摘要:本实验采用固相萃取结合高效液相色谱(SPE-HPLC),建立了化妆品中 7 种局麻药的检测
方法。样品经 1%三氯乙酸溶液提取,Cleanert PEP-2 固相萃取柱净化,Venusil XBP C18(L)
色谱柱(4.6 × 250 mm,5 μm,150 Å)分离,20 mmoL/L 磷酸氢二钠和甲醇为流动相进行梯度
洗脱,外标法进行定量。结果表明,7 种局麻药添加量为 10 μg/g 时,除苯佐卡因外其他回收率
在 70%~120%之间,能够满足检测要求。
关键词:SPE-HPLC;局麻药;Cleanert PCX 固相萃取柱;Venusil XBP C18(L)色谱柱
前言
局部 麻醉药(localanaesthetics),是一类能在用药 局部 可逆性的阻断感觉神经冲
动发生与 传递 ,简称“局麻药”。可卡因 由于吸收后毒性大,使用受到限制。人工合成
低毒性的 普鲁卡因 后,使用范围不断扩大。利多卡因 则是酰胺类局麻药的典型。目前
常用局麻药可分为酯类和酰胺类两大类,芳酸酯类如普鲁卡因,苯佐卡因 ,丁卡因 ;
酰胺类如利多卡因;
普鲁卡因和利多卡因二者能够竞争性地与神经膜脂蛋白牢固结合,阻碍钠离子渗入
及神经纤维的传导,临床上用于浸润麻醉、阻滞麻醉、腰椎麻醉、硬外麻醉和局部封闭
化,它们的用量必须适当控制,如果过量会引起皮疹、头昏、眼花、眩晕,重者还会引
起震颤、恐慌、休克甚至死亡;苯佐卡因临床用做局部麻醉药,有良好的止痛、止痒作
用,主要用于创面、溃疡面、粘膜表面和痔疮麻醉止痛和痒症,具有稳定性好、起效快
维持时间长和副作用小等优点;丁卡因具有吸收快、作用强、毒性大等特点。目前化妆
品中添加防腐剂、激素、抗生素等等,重金属超标事件时有发生,对人的身体健康造成
了一定的危害,而化妆品已成为人日常生活必需品,化妆品安全日益受到关注,健全化
妆品检测已迫在眉睫,故本实验建立了化妆品中 7 种局麻药的检测方法。
仪器、试剂与材料
Agilent 1100
高效液相色谱柱:VenusiL XBP C18(L)规格 5 μm ,150 Å;4.6 × 250 mm
SPE 小柱:Cleanert PCX 规格 60 mg/3 mL
1%三氯乙酸溶液
1%甲酸甲醇溶液
5%氨水甲醇溶液
尼龙针式过滤器:13 mm,0.45 μm
标准储备液:称取一定量利多卡因、普鲁卡因、丁卡因、普鲁卡因胺、氯普鲁卡因、
辛克卡因、苯佐卡因,分别用甲醇溶解定容,配制成 1.0 mg/mL 的溶液
标准工作液:分别取 250 μL 上述 7 种局麻药单标,用甲醇稀释定容至 10 mL,配
制成 25 μg/mL 溶液
样品制备
提取
霜类:称取 0.5 g 霜样品(精确至 0.01 g)于离心管中,加入 200 μL 25 μg/mL 局麻
药标准工作液,涡旋混合 1 min,加入 8 mL 1%三氯乙酸和 2 mL 乙腈,振荡提取 1 min,
超声 10 min,8000 r/min 离心 5 min,转移上层清液至另一离心管,待净化。
精油类:称取 0.5 g 霜样品(精确至 0.01 g)于离心管中,加入 200 μL 25 μg/mL 局
麻药标准工作液,涡旋混合 1 min,加入 2 mL 乙腈饱和正己烷溶液,振荡提取 1 min,
超声 10 min;加入 8 mL 1%三氯乙酸和 2 mL 乙腈,振荡提取 1 min,8000 r/min 离心 5
min,转移上层清液至另一离心管,待净化。
净化
取 PCX(60 mg/3 mL)小柱,依次用 3 mL 甲醇、5 mL1%三氯乙酸活化小柱,将
上述待净化样品以 1.0 mL/min 通过小柱,再依次用 3 mL 1%三氯乙酸、3 mL 1%甲酸甲
醇溶液淋洗小柱,抽干,最后用 10 mL 5%氨水甲醇溶液洗脱小柱,收集洗脱液,40℃
氮气浓缩至近干,用 1 mL 甲醇:水(1:1,体积比)溶解残留物,过 0.45 μm 尼龙针式
过滤器,样品供 HPLC 检测。
注:霜类提取样品上样液、淋洗液在 0.25 MPa 负压下通过小柱
液相检测条件
色谱柱:VenusiL XBP C18(L)规格 5 μm ,150 Å;4.6 × 250 mm
流动相 A:20 mmoL/L 磷酸氢二纳(用磷酸调节 pH 至 7.0);
流动相 B:甲醇
A:40%流动相 A,60%流动相 B;B:20%流动相 A,80%流动相 B
波长:220 nm
进样量:20 μL
流速:1.0 mL/min
柱温:30℃
梯度:
结果与讨论
实验结果
表 1. 精油基质加标回收实验数据(添加水平 10 μg/g)
表 2. 霜基质加标回收实验数据(添加水平 10 μg/g)
液相色谱图
讨论
1) 对比了 Cleanert PCX 不同规格小柱 150 mg/6 mL 与 60 mg/3 mL 对目标物的吸
附情况,发现使用 Cleanert PCX 60 mg/3 mL,可以满足实验要求;
2) 对比了洗脱溶剂不同强度 5%氨水甲醇溶液与 10%氨水甲醇溶液对实验的影响,
发现在用 10%氨水甲醇溶液作为洗脱溶剂时,苯佐卡因受影响较大;用 5%氨
水甲醇溶液作为洗脱溶剂,对目标物影响均较小,且满足实验要求;
3) 考察了 7 种局麻药在碱性和中性条件下的稳定性,局麻药混标溶液在 5%氨水
甲醇溶液放置 1 h 后,40℃氮气吹干,检测发现除苯佐卡因外,其他物质回收
率均在 80%以上,局麻药混标溶液在 5%氨水溶液中用甲酸调节 pH 至中性后,
普鲁卡因胺和氯普鲁卡因回收率为 0%,苯佐卡因回收率只有 40%;说明 7 种
局麻药在 5%氨水甲醇溶液碱性条件下较稳定。
4) 本文选择了精油和霜基质做 7 种局麻药加标实验,精油类样品除苯佐卡因外,
其他回收率均在 90%以上;霜类样品除苯佐卡因外,其他回收率均在 70%以上;
RSD 值小于 15%。
结论
本实验建立了 7 种局麻药的高效液相色谱检测方法,并结合固相萃取技术对化妆品
中 7 种局麻药的含量进行了测定。对于加标量为 10 μg/g 的样品进行了检测,除苯佐卡
因外其他回收率在 70% ~ 120%之间,固相萃取方法稳定并且色谱柱检测重现性良好,
说明本方法能够用于检测化妆中 7 种局麻药。
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