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提取RNA的操作步骤
1、细胞或组织加Trizol后，室温放置5min，使其充分裂解。注：此时可放入-70℃长期保持。
2、12,000rpm 离心5min，弃沉淀。
3、按200ul氯仿/ml Trizol加入氯仿，振荡混匀后室温放置15min。注：禁用漩涡振荡器，以免基因组DNA断裂。
4、4℃ 12,000g离心15min。
5、吸取上层水相，至另一离心管中。注：千万不要吸取中间界面；若同时提取DNA和蛋白质，则保留下层酚相存于4℃冰箱,若只提RNA，则弃下层酚相。
6、按0.5ml异丙醇/ml Trizol 加入异丙醇混匀，室温放置5-10min。
7、4℃ 12,000g离心10min，弃上清，RNA沉于管底。
8、按1ml 75%乙醇/ml Trizol加入75%乙醇，温和振荡离心管，悬浮沉淀。
9、 4℃ 8,000g离心5min，尽量弃上清。
10、室温晾干或真空干燥5-10min。 注：RNA样品不要过于干燥，否则很难溶解。
11、可用50ul H2O，TE buffer或0.5%SDS溶解RNA样品，55-60℃,5-10min。注：H2O、TE或0.5%SDS均须用DEPC处理并高压。
12、测O.D值定量RNA浓度。注：此方法提取RNA A260/A280值在1.6-1.8之间；产率估计：组织标本：（ug RNA/mg组织）1-10ug，培养细胞（ug RNA/106 Cell）：5-15ug。
注：组织或细胞量过少，可酌情减少Trizol用量；组织或细胞用量过多，会引起DNA对RNA的污染；
高蛋白、脂肪或多糖类组织，肌肉组织或块状植物组织等，组织匀浆或液氮研磨后须4℃ 12,000g离心10min去掉不溶物，再进行下面操作，若顶层有脂肪物，则也须去掉；
热天提RNA，带手套是必须的，手是RNase的主要来源；
组织块用液氮研磨，效果最好，若没有液氮或电动匀浆器，可用手动匀浆器代替，此时组织块不宜过大，且需先用眼科剪刀将组织碱碱剪碎，然后再充分研磨。
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