【飞诺美色谱】应用 Cleanert MAS-M 对粪便样品中花生四烯酸进行萃取

一 背景 不饱和脂肪酸是构成体内脂肪的一种脂肪酸，人体必需的脂肪酸。花生四烯酸(ＡＡ)是 一种在生物体内含量较高, 分布最广的多不饱和必需脂肪酸。对粪便样品中花生四烯酸的研 究，可为体内脂肪酸代谢提供一定参考信息。 本实验采用Cleanert MAS-M对粪便样品进行净化处理，建立了粪便样品中花生四烯酸含 量检测方法。 

二 目标物信息

三 材料与仪器 Cleanert MAS-M 96 孔萃取板；Cleanert M96 生物样品前处理仪；Cleanert V96 氮吹浓 缩仪；96 孔接收板；PTFE 过滤头；Venusil ASB C18（2.1*50mm，3μm，150Å）；API 4000+ LC-MS/MS 串联质谱。 四 样品处理方法 4.1 样品前处理 称取 50mg 粪便样品加入 5mL 离心管中，向其中加入 0.5mL 1%甲酸水，涡旋混匀 2min， 再向其中加入 1.5mL 甲醇，涡旋，6000r/min 离心 5min，取上清液；重复上述步骤再提取一 次，合并上清液，过 0.22μm PTFE 滤头，向其中加入 0.6mL 氨水，使上样液中含有 4%氨水， 待净化。 4.2 净化过程 所用 SPE 为 Cleanert MAS-M 96 孔萃取板 活化：甲醇 600μL，水 600μL 上样：待净化液全部上样，上样液弃去 淋洗：水 600μL，甲醇 600μL，弃去 洗脱：3%甲酸乙腈溶液 600μL，使用 96 孔收集板将洗脱液分别收集。 将收集板放置于 96 位氮吹仪上，将温度设定为 45℃，开启氮气将洗脱液氮吹至近干， 并用 100μL 乙腈/水（7/3，v/v）将样品重溶，进样检测。 五 仪器检测条件 5.1 HPLC 条件 色谱柱：Venusil ASB C18（2.1*50mm，3μm，150Å） 流速：200μL/min 柱温：30℃ 进样量：5μL

流动相：乙腈/水（75/25，v/v） 5.2 质谱条件 扫描模式：电喷雾电离负模式 采集模式：多反应监测（MRM）

六 结果 

实验所用的粪便样品中含有约 3mg/kg 的花生四烯酸，计算加标回收率时需要扣除样品 中目标物的含量。

七 结论 本实验采用Cleanert MAS-M 96孔板对粪便样品中的花生四烯酸进行批量样品高通量前 处理。实验结果表明 Cleanert MAS-M 能够有效除去干扰物，并能够对花生四烯酸进行定量 萃取，回收率达到 88.9%，可以满足日常对批量生物样品分析的需求。

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