石蜡包埋组织本是珍贵的分子生物学研究材料,但是由于它们的保存时间一般
都比较长,很不容易从中提取到可以进行PCR的RNA,存在的主要问题是RNA
的降解和脱蜡过程中样品的丢失。本产品是专门用于从甲醛和非甲醛固定的石蜡包
埋组织中快提RNA (包括miRNA)的试剂,具有下列特点:
1.一管式操作,避免了可能的交叉污染和样品RNA的丢失。
2.含一步离心 式脱蜡试剂,不需要使用有毒的二甲苯,健康环保。
3.能有效去除 基因组DNA的污染,得到的RNA可直接用于RT-PCR反应。
4.即开即用, 客户自己不需要准备额外的试剂。
使用方法
1.将5片厚度为6-8 um的石蜡包埋组织切片转移到1.5 mL塑料离心管(
使用螺旋盖离心管)中并加入1 mL溶液A,在振荡器上以大速度振荡10秒。
2.
加入75 ulL溶液B,在振荡器.上以大速度振荡10秒。
3.7000Xg 室温离心2分钟,溶液将形成两个相,其中组织切片位于下相。
4. 小心吸弃上层液体。
5.将离心管放 入真空抽干机中抽干下层的液体,- - 般需要- -小时 。
6.
加入150uL溶液C,55C保温过夜。
7. 短暂离心,95C保温10分钟。
8.加入0.5 mL溶液D,充分震荡半分钟。
9.加入0.1 mL自备氯仿,振荡器上充分振荡混均30秒。
10.13000-5000Xg 室温离心3-5分钟。
11.将上清液(约0.6 mL)转移到另一千净的1.5 mL塑料离心管中。下层有机
相(蓝色)和中间层含有DNA和蛋白质,避免触及,否则将产生蛋白质和DNA
污染。为保险起见,可以留下100uL上清液不取。同时吸取上清时缓慢
进行,否则容易吸出交界面的不可见的DNA.
12.在上清液中加入两倍体积的微量核酸沉淀剂,振蔼器上振荡30秒混匀,
13.13000-15000 g室温离心5分钟,离心底的侧面将形成RNA沉淀。如果需
要提高RNA回收率,可以将离心时间延长到20成30分钟。
14.小心吸弃上清液,注意不要吸弃RNA沉淀。
15.在含RNA沉淀的离心管中加入1mL自备的75%乙醇,振荡混匀30秒。
16. 13000-15000 g室温离心1分钟。
17.小心吸弃上清液,注意不要吸弃RNA沉淀。
18.短暂快速离心,用移液枪小心吸弃残留乙醇(约50 uL)。注意不要吸弃沉淀。
此步十分重要,否则残留的乙酌会影响RNA的使用。
19.室温放1-2分钟后立即加入50-100 uL RNA溶解液使RNA沉淀溶解。千万
不要用真空离心法使RNA沉淀过于干燥,否则RNA将变得十分难溶。样晶立
即使用成存放于80C待用。
20. RNA完整性的电泳检测:
21. RNA产量产率测定:将5-10山RNA溶于TE级冲液中(pH7.5-8.2之间检
测其在0D260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的
RNA= 40 ug/mL) ,进而计算出RNA的产量(浓度x体积)和产率(RNA产量/
组织用量)。
22. RNA纯度测定:无污染的总RNA的OD260/0D280- 般在1.8-2.1之间(具
体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关),高于此范围则分别表示样品
可能有蛋白质污染,但-一般不影响RT-PCR等反应。
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企业名称
上海钦胜生物科技有限公司
企业信息已认证
企业类型
信用代码
27000000202008180010
成立日期
2020-08-18
注册资本
100
经营范围
从事生物科技、医疗科技领域内的技术开发、技术咨询、技术转让;仪器仪表、机电设备、机械设备、玻璃制品、电子产品、医疗器械、化工产品及原料(除危险化学品、监控化学品、烟花爆竹、民用爆炸物品、易制毒化学品)的销售。 【依法须经批准的项目,经相关部门批准后方可开展经营活动】
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