【飞诺美色谱】化妆品中 7 种局麻药的分析方法

摘要：本实验采用固相萃取结合高效液相色谱(SPE-HPLC)，建立了化妆品中 7 种局麻药的检测

方法。样品经 1%三氯乙酸溶液提取，Cleanert PEP-2 固相萃取柱净化，Venusil XBP C18（L)

色谱柱（4.6 × 250 mm，5 μm，150 Å）分离，20 mmoL/L 磷酸氢二钠和甲醇为流动相进行梯度

洗脱，外标法进行定量。结果表明，7 种局麻药添加量为 10 μg/g 时，除苯佐卡因外其他回收率

在 70%~120%之间，能够满足检测要求。

关键词：SPE-HPLC；局麻药；Cleanert PCX 固相萃取柱；Venusil XBP C18（L)色谱柱

前言

局部 麻醉药（localanaesthetics），是一类能在用药 局部 可逆性的阻断感觉神经冲

动发生与 传递 ，简称“局麻药”。可卡因 由于吸收后毒性大，使用受到限制。人工合成

低毒性的 普鲁卡因 后，使用范围不断扩大。利多卡因 则是酰胺类局麻药的典型。目前

常用局麻药可分为酯类和酰胺类两大类，芳酸酯类如普鲁卡因，苯佐卡因 ，丁卡因 ；

酰胺类如利多卡因；

普鲁卡因和利多卡因二者能够竞争性地与神经膜脂蛋白牢固结合，阻碍钠离子渗入

及神经纤维的传导，临床上用于浸润麻醉、阻滞麻醉、腰椎麻醉、硬外麻醉和局部封闭

化，它们的用量必须适当控制，如果过量会引起皮疹、头昏、眼花、眩晕，重者还会引

起震颤、恐慌、休克甚至死亡；苯佐卡因临床用做局部麻醉药，有良好的止痛、止痒作

用，主要用于创面、溃疡面、粘膜表面和痔疮麻醉止痛和痒症，具有稳定性好、起效快

维持时间长和副作用小等优点；丁卡因具有吸收快、作用强、毒性大等特点。目前化妆

品中添加防腐剂、激素、抗生素等等，重金属超标事件时有发生，对人的身体健康造成

了一定的危害，而化妆品已成为人日常生活必需品，化妆品安全日益受到关注，健全化

妆品检测已迫在眉睫，故本实验建立了化妆品中 7 种局麻药的检测方法。

仪器、试剂与材料

Agilent 1100

高效液相色谱柱：VenusiL XBP C18（L）规格 5 μm ，150 Å；4.6 × 250 mm

SPE 小柱：Cleanert PCX 规格 60 mg/3 mL

1%三氯乙酸溶液

1%甲酸甲醇溶液

5%氨水甲醇溶液

尼龙针式过滤器：13 mm，0.45 μm

标准储备液：称取一定量利多卡因、普鲁卡因、丁卡因、普鲁卡因胺、氯普鲁卡因、

辛克卡因、苯佐卡因，分别用甲醇溶解定容，配制成 1.0 mg/mL 的溶液

标准工作液：分别取 250 μL 上述 7 种局麻药单标，用甲醇稀释定容至 10 mL，配

制成 25 μg/mL 溶液

样品制备

提取

霜类：称取 0.5 g 霜样品(精确至 0.01 g）于离心管中，加入 200 μL 25 μg/mL 局麻

药标准工作液，涡旋混合 1 min，加入 8 mL 1%三氯乙酸和 2 mL 乙腈，振荡提取 1 min，

超声 10 min，8000 r/min 离心 5 min，转移上层清液至另一离心管，待净化。

精油类：称取 0.5 g 霜样品(精确至 0.01 g）于离心管中，加入 200 μL 25 μg/mL 局

麻药标准工作液，涡旋混合 1 min，加入 2 mL 乙腈饱和正己烷溶液，振荡提取 1 min，

超声 10 min；加入 8 mL 1%三氯乙酸和 2 mL 乙腈，振荡提取 1 min，8000 r/min 离心 5

min，转移上层清液至另一离心管，待净化。

净化

取 PCX（60 mg/3 mL）小柱，依次用 3 mL 甲醇、5 mL1%三氯乙酸活化小柱，将

上述待净化样品以 1.0 mL/min 通过小柱，再依次用 3 mL 1%三氯乙酸、3 mL 1%甲酸甲

醇溶液淋洗小柱，抽干，最后用 10 mL 5%氨水甲醇溶液洗脱小柱，收集洗脱液，40℃

氮气浓缩至近干，用 1 mL 甲醇：水（1:1，体积比）溶解残留物，过 0.45 μm 尼龙针式

过滤器，样品供 HPLC 检测。

注：霜类提取样品上样液、淋洗液在 0.25 MPa 负压下通过小柱

液相检测条件

色谱柱：VenusiL XBP C18（L）规格 5 μm ，150 Å；4.6 × 250 mm

流动相 A：20 mmoL/L 磷酸氢二纳（用磷酸调节 pH 至 7.0）；

流动相 B：甲醇

A：40%流动相 A，60%流动相 B；B：20%流动相 A，80%流动相 B

波长：220 nm

进样量：20 μL

流速：1.0 mL/min

柱温：30℃

梯度：

结果与讨论

实验结果

表 1. 精油基质加标回收实验数据（添加水平 10 μg/g）

表 2. 霜基质加标回收实验数据（添加水平 10 μg/g）

液相色谱图

讨论

1) 对比了 Cleanert PCX 不同规格小柱 150 mg/6 mL 与 60 mg/3 mL 对目标物的吸

附情况，发现使用 Cleanert PCX 60 mg/3 mL，可以满足实验要求；

2) 对比了洗脱溶剂不同强度 5%氨水甲醇溶液与 10%氨水甲醇溶液对实验的影响，

发现在用 10%氨水甲醇溶液作为洗脱溶剂时，苯佐卡因受影响较大；用 5%氨

水甲醇溶液作为洗脱溶剂，对目标物影响均较小，且满足实验要求；

3) 考察了 7 种局麻药在碱性和中性条件下的稳定性，局麻药混标溶液在 5%氨水

甲醇溶液放置 1 h 后，40℃氮气吹干，检测发现除苯佐卡因外，其他物质回收

率均在 80%以上，局麻药混标溶液在 5%氨水溶液中用甲酸调节 pH 至中性后，

普鲁卡因胺和氯普鲁卡因回收率为 0%，苯佐卡因回收率只有 40%；说明 7 种

局麻药在 5%氨水甲醇溶液碱性条件下较稳定。

4) 本文选择了精油和霜基质做 7 种局麻药加标实验，精油类样品除苯佐卡因外，

其他回收率均在 90%以上；霜类样品除苯佐卡因外，其他回收率均在 70%以上；

RSD 值小于 15%。

结论

本实验建立了 7 种局麻药的高效液相色谱检测方法，并结合固相萃取技术对化妆品

中 7 种局麻药的含量进行了测定。对于加标量为 10 μg/g 的样品进行了检测，除苯佐卡

因外其他回收率在 70% ~ 120%之间，固相萃取方法稳定并且色谱柱检测重现性良好，

说明本方法能够用于检测化妆中 7 种局麻药。

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