细胞迁移服务将transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上室内盛装上层培养液，下室内盛装下层培养液，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。将细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可以研究下层培养液中的成分对细胞迁移运动等的影响。 实验步骤：　　1. 37℃温育细胞培养试剂和transwell　　2. 收集对数期细胞，悬浮细胞，计数　　3. 下室加含血清培养液，上室加细胞悬液培养　　4. 甲醇固定　　5. 结晶紫染色　　6. 中性树脂封片　　7. 统计结果 结果示意图：    服务周期：服务内容说明价格∕元实验周期细胞迁移（transwell法）建议3重复100元/孔3个工作日温馨提醒：　　1. 至少提供105细胞　　2. 提供细胞相关信息

看ELISA试剂盒新老手的操作ELISA试剂盒检测体系可谓是免疫学反响应用到科研出产中最为广泛最为敏捷的技术手段。自己也为此苦恼过很长一段时间，跟着自己技术水平得前进，或多或少地也把握了ELISA试剂盒体系的脾气，也是游刃有余吧，现在做方阵，做ELISA试剂盒已是轻车熟路了，曾经检测一种抗体用整整一下战书还算得晕晕的，现在给我十个八个的从包被到显色，一个工作日根本搞定。包被原的性质很重要，蛋白浓度，是否降解，这关系到你做出的抗体可不可以被其辨认，所以保存抗原很重要，我做重组蛋白时，ELISA试剂盒师兄都严格正告我必定要在冰浴下缓慢消融就是这个道理。封闭就是让很多不相关的蛋白质充填这些旷地空闲，然后排挤ELISA试剂盒后的过程中干扰物质的再吸附。但有时由于实验的需要，包被原的特殊性也可能选用中性的缓冲溶液来包。小分子必需依赖和大的蛋白载体偶联后才干固定在固相载体上。还有有的包被原可能不是蛋白，对于生物素和脂类物质或小分子物质咱们要事前对其改造再加以包被，亲和素生物素:先亲和素先包被载体，参加生物素化的DNA，这种包被办法均匀、结实，已扩大应用于各种抗原物质的定量测定。常用的包被液除了方才说到的pH9.6碳酸盐缓冲液，还有pH7.2的磷酸盐缓冲液和pH7-8的Tris-HCL缓冲液等等。过程中老是会泛起或大或小的标题，本人在刚开始做ELISA试剂盒时就面临良多灾题，固然有师兄师姐铺路，但仍是常常做得乌烟瘴气，比如说花板，假阳性，全显色，悉数显色，显色比空缺还低。由于蛋白质与聚苯乙烯固相载体是经过物理吸附结合的，靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体外表的疏水基团间的效果，ELISA试剂盒这种物理吸附长短特异性的，受蛋白质的分子量、等电点、浓度等的影响，大分子蛋白质较小分子蛋白质通常含有更多的疏水基团，故更易吸附到固相载体外表。 

ELISA试剂盒检测中的加样步聚ELISA试剂盒优质的试剂，出色的仪器和正确的操作是保证ELISA试剂盒检测效果准确可靠的必要条件。ELISA试剂盒检测的操作因固相载体的构成不同而有所差异，国内医学查验一般均用板式点。本文将叙说板式ELISA各个操作进程的留心要害，珠式、管式及磁性球ELSIA，国外试剂均与特别仪器协作运用，严厉遵从规矩操作，必能得出准确的效果。可用作测定的标本非常广泛，体液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、粪便)等均可作标本以测定其间某种抗体或抗原成份。有些标本可直接进行测定(如血清、尿液)，有些则需经预处理(如粪便和某些分泌物)。大部分ELISA检测均以血清为标本。血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝剂外，其他成份均对等于血清。制备血浆标本需借助于抗凝剂，而血清标本只需待血清天然凝结、缩短后即可获得。除特别状况外，在医学查验中均以血清作为检测标本。在ELISA中血浆和血清可对等运用。在ELISA试剂盒检测中一般有3次加样步聚，即加标本，加酶结合物，加底物。加样时应将所加物加在LEISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并留心不可溅起，不可发生气泡。加标本一般用微量加样器，按规矩的量参与板孔中。每次加标本应更换吸嘴，以发生交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加样。有此测定(如间接法ELISA)需用稀的血清，可在试管中按规矩的稀释度稀释后再加样。也可在板孔中参与稀释液，再在其参与血清标本，然后在微型轰动器上轰动1分钟以保证混和。加酶结合物运用液和底物用液时可用定量多道加液器，使加液进程灵敏结束。

ELISA中最要害的试剂---结合物结合物即酶符号的抗体（或抗原），是ELISA中最要害的试剂。杰出的结合物应该是既保有酶的催化活性，也坚持了抗体（或抗原）的免疫活性。结合物中酶与抗体（或抗原）之间有恰当的分子份额，在结合试剂中应尽量不含有或少含有游离的（未结合的）酶或游离的抗体（或抗原）。此外，结合物尚要有杰出的安稳性。抗原和抗体制备结合物时所用抗体一般 均为纯度较高的IgG，以免在与酶联合时其他杂蛋白的搅扰。最好用亲和层析纯的抗体，这样悉数酶结合物均具有特异的免疫活性，能够在高稀释度进行反响，实验成果本底浅淡。如用F（ab）2进行符号，则更可防止标本中RF的搅扰。在ELISA中用酶标抗原的模式不多，总的要求是抗原有必要是高纯度的。结合物的稀释液用于稀释高浓度的结合物以配成工作液。为防止结合物在反响中直接吸附在固相载体上，在稀释缓冲液中常加入高浓度的无关蛋白质（例如1%牛血清白蛋白），经过竞赛以按捺结合物的吸附。一般还加入具有按捺蛋白质吸附于塑料外表的非离子型外表活性剂，如吐温20，0.05%的浓度较为适合。在直接测定抗体时，血清标本需稀释后进行测定，也可应用这种稀释液。 酶用于ELISA的酶应契合以下要求：纯度高，催化反响的转化率高，专一性强，性质安稳，来历丰厚，价格不贵，制备成酶结合物后仍持续保留它的活性部分和催化才能。最好在受检标本中不存在相同的酶。别的，它的相应底物易于制备和保存，价格低廉，有色产品易于测定等。

ELISA中抗原与抗体的影响因素抗原是能在机体中引起特异性免疫应答的物质。小分子化合物在与大分子蛋白质结合后能引起机体产生特异性抗体的，称为半抗原（hapten）。抗原进入机体后，可刺激机体产生抗体和引起细胞免疫。例如某些激素、药物等。能在机体中引起抗体产生的抗原多为分子量大于5000的蛋白质。ELISA是一种免疫测定。一个抗原分子可带有不同的决定簇。在免疫测定中，抗原是指能与抗体结合的物质。在临床检修中主要通过抗原抗体反应检测体液中的抗体或抗原性物质。抗原的反应性取决于抗原决定簇（antigenic determinant），或称为表位（epitope）。免疫测定（immunoassay，IA）是应用免疫学技术测定标本的方法。IgG和IgM的重链分别称为γ（gamma）链和μ（mu）链。抗体是能与抗原特异性结合的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)。Ig的轻链是相同的，有κ（kappa）和λ（Lambda）两种型别。Ig分五类，即IgG、IgA、IgM、IgD和IgE.与免疫测定有关的Ig主要为IgG和IgM.Ig由两个轻链（L）和两个重链（H）的单体组成。五类Ig的重链结构不同，这决定了它们的抗原性也不同。IgG的结构见图。IgG可被木瓜蛋白酶分解为三个区段，其中两个相同的区段称抗原结合片断（Fab）。两者构成抗体的抗原结合部位，只与相应的抗原决定簇匹配，发生特异性结合，是抗体专一性结合抗原的结构基础。每个Fab都保留结合抗原的能力，但只有一个抗原结合位点，是单价的，与抗原结合后不泛起凝集或沉淀。另一区段称Fc段，无抗体活性，但具有IgG特有的抗原性。重链和轻链的N真个氨基酸排列顺序因各种抗体而异，称为可变区，分别用VH和VL表示。如将多种抗原或含有多个抗原决定簇的抗原注入机体，则将由多系的B细胞产生相应的多种抗体，这些抗体均存在于免疫血清中。含有抗体的血清称为抗血清。免疫测定中所用的抗血清一般用抗原免疫兔、羊或马制得。将免疫的脾细胞（含产生抗体的B细胞）与小鼠肿瘤细胞融合，分离杂交瘤细胞，接种于小鼠腹腔，产生的腹水中含有浓度很高的单克隆抗体。每一系B细胞只产生针对某一抗原决定簇的抗体。单克隆抗体通常用抗原免疫小鼠制备。产生抗体的B细胞可在体外与繁殖力强的肿瘤细胞融合成杂交瘤细胞。将单个杂交瘤细胞分离，在体内或体外培养而分泌的抗体单克隆抗体。单克隆抗体仅针对一种抗原决定簇，具有很高的特异性。

ELISA中加样须注意哪些问题？ELISA试剂盒测定现通常为采用手工操作的以微孔板条为固相的测定模式，测定操作非常简单，一般涉及到标本的收集保存、试剂准备、加样、温育、洗板、显色、比色、结果判断和结果报告及解释等方面，其中任一步骤的不当都会影响测定结果，且尤以加样、温育和洗板等步骤为甚。正确的加样方法应为45度，吸头贴着孔壁加入，应注意角度太小，会使液体残留在孔壁上，导致加样不准确；吸头应当贴着管壁和液面的交界处！目前上使用血清标本测定的标志物一般有原体的抗原和抗体、肿瘤标志物、激素、特种蛋白、细胞因子和治疗药物等。用于传染性病原体的抗原和抗体、肿瘤标志物和特种蛋白等的检测的血清标本的收集则没有时间和体位方面的影响，用于ELISA试剂盒测定的临床标本最为常用的是血清（浆），有时由于特定的检测目的，也用到唾液、脑脊液、尿液、粪便等标本。对用于激素和治疗药物测定的血清标本的收集，要留意收集时间甚或体位有可能会对测定结果产生影响。再如治疗药物的检测，应根据药代动力学选择服药后的最适时间抽血检测。又如当从卧位变为站立位时，血清中肾素活性将泛起显著增高。如可的松在早晨4～6点之间，会有一峰值泛起：生长激素、促黄体激素（LH）和促卵泡激素（FSH）均以阵发性方式开释，因此，在测定此类激素时，有必要在紧密亲密相连的时间距离内采取数份血样本，以其中间值为测定值。只是在处理和保存方面要考虑以下几个方面：首先要注意避免出现严重溶血。血红蛋白中含有血红素基团，其有类似过氧化物的活性，因此，在以HRP为标记酶的ELISA测定中，如血清标本中血红蛋白浓度较高，则其就很容易在温育过程中吸附于固相，从而与后面加入的HRP底物反应显色。血清标本如是以无菌操作分离，则可以在2～8 ℃下保存一周，如为有菌操作，则建议冰冻保存。样本的长时间保存，应在-70 ℃以下。样本的采集及血清分离中要注意尽量避免细菌污染，一则细菌的生长，其所分泌的一些酶可能会对抗原抗体等蛋白产生分解作用；二则一些细菌的内源性酶如大肠杆菌的β-半乳糖苷酶本身会对用相应酶作标记的测定方法产生非特异性干扰。标本在保存中如出现细菌污染所致的混浊或絮状物时，应离心沉淀后取上清检测。冰冻保存的血清标本须注意避免因停电等造成的反复冻融。标本的反复冻融所产生的机械剪切力将对标本中的蛋白等分子产生破坏作用，从而引起假阴性结果。此外，冻融标本的混匀亦应注意，不要进行剧烈振荡，反复颠倒混匀即可。

POLYSCIENCES现货促销员    美国POLYSCIENCES公司成立于1961年，主要生产和经营LIFE SCIENCES生命科学(胶体金,不含甲醛的甲醇等)，病理学和显镜学 微球和粒子和磁珠各种单体和聚体等产品。美国POLYSCIENCES公司成立于1961年，主要生产和经营LIFE SCIENCES生命科学（胶体金,不含甲醛的甲醇等），病理学和显镜学 微球和粒子和磁珠各种单体和聚体等产品。polysciences公司是世界上最大最全的多聚化合物供应商,同时是世界一流的免疫学,组织化学试剂耗材供应商.常规产品如PEI  尼龙毛 微球等。Polysciences公司是一家制造公司。我们的化工产品在许多科学应用中使用，体积小，但附加值大。该公司成立于1961，为电子显微镜样品制备产品，因为纳米样品开始揭示新的知识。在组织学（组织学研究）应用后不久，在石蜡块中加入包埋产物，使石蜡包埋在塑料块中。染料和污渍的开发，以实现更好的可视化的样品。与联邦机构合作，开发了用于诊断试剂盒的单分散聚合物微球。天然产物分离纯化的能力导致了从粗生物质制备纯化材料为国家癌症研究所进行紫杉醇的初步临床试验。分离和纯化的兴趣导致了超顺磁性微球用于DNA、蛋白质和肽的发现工具。我们的高纯度单体和聚合物产品在医疗器械中有许多应用，并在各种方法中使用，以增强关键特性。我们最近扩展到电子聚合物和化学品市场，扩大了我们作为高纯度单体和聚合物制造商和供应商的地位。我们的粒子制造技术使我们完成了用于纳米技术应用测量的精密微粒子系列。所有这些经验使我们拥有超过3000种产品，以及一种为新兴应用制造新化学材料而蓬勃发展的企业文化。在polysciences产品质量，公司具有强大的技术和客户支持快速、准确地回答问题。我们致力于提供先进的技术，生产能力和技术支持，帮助我们的客户达到他们的目标。www.polysciences.com

listlabs现货促销  美国List Labs公司是世界著名的科研毒素试剂供应商，其产品包括难辨梭状芽孢杆菌毒素A、B，志贺氏毒素，霍乱毒素，炭疽毒素（PA、LF、EF），百日咳毒素，白喉毒素，CRM197，破伤风毒素，葡萄球菌肠毒素B，肉毒毒素，脂多糖（LPS），内毒素等各类毒素，此外也提供相应的毒素抗体与类毒素，包括破伤风类毒素与难辨梭状芽孢杆菌毒素A、B类毒素。其产品都是具有完全活性的优质纯天然细菌毒素。Linda Shoer和清单的生物实验室我公司成立于1978由Linda Shoer。霍乱毒素是第一种产品，被研究信号转导和其他使用毒素B亚单位标记神经元的人所追求。当时没有这种毒素的商业供应者。我们公司一直专注于高质量的细菌毒素，你可以信赖你的研究。因为毒素是许多疫苗的基础，所以实验室产品支持疫苗开发。列出实验室商业化的许多细菌毒素研究的第一，包括艰难梭菌毒素和百日咳毒素。今天，我们仍然专注于制造、提供和支持多种细菌产品。BL1、BL2、BL3遏制实验室能力制造套件是设计和设计的cGMP生产和产品生产从BL1 BL2和BL3细菌。该设施符合21 CFR 211，目前良好的成品制药生产惯例，以及微生物和生物医学实验室的生物安全性第五版和国家卫生组织关于重组DNA分子研究的指导方针G和K附录G和K。还提供了独立的区域，用于制备解决方案和清洁设备、净化和清洗旧设备以及进行测试。材料、产品和人员通过特定途径通过设施。以每一个生产套件中的清洁环境为支撑的人员穿的长袍。表面光滑，清洁。在cGMP制造之前，生产套件将进行消毒，以确保不会与其他产品发生交叉污染。制造套件中的空气供应是100%个单通HEPA过滤空气，提供ISO 7和8环境。生物安全柜位于所有生产套房提供ISO 5环境关键无菌操作如主/工作细胞库的生产、发酵剂接种，最终产品灌装，产品的细菌培养和最终纯度和不育的分析。https://www.listlabs.com/products/

春节放假公告上海沪震实业有限公司全体员工：向敬爱的顾客朋友们致以节日的问候和真诚的祝福，祝愿我们的客户在新的一年里万事如意幸福吉祥！自2018年2月10日至2018年2月25为我公司放假期，届时将停止发货，所有订单都将在春节假期回来的第一天处理，预定商品2天内陆续发出，给您带来的不便，敬请谅解！提前预祝大家春节快乐！团团圆圆！阖家幸福，因放假给您带来不便，敬请原谅。

生物因素对微生物的影响(抗菌谱试验)实验原理　　许多微生物在其生命活动过程中能产生某种特殊的代谢产物，具有选择性地抑制或杀死其他微生物的作用，例如抗生素。不同抗生素的抗菌谱是不同的，某些抗生素只对少数细菌有抗菌作用，例如青霉素一般只对革兰氏阳性菌有抗菌作用，多粘菌素只对革兰氏阴性菌有作用，这类抗生素称为窄谱抗生素；而另一些抗生素则对多种细菌有作用，例如四环素、土霉素对许多革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都有作用，这类抗生素称为广谱抗生素。 　　如果将产生某种抗生素的菌划直线接种在豆芽汁葡萄糖琼脂培养基平板上，经培养后，就会长出一条菌带，并产生某种抗生素向菌带周围扩散。再与这条菌带相垂直划直线接种某些不同的试验菌，就会产生不同长度的抑菌带，如图Ⅸ-3。根据抑菌带的长短，即可判断该抗生素对不同微生物的影响。本实验说明产黄青霉产生的青霉素对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的抑制效果。实验试剂豆芽汁葡萄糖琼脂培养基实验设备无菌平皿，接种环等实验材料产黄青霉（Peenicillium chrysogenum）、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌，枯草芽孢杆菌；实验步骤　　1．将豆芽汁葡萄糖琼脂培养基溶化后，冷至45℃左右倒平板，凝固待用。　　2．用接种环挑取产黄青霉的孢子在平板上按图Ⅸ-3，1所示划一直线。　　3．接种后，倒置于28℃温室中培养2—3天。　　4．待上述平板形成菌苔后，再用接种环从产黄青霉菌的菌带边缘但不要接触菌苔分别垂直向外划直线接种大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌。　　5．倒置于37℃温室培养24小时。　　6．观察结果。 

Omega质粒小量提取流程实验试剂1. 使用前，将RNase A全部加入Solution I中并于4度保存。2. 按下表用无水乙醇稀释DNA Wash Buffer，并于室温保存。    D6948-00B: 加入8ml无水乙醇    D6948-01B: 加入80ml无水乙醇    D6848-02B: 加入80ml无水乙醇实验步骤1. 取1.5-5ml 菌液10，000 x g室温离心1min收集菌体沉淀；2. 小心去除上清液，加250ul Solution I/RNase，涡旋或用移液枪上下吹打重悬菌体。3. 加250ul SolutionⅡ，来回颠倒4- 6次轻柔混匀，得到澄清的裂解液。4. 加125ul Buffer N3，颠倒混匀几次直至出现白色絮状沉淀，室温放置2-3min让其充分反应。5. 12，000×g 室温或4℃离心10min得上清，把上清转移到一个新的离心管内；6. 加入与上清等体积的ETR Binding Buffer，颠倒混匀7-10次，室温放置5min。7. 结合质粒——把结合柱插入2ml收集管，每次转移700ul混合液至结合柱柱里，8，000×g离心1min，弃滤液。8. 重复第7步，直至所有上清都过滤完，弃滤液。9. 加入500ul ETR Wash Buffer到结合柱上，8，000×g离心1min，使全部液体滤过柱子，弃滤液。10. 加入500ul Buffer EHB到结合柱上，8，000×g离心1min，使全部液体滤过柱子，弃滤液；11. 加入700ul DNA Wash Buffer到结合柱上， 8，000×g离心1min使全部液体滤过柱子，弃滤液；注意：浓缩的DNA Wash Buffer在使用之前必须按标签的提示用无水乙醇稀释。12. 加入700ul DNA Wash Buffer到结合柱上，8，000×g离心1min使全部液体滤过柱子，弃滤液；13. 把空柱子套回离心管，最大转速（不超过13，0 0 0×g）离心2min干燥柱子；14. 把结合柱套在一个新的1.5ml离心管中，加入30-50ul Endotoxin-Free Elution Buffer，室温放置2-5min，最高转速离心1min洗脱质粒DNA。

做ELISA包被时抗原结合在96孔板上的原理？ELISA所用的包被抗原一般是蛋白质，促使蛋白质同板基质结合的力一般是疏水作用。不同的蛋白因其疏水性不同而有不同的结合常数。由于一般的蛋白其亲水基团都在外围，疏水基团包裹在里边，所以可以对蛋白进行“加工”以增加其结合性。抗体通常是结合在固相载体上，抗原与固相载体是通过物理吸附结合的，靠的是抗原蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体表面的疏水基团间的相互作用。这种物理吸附是非特异性的，受蛋白质的分子量、等电点、浓度等地影响。载体对不同蛋白质的吸附能力是不相同的，大分子蛋白质较小分子蛋白质通常含有更多的疏水基团，故更易吸附到固相载体表面。

ELISA法检测抗原的双抗体夹心法的一些困惑首先，是为什么酶标不能直接标记在一抗上，标记在一抗上之后加底物显色不也可以吗？难道是因为C区已经与固相载体结合？那可以不要固相载体。其次，既然一抗二抗都能与抗原反应，那说明我们对待检抗原的结构也了解了一些吧，为什么不能用电子显微镜直接寻找呢？而且哦，说到底就是抗原抗体反应，干嘛还分直接间接竞争捕获？形式不同罢了，这样不是很难学吗？不直接标记一抗而标记二抗，这是从生产成本上考虑的。二抗大部分是通用的，标记一次可以大量标记，比如10ml或者更多的浓缩液，可以生产上千上万的试剂盒。一次检测就行了而一抗种类很多，量少，如果标记一抗，比较费事。次次得检测（标记完得检测）。HRP标记不是很简单的事科研用的试剂盒。单品销售量很小的，不值当。但临床上的ELISA试剂盒是直接标记在一抗上的，他们量大。这样也用着简单。还有一个，科研试剂盒也不一定用的酶标二抗，有的是生物素放大系统，这样提离灵敏度。

用Wang树脂和2-氯TRT树脂同时合成多肽 Peptides which differ in the C-termini can be simultaneously synthesized in one reaction vessel by employing resins that possess different cleavage properties. The resins used were the weak acid labile 2-chlorotrityl resins and the TFA labile Wang resins. The success of this approach was shown by the co-synthesis of ACTH (4-10) with ACTH (4-11) and Neuropeptide Y, a C-terminal amide peptide with its corresponding C-terminal free acid analog. *Hong A., Le T., and Phan T. Techniques in Protein Chemistry VI, 531-562 (1995). 切割程序 Starting Resin: Chlorotrityl resins Reagents for 1 g Peptide-Resin:1 mL acetic acid (AcOH)2 mL trifluoroethanol (TFE)7 mL dichloromethane (DCM)Prepare above mixture.Add peptide-resin to the mixture and let it stir at room temperature for 1 h.Filter and wash resin with 10 mL TFE:DCM (2:8) (2x) to ensure that all of the product is recovered.Evaporate the solvent until there is less than 5 mL of liquid.Add ether to a test tube containing about 100 mL of the above solution. Check solubility of the fully protected peptide in ether. If the product precipitates, proceed to step 6. If no precipitate is observed, proceed to step 7.Add cold ether to the residual liquid in step 4 to precipitate the fully protected peptide. Filter through a fine sintered funnel to obtain the product.Some fully protected peptides are soluble in ether. In this case, add water to precipitate them out. Filter through a fine sintered funnel to obtain the product.从Fmoc-Lys(Mtt)氨基酸上脱去Mtt的方法 Reagent:Fmoc-Lys(Mtt)-OHSwell resin in DCM.Wash resin with 3% TFA/DCM (2x) (since the resin is swollen in DCM, this step of washing the resin quickly with 3% TFA/DCM ensures that the actual concentration of TFA is 3%).Shake the resin in 3% TFA for 10 min.Repeat step 3.Wash resin with DCM (3x), DMF (3x), isopropanol (3x), and DCM (3x).Let the resin dry in air.

合成含有磷酸化酪氨酸多肽的方法 Reagent: N-a-Fmoc-O-phosphotyrosineFor 0.1 mmol or 0.25 mmol synthesis, use 0.483 g Fmoc-Tyr(PO3H2)-OH (1 mmol, MW 483.4) . For ABI synthesizers, pack Fmoc-Tyr(PO3H2)-OH in a cartridge.The cycle program for coupling Fmoc-Tyr (PO3H2)-OH is the same as for other Fmoc-amino acids except for the coupling time (see step 3). (Note: ABI synthesizers use HBTU/HOBT as the activating reagent.)The coupling time for Fmoc-Tyr(PO3H2)-OH needs to be increased. For ABI model 430A peptide synthesizer, insert several steps (i.e., vortex on, wait 990 sec, vortex off, to increase the coupling time). For ABI model 431A peptide synthesizer, add additional "I"s. Overnight coupling may be necessary for some sequences.After the coupling step for Fmoc-Tyr(PO3H2)-OH, perform ninhydrin test to ensure complete coupling. Negative (colorless) ninhydrin test indicates complete coupling, while a positive (blue) ninhydrin test indicates incomplete coupling.Increase the coupling time of the amino acid residues after the phosphotyrosine or perform double coupling. (Note: The coupling of amino acids after the phosphotyrosine can be difficult.)There is a limit on the number of amino acid residues that can be coupled after the hosphotyrosine. Since the phospho group is unprotected, side reactions are likely to ccur. (Note: Peptides have been successfully coupled with sequences containing up o ten additional amino acids following the phosphotyrosine residue.)

                         ELISA试剂盒实验关键步骤1.重要的洗刷：ELISA试剂盒如果洗刷不充分，会形成一系列的差异和高布景最终导致试验成果偏差大。如果未结合的材料残留在微孔板中，那么它会添加布景噪音。条件答应的情况下，恰当添加洗刷液中的盐浓度，这会阻挠非特异结合反响。如果布景过高，置疑洗刷不行时，能够测验添加洗刷次数。2.关键的关闭：关闭液的作用是让不相关的蛋白占据微孔板中潜在的结合位点。ELISA试剂盒这就降低了可产生信号的抗体非特异结合的时机。如果布景过高，置疑关闭不充分，那么能够测验运用更高浓度的关闭液，或恰当延长关闭时刻现在主要有两种类型的关闭液：蛋白和非离子型去污剂。运用的类型须取决于多个要素，包含微孔板的外表试剂、吸附的抗原、抗体和检测试剂。好的关闭液应降低非特异性结合，但它不应当与抗原、抗体或检测试剂发生相互作用。3.抗体浓度须优化：如果试剂稍有不同，ELISA试剂盒则可能需求优化抗体的量。非特异的抗体结合会添加布景。为了防止这一点，切勿运用过多的一抗或二抗。4.、检测试剂要适量：必定不能够运用过多的检测试剂。如果浓度过高，或许未正确稀释，则会导致高布景。也不要显色过度，如有必要，优化一下何时应加入停止液。

           ELISA试剂盒可用于测定抗原,也可用于测定抗体ELISA试剂盒可用于测定抗原,也可用于测定抗体.在这种测定方法中有三个必要的试剂1)固相的抗菌素原或抗体,即"免疫吸附剂"(immunosorbent);(2)酶符号的抗原或抗体,称为"结合物"(conjugate);(3)酶反应的底物.根据试剂的来历和标本的情况以及检测的具体条件,可规划出各种不类型的检测方法.  ELISA试剂盒可分类是根据抗原抗体的结合情况来分类的。主要有以下几种类型:（直接法也称一步法） 1 双抗体夹心法测抗原  双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法,操作过程如下:  1. 将特异性抗体与固相载体联合,构成固相抗体.洗刷除去未结合的抗体及杂质. 2. 加受检标本,保温反应.标本中的抗原与固相抗体结合,构成固相抗原抗体复合物.洗刷除去其他未结合物质. 3. ELISA试剂盒加酶标抗体,保温反应.固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合.完全洗刷未结合的酶标抗体.此时固相载体上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关. 4. 加底物显色.固相上的酶催化底物成为有色产品.通过比色,测知标本中抗原的量.在临床查验中,此法适用于查验各种蛋白质等大分子抗原,例如HBsAg,HBeAg,AFP,hCG等.只需获得针对受检抗原的异性抗体,就可用于包被固相载体和制备酶结合物而建立此法.如抗体的来历为抗血清,心的问题.

BIM试剂盒解读:何为抗体稀释剂?它的种类有哪些?什么是抗体稀释液？   抗体稀释液--顾名思义，用于稀释抗体的溶液。通常在进行抗原抗体反应的实验中，是用已经制备的抗体（试剂）检测（鉴定或分析）样本中的抗原（及其组成成分）。常用的抗体试剂的浓度（效价或滴度）很高，需要稀释（合适的倍数）后才可以用于检测抗原的试验反应中。在这一步，用于稀释抗体的溶液，也就是稀释剂，称为抗体稀释剂。抗体稀释液的种类主要有：   可根据需要选择不同的抗体稀释液。如稀释当天用完的一抗，用0．05m01／L(pH7.6)TBS即可。如需长期保存，可用如下稀释液：取0．1g明胶(或绿色明胶)溶在100ml0.05m01／L(pH7．6)TBS缓冲液中，边搅拌边加热至60℃，待完全溶解后，冷却至室温，加入1g牛血清白蛋白，最后加入200mg aN3，分装保存在一40℃中备用。另外，抗体原液应分装后一40℃保存，可保存5年以上。

实验数据：肿瘤坏死因子 α 检测试剂盒肿瘤坏死因子 α (tnf-α) 也称为恶病质素和 tnfsf1a， 是一种脂肪因子，参与全身的炎症，同时也是刺激急性期反应的细胞因子之一。 它主要由活化的巨噬细胞产生，也可由其它类型的细胞分泌，如 cd4+ 淋巴细胞、nk 细胞、中性粒细胞、肥大细胞、嗜酸性粒细胞和神经元等。 它在免疫应答中具有多种调节功能， 还可作为潜在的热原。tnf-α 对刺激物 (感染因子或组织受损) 产生应答后，在全身循环，激活中性粒细胞，改变血管内皮细胞的特性， 调控其它组织的代谢活性，以及通过诱导局部凝血作用展现肿瘤杀伤活性。 tnf-α 在关节组织和其它组织发生炎症的发病机制具有重要作用。 最近，越来越多的信息表明 tnf-α 也参与了 aids 的发病机制。 tnf-α 的测定对于移植研究也非常有用。产品名称human tnf-α high sensitivity产品货号hz-tnf-α-hu样本体积20ul性能指标标曲范围1.56 - 100 pg/ml l灵敏度0.16 pg/ml板内cv值4.1 - 4.8 %板间cv值5.4 - 7.0 %加标回收率100 - 108 %稀释线性92 - 120 %                

高效液相色谱法方法一、引言以液体为流动相的色谱体系称为液相色谱。柱色谱、薄层色谱、纸色谱等都属于此类色谱。最早的液相色谱(经典液相色谱)是1906年俄国植物学家Tswett在分离植物色素时建立的一种分离方法。它的原理是借助于样品中各组分分子在流动相(淋洗液)和固定相(色谱柱)之间作用力的差别而进行分离。高效液相色谱法(high performance liquid chromatography， HPLC)是在经典液相色谱法的基础上，随着现代科学技术的发展而发展起来的一种高效、高速、高灵敏度的现代化分离方法。由于固定相和流动相的多样性，分离机理也是多种多样的，从原理上讲，只要是能溶解在流动相中的物质都可以用高效液相色谱来分离和分析。高效液相色谱与气相色谱的主要区别在于高效液相色谱中的分离作用，是依据样品分子与固定相和流动相三者之间的作用力差别，而气相色谱是依据样品分子与固定相之间作用力的差别(流动相几乎不参与分离作用)，高效液相色谱分析的是液体样品，可以在室温下进行分离，而气相色谱分析的是气体样品或是在高温下可以气化的样品，因此高效液相色谱法的应用范围非常广泛。在目前已知的有机化合物中，大约有80％的有机化合物可以用高效液相色谱法分析。半经验性的塔板理论和范第姆特的速率理论以及用于气相色谱中的一些定性定量方法仍然适用于高效液相色谱。联用技术在高效液相色谱定性方面起着重要的作用，目前应用较普遍的是高效液相色谱一质谱(HPLC-MS)，其他还有高效液相色谱-激光拉曼光谱、高效液相色谱-原子吸收光谱等。二、方法原理1、吸附色谱吸附色谱(adsorption chromatography)也称液-固色谱，其固定相是固体吸附剂，常用的有硅胶、氧化铝、活性炭等无机吸附剂。硅胶是一种多孔性物质，因-O-Si(-O-)-O-Si(-O-)-O-结合而具有三维结构，表面具有硅羟基(≡Si-OH)，此硅羟基呈微酸性，易与氢结合，是吸附的活性点。在吸附色谱中，样品主要靠氢键结合力吸附到硅羟基上，和流动相分子竞争吸附点，反复地被吸附，又反复地被流动相分子顶替解吸，随着流动相的流动而在柱中向前移动。因为不同的待测分子在固定相表面的吸附能力不同，因而吸附一解吸的速度不同，各组分被洗出的时间(保留时间)也就不同，使得各组分彼此分离。吸附色谱在早期的HPLC中应用得较多，现在被更方便和更有效的化学键合相反相分配色谱所代替。由于硅羟基活性点在硅胶表面常按一定几何规律排列，因此吸附色谱用于异构体的分离和族分离仍是最有效的方法。2、分配色谱分配色谱(partion chromatography)原本是基于样品分子在包覆于惰性载体(基质)上的固定相液体和流动相液体之间的分配平衡的色谱方法，因此也称液一液色谱。因为作固定相的液体往往容易溶解到流动相中去，所以重现性很差。如果将固定相通过化学键合的方法键合到惰性载体上，固定相就不会流失到流动相中去。基于这种思想发展起来的固定相就是当今在HPLC中应用最广泛的化学键合型固定相。如ODS(octa decyltrichloro silane，十八烷基三氯硅烷)固定相就是最典型的代表，它是将十八烷基三氯硅烷通过化学反应与硅胶表面的硅羟基结合，在硅胶表面形成化学键合态的十八碳烷基，其极性很小，而常用的流动相，如甲醇、乙腈以及它们与水的混合溶液，极性比固定相大，被称作反相HPLC。相反，如流动相的极性比固定相小，被称作正相HPLC。3、离子交换色谱离子交换色谱是根据不同样品离子与固定相(离子交换树脂)离子基团亲和力的差异而进行分离的一种色谱方法。固定相可用阳离子交换剂和阴离子交换剂或键合相的离子交换剂。流动相多采用盐类的缓冲溶液，通过改变流动相的pH值、离子强度，或加入有机溶液、配位剂等改变固定相的选择性，以获得样品的良好分离。4、凝胶色谱凝胶色谱是根据样品分子的尺寸不同而达到分离，因而凝胶色谱又常被称作体积排阻或空间排阻色谱。凝胶色谱是以多孔性填料作固定相。样品分子的分离受填料孔径的影响，比填料孔径大的样品分子不能进入填料的孔内，最先流出色谱柱；填料颗粒上有很多不同尺寸的孔，在那些可以进入填料孔内的样品分子中，体积较大的样品分子可以利用的孔少，所以样品分子按体积从大到小的顺序依次流出色谱柱。在凝胶色谱中，流动相的作用不是为了参与分离，而是为了溶解样品或减小流动相黏度。以有机溶剂作流动相的称为凝胶渗透色谱(gel permeation chromategraphy，GPC)，以水溶液作流动相的称为凝胶过滤色谱。参考资料：现代仪器分析实验与技术

标准溶液的制备标准溶液浓度的准确性直接关系分析结果的准确度，所以标准溶液在滴定分析中非常重要，标准溶液的制备主要包括两个内容，一是配制，二是确定准确浓度，配制标准溶液的方法分为直接法和间接法。一、直接法准确称取一定量的基准物质，溶解后，定量转入一定体积的容量瓶中，定容后混合均匀，由基准物的质量和所配溶液的体积计算出所配溶液的准确浓度。准确称取2.65g(称准至0.0001g)基准碳酸钠。用蒸馏水溶解后，转入500 ml容量瓶中，定容后盖上瓶塞，混合均匀，所配溶液的准确浓度为：式中：m(na2co3)——准确称取的基准碳酸钠的质量，g；v——标准溶液的体积，l。采用直接法配制标准溶液的物质必须是基准物质。基准物质应符合下列条件：(1)纯度要高。要求纯度大于或等于99.9％，杂质含量少到可以忽略不计。通常为基准试剂或优级纯物质。(2)物质的实际组成(包括结晶水)应与化学式相符合。(3)性质稳定，一般条件下不易吸潮，不吸收co2，不易被空气氧化，不风化失水等。(4)基准物质的摩尔质量应尽可能大，这样可以减小称量的相对误差，提高称量的准确度。常用的基准物质在贮存过程中或由于微量杂质等因素的影响会带来一定的误差，故使用前都要经过一定的处理。处理的方法及条件随基准物质的性质及杂质的性质和种类而不同，常用基准物质的干燥条件及其应用见表4—2。 从上表中可以看出，基准物质最主要的用途还是用以确定未知浓度溶液的准确浓度。直接法配制的标准溶液，其浓度准确度高，但需使用较多量的基准物质，故不适于配制大量的标准溶液，大量的标准溶液通常采用一般试剂用间接法配制。二、间接法问接法又叫标定法，对于不符合基准物质条件的试剂，不能用直接法配制，可采用间接法配制，即先配制成近似浓度的溶液，然后用基准物质或另一种标准溶液来确定它的准确浓度。 (一)配制对固体试剂，根据所配溶液的浓度和体积计算所需要的质量，然后在托盘天平上称出所需溶质的质量，溶解后稀释成所需体积，混合均匀即可。对液体试剂，根据所配溶液的浓度和体积，计算出所需浓溶液的体积，量取所需浓溶液稀释成所需配溶液的体积、混合均匀即可。用量筒量取2.5 ml浓hcl稀释至300ml，混合均匀。 (二)标定用基准物质或标准溶液确定未知浓度溶液准确浓度的过程称为标定。1、用基准物质标定准确称取一定量的基准物质与被标定的溶液作用，达到化学计量点时，根据基准物质的质量和消耗的标准溶液的体积计算所标定溶液准确浓度。具体操作中又包括称量法(又叫小份标定法)和移液管法(又叫大份标定法)。 (1)称量法准确称取若干份小量的基准物质，分别溶解后，用被标定溶液滴定，达化学计量点后，根据每份基准物质的质量和所标定的溶液的体积计算其准确浓度，最后取平均值，作为该溶液的准确浓度。这种方法称量基准物质份数较多，偶然误差易发现，但称量时间较长。 (2)移液管法准确称取一份较大质量的基准物质，溶解，于一定体积容量瓶中定容。混合均匀后，用移液管分别移取数份，用被标定溶液滴定，达化学计量点后，根据基准物质质量和被标定溶液体积计算其准确浓度。最后取平均值作为该溶液的准确浓度。这种大份标定方法可以节省称量时间，且称量的准确度高，但偶然误差不易发现，并且要求使用配套容量瓶和移液管。2、用已知准确浓度的标准溶液标定用已知准确浓度的标准溶液与被标定溶液相互滴定，达到化学计量点时，由已知准确浓度的标准溶液的浓度和体积以及被标定溶液的体积，计算被标定溶液的准确浓度。这种方法又叫“比较法”，显然，该方法不如基准物质标定法标定的浓度准确度高，因为标准溶液浓度的准确性会直接影响待标定溶液浓度的准确性，但这种方法操作简便、快速。在实际工作中，除上述两种标定方法外，还常用“标准试样”来标定标准溶液。由标准试样的组成与实际样品相似，所以这样标定的浓度用于测定可以抵消实验中的系统误差。不管用哪一种方法标定，都应力求标定过程、反应条件及测定物质含量过程的一致，这样可以减少和抵消实验中的系统误差。标准溶液的浓度标定的是否准确，会直接影响分析结果的准确度，为了提高标定的准确度，除上面的措施外，标定时还应该注意以下几点：①定时的平行操作次数应至少3次，其相对偏差不大于0.2%。②每份称量的基准物质应大于o.2 g，可使称量的相对误差小于±o.1％。③滴定中使用的滴定剂体积应大于20 ml，可使滴定管产生的相对误差小于0.1％，但每一滴定使用的滴定剂的体积也不应超出滴定管的容量。制备好的标准溶液应保管好，保证其浓度稳定不变。根据溶液的性质，可以采用下列几种方法保存：①准溶液应密封保存，防止溶剂蒸发。②见光易分解、易挥发的溶液应贮于棕色磨口瓶中，如kmno4，na2s2o3，agn03，i2等溶液。③易吸收co2并能腐蚀玻璃的较浓溶液应贮存于棕胶塞及内壁涂有石蜡的玻璃瓶或聚乙烯瓶中，如koh，naoh，edta等溶液，对于碱溶液还应在瓶口装上碱一石灰干燥管，以防止放出的溶液吸入co2。④由于溶剂易蒸发挂于瓶内壁，使溶液浓度不均匀，在使用时应摇匀。参考资料：分析化学

提取DNA的方法有哪些为了研究DNA分子在生命代谢中的作用，常常需要从不同生物材料中提取DNA。由于DNA分子在生物体内的分布及含量不同，要选择适当的方法提取DNA。下面我们就总结了四种dna提取方法并做详细说明和比较。一.浓盐法提取dna：A. 利用RNA和DNA在电解溶液中溶解度不同，将二者分离，常用的方法是用1M 氯 纳提取化钠抽提,得到的DNP粘液与含有少量辛醇的 CCL4一起摇荡,使乳化,再离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及CCL4相中间，而DNA位于上层水相中,用2倍体积95%乙醇可将DNA 钠盐沉淀出来.B. 也可用0.15 MNaCL液反复洗涤细胞破碎液除去RNP,再以1MNaCL提取脱氧核糖蛋白,再按CCL4---异醇法除去蛋白.两种方法比较,后种方法使核酸降解可能少一些.C.以稀盐酸溶液提取DNA 时,加入适量去污剂,如SDS可有助于蛋白质与DNA 的分离。在提取过程中为抑制组织中的DNase对DNA 的降解作用,在氯化钠溶液中加入柠檬酸钠作为金属离子的烙合剂.通常用.15MNaCL,0.015M柠檬钠,并称SSC溶液,提取DNA.二.阴离子去污剂法提取dna：用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性,可以直接从生物材料中提取DNA .由于细胞中DNA与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合,因为阴离子去污剂能够破坏这种价键,所以常用阴离子去污剂提取DNA三.苯酚抽提法提取dna：苯酚作为蛋白变性剂,同时抑制了DNase的降解作用.用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA 联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。离心分层后取出水层，多次重复操作，再合并含DNA 的水相，利用核酸不溶于醇的性质，用乙醇沉淀DNA 。此时DNA是十分粘稠的物质，可用玻璃漫漫绕成一团，取出。此法的特点是使提取的DNA保持天然状态四.水抽提法提取dna:利用核酸溶解于水的性质,将组织细胞破碎后,用低盐溶液除去RNA，然后将沉淀溶于水中，使DNA充分溶解于水中,离心后收集上清液.在上清中加入固体氯化钠调节至2.6M.加入2倍体积95%乙醇,立即用搅拌法搅出.然后分别用66% ，80%和95%乙醇以及丙铜洗涤,最后在空气中干燥,既得DNA样品.此法提取的DNA中蛋白质含量较高,故一般不用.为除蛋白可将此法加以改良,在提取过程中加入SDS.

血清的保存方法血清的保存应该注意以下几点：（1）生物学实验中需要长期保存的血清必须储存于-20℃ - 70℃ 低温冰箱中。4℃冰箱中保存时间切勿超过1个月。由于血清结冰时体积会增加约10%，因此，血清在冻入低温冰箱前，必须预留一定体积空间，否则易发生污染或玻璃瓶冻裂。（2）热灭活是指56℃，30分钟加热已完全解冻的血清。生物学实验中加热过程中须规则摇晃均匀。此热处理的目的是使血清中的补体成分（complement）灭活。除非必须，一般不建议作此热处理，因为热处理会造成血清沉淀物显著增多，而且还会影响血清的质量。补体参与反应有:细胞毒作用，平滑肌细胞收缩，肥大细胞和血小板释放组胺，增强吞噬作用，促进淋巴细胞和巨噬细胞发生化学趋化和活化。（3）瓶装血清解冻需采用逐步解冻法:-20℃ 至 -70℃ 低温冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天。然后移入室温，待全部溶解后再分装。生物学实验中在溶解过程中需不断轻轻摇晃均匀（小心勿造成气泡），使温度与成分均一，减少沉淀的发生。切勿直接将血清从-20℃进入37℃解冻，这样因温度改变太大，容易造成蛋白质凝集而出现沉淀。（4）一般厂商提供的血清为无菌，无需再过滤除菌。如发现血清有悬浮物，则可将血清加入培养液内一起过滤，切勿直接过滤血清。（5）血清中的沉淀物 絮状物:主要是血清中的脂蛋白变性及解冻后血清中纤维蛋白造成，这些絮状物不会影响血清本身的质量。可用离心3000rpm， 5分钟去除，也可不用处理。显微镜下"小黑点":经过热处理过的血清，沉淀物的形成会显著增多。有些沉淀物在显微镜下观察象"小黑点"，常误认为血清受污染。一般情况下，此小黑点不会影响细胞生长，但如果怀疑血清质量，则应立即停止使用，更换另一批号的血清。（6）切勿将血清在37℃放置太久，否则血清会变得浑浊，同时血清中的有效成分会破会而影响血清质量。

       ELISA试剂盒推广以及分析原理ELISA试剂盒供给了两款改进型siRNA用于活体转染。其中STICKYSIRNA能够增加siRNA-转运试剂（in vivo-jetPEI）复合体的安稳性。而SIRNAPLUS则不需求转运试剂，其转运载体就整合在siRNA分子上。公司也推出了ELISA试剂盒新产品，即由pre-designed siRNA构成的Dicector文库。这一新产品是DsiRNAs（Dicer-substrate siRNAs）产品线的新成员。Dicector DsiRNAs的规划选用改进后的算法，siRNA通常进行瞬时转染，而shRNA通常被结合在病毒或细菌载体上，完成安稳表达。不过，因为shRNA随机整合到宿主细胞的基因组中，其表达水平并不安稳。ELISA试剂盒分析原理为了解决这一疑问，我司开发了一个试剂盒，能够将shRNA刺进到基因组的特定位置。这一靶向整合试剂盒选用锌指核酸酶技能，ELISA试剂盒将shRNAELISA试剂盒刺进到人类基因组的AAVS1位点。这一技能将shRNA定位在一个当地，使影响shRNA表达水平的一个主要变量固定下来。现在在上，多种主要的疾病诊断标志物均运用酶联免疫测定方法来检查，如抗HAVIgM，乙肝“两对半"、抗HCV，抗HIV，梅毒抗体、优生优育TORCH系列、病原体的抗原或抗体等传染原体血清标志物、激素、肿瘤标志物、本身抗体、特种蛋白、细胞因子和医治药物以及HBVDNA，HCV-RNA，遗传病基因、肿瘤基因、基因突变等，这些标志物的检查质量直。

        ELISA试剂盒制作高效感受态细胞ELISA试剂盒严格的质量监控检测，从包装到品质，从产品到服务，每个环节，都严控质量关，为科研工作者提供各种不同试验研究用试剂盒，作为国家重点实验室、科研院校指定供应商，致力于发展酶联免疫领域，多年来坚守产品质量的可靠、稳定性。制作感受态细胞大全方法A液1M，MnCl2B液：1M，HEPES，pH=6.2-6.8，用无菌水配，配后不需灭菌；C液 称取CaCl2 0.10g，KCl 1.18g，全部转入细口试剂瓶，然后加入46ml三蒸水，轻轻振荡使所有组分充分溶解。将瓶塞盖上并用牛皮纸、棉线包扎，然后放入灭菌锅121℃高压灭菌备用。取1管B液（0.6ml），全部加入C液(46ml)中，混匀后，再用1ml移液器加入3.3ml A液，混匀冰浴即可使用。ELISA试剂盒挑取2-4个形态饱满的单菌落接种于装有100ml SOB 培养基的三角瓶，37℃剧烈振荡（300 rpms）培养3-4小时，将培养温度调至18℃剧烈振荡（3280 rpms）培养，其余与普通感受态差不多，每管加入4ml TB缓冲液，轻轻振荡，使菌体重新悬浮，加入280ml DMSO（可用国产分析纯），混匀后分装入1.5ml EP管，冰上静置15分钟。用纱布将所有装有感受态的EP管包好，用棉线系好后放入液氮中速冻，在液氮中静置12小时以上。取出感受态放入-70℃超低温冰箱备用。效率非常高，一般可到10*8，好时可到10*9，特别适宜于大片段与文库构建及珍贵材料的连接转化。

2017中秋节国庆节连休放假通知　根据国务院办公厅通知精神，现将2017年中秋节、国庆节放假安排通知如下：　　10月1日（星期日）至8日（星期日）放假调休，共8天。9月30日（星期六）上班。节假日期间，各部门要妥善安排好值班和安全、保卫等工作，遇有重大突发事件，要按规定及时报告并妥善处理，确保人民群众祥和平安度过节日假期。恭祝所有的客户及全体员工节日快乐。　　                                                                                 上海沪震实业有限公司                                    2017年9月30日

反义RNA技术改良用反义RNA分子来调节基因表达时，经常会遇到的困难是反应模板的稳定性差。因此，人们正在探索如何改进反义基因的新方法，目前主要有：（1）优化反义RNA的结合。反义RNA链的长度对抑制基因的效果是重要的。双螺旋形成过程中将释放能量，RNA链越长，释放的自由能越多。从这一意义来讲，可以说长RNA作为反义RNA更有效。但是，并没有关于反义RNA长度的一般规则。Nellen和Lichtentein曾指出，有关反义RNA技术的一个普遍问题是，怎样使反义RNA更有效，即怎么样使一个互补的RNA成为有效的反义RNA。在植物中覆盖整个cDNA的反义RNA有效地抑制了基因表达。但是，与51或31端部分mRNA互补的反义RNA效果同样好。最小的反义RNA只有41个核苷酸。反义RNA的二级结构对双螺旋的形成至关重要。因为形成双链结构必须克服正义和反义RNA本身的二级结构，比潜在自由能的绝对量更重要的是形成双螺旋的作用能量，也就是说，双螺旋构象是由动力学控制的，而不是由释放的自由能的绝对量控制的。原核生物中自然发生的RNA可以很好的说明RNA结构与形成双螺旋构象的速度之间的复杂关系。Simons和Kleckner指出，许多非常有效的反义RNA通常较短（约70个核苷酸），含有一个典型的茎环结构。例如大肠杆菌R1质粒的拷贝数受反义 RNA cop A的控制。Nordstroem和合作者详细研究了这一系统，其正义和反义RNA由同一DNA编码，但以相反方向转录。因此，点突变一点也不能改变这两种RNA的互补性，但是当同时改变正义和反义RNA环区时，虽然两条RNA链完全互补，但结合率下降了三至四倍。与此同时，质粒拷贝数却增加了。很显然，结合率受正义和反义RNA二级结构的影响。两条RNA链形成双螺旋的初始“吻合”结构非常重要。毫无疑问，内源的正义RNA不能被改变，但反义RNA的靶结合区及反义RNA的长度是可以改变的。这将影响反义RNA的二级结构，从而改变其结合能力，使其与靶RNA结合更有效。Rittner等令人信服地证明了反义RNA的长度与它的结合率之间的复杂关系。他们用一个51端长度固定的人免疫缺陷型I型病毒（HIV-I）的反义RNA，改变其31端，从而改变了RNA长度。然后选择能够快速结合的反义RNA，发现结合率长度之间的关系依长度和相应二级结构的不同而摆动。31端只有几个核苷酸不同的反义RNA结合率变化可达上百倍。这与反义RNA的二级结构的改变有关。而且，体外的结合率与体内抑制HIV-I增值的有效性一致。这些结果也证明了在体内应用反义RNA抑制靶基因之前，在离体条件下实验的重要性。在优化反义RNA的实际长度以前，也可以用计算机辅助分析靶RNA，以寻找有效的靶RNA序列，通过设置一个50~400核苷酸的窗口，Sczakiel等设计了基因组和非基因组HIV RNA的能量。这些能量反映了区域折叠能力。观察到高△G值（低自由能）区域与抑制HIV复制的最有效区相对应。（2）延长反义RNA的半衰期。原核生物中自然发生的反义RNA极其稳定，可能是由于它们特殊的茎环结构保护它们免受核酸外切酶的降解。据报道，通过控制插入序列IS10的RNA-OUT，能在体内稳定存在70 min，达三代之久。在反义RNA的末端加上这些保护性的茎环结构，可以减少核酸外切酶的降解。Heinrich等应用了这一方法。最近，Bourque和Folk报道，一个变相方法是把反义RNA与tRNA连接，用一个依赖于DNA的RNA聚合酶III特异启动子来表达。（3）在细胞质中表达反义RNA。另一个能够获得高水平表达的反义RNA的方法是在一个游离的复制系统中表达反义基因。这种系统不同于转基因于细胞核内染色体上。已有几个应用植物RNA病毒作为载体的系统，在细胞质中表达反义RNA。Joshi等用萤火虫萤光素酶基因代替了大麦条斑病毒（BSMV）RNA β的开放读码框b，并且在转染烟草和玉米原生质体时表达；Donson等用一个以TMV为基础的载体来产生细菌新霉素磷酸转移酶（NPT II）。Chapman等应用马铃薯病毒X（PVX）为载体，表达了β-葡萄糖苷酸酶（GUS）。Dolja等把GUS插入到烟草蚀刻病毒（TEV）的多聚蛋白中，得到了表达。因此，在这样的系统中表达反义RNA是完全可行的。刘博林等借助于Chapman等的PVX载体表达系统，在野生烟草（N. clevelandii）细胞质中成功表达了对应于plum pox virus（PPV）的反义RNA和酶性RNA。这为在细胞质中抑制RNA病毒的复制研究奠定了良好的基础。

胰岛素抗体的意义说明胰岛素抗体的出现有两种情况，一种出现于接受外源性胰岛素治疗的病人，主要和胰岛素制剂的纯度有关系，一种出现于从未接受胰岛素治疗的病人，称为胰岛素自身抗体。 胰岛素抗体对糖尿病和低血糖的诊断、鉴别诊断及治疗具有非常重要的意义。 （1）1型糖尿病的早期发现：正常人群如在血中发现胰岛素抗体则很容易罹患1型糖尿病。胰岛素自身抗体可能系β细胞破坏所产生，因此胰岛素自身抗体的检测可作为自身免疫性β细胞损伤的标志，可用于早期发现和预防1型糖尿病。 　（2）诊断胰岛素抵抗，指导糖尿病治疗：血液中存在胰岛素抗体是产生胰岛素抵抗的重要原因，糖尿病患者在使用胰岛素治疗的过程中可因胰岛素抗体的产生而出现胰岛素抵抗，表现为胰岛素用量逐日增加但血糖控制并不理想。此时应检测胰岛素抗体，若出现阳性或滴度增高可作为胰岛素抵抗的客观依据。换用单组分胰岛素、高纯度胰岛素及停用胰岛素、口服降糖药或应用糖皮质激素皆有助于降低胰岛素抗体的浓度，改善胰岛素抵抗。 　　（3）胰岛素自身免疫综合征：自Hirata等于1970年首次报告后，国内外报告逐年增多。胰岛素自身免疫综合征（insulin autoimmune syndrome，IAS）的特征为严重低血糖、高胰岛素血症、胰岛素抗体（IAA）阳性及从未接受外源性胰岛素治疗。IAS低血糖发作呈自限性，82%不经治疗1年内自行缓解，但发作时多较严重且诊断困难。除对症治疗外，应用肾上腺皮质激素可能有一定价值。遗传易感性在IAS发生中可能起重要作用。

胰蛋白酶说明定义介绍 胰蛋白酶Trypsin （Parenzyme） 为蛋白酶的一种，EC3.4.21.4。在脊椎动物中，作为消化酶而起作用。在胰脏是作为酶的前体胰蛋白酶原而被合成的。作为胰液的成分而分泌，受肠激酶，或胰蛋白酶的限制分解成为活化胰蛋白酶，是肽链内切酶，它能把多肽链中赖氨酸和精氨酸残基中的羧基侧切断。它不仅起消化酶的作用，而且还能限制分解糜蛋白酶原、羧肽酶原、磷脂酶原等其它酶的前体，起活化作用。是特异性最强的蛋白酶，在决定蛋白质的氨基酸排列中，它成为不可缺少的工具。牛的胰蛋白酶氨基酸残基223个，分子量为23300，活性部位的丝氨酸残基是不可缺少的丝氨酸蛋白酶。除存在于脊椎动物外，还存在于蚕、海盘车、蝲姑、放线菌等范围广泛的生物体中。另外与高等动物的血液凝固和炎症等有关的凝血酶、纤溶酶、舒血管素等蛋白酶在化学结构和特异性等方面与胰蛋白酶具有密切的关系，可以认为这些酶是从共同的祖先酶在进化过程中分化而来的。胰糜蛋白酶与弹性蛋白酶在结构和催化机制方面也具有密切关系，但其特异性则完全不同。 胰蛋白酶系自牛、羊或猪胰中提取的一种蛋白水解酶。中国药品标准规定按干燥品计算，每1mg 的效价不得少于2500单位。 由牛、羊、猪胰脏提取而得的一种肽链内切酶，只断裂赖氨酸或精氨酸的羧基参与形成的肽键。白色或米黄色结晶性粉末。溶于水，不溶于乙醇、甘油、氯仿和乙醚。分子量24 000，pI 10.5，最适pH值7.8～8.5左右。pH值2～3是稳定的。pH值5以上易自溶失活。pH>9.0不可逆失活。Ca2+对酶活性有稳定作用；重金属离子、有机磷化合物、DFP、天然胰蛋白酶抑制剂对其活性有强烈抑制。临床用于抗炎消肿，工业上用于皮革制造、生丝处理、食品加工等。作用与用途　本品为蛋白质水解酶，能选择地水解蛋白质中由赖氨酸或精氨酸的羧基所构成的肽链，能消化溶解变性蛋质，对未变性的蛋白质无作用，因此，能使脓、痰液、血凝块等分解、变稀，易于引流排除，加速创面净化，促进肉芽组织新生，此外还有抗炎症作用。临床上用于脓胸、血胸、外科炎症、溃疡、创伤性损伤、瘘管等所产生的局部水肿、血肿及脓肿等。喷雾吸入，用于呼吸道疾病。也可用于治疗毒蛇咬伤。还常用于动物细胞培养前对组织的处理。剂量与用法肌内注射，1 000～2 000U或5 000U用生理盐水或注射用水溶解，1次/日。治毒蛇咬伤，取本品2 000U，1～3支，加0.25%～0.5%盐酸普鲁卡因液（或注射用水）4ml～20ml溶解，以牙痕为中心，在伤口周围作浸润注射。或在肿胀部位上方作环形封闭1～2次，如病情需要可重复使用。副作用1 寒战、发热、头痛、头晕、胸痛及腹痛、腹泻等。 2 不可用于急性炎症及出血空腔中。 3 肝、肾损伤、血凝异常和有出血倾向者忌用。

ELISA试剂盒保温与加样ELISA试剂盒的保温保温的方法除有的ELISA仪器附有特制的电热块外，一般均选用水浴，可将ELISA板置于水浴箱中，ELISA板底应贴着水面，使温度灵敏平衡。为避免蒸发，板上应加盖，也可用塑料贴封纸或保鲜膜覆盖板孔，此时可让反应板漂浮在水面上。应留心温育的温度和时间应按规矩力求精确。为保证这一点，一个人操作时，一次不宜多于两块板一起测定。若用保温箱，ELISA板应放在湿盒内，湿盒要选用传热性杰出的材料如金属等，在盒底垫湿的纱布，最终将ELISA板放在湿纱布上。湿盒应先放在保温箱中预温至规矩的温度，特别是在气温较低的时分更应如此,室温温育时，ELISA板只需平置于操作台上即可。ELISA试剂盒的加样在ELISA中一般有3次加样步聚，即加标本，加酶联络物，加底物。加样时应将所加物加在LEISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并留心不可溅起，不可发生气泡。有此测定（如间接法ELISA）需用稀释的血清，可在试管中按规矩的稀释度稀释后再加样。也可在板孔中参与稀释液，再在其间参与血清标本，然后在微型轰动器上轰动1分钟以保证混和。加酶联络物运用液和底物运用液时可用定量多道加液器，使加液进程灵敏结束。加标本一般用微量加样器，按规矩的量参与板孔中。每次加标本应更换吸嘴，避免发生穿插污染，也可用一次性的定量塑料管加样。