一 背景 类固醇激素又称为甾体激素,是内分泌细胞分泌的高效能生物化学物质。它们在维持生 命、调节机体物质代谢、促进性器官发育和维持生育等方面起着重要作用。 类固醇激素在体内的含量较低,对其准确定量具有重要意义。本实验采用 Cleanert® PEP 96 微孔板对血清样品进行净化,建立了血清中类固醇激素的检测方法,该方法适合高通量 样品前处理。
二 目标物信息
三 材料及仪器
Cleanert PEP 96 微孔板(5mg/1mL);96 孔板正压装置;96 位接收板;Venusil ASB C18(2.1*50mm,3μm,150 Å);API 4000+。
四 样品处理方法
.1 样品预处理 100μL 血清样品与 100μL 含有 1%甲酸的甲醇/水溶液混合(50/50,v/v) 4.2 SPE 过程 活化:依次用 200μL 甲醇、200μL 水活化; 上样:将预处理过的血清样品上样至 96 孔板中; 淋洗:加入 400μL 甲醇/水(35/65, v/v)用于淋洗样品中的干扰物; 洗脱:加入 200μL 1%甲酸甲醇,用 96 位收集板收集洗脱液用于 LC-MS/MS 检测。(将 洗脱液氮吹浓缩可获得更低的检测限)
五 仪器检测条件
5.1 HPLC 条件 色谱柱:Venusil ASB C18(2.1*50mm,3μm,150Å) 流速:200μL/min 柱温:30℃ 进样量:3μL 流动相:0.1%甲酸水/0.1%甲酸乙腈( 40/ 60,v/v) 5.2 质谱条件 扫描模式:电喷雾电离正模式 采集模式:多反应监测(MRM)
六 结果
七 结论
在临床检验中类固醇激素是一个难点。本实验使用 Cleanert® PEP 96 孔板提取血清中的 类固醇,加快了检测速度,相较免疫法提高了最低检测浓度,回收率高于 85%,可满足实 验室检测相关物质的需要。
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