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艾杰尔飞诺美
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【飞诺美色谱】典型使用案例
血清中 20 种类固醇激素 LC-MS 分析
类固醇激素是一类脂溶性小分子激素，是由胆固醇经一系列酶催化而来，可分为肾上腺 皮质激素和性激素两类，在维持机体正常内分泌，调节性功能、机体发展、免疫调节及 生育控制方面有明确的作用。人体内类固醇激素的升高或者降低与一些临床疾病，如， 先天肾上腺增生、多囊卵巢综合症、内分泌紊乱、肾上腺皮质功能及 (3,17 和 21) 羟化 酶缺乏症等息息相关。各个类固醇激素作为代谢网络中的节点相互影响，如能详尽表征 代谢网络上下游中各激素的含量变化情况，对临床疾病的确诊、机体内分泌状态的监控 等具有种重要意义。
样品制备
预处理：
准确量取 200 μL 样品于 1.5 mL 塑料离心管中 ，加入 20 μL 同位素内标混合工作溶，200 μL 甲醇， 涡旋 1 min，加入 200 μL 水，涡旋 1 min ，10000 rpm 离心 5 min，取上层溶液待用。
固相萃取 (SPE)：
前处理耗材：Cleanert PEP 96 Well Microplates (2 mg/mL) 货号：PE00201-MW
活化：依次加入 200 μL 甲醇，200 μL 水进行活化 上样：350 μL 预处理后的上清液
淋洗：依次用 200 μL 10 % 乙腈水溶液和 200 μL 正己烷进行淋洗
洗脱：加入30 μL洗脱溶剂进行洗脱，收集洗脱液，用10 %乙腈水溶液稀释至200 μL，混 匀待测。
液相条件
色谱柱：Kinetex C18
规格：3.0×100 mm ，2.6 μm 货号：00D-4462-Y0
流动相：A：0.5 mM 氟化铵水溶液 B：甲醇，洗脱流程如表 1
流速：0.6 mL/min
柱温：40℃
进样量：20 μL 时间
梯度程序：
质谱条件
电离方式：电喷雾离子源，正负离子同时采集
检测方式：分时间窗口 (schedule)，多反应监测 (MRM) 离子源温度 (TEM)：600℃
雾化气 (Gas1)：60 psi
辅助气 (Gas2)：60 psi 气帘气 (Gurtain Gas)：5 psi
电喷雾电压：5500V(+)/ -4500V(-)
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