应的物质（如组胺）的合成而起抗炎作用。关于其抗风湿，主要是因为它具有解热镇痛和抗炎作用。4、抗血小板聚集阿司匹林通过抑制血小板的前列腺素环氧酶、从而防止血栓烷A2的生成而起到抗血小板聚集的作用。5、用于川崎病患川崎病的患儿应用阿斯匹林，目的是减少炎症反应和预防血管内血栓的形成。6、用于糖尿病阿司匹林可能有促进内原性胰岛素分泌及肝糖元合成，抑制肠道对糖的吸收和促进组织对糖的摄取而起到降低血糖作用。7、用于阿尔茨海默病（老年痴呆症）据研究发现，经常服用阿斯匹林的老年人患老年痴呆和认知障碍的危险性明显降低。小剂量阿司匹林可以减少老年痴呆症恶化。这是因为阿司匹林具有增强脑血流量，防止血液凝固的作用。8、降低胃肠道恶性肿瘤发病率及死亡率研究表明，PGE2与肿瘤发生发展及转移关系极为密切，随肿瘤生长其水平逐渐增高，阿司匹林能降低PGE2水平，抑制肿瘤生长和转移。肿瘤组织合成TXA2增加，阿司匹林对防止肿瘤病人的高凝状态显然有意义，且有抗肿瘤转移作用。阿司匹林治疗5年或以上：胃肠道癌症20年死亡风险降低35%。9、用于男性避孕人精液中含13种PG，总量达300mg/ml有利于精子的运行和受孕，阿司匹林可使精液中PG浓度降低，导致精液中出现较多畸形精子，运行不畅而起到降低受孕的概率。10、降低耳毒性抗生素对听力损害动物实验研究表明,在使用氨基糖苷类抗生素时,合用阿司匹林会减少听力损害的发生。氨基糖甙类抗生素进入人体后,与体内铁元素结合形成自由基,自由基它能损伤毛细胞。毛细胞一旦受损,内耳就会丧失探测声音的功能,从而造成永久性听力丧失。阿司匹林被分解为水杨酸盐,它能阻止自由基的形成，从而减少抗生素所致耳聋的发生。11、治疗胆道蛔虫口服吸收后，自胆汁排泄，使胆道环境改变，蛔虫厌酸而退出胆道。12、先兆子痫先兆子痫患者胎盘组织和血小板比正常妊娠者全盛显着增多的TXA2，而胎盘，脐带PGI2及尿中排出PGI2代谢物则减少，正常的PGI2/TXA2平衡被破坏。因此用小剂量APC恢复此平衡，可望预防或治疗该病。13、女性不孕和习惯性流产阿司匹林可抑制PG合成，可用于治疗由于PG增高所至的习惯性流产和不孕症，因为体内PG增高可促进输卵管蠕动加强，破坏受精卵与子宫内膜的同步作用，增加了子宫收缩力，使卵巢黄体分泌孕酮降低而影响受精卵的着床。14、老年性白内障英《医学新闻》第244卷第23期报道:在芝加哥美国眼科科学院召开的会议上,耶鲁大学附属医学院的眼科学教授戈特勒研究发现阿司匹林对老年性白内障的病程发展可能有一些延缓的作用。可使本病形成推迟10年，可减少45%或更多的患者免于手术。其确切抑制机制临床应用等问题有待进一步研究。有研究认为白内障患者血浆中色氨酸含量增高致晶体中醛糖还原糖活性增高，而阿司匹林不仅可抑制醛糖还原酶活性，还可降低血浆中色氨酸的含量，故认为阿司匹林至少可减缓白内障的发生。结语上面说了阿司匹林这么多用途，其实关于它的新用途研究还有很多。但是目前临床上主要还是用来抗血小板聚集，其次解热、镇痛，还有用于川崎病等。其它有些功能还处于研究阶段，还没有大范围用于临床。

牛血清是一种成分复杂的混合物，其大部分成分已为人所知，但还有一部分仍不清楚，而且血清的组成及含量通常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而存在差异。牛血清主要成分有以下几类。  蛋白质类 包括白蛋白、球蛋白、α-巨球蛋白（抑制胰蛋白酶的作用）、胎球蛋白（促进细胞附着）、转铁蛋白（能结合铁离子，减少其毒性和被细胞利用）、纤维粘连素（促进细胞附着生长）等； 多肽类 主要是一些促进细胞生长和分裂的生长因子，最主要的生长因子是血小板生长因子，还有成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子、神经细胞生长因子等，虽然在血清中含量很少，但对细胞的生长和分裂也起着重要作用； 激素类 激素对细胞的作用是多方面的。包括： 胰岛素：促进细胞摄取葡萄糖和氨基酸，与促细胞分裂有关； 类胰岛素生长因子：能与细胞表达的胰岛素受体结合，从而有胰岛素同样的作用： 促生长激素：促进细胞增殖的效应； 氢化可的松：血清中含有微量该成分，它可能具有促细胞贴附和增殖作用。但有人证明，血清中 的氢化可的松，在细胞密度较高时可能有抑制细胞生长和诱导细胞发生分化的作用。 其他成分 如氨基酸、葡萄糖、微量元素等。在合成培养基中这些成分的作用并不明显，与蛋白相结合的微量元素对细胞生长起促进作用。

      对于很多做elisa实验的科研人来说，都会遇到很多问题，那么elisa试剂盒都要注意哪些细节？elisa试剂盒加班的时候会产生气泡，那么应该如何处理？下面由远慕生物亲自为您解答：ELISA试剂盒使用需要注意的细节：（1）不管是试剂盒，还是其它产品，在使用之前都要仔细阅读说明书，同时确定试剂盒是不是在有效期内。（2）标本制备要规范，每份标本体积要按2-3个复孔以上的量制备（贮存），尽量分装做备份，短期内无法实验者，注意低温保存。（3）根据检测标本数量确定所需试剂盒的量。（4）按说明书将所用试剂盒平衡至室温，配制所需试剂盒，DIY夹心法ELISA常见技术指南。（5）选择抗体时最好选择一个单抗和一个多抗进行配对，若选择两个单抗，必须识别不同表位的抗体，最好从同一家公司选择抗体。（6）若使用过氧化物酶作为显色系统，应严禁在洗液和稀释液中加叠氮钠，叠氮钠可抑制过氧化物酶的活性。（7）当测定混合液体中的抗原时，如血清，建议在标本稀释液中加不相干的Ig。（8）准备好所有实验额外所需物品，如试管、吸头、移液器、离心机等。 ELISA试剂盒加板时产生气泡的处理办法：A、使用吹风机，将吹风机打开，并调节到最高温度，对96孔板吹1-2秒就可以了。B、采用更好材质的板、或采用专门的96孔板振荡器。C、可以用tip吸走，但实验中费事、效果还不是很理想。D、使用注射器针头扎破。

中文名称:硫酸卡那霉素英文名称:kanamycin acid disulphatecas:25389-94-0纯度：＞99%包装信息：1kg;5kg;25k分子式: c18h38n4o15s分子量:582.58einecs号: 246-933-9储存条件：2-8°c性状：本品为无色至微带黄色或黄绿色的澄明液体主要用途1、用于治疗食道炎、胃窦炎、细菌性痢疾及消化道感染2、生化研究3、生物技术的应用，以抑制蛋白质的合成。用于转化细胞用卡那霉素b（neor，kanr表型）抗性基因作为选择剂。作用:       本品为氨基糖甙类广谱抗生素，抗菌谱和新霉素相似。主要对革兰阴性菌如大肠埃希菌、克雷伯菌属、变形杆菌属、肺炎杆菌、产气肠杆菌及志贺菌属等引起的严重感染，对耐药性金葡菌也有良好的抗菌作用。临床上主要用于敏感菌所致的肺部感染、尿路感染、胆道感染败血症及腹腔感染等，后两者常与其它抗菌药联合应用。也可用于对其它抗生素耐药而对本品敏感的金葡菌感染。对结核病的治疗，本品可作为第二线药物。原理：       本品主要与细菌核糖体30s亚单位结合，抑制细菌蛋白质合成。近年来耐药菌株显著增多，由于某些细菌产生氨基糖苷类钝化酶，使之失去抗菌活性。卡那霉素与链霉素、新霉素有完全交叉耐药，与其他氨基糖苷类可有部分交叉耐药。 本品主要与细菌核糖体30s亚单位结合，抑制细菌蛋白质合成。剂量与服用:1. 成人常用量 肌内注射或静脉滴注，一次0.5g，每12小时一次；或按体重一次7.5mg/kg，每12小时一次，成人每日用量不得超过1.5g，疗程不易超过14天。50岁以上患者应适当减少。2. 小儿常用量 肌内注射或静脉滴注，按体重一日15-25mg/kg，分两次给药。3. 肾功能减退时用量 肌酐清除率50-90mg/min时用正常剂量的60-90%，每12小时一次（正常剂量为每次7.5mg/kg，每12小时一次）；肌酐清除率10-50mg/min时用正常剂量的30-70%，每12-18小时一次；肌酐清除率不良反应:1. 本品毒性较大，主要毒性是对第八对颅神经的毒性。2. 肾脏毒性，常可引起轻度蛋白尿、管型尿及尿中出现少量红细胞、白细胞，偶可引起血尿素氮升高。3. 神经毒表现是肌肉神经阻滞，可致呼吸麻痹、感觉麻木、视觉异常等。4. 过敏反应，可有斑丘疹、药物热、皮肤瘙痒、嗜酸性粒细胞增多等。5. 忌与碱性药物配伍，因可增加毒性。与碱化尿液药物同用可增强本品在泌尿系统的抗菌活性，但毒性亦增加，因此剂量必须相应减少。6. 一般疗程不宜超过2周，肾功能减退者慎用。对老年病人应减少剂量。

      DEAE纤维素，它采用平均粒径为50μm的颗粒型亲水高分子聚合物，表面又用大分子糖链接枝，使它有更高的比表面积和更好的生物兼容性，它在高流水下保持更高载量，同时又具有更好的分辨率。由于比表面积大，平衡和洗脱的时间也更短。它经过接枝即使是纯化病毒，质粒等超大分子的物质，载量基本保持不变。本产品物理和化学稳定性好，使用寿命长，操作方便。那么，在应用过程中有哪些注意事项呢？ 应用的注意事项： 1) 色谱柱装填1、所需要用到的材料的温度要与色谱操作的温度一样，液体最好做脱气处理。填料可直接称量需要的量用缓冲液溶涨一小时装柱即可. 2、在柱子下端加入20%乙醇，以除去柱子中的空气，关闭柱子出口，在柱内保留少量的20%乙醇。20%乙醇容易产生气泡，可以在里面加1%吐温避免气泡产生。也可以换成纯水装柱子，但是需要把填料中的20%乙醇也换成纯水，具体的方法取需要体积的填料在抽滤漏斗上进行，也可以小心倾去填料上的20%乙醇，再换成5倍体积的纯水，反复沉淀去上清，5次左右就可以用于装柱子。3、此填料颗粒比较细，所以一定要注意柱子要选择合适的筛网，不能漏，也可以取点填料加到筛网上试试，如果没有问题再将填料连续倒入柱子时，要用玻璃棒的紧靠柱子内壁引流，以减少气泡的产生，让填料先自然沉降到填料体积不再变化，而填料和上面的液体很好分层，上层溶液完全澄清，就可以开泵用适当的流速压柱子，填料体积不再变化后，再把转换头紧顶在填料上就可以平衡柱子使用。使用的流速要小于装柱子的流速。4、在装柱子前，填料从冰箱中取出至少要室温放置2-3个小时，这样避免装柱子时由于温度变化而使柱子中产生气泡。2) 蛋白的结合    样品的盐浓度和pH要尽量和平衡柱子的缓冲液一致，盐浓度过高或者pH带低也许挂不上，所以要根据自己的样品做适当调整。3) 蛋白的洗脱    这个填料如果采用线性梯度洗脱，柱子的直径和高度比最好是大于10，数值越大越有利于分离，而且样品最好别上太多，可以按约10mg/ml上样，如果采用阶段洗脱的方法，装短粗柱子就可以，上样量也没有限制。阶段洗脱容易放大，重复性好，如果洗脱条件好完全可以得到和线性梯度一样或者更好。采用什么方法完全根据自己需要。 

第一、中性蛋白酶简单介绍　　中性蛋白酶是由枯草芽孢杆菌经发酵提取而得的，属于一种内切酶，可用于各种蛋白质水解处理。在一定温度、PH值下，本品能将大分子蛋白质水解为氨基酸等产物。　　第二、中性蛋白酶主要功效作用　　中性蛋白酶(Neutral protease)是一类最适作用pH位于6.0-7.5之间，分子量为35000-40000，等电点为8-9。其作用条件温和，根据来源可分为霉菌中性蛋白酶，细菌中性蛋白酶等。　　中性蛋白酶是最早发现并广泛应用于工业化生产的蛋白酶制剂，可用于焙烤食品工业中、阿斯巴甜的合成、蛋白水解物苦昧的去除，大米深加工领域以及医药治疗等领域，目前，国内外关于中性蛋白酶的研究也相当多。　　第三、中性蛋白酶用途及保存　　质量标准：中性蛋白酶9068-59-1符合国家标准、企业标准及相关标准。　　检测方法：高效液相色谱法(HPLC≥98%)。　　用途：用于蛋白质及多肽等的合成，广泛应用于医药、生物化学、食品、化妆品等多种产品合成中。　　运输：本品为生化试剂，不能与有毒、有害物品混运，可按一般化学品运输。　　贮存：防止日晒、雨淋，应贮存在干燥清洁避光的环境中，严禁与有毒物质混放，以免污染。

    ELISA试剂盒在国内有许多种叫法，例如：ELISA检测试剂盒、ELISA Kit、酶联免疫试剂盒、酶联免疫吸附测定试剂盒、酶联免疫分析试剂盒、酶免试剂盒等，比较常见的叫法是ELISA检测试剂盒、酶联免疫吸附测定试剂盒等。到底是进口试剂盒好还是国产试剂盒好？下面远慕生物为您详细解答!   目前国内的的试剂盒质量已经很成熟了，进口的东西只是消费者心理比较容易得到满足，其实用起来效果是差不多的，进口原装的试剂盒的价格是国产试剂盒的好几倍，国内的技术水平还是比较尖端的。    二、测试注意事项：    1、实验严格按照说明书的操作进行，实验结果判定必须以酶标仪读数为准。    2、酶标包被板开封后如未用完，应立即装入密封袋中加干燥剂保存。    3、建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测，取平均值，以减小实验误差。    4、试剂盒保质期内使用，不同批号的试剂不得混用。    elisa质量保证是一个复杂的过程，许多重要的环节都影响到检测的质量：    三、标本复查    ELISA手工检测过程复杂，影响因素较多，即使室内质控在控，也可能因孔间差异而造成结果的差异，因此加大复查力度是保证结果准确性的可靠方法，比如对HBsAg、HBeAg、HCV-Ab、HIV-Ab、TP-Ab等项目的可疑、弱阳性标本及少见模式的检测结果进行复查。    四、结果判断和报告    常用下列几种方法表示结果：    1.定性测定    2.半定量测定结果一般以滴度表示。    3.定量测定即用已知量的标准品作一系列稀释后进行ELISA测定，绘制标准曲线，结果以绝对量或单位表示。在ELISA定量检测中每一块反应板都必须绘制相应的标准曲线。    4.结果报告以上作为参考.

中文名称:靛蓝胭脂红, 高纯生物染色剂英文名称:Indigo carMine, high purity biological stainCAS:860-22-0纯度：95.0%(E)包装信息：100G,25G分子式: C16H8N2Na2O8S2分子量: 466.35EINECS号:212-728-8储存条件:Store below +30°C.化学性质:深绿色粉末或颗粒。溶于水，微溶于乙醇。鉴别实验：溶解性 溶于水；难溶于乙醇。按OT-42方法测定。色素鉴别试验 按OT-16方法测定。主要用途：1、用于食品、医药和日用化妆品的着色。食用靛蓝为食用合成色素。食用色素是用于食品着色的一类添加剂，包括合成色素和天然色素，总数逾60种。2、用于氧化剂还原指示剂及生物染色剂，也用于肾功能的测定3、食品蓝色素。一般用于调色。因其较不稳定，牢度低，染色性弱，最适宜于深色调。可调制成巧克力色、绿色、赤豆色、茶色、咖啡色。用于糕饼、冷饮、清凉饮料，用量5～100mg/kg。4、作食品着色剂，我国规定可用于红绿丝中，最大使用量为0.20g/kg；在果汁(味)饮料类、碳酸饮料、配制酒、糖果、糕点上彩装、染色樱桃罐头(系装饰用)、青梅中，最大使用量0．10g/kg；在浸渍小菜中最大使用量为0.01g/kg。5、氧化还原指示剂。检验牛奶的硝酸盐和氯酸盐的试剂。生物染色剂，如尼基氏小体、细胞核的染色。肾功能的测定等。生产方法: 1、蓝制备食用靛蓝实际上是靛蓝二磺酸二钠，由靛蓝用浓硫酸磺化，磺化结束后用水稀释，再用纯碱中和，最后加入氯化钠盐析，经过滤、水洗、干燥得成品。靛蓝铝色淀制备由氯化铝、硫酸铝等的铝盐与碳酸钠等的碱类制取氢氧化铝，然后添加于靛蓝水溶液，沉淀而得产品。2、用浓硫酸或与少量发烟硫酸合用，使靛蓝。磺化后，用水适量稀释，经碳酸钠或氢氧化钠中和，以硫酸钠或氯化钠盐析，再经精制而得。3、由靛蓝粉经浓硫酸磺化后，加水稀释，用碳酸钠中和，再经盐析，精制而得。每吨产品消耗靛蓝粉（100%）210kg。4、由双二甲基氨基二苯基甲醇与2-羟基萘-3，6-二磺酸，于浓硫酸存在下，失去一分子水缩合成无色母体，在弱酸溶液中用二氧化锰氧化成三芳基甲烷色素。二苯基甲醇系由二氧化锰和硫酸氧化四烷基二氨基二苯基甲烷而得。可直接使用其离心分离的滤饼进行缩合。二氧化锰系由硫酸锰与高锰酸钾在碳酸钠溶液中新鲜制备而得。

1、细胞或组织加Trizol后，室温放置5min，使其充分裂解。注：此时可放入-70℃长期保持。 2、12,000rpm 离心5min，弃沉淀。 3、按200ul氯仿/ml Trizol加入氯仿，振荡混匀后室温放置15min。注：禁用漩涡振荡器，以免基因组DNA断裂。 4、4℃ 12,000g离心15min。 5、吸取上层水相，至另一离心管中。注：千万不要吸取中间界面；若同时提取DNA和蛋白质，则保留下层酚相存于4℃冰箱,若只提RNA，则弃下层酚相。 6、按0.5ml异丙醇/ml Trizol 加入异丙醇混匀，室温放置5-10min。 7、4℃ 12,000g离心10min，弃上清，RNA沉于管底。 8、按1ml 75%乙醇/ml Trizol加入75%乙醇，温和振荡离心管，悬浮沉淀。 9、 4℃ 8,000g离心5min，尽量弃上清。 10、室温晾干或真空干燥5-10min。 注：RNA样品不要过于干燥，否则很难溶解。 11、可用50ul H2O，TE buffer或0.5%SDS溶解RNA样品，55-60℃,5-10min。注：H2O、TE或0.5%SDS均须用DEPC处理并高压。 12、测O.D值定量RNA浓度。注：此方法提取RNA A260/A280值在1.6-1.8之间；产率估计：组织标本：（ug RNA/mg组织）1-10ug，培养细胞（ug RNA/106 Cell）：5-15ug。注：组织或细胞量过少，可酌情减少Trizol用量；组织或细胞用量过多，会引起DNA对RNA的污染；高蛋白、脂肪或多糖类组织，肌肉组织或块状植物组织等，组织匀浆或液氮研磨后须4℃ 12,000g离心10min去掉不溶物，再进行下面操作，若顶层有脂肪物，则也须去掉； 热天提RNA，带手套是必须的，手是RNase的主要来源； 组织块用液氮研磨，效果最好，若没有液氮或电动匀浆器，可用手动匀浆器代替，此时组织块不宜过大，且需先用眼科剪刀将组织碱碱剪碎，然后再充分研磨。

异丙基-β-D-硫代半乳糖苷的主要优点1.能诱导酶的合成，但又不被分解的分子，称为安慰诱导物。由于乳糖虽可诱导酶的合成，但又随之分解，产生很多复杂的动力学问题，因此人们常用安慰诱导物来进行各种实验。2.IPTG不被菌体代谢，为乳糖类似物，一旦进入细胞就会产生持续长久的诱导效果，所以IPTG的诱导效率高，往往只需要很少量(1mmol/L)即可达到理想诱导效果。由于IPTG不被代谢，在胞内专一诱导外源蛋白的表达。不受细胞代谢的影响，诱导效果持续稳定。乳糖有双效作用，既能做为诱导剂异乳糖的前体物质，又可以做碳源，在诱导过程中，很不稳定，IPTG因其优异的稳定性决定了它适合做实验研究用。3.IPTG能在缺乏lacY基因下而有效地被抄送。4.半乳糖苷键中用硫代替了氧，失去了水解活性，但硫代半乳糖苷和同源的氧代化合物与酶位点的亲和力相同，IPTG虽不为β–半乳糖苷酶所识别，但它是lac基因簇十分有效的诱导物。使用方法：首先把IPTG配制成23.83 mg/ml(100 mM)的水溶液，并进行过滤除菌后保存。然后在100 ml的琼脂培养基中，加入100 μl的上述溶液、200 μl的X-Gal(20 mg/ml的二甲基甲酰胺(DMF)溶液)和100 μl的Amp(100 mg/ml)，制作成IPTG、X-Gal、Amp平板培养基。当dna片段插入至pUC系列载体(或其他带有lacZ、Amp基因载体)，然后转化至lacZ缺失细胞中后，涂布上述的IPTG、X–Gal、Amp平板培养基，可根据长出菌体的蓝白色，而方便地挑选出基因重组体(白色为具有DNA插入片段的基因重组体)。

 目前市场上的 ELISA 试剂盒质量参差不齐，如何去挑选适合自己的试剂盒就显得特别重要，具体有以下几点可供参考。   特异性   ELISA 试剂盒的特异性与试剂盒的关键组分，抗体对有关。若抗体对中之一为多抗，另一个必须为单抗，建议使用双单抗。   灵敏度   灵敏度反映的是试剂盒检出被检物质的最低量的能力，用户可根据自己样本中待检指标的量选择合适的试剂盒，如果待检指标量很低，一般的试剂盒不能满足要求，可选择高敏的 ELISA 试剂盒。   重复性   科学实验讲求重复性，一般 ELISA 试剂盒，其板内和板间变异系数应该控制在 15% 以内。   简便性   试剂盒在保证高质量数据的情况下，实验时间越短，操作越便利，越容易受到用户欢迎。这也不妨作为选择试剂盒的一个指标。   经济性   进口分装试剂盒因为省去不少物流和报关费用，与国外原装进口试剂相比价格上有比较大的优惠，而且能提供比较灵活的包装规格，特别是 48T 等小包装，目前很多客户因为对品牌的信任度问题，主要还是选择国外原装进口，但是国内进口分装比较成熟的公司仍然是一个非常好的选择。   美誉度   一个品牌不光要有知名度，更重要的是美誉度。通过行业调查公司以及网络，相关宣传资料等可以找到美誉度高的 ELISA 试剂盒供应商，这个反映的不仅是产品质量的问题，对供应商的售前售后服务也是一个非常严格的检验。国内主要的 ELISA 试剂盒供应商有上海乔羽生物、上海远慕生物等。主要供应进口ELISA 试剂盒、人ELISA 试剂盒、小鼠ELISA 试剂盒、大鼠ELISA 试剂盒等。

细胞冻存和复苏可以：（1）用于生物学保种；（2）用于医学上干细胞研究；（3）用于传代培养。实验方法原理:       细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融，实验证明这样可以最大限度的保存细胞活力。目前细胞冻存多采用甘油或二甲基亚砜作保护剂，这两种物质能提高细胞膜对水的通透性，加上缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外，减少细胞内冰晶的形成，从而减少由于冰晶形成造成的细胞损伤。复苏细胞应采用快速融化的方法，这样可以保证细胞外结晶在很短的时间内即融化，避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造成损伤。实验材料:细胞实验步骤: 一、材料准备 1.  仪器：净化工作台、 离心机、恒温水浴箱、冰箱（4℃、-20℃、-70℃）、倒置相差显微镜、培养箱、液氮冰箱。   2.  玻璃器皿：吸管（弯头、直头）、 培养瓶、玻璃瓶（250ml、100ml）、废液缸。   3.  塑料器皿： 吸头、枪头、胶塞、移液管（10ml）、15ml离心管、冻存管（1～2ml）。   4.  其他物品：微量加样枪、红血球计数板、记号笔、医用橡皮膏、移液枪。   5.  试剂：D-Hanks液、小牛血清、培养液、双抗（青霉素、链霉素）、胰蛋白酶（0.08%）、1NHCl、7.4%NaHCO3、DMSO（分析纯）或无色新鲜甘油。 二、细胞冻存   1.  配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的冻存培养液。   2.  取对数生长期的细胞，用胰蛋白酶把单层生长的细胞消化下来，悬浮生长的细胞则直接将细胞移至15ml离心管中。   3.  离心1 000 rpm，5 min。   4.  去除胰蛋白酶及旧的培养液，加入适量配制好的冻存培养液，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，计数，调节冻存液中细胞的最终密度为5×106/ml～1×107/ml。   5.  将细胞分装入冻存管中，每管1～1.5 ml。   6.  在冻存管上标明细胞的名称，冻存时间及操作者。   7.  冻存：标准的冻存程序为降温速率-1～-2℃/ min；当温度达-25℃以下时，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃时，则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱2 h ，然后放入-70℃冰箱中过夜，取出冻存管，移入液氮容器内。   三、 细胞复苏   1.  从液氮容器中取出冻存管，直接浸入37℃温水中，并不时摇动令其尽快融化。   2.  从37℃水浴中取出冻存管，打开盖子，用吸管吸出细胞悬液，加到离心管并滴加10倍以上培养液，混匀。   3.  离心， 1 000 rpm，5 min。   4.  弃去上清液，加入含10%小牛血清培养液重悬细胞，计数，调整细胞密度，接种培养瓶，37℃培养箱静置培养。   5.  次日更换一次培养液，继续培养。注意事项:  1.  从增殖期到形成致密的单层细胞以前的培养细胞都可以用于冻存，但最好为对数生长期细胞。在冻存前一天最好换一次培养液。   2.  将冻存管放入液氮容器或从中取出时，要做好防护工作，以免冻伤。   3.  冻存和复苏最好用新配制的培养液。

Elisa kit规格：48孔配置/96孔配置标准品稀释液：1.5ml×1瓶酶标试剂：3 ml×1瓶（48）/6 ml×1瓶（96）【猪透明质酸(HA) elisa试剂盒】本试剂仅供研究使用计算：以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。【猪透明质酸(HA) elisa试剂盒】试剂盒组成：封板膜:2片（48）/2片（96）说明书:1份密封袋:1个标准品：   2700ng/L 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶  2-8℃保存酶标包被板:  1×48     1×96         2-8℃保存样品稀释液: 3ml×1瓶  6 ml×1瓶     2-8℃保存显色剂A液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶     2-8℃保存显色剂B液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶     2-8℃保存终止液:     3ml×1瓶 6ml×1瓶     2-8℃保存浓缩洗涤液:（20ml×20倍）×1瓶 （20ml×30倍）×1瓶   2-8℃保存实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中猪透明质酸(HA) 水平。用纯化的猪透明质酸(HA) 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入猪透明质酸(HA) ，再与HRP标记的猪透明质酸(HA) 抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的猪透明质酸(HA) 呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中猪透明质酸(HA) 浓度。目的：本试剂盒用于测定猪血清，血浆及相关液体样本中猪透明质酸(HA) 的含量。服务承诺：供货期：款到发货。工作时间内免费的技术咨询和指导 。请为客户提供来样检测服务，zui大限度实验结果的有效性(免费代测)。保存条件及有效期：试剂盒保存：2-8℃| 有效期：6个月【猪透明质酸(HA) elisa试剂盒】样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。【猪透明质酸(HA) elisa试剂盒】操作步骤：1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在*、第二孔中分别加标准品100μl，然后在*、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从*孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为1800ng/L，1200ng/L ，600ng/L，300ng/L， 150ng/L）。2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。4. 配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。7. 温育：操作同3。8. 洗涤：操作同5。9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。公司以高效的产品质量，完善的销售体系、快速、安全、的产品渠道，优质的客户服务，以诚信的态度，真诚的对待客户、合作伙伴以及各位同仁

中文名称:齐墩果酸英文名称:Oleanolic Acid;Oleanic acidCAS:508-02-1纯度：98%HPLC;Titration分子量:456.71分子式:C30H48O3EINECS号:208-081-6理化性质:       齐墩果酸在植物中存在很广泛，一般含量0.2%～2%。葫芦科植物罗锅底含量较高为1.5%～2%，女贞子果实含量0.6%～0.7%。齐墩果酸为白色针状结晶 (乙醇)，无臭、无味。对酸、碱不稳定。熔点308～310℃，[α]20D+73.3° (c=0.15，氯仿)，不溶于水，可溶于甲醇、乙醇、乙醚、丙酮和氯仿.女贞子提取齐墩果酸流程:        齐墩果酸是从龙胆科植物獐牙菜属的青叶胆全草或女贞子的果实中分离提取而得一种五环三萜类化合物，以游离体和配糖体存在于多种植物中，已成为临床上常用的保肝药物，对四氯化碳引起的大鼠急性和慢性肝损害有明显保护作用，可使升高的ALT和AST下降，炎症、坏死和间质炎症反应减轻，阻止纤维化形成，促进肝细胞的再生，加速坏死组织的恢复作用。电镜显示经齐墩果酸治疗后，肿大的线粒体和粗面内质网恢复。其琥珀酸酯可使小鼠肝微粒体细胞色素P450酶活力降低。此外齐墩果酸尚有纠正蛋白代谢障碍、消炎、强心、利尿、升高白细胞、降血糖和促进免疫功能、抑制S-180瘤株生长等作用。下图为从木犀科植物女贞子的干燥成熟果实中提取齐墩果酸、乌索酸的工艺流程：女贞子成熟果实中提取齐墩果酸工艺流程图【注1】95%乙醇回流提取4次，合并提取液，减压浓缩。【注2】稀醇溶解后，分别以石油醚，乙酸乙酯和正丁醇萃取。【注3】低压硅胶柱层析，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱。

实验原理　　血红蛋白具有类过氧化物酶活性，可催化H2O2释放新生态氧，使邻甲联苯胺氧化发生颜色变化，由无色zui终变为蓝紫色。根据显色深浅与标准进行比较，可测出其含量。实验方法　　材料：　　1．2g/L邻甲联苯胺溶液　　2．1%H2O2　　3．10%醋酸溶液　　4．分光光度计　　方法：　　1.抽取静脉血2-3ml，枸橼酸钠抗凝，离心分离血浆。　　2．按下表进行操作，用分光光度计，波长为530nm，以空白管调零，测定测定管的吸光度。试剂 （ml）测定管空白管2 g/L邻甲联苯胺溶液0.50.5患者血浆0.02/1% H2O20.50.5混匀后室温放置10min10%醋酸溶液5.05.0室温放置10min　　3.计算公式　　血浆游离Hb（mg/L）=测定管吸光度/标准管吸光度×100实验结果计算　　参考范围：0-40mg/L注意事项　　1.一切容器避免血红蛋白污染；　　2.采血要顺利，器皿要干燥，检测血浆要新鲜，及时分离，防止人为溶血；　　3.邻联苯胺溶液具致癌性，检测时要小心，废液要妥善处理，以免污染；　　4.双氧水要新鲜配置，浓度要准确

      胰岛素是由胰脏内的胰岛β细胞受内源性或外源性物质如葡萄糖、乳糖、核糖、精氨酸、胰高血糖素等的刺激而分泌的一种蛋白质激素。胰岛素是机体内唯一降低血糖的激素，同时促进糖原、脂肪、蛋白质合成。外源性胰岛素主要用来糖尿病治疗。中文名：胰岛素英文名：insulin中文别名：普通胰岛素；胰激素；因苏林；正规胰岛素；短效胰岛素英文别名：insulin；ri；insulyl；crystalline insulin；regular insulin分子式：c256h381n65o76s6分子量：5778来源含量：本品系自猪胰中提取制得的具有降血糖作用的多肽类物质。按干燥品计算，每1mg的效价不得少于27单位。每1单位相当于胰岛素0.0345mg。制法要求：本品应从检疫合格猪的冰冻胰脏中提取。生产过程应符合现行版《药品生产质量管理规范》的要求。体内胰岛素的分泌主要受以下因素影响：       血浆葡萄糖浓度血浆葡萄糖浓度是影响胰岛素分泌的最重要因素。口服或静脉注射葡萄糖后，胰岛素释放呈两相反应。早期快速相，门静脉血浆中胰岛素在2分钟内即达到最高值，随即迅速下降；延迟缓慢相，10分钟后血浆胰岛素水平又逐渐上升，一直延续1小时以上。早期快速相显示葡萄糖促使储存的胰岛素释放，延迟缓慢相显示胰岛素的合成和胰岛素原转变的胰岛素。       进食含蛋白质较多的食物进食含蛋白质较多的食物后，血液中氨基酸浓度升高，胰岛素分泌也增加。精氨酸、赖氨酸、亮氨酸和苯丙氨酸均有较强的刺激胰岛素分泌的作用。       进餐后胃肠道激素增加进餐后胃肠道激素增加可促进胰岛素分泌如胃泌素、胰泌素、胃抑肽、肠血管活性肽都刺激胰岛素分泌。       自主神经功能状态迷走神经兴奋时促进胰岛素分泌；交感神经兴奋时则抑制胰岛素分泌。受体       胰岛素在细胞水平的生物作用是通过与靶细胞膜上的特异受体结合而启动的。胰岛素受体为胰岛素起作用的靶细胞膜上特定部位，仅可与胰岛素或含有胰岛素分子的胰岛素原结合，具有高度的特异性，且分布非常广泛。受体是一种糖蛋白，每个受体由α、β各两个亚单位组成,并由各两条亚基组成四聚体型受体。α亚单位穿过细胞膜，一端暴露在细胞膜表面，具有胰岛素结合位点。β亚单位由细胞膜向胞浆延伸，是胰岛素引发细胞膜与细胞内效应的功能单位。胰岛素与亚单位结合后，β 亚单位中酪氨酸激酶被激活，使受体磷酸化，产生介体，调节细胞内酶系统活性，控制物质代谢。并由各两条亚基组成四聚体型受体。每种细胞与胰岛素结合的程度取决于受体数目与亲和力，此二者又受血浆胰岛素浓度调节。当胰岛素浓度增高时往往胰岛素受体数下降，称下降调节。如肥胖的非胰岛素依赖型糖尿病人由于脂肪细胞膜上受体数下降，临床上呈胰岛素不敏感性，称抵抗性。当肥胖的非胰岛素依赖型糖尿病患者经饮食控制、体育锻炼后体重减轻时，脂肪细胞膜上胰岛素受体数增多，与胰岛素结合力加强而使血糖利用改善。此不仅是肥胖的非胰岛素依赖型糖尿病的重要发病机制，也是治疗中必须减肥的理论依据。代谢       胰岛素是由胰岛β细胞受内源性或外源性物质如葡萄糖、乳糖、核糖、精氨酸、胰高血糖素等的刺激而分泌的一种蛋白质激素。       先分泌的是由84个氨基酸组成的长链多肽—胰岛素原（proinsulin），经专一性蛋白酶——胰岛素原转化酶（pc1和pc2）和羧肽脢e的作用，将胰岛素原中间部分（c链）切下，而胰岛素原的羧基端部分（a链）和氨基端部分（b链）通过二硫键结合在一起形成胰岛素。成熟的胰岛素储存在胰岛β细胞内的分泌囊泡中，以与锌离子配位的六聚体方式存在。在外界刺激下胰岛素随分泌囊泡释放至血液中，并发挥其生理作用。       胰岛素的分泌分成两部分，一部分帮助维持空腹血糖正常而分泌的胰岛素，称为基础胰岛素，另一部分则是为了降低餐后血糖升高、维持餐后血糖正常而分泌的胰岛素，称为餐时胰岛素。餐时胰岛素的早时相分泌控制了餐后血糖升高的幅度和持续时间，其主要的作用是抑制肝脏内源性葡萄糖的生成。通过该作用机制，血糖在任何时间均被控制在接近空腹状态的水平;餐后血糖的峰值在7.0 mmol/l以下，并且血糖水平高于5.5 mmol/l的时间不超过30分钟。1型糖尿病患者在确诊糖尿病之前，大部分患者胰岛β细胞发生自身免疫性破坏，导致餐时和基础胰岛素分泌均减少。2型糖尿病患者胰岛β细胞功能异常进展缓慢，常常表现为外周胰岛素抵抗，但是也同时存在胰岛素一相分泌减少，因而可以出现空腹血糖正常而餐后血糖升高的情况。最终，餐后血糖水平可达到非糖尿病的生理状态时的4倍，并且在进餐后血糖升高持续数小时，以至于在下一餐前仍然显著升高。弥补餐时胰岛素分泌不足的胰岛素制剂有诺和灵r，胰岛素类似物制剂有诺和锐等。基础胰岛素是胰岛细胞24小时持续脉冲式分泌的胰岛素，主要用于维持空腹血糖水平的正常。美国糖尿病学会（ada）与欧洲糖尿病学会（easd）指南均建议，在生活方式干预和口服糖尿病治疗后，如果血糖控制仍不满意，应尽早开始胰岛素治疗，且首选基础胰岛素与口服降糖药合用。若此疗法仍不能控制血糖，根据该指南的治疗线路图，建议在此基础上在就餐时再加用速效胰岛素。目前用于弥补基础胰岛素不足的制剂主要有基础胰岛素类似物地特胰岛素等。       胰岛素由胰岛素降解酶（insulin degrading enzyme, ide）降解。胰淀素和β淀粉样多肽也是ide的底物。胰岛素的纤维化：经过大量的临床医学以及科学研究，胰岛素的淀粉样纤维化与ii型糖尿病密切相关。