柱式动物DNA提取试剂盒

本产品主要用于快速提取新鲜或冷冻的动物组织中的基因组DNA。

它具有下列特点:

1. DNA 更加纯净，大多数DNA样品的0D260/280值在1.8-1.9之间。

2. DNA产率- -般在200ug/g左右(跟组织种类密切相关)。

3.可直接用于PCR、酶切、杂交等后续反应。

4.操作更加简单，离心吸附操作代替离心沉淀，整个过程室温操作约10分钟,

适合大规模样品处理。

5.安全无毒，本试剂盒对人体无毒，无腐蚀性和刺激性气味。

6.性价比高，质量和国外同类产品相当，但价格更便宜。

注意:溶液A容易产生沉淀，溶液B十分粘稠，用前均需要在65C水浴中加热使

沉淀溶解或粘稠度降低，用前充分摇匀。

1.根据使 用材料的不同进行下列操作:

a)对贴璧细胞: 吸尽培养液，在每10平方厘米细胞中加入0.8 mL预热的溶液

A，用枪充分吹打以确保细胞全部裂解，然后把裂解液转移到1.5mL塑料离

心管中。

b)对悬浮细胞:离心收集细胞,吸尽液体,在每1-5X106悬浮细胞中加入0.8mL

预热的溶液A，用枪充分吹打以确保细胞全部裂解。然后把裂解液转移到1.5

mL塑料离心管中。如果是fibroblasts或carcinoma细胞，0.8 mL溶液A

的细胞使用量不要超过1X106个细胞。

c)对新鲜或冷冻的组织:先将剪切成小块的新鲜组织或冷冻保存的组织放入10

mL或15mL塑料离心管中，每50-100mg组织加0.8mL预热的溶液A,

用剪切式匀浆器匀浆30秒左右,然后把裂解液转移到1.5 ml塑料离心管中。

对肝、脾、胰、肾等细胞分裂十分旺盛的组织(细胞中含大量正在复制的DNA),.

建议组织的使用量不要超过50mg.

d对DNALOCKER保存组织:先用纸吸去DNALOCKER液体后再剪切成小块，其余

操作同新鲜成冷冻组织的处理。

2. 加入0.4 mL預热的溶液B到裂解液中。由于溶液B十分粘桐，可将1mL枪

头剪掉- - 截再用，也可以用称量方法加0.4 go加入溶液B后需要颠倒数次充

分混匀。

3. 65C水浴5-10分钟。如果室温放置，DNA产量将降低10-20%。

4.加入 0.2mL自备氯仿，振荡器上充分振荡混均30秒，此时溶液将呈乳白色。

一定要确保离心管底的液体被震荡起来。

5.

12000-15000 g室温离心2分钟。上清透明，中间层为白膜(蛋白层)。

6. 小心将上清液平均转移到两个新的离心管中，避免触及中间的白膜。

7.每个管中 加入1.5倍体积的溶液C,充分颠倒混匀。

8. 分两次上柱(即先转移- -半的混合液到离心吸附柱中，室温放置2分钟，

12000-15000 g室温离心半分钟，弃穿透液，然后再将剩下的混合液到离心

吸附柱中，室温放置2分钟，12000-15000 g室温离心半分钟，弃穿透液)。

9. 加0.7 mL通用洗柱液到离心吸附柱中，12000-15000 g室温离心半分钟，

弃穿透液。.

10.加0.3 ml通用洗柱液到离心吸附柱中，12000-15000 g室温离心半分钟，

弃穿透液。.

11. 12000-15000 g室温再离心半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液

会污染DNA。

12.室温放置半分钟使残留乙醇挥发。

13.将离心吸附柱转移到- 新的1.5 mL塑料离心管中，加入50-100 uLDNA洗

脱液2.0,室温放置离心吸附柱1-2分钟。

14.12000-15000 g室温离心半分钟，离心管中溶液即为DNA样品，可以立即

使用或存放于冰箱待用。