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ELISA中最要害的试剂---结合物
ELISA中最要害的试剂---结合物
结合物即酶符号的抗体（或抗原），是ELISA中最要害的试剂。杰出的结合物应该是既保有酶的催化活性，也坚持了抗体（或抗原）的免疫活性。结合物中酶与抗体（或抗原）之间有恰当的分子份额，在结合试剂中应尽量不含有或少含有游离的（未结合的）酶或游离的抗体（或抗原）。此外，结合物尚要有杰出的安稳性。
抗原和抗体
制备结合物时所用抗体一般 均为纯度较高的IgG，以免在与酶联合时其他杂蛋白的搅扰。最好用亲和层析纯的抗体，这样悉数酶结合物均具有特异的免疫活性，能够在高稀释度进行反响，实验成果本底浅淡。如用F（ab）2进行符号，则更可防止标本中RF的搅扰。在ELISA中用酶标抗原的模式不多，总的要求是抗原有必要是高纯度的。
结合物的稀释液
用于稀释高浓度的结合物以配成工作液。为防止结合物在反响中直接吸附在固相载体上，在稀释缓冲液中常加入高浓度的无关蛋白质（例如1%牛血清白蛋白），经过竞赛以按捺结合物的吸附。一般还加入具有按捺蛋白质吸附于塑料外表的非离子型外表活性剂，如吐温20，0.05%的浓度较为适合。在直接测定抗体时，血清标本需稀释后进行测定，也可应用这种稀释液。
酶
用于ELISA的酶应契合以下要求：纯度高，催化反响的转化率高，专一性强，性质安稳，来历丰厚，价格不贵，制备成酶结合物后仍持续保留它的活性部分和催化才能。最好在受检标本中不存在相同的酶。别的，它的相应底物易于制备和保存，价格低廉，有色产品易于测定等。
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