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远慕阐述:ELISA双抗体夹心法实验
酶联免疫吸附（ELISA）可以：（1）免疫酶染色各种细胞内成份的定位；（2）研究抗酶抗体的合成；（3）显现微量的免疫沉淀反应；（4）定量检测体液中抗原或抗体成份。
实验原理
双抗体夹心法（常用于测定抗原）
用特异性抗体包被于固相载体，经洗涤后加入含有抗原之待测样品，如待检样品中有相应抗原存在，即可与包被于固相载体上的特异性抗体结合，经保温孵育洗涤后，即可加入酶标记特异性抗体，再经孵育洗涤后，加底物显色进行测定，底物降解的量即为欲测抗原的量。
实验步骤
一、材料准备
1. 实验材料：血清、血浆、体液
2. 实验仪器：酶标比色计、96 孔板、移液枪、离心管、离心管盒
3. 所需试剂及试剂盒：碳酸盐包被缓冲液、抗体球蛋白、吐温-20、柠檬酸、硫酸
二、实验操作
1. 包被抗体：用包被缓冲液稀释特异性抗体球蛋白至最适浓度（1～10 μg /ml），每凹孔加 0.3 ml，4℃ 过夜，或 37℃ 水浴 3 小时，贮存冰箱。
2. 洗涤：移去包被液，凹孔用洗涤缓冲液（含 0.05% 吐温-20）洗 3 次，每次 5 分钟。
3. 每凹孔加入 0.2 ml 用稀释缓冲液稀释的含抗原的被检标本，37℃ 作用 1～2 小时。
4. 洗涤：移去包被液，凹孔用洗涤缓冲液（含 0.05% 吐温-20）洗 3 次，每次 5 分钟。
5. 加入 0.2 ml 用稀释缓冲液稀释的酶标记特异性抗体溶液，37℃ 作用 1～2 小时或由预试实验确定作用时间。
6. 洗涤：移去包被液，凹孔用洗涤缓冲液（含 0.05% 吐温-20）洗 3 次，每次 5 分钟。
7. 加入 0.2 ml 底物溶液于每个凹孔（OPD 或 OT），室温作用 30 分钟（另作一空白对照，0.4 ml 底物加 0.1 ml 终止剂）。
8. 加终止剂：每凹孔加 2M H2SO4 或 2 M 柠檬酸 0.05 ml。
9. 观察记录结果：目测或用酶标比色计测定（OPD 用 492 nm）OD 值。
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